山東濟南地區(qū)健康成人血清超氧化物歧化酶參考區(qū)間的初步建立與驗證

曹修娥，張倡誌，鮑國林，趙士玉，劉義慶（山東第一醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)檢驗部，濟南 250021）

檢驗項目的參考區(qū)間是診斷疾病、治療監(jiān)測、判斷預(yù)后和健康評估的重要依據(jù)，受性別、年齡、遺傳學(xué)、飲食習慣和地理環(huán)境等因素的影響[1-3]。血清超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）是臨床常用指標，能通過催化陰離子自由基發(fā)生歧化反應(yīng)來清除陰離子自由基、對抗細胞的氧化損傷，消除自由基對細胞膜的損害，從而避免疾病的發(fā)生[4-5]。另外，血清SOD的水平可以反映機體的抗氧化能力，可作為腫瘤等疾病的輔助診斷指標，若與其他指標聯(lián)合檢測，可以提高對疾病的診斷效能[6-8]。

目前，血清SOD的實驗室檢測逐漸普及，但實驗室使用的參考區(qū)間多參照試劑說明書，未考慮地域和人群等因素的影響，存在參考區(qū)間應(yīng)用不當?shù)膯栴}，給臨床診療和患者安全帶來不利影響。本研究旨在建立山東濟南地區(qū)健康成人血清SOD的參考區(qū)間，為本地區(qū)臨床應(yīng)用SOD輔助診斷各類疾病提供更好的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2020年3月～2021年10月在山東第一醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院體檢的健康成人2 559例，其中男性1 293例，年齡18～88（42.51±11.53）歲；女性1 266例，年齡18～89（42.16±11.18）歲。納入標準：入選對象經(jīng)B超、內(nèi)外科檢查、胸片、心電圖及實驗室檢查（肝腎功能、血脂血糖、血尿常規(guī)、血清病毒抗原抗體、血清腫瘤標志物等）均正常，女性避開月經(jīng)期。排除標準：①體檢資料不全者、年齡＜18歲；②肝腎功能不全者；③具有心血管病史者、糖尿病、高血壓、高脂血癥者。本研究通過了我院倫理委員會批準。

1.2 儀器與試劑 BECKMAN Coulter AU5831全自動生化流水線；SOD檢測試劑盒（比色法，福建福緣生物科技有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 標本采集及檢測：所有入選對象于清晨體格檢查后，空腹采集靜脈血3～5ml，置于黃色促凝管中，室溫自然凝固后3 200r/min離心10min，分離并吸取上層血清，立即上機檢測或-20℃冰箱保存待集中檢測，排除溶血、脂血和黃疸標本。樣本檢測：血清SOD（比色法，福建福緣生物科技有限公司）使用BECKMAN Coulter AU5831全自動生化流水線檢測，具體操作嚴格按照儀器SOP文件和項目SOP文件操作。檢測前室內(nèi)質(zhì)控在控，該項目的室間質(zhì)評成績合格。

1.3.2 參考區(qū)間的驗證：按照WS/T402-2012《臨床實驗室檢驗項目參考區(qū)間的制定》[9]，每組采集至少20例健康個體，檢測血清SOD水平，將測定值與已建立的參考區(qū)間進行比較，若落在參考限外的測定值不超過2個，則該參考區(qū)間驗證通過；若3個或3個以上測定值超出參考限，則需重新篩選20例，重復(fù)上述操作。若驗證仍未通過，則提示需要重新建立參考區(qū)間。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS21.0和GraphPad Prism 5.0軟件進行統(tǒng)計分析。正態(tài)性檢驗選用Kolmogorov-Smirnov檢驗。呈正態(tài)分布的計量資料用均數(shù) ± 標準差（±s）表示，非正態(tài)分布的計量資料采用中位數(shù)（四分位間距）即[M(P25,P75)]表示，多組間比較采用Kruskal-Wallis 秩和檢驗，組間兩兩比較采用Mann-WhitneyU秩和檢驗并計算Z值，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。采用百分位數(shù)法（P2.5～P97.5）建立參考區(qū)間。

2 結(jié)果

2.1 SOD數(shù)據(jù)的正態(tài)性檢驗 SOD數(shù)據(jù)正態(tài)性檢驗結(jié)果表明，W=0.985，P=0.000。SOD數(shù)據(jù)呈非正態(tài)分布，采用M(P25,P75)進行描述。

2.2 不同性別和年齡組健康成人血清SOD檢測結(jié)果比較 見表1。男性血清SOD水平為181.30(172.00，189.45) U/ml，高于女性的175.70(165.60，184.33) U/ml，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=-9.67，P=0.000）。血清SOD水平隨著年齡的增加而降低，其中男性年齡組間比較Z=-4.993～-2.094，P= 0.000～0.036；女性年齡組間比較41～50歲與51～60歲兩年齡組間比較Z=-0.209，P=0.835，其余年齡組間比較Z=-3.847～-2.034，P=0.000～0.042。除51～60歲組血清SOD在男、女性間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Z=-0.526，P=0.599），其余年齡組間男性血清SOD水平均高于女性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=-7.601～-1.984，P= 0.000～0.047）。

表1 不同性別和年齡組健康成人血清SOD檢測結(jié)果比較 [M（P25，P75）U/ml]

2.3 健康成人血清SOD參考區(qū)間的建立與驗證 見表2。本研究中，血清SOD數(shù)據(jù)呈非正態(tài)分布，因此采用百分位數(shù)法（P2.5～P97.5）建立參考區(qū)間。依據(jù)表1中組間分析結(jié)果，將男性、女性年齡分組中差異無統(tǒng)計學(xué)意義的年齡組合并，計算合并后各組的參考區(qū)間。按WS/T402-2012進行驗證，參加驗證的獨立樣本其血清SOD的檢測結(jié)果除男性51～60歲組有1例超出范圍，其余均落在本研究建立的參考區(qū)間內(nèi)，根據(jù)標準全部驗證通過。

表2 健康成人血清SOD參考區(qū)間值及驗證結(jié)果（P2.5～P97.5）

2.4 血清SOD參考區(qū)間與其他研究結(jié)果的比較 見表3。其他研究報告均顯示血清SOD隨年齡增加而降低且男性均高于女性，與本研究結(jié)果趨勢一致。但是不同地區(qū)血清SOD參考區(qū)間存在差異。

表3 其他研究報告中血清SOD參考區(qū)間（U/ml）

3 討論

超氧化物歧化酶（SOD）是一種源于生物體的活性物質(zhì)，作為一種重要的能清除體內(nèi)超氧陰離子自由基的抗氧化酶，保護細胞免受損傷。由于分布廣泛，在多種疾病如心腦血管疾病、肝臟疾病、腎臟疾病、糖尿病和自身免疫性疾病等患者血清中表現(xiàn)出濃度水平的降低。有研究結(jié)果表明，將血清SOD與其他指標聯(lián)合應(yīng)用，可在肝病、早期糖尿病、肺炎的鑒別診斷、惡性腫瘤等疾病的篩查、診斷、術(shù)后監(jiān)測等方面具有一定的指導(dǎo)意義，并能提高監(jiān)測效能[10-12]，因此檢測血清SOD水平對疾病的預(yù)防與診療有重要意義。

我國幅員遼闊、人口構(gòu)成復(fù)雜，且不同地區(qū)人群由于遺傳學(xué)、飲食習慣、營養(yǎng)狀況、地理環(huán)境等因素的影響導(dǎo)致檢驗項目的參考區(qū)間存在差異[13-15]。本研究旨在分析濟南地區(qū)健康成人血清SOD水平與性別、年齡的相關(guān)性，依據(jù)性別和年齡等因素建立本地區(qū)血清SOD的參考區(qū)間，為臨床診療提供參考。分析結(jié)果顯示，血清SOD水平隨著年齡增加而降低，且男性SOD水平高于女性，原因可能與成年男性中吸煙及飲酒者的比例高于女性有關(guān)。有研究證實[16]，吸煙可生成大量的活性氧自由基，為保持機體內(nèi)氧自由基平衡，抗氧化酶的活性會反應(yīng)性增加，SOD作為最主要的抗氧化酶，其血清濃度會升高。另外，還可能與機體激素水平變化、機體代謝能力變化有關(guān)，隨著年齡的增加，機體的抗氧化能力呈下降趨勢，尤其絕經(jīng)后，雌激素分泌減少，機體的抗氧化能力下降更明顯，因此，血清SOD水平顯著降低[17]。

本研究我們通過對山東濟南地區(qū)2 559例健康成人的血清SOD水平分析，綜合年齡、性別因素，建立了濟南地區(qū)不同性別及年齡段的血清SOD參考區(qū)間，與以往研究中的血清SOD參考區(qū)間均有差異性[18-19]，這可能與以下因素有關(guān)：①地區(qū)差異的關(guān)系，地理、歷史、人群遺傳背景、飲食結(jié)構(gòu)和人口構(gòu)成不同；②檢測系統(tǒng)不同。③樣本數(shù)據(jù)來源不同和樣本量大小差異因素。

本研究仍存在一定的局限性：①只是針對山東濟南地區(qū)的健康成年人，其他地區(qū)未做調(diào)查分析；②缺少18歲以下人群研究樣本，該部分群體的參考區(qū)間仍需進一步探討。

總之，我們綜合年齡和性別因素初步建立了濟南地區(qū)男女性不同年齡段血清SOD 的參考區(qū)間，為SOD在臨床上用于疾病的篩查、診斷、術(shù)后監(jiān)測、判斷預(yù)后等提供了數(shù)據(jù)基礎(chǔ)和參考意見。