非酒精性脂肪性肝病患者外周血內(nèi)皮素、C 型凝集素-1水平與小腸細(xì)菌過度生長、肝纖維化的關(guān)系

王青青 魏 芳 劉瑩瑩 李立文 張秀剛

在中國非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD）的發(fā)病率較高，且隨著人們生活水平的提高及生活方式的改變，近年來其發(fā)病率呈升高趨勢(shì)；在中國NAFLD 的患病率為20.09%，其已成為重要的公共健康問題之一[1-2]。既往有研究認(rèn)為，腸道菌群失調(diào)、肝纖維化在NAFLD 的發(fā)生和進(jìn)展過程中具有重要的作用[3-4]。內(nèi)皮素（ET）作為調(diào)節(jié)心血管功能的重要因子，具有收縮血管、促進(jìn)細(xì)胞增殖等功能[5]。研究表明，潰瘍性結(jié)腸炎患者腸道菌群改變是其血清ET 水平的獨(dú)立影響因素[6]。C 型凝集素-1（Dectin-1）是一類含有C 型凝集素樣結(jié)構(gòu)域的模式識(shí)別受體，其與真菌感染疾病關(guān)系密切[7]。由此推測(cè)，NAFLD 患者血清ET、Dectin-1 水平可能與小腸細(xì)菌過度生長（SIBO）及肝纖維化程度有關(guān)，本文對(duì)此進(jìn)行探討。

1 研究對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選擇2021 年10 月至2022 年10 月滄州市中心醫(yī)院收治的88 例NAFLD 患者作為研究對(duì)象（設(shè)為NAFLD 組），其中男性58 例，女性30 例，年齡30～80 歲，平均年齡為（50.66±5.62）歲。另選擇同期在該院體檢的65 名健康體檢者設(shè)為對(duì)照組，其中男性45 人，女性20 人，年齡31～80 歲，平均年齡為（50.95±5.84）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）NAFLD患者均符合《非酒精性脂肪性肝病防治指南（2018年更新版）》[8]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并結(jié)合實(shí)驗(yàn)室相關(guān)檢查確診；（2） 受試者及家屬均簽署知情同意書；（3）健康體檢者均身心健康。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）伴有重要臟器功能障礙者；（2）合并自身免疫病、代謝性疾病、遺傳性疾病、血液性疾病、凝血功能障礙疾病及惡性腫瘤者；（3）合并病毒性肝炎、酒精性肝病、藥物性肝損傷及原發(fā)性膽汁性膽管炎者；（4）近1 個(gè)月內(nèi)使用過抗生素、乳果糖和抑酸劑者；（5）妊娠期或哺乳期者；（6）既往有精神病史者；（7）臨床資料缺失者；（8）不配合治療、中途退出研究或死亡者。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 血清ET、Dectin-1 水平檢測(cè)

采用ELISA 法檢測(cè)受試者血清ET 和Dectin-1水平。抽取所有受試者清晨空腹外周靜脈血5 mL，室溫下以3 000 r/min 離心15 min 后取上清液，使用ELISA 試劑盒（購自美國BD 公司）檢測(cè)血清ET、Dectin-1 水平，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.3 SIBO 的診斷方法

使用EC60 Gastrolyzer 氫氣檢測(cè)儀（購自英國Bedfont 公司）進(jìn)行乳果糖氫呼氣試驗(yàn)（LHBT）以檢測(cè)SIBO 情況[9]。檢測(cè)前1 日晚上禁食牛奶、奶制品、豆制品、富含纖維素食品及辛辣刺激食物，并確保在進(jìn)行LHBT 前已禁食12 h 及以上。檢測(cè)當(dāng)日先測(cè)量空腹氫呼氣濃度（即基礎(chǔ)值），隨后口服10 g 乳果糖（購自荷蘭蘇威制藥公司），每隔15 min 收集呼出氣體并測(cè)定氫濃度，持續(xù)2 h。以各時(shí)間節(jié)點(diǎn)的氫呼氣濃度值減去基礎(chǔ)值作為各時(shí)間節(jié)點(diǎn)的氫呼氣濃度實(shí)際值。符合以下任意1 條可判定為SIBO 陽性：（1）基礎(chǔ)值＞20 ppm，且每隔30 min 重復(fù)測(cè)定2 次均顯示氫呼氣濃度值＞20 ppm；（2）明顯的雙峰圖形（早期小腸峰和后期結(jié)腸峰）；（3）口服乳果糖后開始產(chǎn)氫氣時(shí)間＜90 min，氫呼氣濃度升高的絕對(duì)值達(dá)到20 ppm[9]。將90 min 內(nèi)的7 次測(cè)量值之和作為LHBT 集值，其能夠間接反映小腸內(nèi)細(xì)菌生長情況。

1.4 肝纖維化病理分期

NAFLD 患者在B 超定位下行肝臟活體組織穿刺術(shù)，并根據(jù)《肝纖維化中西醫(yī)結(jié)合診療共識(shí)意見（2017 年）》[10]判斷病理結(jié)果。肝纖維化病理分期標(biāo)準(zhǔn)如下：S0 期表示無明顯肝纖維化（設(shè)為無肝纖維化組，n＝28），S1～S2 期表示輕度肝纖維化（設(shè)為輕度肝纖維化組，n＝36），S3～S4 期表示重度肝纖維化（設(shè)為重度肝纖維化組，n＝24）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 24.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，2 組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，組內(nèi)比較采用SNK-q檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。采用Pearson相關(guān)系數(shù)法分析NAFLD 患者外周血ET、Dectin-1水平與SIBO 的相關(guān)性。采用ROC 曲線分析外周血ET、Dectin-1 水平對(duì)NAFLD 患者肝纖維化的評(píng)估價(jià)值。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NAFLD 組與對(duì)照組的SIBO 陽性率及血清ET、Dectin-1 水平比較

NAFLD 組的SIBO 陽性率為62.50%，顯著高于對(duì)照組（3.08%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。與對(duì)照組相比，NAFLD 組的血清ET、Dectin-1 水平均顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.001）。見表1。

表1 NAFLD 組與對(duì)照組的SIBO 陽性率及血清ET、Dectin-1 水平比較

2.2 SIBO 陽性組與SIBO 陰性組的LHBT 集值及血清ET、Dectin-1 水平比較

如表2 所示，與SIBO 陰性組相比，SIBO 陽性組的LHBT 集值及血清ET、Dectin-1 水平均顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.001）。

表2 SIBO 陽性組與SIBO 陰性組的LHBT 集值及血清ET、Dectin-1 水平比較

2.3 血清ET、Dectin-1 水平與LHBT 集值的相關(guān)性分析

Pearson 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，NAFLD 組血清ET、Dectin-1 水平與LHBT 集值均呈正相關(guān)（r＝0.552，P＜0.05；r＝0.451，P＜0.05）。

2.4 各組血清ET、Dectin-1 水平比較

如表3 所示，與對(duì)照組相比，無肝纖維化組、輕度肝纖維化組和重度肝纖維化組的血清ET、Dectin-1 水平均顯著升高（P均＜0.05）；與無肝纖維化組相比，輕度肝纖維化組和重度肝纖維化組的血清ET、Dectin-1 水平均顯著升高（P均＜0.05）；與輕度肝纖維化組相比，重度肝纖維化組的血清ET、Dectin-1 水平均顯著升高（P均＜0.05）。4 組血清ET、Dectin-1 水平的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。

表3 各組血清ET、Dectin-1 水平比較

2.5 血清ET、Dectin-1 水平對(duì)NAFLD 患者肝纖維化的評(píng)估價(jià)值

ROC 曲線分析結(jié)果顯示，血清ET、Dectin-1水平評(píng)估NAFLD 患者肝纖維化的最佳截?cái)嘀捣謩e為65.63 pg/mL、18.52 pg/mL。血清ET 和Dectin-1聯(lián)合檢測(cè)評(píng)估NAFLD 患者肝纖維化的曲線下面積（AUC）均大于單項(xiàng)檢測(cè)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05），且聯(lián)合檢測(cè)的特異度較高。血清ET 與Dectin-1 水平評(píng)估NAFLD 患者肝纖維化的AUC、敏感度、特異度差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。見表4。

圖1 血清ET、Dectin-1 水平評(píng)估NAFLD 患者肝纖維化的ROC曲線

表4 血清ET、Dectin-1 水平對(duì)NAFLD 患者肝纖維化的評(píng)估價(jià)值

3 討論

SIBO 是一種由于小腸內(nèi)細(xì)菌數(shù)量增加或種類增多而引起消化吸收障礙的臨床綜合征，其與NAFLD 的發(fā)生和進(jìn)展密切相關(guān)[11-12]。研究發(fā)現(xiàn)，肝纖維化是NAFLD 進(jìn)展為肝硬化及肝細(xì)胞癌的基礎(chǔ)性病變[13]。因此，早期準(zhǔn)確診斷NAFLD 合并SIBO 或肝纖維化有助于延緩病程進(jìn)展。ET 是一種具有多種生物效應(yīng)的活性肽，可參與調(diào)控血管平滑肌細(xì)胞的增殖、遷移和基因表達(dá)等[14]。Dectin-1屬于NK 細(xì)胞受體樣C 型凝集素，作為Ⅱ型跨膜受體，參與了機(jī)體防御真菌病原體的天然免疫反應(yīng)[15]。

本研究結(jié)果顯示，NAFLD 組的血清ET、Dectin-1 水平均顯著高于對(duì)照組，這提示血清ET、Dectin-1 可能參與了NAFLD 的發(fā)生過程；NAFLD組的SIBO 陽性率顯著高于對(duì)照組，這表明NAFLD患者普遍存在小腸細(xì)菌感染。此外，NAFLD 患者中SIBO 陽性組血清ET、Dectin-1 水平均顯著高于SIBO 陰性組，這提示血清ET、Dectin-1 水平可反映NAFLD 患者合并SIBO 狀況。LHBT 集值是目前反映小腸內(nèi)細(xì)菌生長情況的常用指標(biāo)[16-17]。本研究結(jié)果表明，NAFLD 患者血清ET、Dectin-1 水平與LHBT 集值均呈正相關(guān)，這提示NAFLD 患者血清ET、Dectin-1 水平越高，小腸細(xì)菌感染越嚴(yán)重。SIBO 可導(dǎo)致腸道微生態(tài)失衡，同時(shí)可誘導(dǎo)免疫細(xì)胞釋放炎癥因子，加重肝功能損傷，從而引發(fā)NAFLD。ET 主要分布于結(jié)腸、回腸、空腸黏膜細(xì)胞內(nèi)，可促進(jìn)腸系膜血管和胃腸道平滑肌收縮，并促進(jìn)平滑肌細(xì)胞增殖，從而加重炎癥反應(yīng)。本研究結(jié)果顯示，NAFLD 組血清ET 水平升高，導(dǎo)致其介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)增強(qiáng)，使小腸黏膜下微血管收縮，血流量減少，腸道局部缺血、缺氧，進(jìn)而導(dǎo)致腸道組織損傷，而腸道組織損傷可影響小腸動(dòng)力功能，進(jìn)而增高SIBO 的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[18]。Dectin-1 對(duì)于維持胃腸道內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定具有重要作用，其水平升高可加重腸道炎癥反應(yīng)，進(jìn)而損傷腸道上皮屏障功能，減弱其防御細(xì)菌及其他病原體的能力[19]。由此推測(cè)，NAFLD 患者血清ET、Dectin-1 水平升高可誘發(fā)SIBO。

本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，無肝纖維化組、輕度肝纖維化組和重度肝纖維化組的血清ET、Dectin-1 水平均顯著升高，且隨著肝纖維化程度加重，血清ET、Dectin-1 水平隨之升高。ROC 曲線分析結(jié)果顯示，血清ET、Dectin-1 水平聯(lián)合檢測(cè)評(píng)估NAFLD 患者肝纖維化的AUC 為0.912，均大于單項(xiàng)檢測(cè)，這提示聯(lián)合檢測(cè)評(píng)估NAFLD 患者肝纖維化具有一定的應(yīng)用價(jià)值，可為臨床上及時(shí)采取積極有效的干預(yù)治療措施提供指導(dǎo)，從而改善臨床結(jié)局。炎癥反應(yīng)是肝纖維化發(fā)生和進(jìn)展過程中的重要因素。ET 是一種有效的血管收縮劑，其水平升高不僅可以刺激血管平滑肌細(xì)胞增殖，還可以促進(jìn)纖維化和炎癥反應(yīng)[20]。Dectin-1 具有促進(jìn)機(jī)體分泌促炎細(xì)胞因子的作用，有研究報(bào)道，沉默Dectin-1可顯著改善心肌梗死后小鼠的心肌纖維化[21]。由此推測(cè)，NAFLD 患者血清ET、Dectin-1 水平升高可導(dǎo)致肝纖維化發(fā)生。

綜上所述，與健康人群相比，NAFLD 患者外周血ET、Dectin-1 水平均顯著升高，且其水平均與SIBO 陽性率呈正相關(guān)。NAFLD 患者外周血ET 與Dectin-1 聯(lián)合檢測(cè)評(píng)估患者肝纖維化具有一定應(yīng)用價(jià)值。本研究為單中心數(shù)據(jù)分析，納入的樣本量較小，結(jié)論存在局限性；此外，本研究未涉及血清ET 和Dectin-1 水平與常規(guī)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)評(píng)估肝纖維化的價(jià)值，以及該2 項(xiàng)指標(biāo)與NAFLD 患者其他臨床病理特征的關(guān)系，今后需加大樣本量并進(jìn)行深入分析。