貴州苗藥柳葉菜與混淆品粉花月見草的生藥鑒別研究

吳向莉, 丁 寧, 孫慶文, 王 爽, 李蒙禹

(貴州中醫(yī)藥大學(xué), 貴陽 550002)

柳葉菜科(Onagraceae)植物柳葉菜(EpilobiumhirsutumL.)以花、根、全草入藥?；ň哂星鍩嵯?調(diào)經(jīng)止帶,止痛。治療牙痛,急性結(jié)膜炎,咽喉炎,月經(jīng)不調(diào),白帶過多。根具有理氣活血,止血。治療閉經(jīng),胃痛,食滯飽脹。全草治療骨折,跌打損傷,疔瘡癰腫,外傷出血[1]。植物柳葉菜全草在民間常作為苗藥使用,其苗藥名為“萵倆料”(vobliaxlios貴州黔東南地區(qū)),俗名陽光草[2],別名水朝陽花、雞腳參、水丁香等,葉含粉背蕨酸、蔗糖和黃酮類化合物,味淡、苦,性涼?；ㄓ糜谥委熢陆?jīng)過多、白帶過多、急性結(jié)膜炎、骨折、跌打損傷、瘡癤癰腫、牙痛、咽喉炎、火燙傷;根用于治療閉經(jīng)、胃痛、食滯飽脹。全草主治風(fēng)熱感冒、音啞、咽喉腫痛、肺熱咳嗽、水腫、淋痛、濕熱瀉痢、風(fēng)濕熱痹、瘡癰、毒蟲咬傷[3]。在研究中發(fā)現(xiàn),枊葉菜與同科柳葉菜科不同屬植物粉花月見草(OenotheraroseaL.)植株形態(tài)特征相似。二者全體皆被柔毛,葉片形態(tài)、花冠等特征極為相似[4]。粉花月見草功效:強(qiáng)筋壯骨,祛風(fēng)除濕。主治風(fēng)濕病,筋骨疼痛[5]。粉花月見草藥材的研究報(bào)道較少,劉紹華[6]研究表明,粉花月見草草籽油富含γ-亞麻酸,具有潛在的廣譜抗真菌、抗細(xì)菌作用等。王芳等[7]通過抑菌圈法和最低抑菌濃度(MIC)法發(fā)現(xiàn)粉花月見草富含黃酮類化合物山奈酚,全草具有廣譜抗真菌、抗細(xì)菌的作用?；瘜W(xué)成分和藥理研究表明,花粉月見草根入藥具有消炎、降血壓、降血糖、降血脂等功效[8-9]。粉花月見草不僅具有以上藥用功效,還具有食療和保健的價(jià)值[10]。柳葉菜和粉花月見草兩種藥材的功效及主治迥異,而植物形態(tài)特征相似,在臨床上容易混淆,且目前未見關(guān)于二者的鑒別研究報(bào)道,因此,為鑒別二者所做的生藥研究具有十分重要的意義。本研究結(jié)果可為柳葉菜和粉花月見草的臨床鑒別使用提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器與試劑

生物顯微鏡(型號(hào):UB102i,廠家:重慶澳浦光電技術(shù)有限公司),YHG-500-BS遠(yuǎn)紅外快速恒溫干燥箱,粉碎機(jī)(型號(hào):800Y,永康市鉑歐五金制品有限公司)。電熱鼓風(fēng)干燥箱(天津市泰斯特儀器有限公司,101-1AB型);高速萬能粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司,FW100);電子分析天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司,BSA224S);四孔電熱恒溫水浴鍋(常州市華普達(dá)教學(xué)儀器有限公司,HH-4);超聲波清洗器(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司,科導(dǎo)SK8210LHC);三用紫外分析儀(上海市安亭電子儀器有限公司,ZF-2),硅膠G薄層色譜板(青島海洋化工廠,規(guī)格50 mm、100 mm,批號(hào):20180528)

槲皮素對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào)100081-201403);山奈酚對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào)110861-200011)。

水合三氯乙醛、稀甘油、間苯三酚、濃鹽酸、稀碘液、蒸餾水等,其他所用試劑均為分析純。

1.2 材 料

柳葉菜采于貴陽市烏當(dāng)區(qū),經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)丁寧老師鑒定為柳葉菜科柳葉菜的新鮮全草。粉花月見草采于貴陽市花溪區(qū),經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)孫慶文老師鑒定為柳葉菜科粉花月見草新鮮全草(圖1、圖2)。

注:1為植物小枝;2為花縱剖;3為根。

注:1為原植物;2為生境;3為根;4為花;5為花解剖。

2 方法與結(jié)果

2.1 顯微鑒別

2.1.1方 法

性狀鑒別法:在日光燈或明亮處對(duì)新鮮植株采用進(jìn)行眼觀、手摸、鼻聞及工具測(cè)量等方法,對(duì)柳葉菜和粉花月見草全草進(jìn)行外觀及性狀上的鑒別及描述。

橫切面制片法:對(duì)柳葉菜和粉花月見草的根、莖、葉分別用清水洗凈后,置于燒杯或托盤中用清水分別浸泡不同時(shí)間(根為24 h、莖為3～6 h、葉為0.5～1 h),選取適宜的實(shí)驗(yàn)材料對(duì)其進(jìn)行徒手切片,挑取薄而完整的材料置于載玻片上,先滴加濃鹽酸進(jìn)行解離,再滴加間苯三酚染色,最后滴加稀甘油后蓋上蓋玻片,制成臨時(shí)裝片后鏡檢。

表面制片法:取成熟柳葉菜和粉花月見草葉片用鑷子分別撕取其葉片的上下表皮,選取清晰完整且較大的表皮于載玻片上,滴加適量蒸餾水制成臨時(shí)裝片鏡檢。

粉末制片法:將新鮮柳葉菜和粉花月見草全草陰干,或可剪成小段放入烘箱中加熱烘干,烘干后用粉碎機(jī)粉碎,過60目篩,取過篩后的粉末于一旁備用,分別制水裝片和透化片。

水裝片法:取適量過篩藥粉于載玻片上,滴加一定蒸餾水,蓋片即得水裝片;透化裝片為取適量過篩藥粉于載玻片上,而后滴加1滴水合氯醛,再將載玻片置于酒精燈上加熱至水合氯醛微沸后,滴加一滴稀甘油,兩者分別置于光學(xué)顯微鏡下鏡檢。

2.1.2顯微鑒別法結(jié)果

柳葉菜和粉花月見草根橫切面顯微特征(圖3);

注:圖為放大400倍。下同。

柳葉菜和粉花月見草莖橫切面顯微特征(圖4);

圖4 柳葉菜(左)和粉花月見草(右)莖橫切面顯微組織特征

柳葉菜和粉花月見草葉橫切面顯微特征(圖5);

圖5 柳葉菜(左)和粉花月見草(右)葉橫切面顯微組織特征

柳葉菜和粉花月見草葉表皮顯微特征(圖6);

圖6 柳葉菜(左)和粉花月見草(右)葉表皮顯微特征

柳葉菜和粉花月見草粉末顯微特征(圖7)。

圖7 柳葉菜(左)和粉花月見草(右)粉末特征

2.2 薄層色譜鑒別

2.2.1薄層色譜鑒別方法

點(diǎn)樣量:5～10 μL。

薄層板:硅膠G薄層板。

展開劑:1) 甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸(9∶3∶1)。

2) 三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸(6∶2∶1.5)。

3) 二氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸(6∶3∶1.2)。

顯色方式:上行法展開,取出后揮干展開劑,噴以1%三氯化鋁溶液,置紫外光燈(365 nm)下檢視。

2.2.2供試品的制備

精密稱取已干燥粉碎的粉花月見草和柳葉菜各2.0 g,分別加甲醇25 mL,浸泡25 min,超聲45 min過濾。濾液蒸干后,加水溶解并定容于20 mL容量瓶中,用石油醚萃取2次,每次10 mL,棄去石油醚液。選擇水液,加稀鹽酸10 mL,水浴鍋水浴60 min后取出,迅速用流水冷卻,用乙酸乙酯萃取2次,每次10 mL,棄去水液,合并乙酸乙酯溶液,蒸干,殘?jiān)? mL甲醇溶解之后,用0.45 μm的微孔濾膜過濾,即得粉花月見草和柳葉菜供試品溶液。

2.2.3對(duì)照品的制備

分別取槲皮素、山奈酚對(duì)照品適量加甲醇溶解,分別制成每1 mL含0.3 mg的對(duì)照品溶液,備用。

2.2.4展開方法

按2020年版《中華人民共和國(guó)藥典》(四部)通則0502薄層色譜法[11],吸取粉花月見草、柳葉菜供試品溶液、槲皮素對(duì)照品、山奈酚對(duì)照品溶液各5～10 μL,分別點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板上,以3種不同展開系統(tǒng)展開,取出,晾干,噴以1%三氯化鋁乙醇溶液,于紫外燈(365 nm)下檢視。

2.2.5薄層色譜鑒別結(jié)果

系統(tǒng)1:甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸(9∶3∶1);系統(tǒng)2:三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸(6∶2∶1.5);系統(tǒng)3:二氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸(6∶3∶1.2)(圖8)。

3 討 論

3.1 原植物、性狀、顯微鑒別

通過對(duì)二者的鑒別研究發(fā)現(xiàn)柳葉菜原植物花瓣寬倒心形,葉披針狀橢圓形至狹葉倒卵形,基部近楔形;莖橫切面表皮外有單細(xì)胞非腺毛壁厚頂端不尖,中柱鞘纖維緊密連接成環(huán)狀。葉橫切面中葉肉組織含草酸鈣方晶;全草粉末有晶鞘纖維含方形,花粉粒表面略光滑。粉花月見草葉片披針形或長(zhǎng)圓形,基部呈細(xì)羽狀裂,葉緣齒突狀,花瓣寬倒卵形,雄蕊8枚排成平面;莖橫切面表皮有多細(xì)胞非腺毛,其壁厚具有疣狀突起。中柱鞘纖維斷續(xù)連接;葉橫切面上下表皮有多細(xì)胞非腺毛,頂端尖壁厚具有疣狀突起;全草粉末無晶鞘纖維和方晶,花粉粒表面具有疣狀突起。以上可以作為二者的顯微鑒別要點(diǎn)(見表1)。

3.2 薄層色譜鑒別

本研究對(duì)比3種不同展開劑(甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸=9∶3∶1、三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸=6∶2∶1.5及二氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸=6∶3∶1.2)對(duì)粉花月見草和柳葉菜在相同提取方法下制備的供試品進(jìn)行了薄層色譜鑒別考察其結(jié)果相同,確定粉花月見草中含有山奈酚,柳葉菜含有山奈酚及槲皮素,因此,可以作為粉花月見草和柳葉菜的鑒別依據(jù)。