染色體微陣列技術(shù)檢測(cè)父源性t（13；22）非平衡易位22q13缺失綜合征一例及文獻(xiàn)復(fù)習(xí)

林俊偉?侯紅瑛?章鈞

【摘要】目的 從遺傳學(xué)角度分析22q13缺失綜合征病因。方法 應(yīng)用G顯帶的染色體核型分析技術(shù)及全基因組單核苷酸多態(tài)性微陣列分析技術(shù)（SNP-array）對(duì)一例22q13缺失綜合征患兒進(jìn)行遺傳學(xué)檢測(cè)，并對(duì)患兒父母進(jìn)行外周血染色體核型分析，驗(yàn)證患兒染色體異常來源。以“t（13；22）”為檢索詞，在生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)外文數(shù)據(jù)庫（PubMed）、中國知網(wǎng)全文數(shù)據(jù)庫（CNKI）、萬方數(shù)據(jù)庫、重慶維普學(xué)術(shù)期刊數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，收集親代遺傳t（13；22）非平衡易位病例進(jìn)行分析。結(jié)果 該例患兒母親染色體核型分析結(jié)果為46，XX，患兒父親染色體核型分析結(jié)果為46，XY，t（13；22）（q31；q13.3），患兒SNP-array分析結(jié)果提示13號(hào)染色體長(zhǎng)臂q31.1q34存在35.8 Mb片段重復(fù)，22號(hào)染色體長(zhǎng)臂q13.3發(fā)生1.1 Mb片段缺失，染色體核型分析結(jié)果為46，XY，der（22）t（13；22）（q31；q13.3）pat。文獻(xiàn)復(fù)習(xí)3例患者病例表現(xiàn)為智力低下、癲癇、面部畸形、房間隔缺損等，其中一例出生11 d死亡。結(jié)論 患兒遺傳父源性der（22）t（13；22）（q31；q13.3）片段，13號(hào)染色體存在35.8 Mb重復(fù)，為染色體異常，具有致病性；22號(hào)染色體存在1.1 Mb缺失，該變異片段包括已知的遺傳綜合征區(qū)域，即22q13缺失綜合征。

【關(guān)鍵詞】單核苷酸多態(tài)性微陣列技術(shù)；染色體非平衡易位；遺傳學(xué)分析；染色體核型分析；22q13缺失綜合征；

費(fèi)倫-麥克德米德綜合征

Single nucleotide polymorphisms array for detecting paternal t （13;22） unbalanced translocation 22q13 deletion syndrome： a case report and literature review Lin Junwei， Hou Hongying， Zhang Jun. Department of Obstetrics and Gynecology， the Third Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University，Guangzhou 510630， China

Corresponding author， Zhang Jun， E-mail： 152464268@qq.com

【Abstract】Objective To analyze the etiology of 22q13 deletion syndrome. Methods Genetic analysis was performed for a baby with 22q13 deletion syndrome using G-banded chromosome karyotype analysis and single nucleotide polymorphisms array （SNP-array） techniques. Chromosomal karyotype analysis of peripheral blood of parents was also conducted to identify the origin of chromosomal abnormality. Literature review was performed using the keywords of “t（13； 22）” in PubMed， CNKI， Wanfang Data， Chongqing VIP databases. Cases of parental genetic t（13； 22） unbalanced translocation were analyzed. Results The mothers karyotype was 46， XX， while the fathers karyotype was 46， XY， t（13； 22）（q31； q13.3）. The results of SNP-array analysis showed 35.80 Mb fragment duplication in 13q31.1q34 and 1.10 Mb fragment deletion in 22q13.3 in the premature baby. The karyotype of the premature baby was 46， XY， der（22）t（13； 22）（q31； q13.3）pat. According to literature review， three patients presented with mental retardation， epilepsy， facial deformity and atrial septal defect， etc. One of them died 11 d after birth. Conclusions The child carries a paternally inherited der（22）t（13； 22）（q31； q13.3） translocation. Specifically， 35.80 Mb fragment duplication is observed in 13q31.1q34， which is abnormal and pathogenic. 1.10 Mb fragment deletion is noted in 22q13.3， which includes 22q13 deletion syndrome （PMS）.

【Key words】Single nucleotide polymorphisms array； Unbalanced chromosomal translocation； Genetic analysis；

Chromosome karyotype analysis；22q13 deletion syndrome； Phelan-McDermid syndrome

染色體平衡易位是染色體結(jié)構(gòu)變異常見的一種類型，正常人群平衡易位攜帶者發(fā)病率約為0.2%。染色體平衡易位攜帶者由于沒有存在遺傳物質(zhì)減少或增加，臨床可表現(xiàn)為正常，但在生育下一代時(shí)由于染色體重新分配，可產(chǎn)生遺傳物質(zhì)正常、缺失、重復(fù)或與攜帶者一致的4種配子，其中缺失或重復(fù)配子在子代可導(dǎo)致流產(chǎn)、死胎、嚴(yán)重出生缺陷的胎兒出生［1］。本文從一例父源性遺傳導(dǎo)致非平衡易位患兒的基因型與表型進(jìn)行分析，從兩者相關(guān)性進(jìn)行遺傳學(xué)研究，為遺傳咨詢提供相關(guān)依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

對(duì)象與方法

一、研究對(duì)象

2018年6月14日我科接診一例出生7 d因?qū)m內(nèi)窘迫剖宮產(chǎn)娩出早產(chǎn)兒，雙手多指畸形（六指），為確定患兒是否存在遺傳性疾病，進(jìn)行家系染色體核型分析及患兒全基因組單核苷酸多態(tài)性微陣列分析技術(shù)（SNP-array）檢測(cè)，并收集分析其病史，實(shí)驗(yàn)室及輔助科室相關(guān)資料，所有受檢者對(duì)上述檢測(cè)知情并簽署知情同意書。本研究已獲得本院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)（批件號(hào)：CR2023-008-01）。

二、染色體核型分析

采集患兒及父母肝素鈉抗凝外周血進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，72 h后加入秋水仙素終止細(xì)胞分裂，通過細(xì)胞收獲、染色體制備、烤片、顯帶、吉姆薩染色、顯微鏡下核型分析確定染色體核型。染色體核型分析計(jì)數(shù)20個(gè)分裂像，分析5個(gè)細(xì)胞核型，結(jié)果參考國際人類細(xì)胞遺傳學(xué)術(shù)語命名系統(tǒng)（ISCN 2020）進(jìn)行核型描述。通過染色體細(xì)胞計(jì)數(shù)及核型分析對(duì)染色體數(shù)目及結(jié)構(gòu)異常進(jìn)行診斷，其中染色體數(shù)目異常包括多倍體、三體綜合征、嵌合體等；染色體結(jié)構(gòu)異常包括易位、倒位、重復(fù)、缺失、插入、環(huán)狀等。

三、基因芯片檢測(cè)

采用Affymetrix平臺(tái)750K基因芯片進(jìn)行全基因組檢測(cè)分析。檢測(cè)結(jié)果通過查詢正常人群的結(jié)構(gòu)變異（DGV）數(shù)據(jù)庫、Decipher數(shù)據(jù)庫、ClinGen數(shù)據(jù)庫、在線人類孟德爾遺傳（OMIM）數(shù)據(jù)庫進(jìn)行注釋分析。結(jié)果參考美國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)和基因組學(xué)學(xué)會(huì)（ACMG）指南對(duì)拷貝數(shù)變異（CNV）的臨床意義分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)分為：致病性（P）、可能致病性（LP）、臨床意義不明（VUS）、可能良性（LB）、良性（B）。

四、文獻(xiàn)檢索

以“t（13；22）”為檢索詞，對(duì)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)外文數(shù)據(jù)庫（PubMed）、中國知網(wǎng)全文數(shù)據(jù)庫（CNKI）、萬方數(shù)據(jù)庫、重慶維普學(xué)術(shù)期刊數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，收集親代遺傳t（13；22）非平衡易位病例進(jìn)行分析，檢索時(shí)間截至2023年6月。

結(jié)果

一、一例22q13缺失綜合征患兒及父母資料

1. 患兒臨床資料

患兒男，出生7 d，系孕36+3周自然受孕早產(chǎn)兒。母親G1P1，產(chǎn)前未在本院規(guī)律產(chǎn)檢，孕早期唐氏綜合征篩查未見異常，停經(jīng)14+周外院彩色多普勒超聲（彩超）提示胎兒大小約12+4周， 頸項(xiàng)透明層厚度（NT）值為2.5 mm。孕中期外院三維彩超未見明顯異常。母親36+3周外院產(chǎn)檢發(fā)現(xiàn)胎心持續(xù)反應(yīng)差，無下腹部疼痛，陰道無流血、流液，自覺胎動(dòng)如常，予胎心監(jiān)護(hù)、靜脈輸液治療未見改善，遂至我院急診就診，擬診胎兒宮內(nèi)窘迫，行剖宮產(chǎn)，娩出一男性新生兒?；純撼錾鷷r(shí)體重2 850 g，身長(zhǎng)48 cm，出生后查體反應(yīng)可，前囟平軟，哭聲不揚(yáng)，口唇微紺，雙手多指畸形（六指）。輔助檢查：血尿糞常規(guī)，甲狀腺功能，電解質(zhì)，肝功能等均正常。性激素6項(xiàng)：睪酮3.03 nmol/L，卵泡刺激素< 0.30 IU/L，催乳素

1 431.6 mIU/L，孕酮6.89 nmol/L，黃體生成素< 0.07 IU/L，雌二醇88.02 pmol/L。彩超提示：右側(cè)陰囊內(nèi)睪丸缺如，右側(cè)腹股溝隱睪，左側(cè)睪丸及附睪未見明顯異常；肺動(dòng)脈高壓（重度），動(dòng)脈導(dǎo)管未閉，房間隔缺損（多孔，繼發(fā)孔型），室間隔小缺損（肌部），三尖瓣反流（輕度），右心房右心室增大，左心室收縮功能正常，見圖1?；純焊改阜墙H結(jié)婚，否認(rèn)家族遺傳病史，無既往病史。

2. 家系染色體核型分析結(jié)果

患兒染色體核型分析結(jié)果為46，XY，der（22）t（13；22）（q31；q13.3），22號(hào)衍生染色體由13號(hào)染色體與22號(hào)染色體相互易位產(chǎn)生，13號(hào)染色體13q31的遠(yuǎn)端片段易位到22q13.3處；患兒父親染色體核型分析結(jié)果為46，XY，t（13；22）（q31；q13.3），13號(hào)染色體長(zhǎng)臂3區(qū)1帶與22號(hào)染色體長(zhǎng)臂1區(qū)3亞帶發(fā)生易位；母親染色體核型分析結(jié)果為46，XX，正常核型，見圖2。依據(jù)以上家系核型結(jié)果分析確定患兒22號(hào)衍生染色體遺傳來源于父源，確定其外周血染色體核型結(jié)果為46，XY，der（22）t（13；22）（q31；q13.3）pat。

3. SNP-array檢測(cè)結(jié)果

患兒SNP-array結(jié)果為arr［hg19］13q31.1q34（79279417-115107733）×3（CNV）、arr［hg19］22q13.33（50059837-51197766）×1（CNV），提示

13號(hào)染色體長(zhǎng)臂13q31.1q34發(fā)生35.8 Mb片段重復(fù)，22號(hào)染色體長(zhǎng)臂q13.33發(fā)生缺失1.1 Mb片段缺失。見圖3。

arr［hg19］13q31.1q34（79279417-115107733）×3（CNV），檢索DGV數(shù)據(jù)庫，片段相似、片段及拷貝數(shù)都相似的例數(shù)分別為0、0例，該數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)果為不存在片段多態(tài)性相似個(gè)體。檢索Decipher數(shù)據(jù)庫，片段相似、片段及拷貝數(shù)相似、片段拷貝數(shù)臨床表現(xiàn)都相似的例數(shù)分別為：3、3、1例，相似病例編號(hào)為283913，表型為先天性膈疝，該拷貝數(shù)變異片段為新發(fā)突變。該數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)果提示存在表型變異相似個(gè)體。檢索ClinGen數(shù)據(jù)庫，不存在片段變異相似個(gè)體。檢索OMIM數(shù)據(jù)庫，該片段內(nèi)包含78個(gè)蛋白編碼致病基因，其中包含SPRY2、SLITRK1、SLITRK6、MIR17HG、GPC6、TGDS、CLDN10、DNAJC3、ZIC2、PCCA、NALCN、FGF14、ERCC5、SLC10A2、DAOA、LIG4、IRS2、COL4A1、COL4A2、CARS2、ING1、F7、F10、PROZ、GRK1、CHAMP1等基因。根據(jù)ACMG指南，綜合以上數(shù)據(jù)庫收錄病例以及相關(guān)臨床癥狀將arr［hg19］13q31.1q34（79279417-115107733）×3（CNV）臨床致病性評(píng)級(jí)為：致病性（P）。

arr［hg19］22q13.33（50059837-51197766）×1（CNV）該片段變異包括已知的遺傳綜合征區(qū)域：22q13缺失綜合征［又稱費(fèi)倫-麥克德米德綜合征（PMS）］，患者通常會(huì)出現(xiàn)以下臨床表現(xiàn)：常見的發(fā)育及行為特征為語言缺乏或嚴(yán)重落后（100.00%）、發(fā)育遲緩或智力障礙（91.89%）、肌張力減退（73.17%）；輕微畸形特征主要表現(xiàn)為大耳（21.88%）、瞼裂狹?。?1.88%）、斜視（18.75%），缺失的片段大小與臨床表現(xiàn)多樣性和（或）嚴(yán)重程度呈正相關(guān)［2］。

4.預(yù)后及隨訪

PMS主要臨床表現(xiàn)為智力低下、生長(zhǎng)發(fā)育遲緩，由于本例患兒年齡較小，臨床癥狀表現(xiàn)不明顯；2019年6月6日隨訪：不會(huì)獨(dú)坐，追視追聲可，可逗笑，表情落后，精神發(fā)育遲緩；2020年8月22日隨訪：不會(huì)獨(dú)立行走，后續(xù)隨訪一直未能與家屬取得聯(lián)系，患兒預(yù)后情況不詳。

二、源于親代遺傳t（13；22）非平衡易位病例文獻(xiàn)分析

由于親代遺傳t（13；22）非平衡易位患者大部分在孕早期發(fā)生流產(chǎn)，因此國內(nèi)外鮮有非平衡易位病例報(bào)道［1， 3］。文獻(xiàn)檢索3例患者表現(xiàn)為智力低下、癲癇、面部畸形、房間隔缺損等臨床癥狀，其中一例出生11 d因敗血癥死亡。見表1。

討論

染色體平衡易位人群發(fā)病率約為0.2%［7］。平衡易位攜帶者通常無明顯臨床表現(xiàn)，但在生育下一代的時(shí)候由于易位的染色體形成四射體產(chǎn)生36種配子重新進(jìn)行分配，僅有1種正常配子跟1種平衡易位攜帶配子為正常，其他配子均為異常，因此平衡易位攜帶者生育下一代時(shí)容易引起流產(chǎn)、死胎或嚴(yán)重的出生缺陷等情況［8］。

本研究患兒的染色體核型為46，XY，der（22）t（13；22）（q31；q13.3）pat，通過家系核型分析為父源的染色體平衡易位再次分配導(dǎo)致，其中13號(hào)染色體長(zhǎng)臂13q31.1q34發(fā)生35.8 Mb片段重復(fù)，檢索DGV數(shù)據(jù)庫未發(fā)現(xiàn)存在片段多態(tài)性相似個(gè)體；檢索Decipher數(shù)據(jù)庫提示存在表型變異相似個(gè)體，其中片段相似3例、片段及拷貝數(shù)相似3例、片段拷貝數(shù)及臨床表現(xiàn)都相似1例，相似病例的臨床表現(xiàn)為先天性膈疝。ClinGen數(shù)據(jù)庫不存在片段變異相似個(gè)體。OMIM數(shù)據(jù)庫中，該片段內(nèi)包含78個(gè)蛋白編碼致病基因，其中與本研究患者臨床表型相關(guān)的基因分別為DZIP1、NALCN。因此，該片段可能為致病性（P）。另外，患兒22號(hào)染色體長(zhǎng)臂q13.33發(fā)生1.1 Mb片段缺失，該片段變異包括PMS區(qū)域。

DZIP1基因是位于13q31.3-32.1的常染色體顯性基因，Toomer等［9］對(duì)二尖瓣脫垂3（MVP3）的4代家系進(jìn)行了全外顯子組測(cè)序（WES），并鑒定了DZIP1基因（608671.0001）錯(cuò)義突變的雜合性，發(fā)現(xiàn)了DZIP1亞型存在于S70R和S24R中，該突變?cè)诩易逯信c疾病完全分離，主要臨床表型為雙小葉脫垂并二尖瓣反流，本研究患兒心臟彩超提示輕度三尖瓣反流與MVP3臨床表現(xiàn)相似。Bourque等［10］在一例自然受孕早產(chǎn)兒中發(fā)現(xiàn)了NALCN基因中一個(gè)純合突變c.3910C>T，臨床表現(xiàn)為早產(chǎn)、呼吸窘迫、癲癇、隱睪、生長(zhǎng)發(fā)育落后、語言能力遲緩，與本研究患兒呼吸窘迫、早產(chǎn)、隱睪等臨床表現(xiàn)相似。

PMS是22號(hào)染色體長(zhǎng)臂末端缺失導(dǎo)致的罕見遺傳性疾病，顯性遺傳，男女間發(fā)病率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?；颊咧饕R床表現(xiàn)為智力低下，語言能力發(fā)育遲緩，行為障礙（多動(dòng)、攻擊性暴發(fā)）和肌張力低下，目光對(duì)視差，行為類似于孤獨(dú)癥，對(duì)疼痛的感知減少［2， 11］。Xu等（2020年）報(bào)道，PMS缺失片段大小從8 kb至7.3 Mb不等，缺失片段大小在患者智力低下與語言能力方面并無明顯差異性，缺失區(qū)域的SHANK3基因單倍功能不全是PMS神經(jīng)系統(tǒng)癥狀的主要病因。SHANK3是一種突出后支架蛋白，當(dāng)SHANK3基因缺失或功能受損時(shí)突觸傳遞受阻，從而影響行為和發(fā)育功能［12］。

目前PMS尚無標(biāo)準(zhǔn)診斷流程，臨床診斷需與肌張力低下、發(fā)育遲緩、言語遲緩和（或）孤獨(dú)癥等影響相關(guān)的綜合征（如普拉德-威利綜合征、快樂木偶綜合征、威廉姆斯綜合征、史密斯-馬蓋尼斯綜合征、脆性X綜合征、腭心面綜合征、孤獨(dú)癥譜系障礙、腦癱）相鑒別，同時(shí)結(jié)合分子遺傳學(xué)技術(shù)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行確診。本研究通過對(duì)該患兒家系細(xì)胞遺傳染色體核型分析及分子遺傳診斷確定患兒PMS遺傳模式，為進(jìn)一步遺傳咨詢提供依據(jù)。PMS不對(duì)患者生命造成影響，但由于智力與發(fā)育障礙對(duì)家庭和社會(huì)將產(chǎn)生很大的負(fù)擔(dān)及影響，因此建議染色體核型分析檢測(cè)應(yīng)列入婚檢常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目，對(duì)于有染色體異常的夫婦應(yīng)選擇產(chǎn)前診斷以避免存在出生缺陷的胎兒出生，必要時(shí)選擇第三代試管技術(shù)進(jìn)行干預(yù)，這將有助于降低我國出生缺陷發(fā)病率［13］。無創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)技術(shù)對(duì)于13、18、21號(hào)染色體非整倍體具有高靈敏度、高特異度的優(yōu)點(diǎn)，且對(duì)染色體微缺失、微重復(fù)有一定提示［14］。因此，對(duì)于本例13號(hào)染色體存在35.8 Mb片段重復(fù)的非平衡易位，若早期通過NIPT篩查可能會(huì)有異常提示，從而避免出生缺陷發(fā)生，這有待后續(xù)進(jìn)一步研究探討。

參 考 文 獻(xiàn)

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（收稿日期：2023-06-06）

（本文編輯：林燕薇）