雜交構(gòu)樹適宜收割高度與青貯加工工藝參數(shù)研究

宮 斌，李帥宏，范彩云，武欣燕，王 典，蘭儒冰，陸興偉，卓 釗，王菊花，程建波

（1.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，安徽 合肥 230036；2.內(nèi)蒙古優(yōu)然牧業(yè)有限責(zé)任公司，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010；3.安徽華好生態(tài)養(yǎng)殖有限公司，安徽 六安 237010）

雜交構(gòu)樹（hybrid Broussonetia papyrifera）是中國科學(xué)院植物研究所培育出的新型構(gòu)樹品種［1］，具有產(chǎn)量高、蛋白質(zhì)含量豐富、纖維素含量低、生長快、耐刈割等特性，是一種極具開發(fā)價(jià)值的非常規(guī)林業(yè)蛋白質(zhì)飼料資源［2-3］。 雜交構(gòu)樹能夠適應(yīng)嚴(yán)寒干燥、 高溫高濕、 土地貧瘠等多種極端環(huán)境條件，在我國多個(gè)地區(qū)廣泛種植［1］，構(gòu)樹產(chǎn)業(yè)在助力鄉(xiāng)村振興中發(fā)揮了重要作用。由于構(gòu)樹種植環(huán)境、生長時(shí)間和高度的差異， 常會導(dǎo)致其營養(yǎng)成分變化較大，尤其是收割方式、生長高度和收割時(shí)間直接影響其全株的營養(yǎng)成分含量［4］。曹力凡等［5］研究表明，雜交構(gòu)樹株高在1.4 cm 時(shí)，留茬40 cm 收割較為合適；郝陽毅等［6］研究發(fā)現(xiàn)生長高度為1.6 m，留茬高度為35 cm 時(shí)收割最為合適。 目前，構(gòu)樹收割時(shí)間、高度和標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一，導(dǎo)致構(gòu)樹飼料質(zhì)量參差不齊，影響構(gòu)樹產(chǎn)業(yè)的進(jìn)一步發(fā)展。 此外，雜交構(gòu)樹盡管可以作為一種新興的蛋白質(zhì)粗飼料飼喂動物［2］，但其不僅含有單寧等抗?fàn)I養(yǎng)因子，而且蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)復(fù)雜且粗纖維含量高， 動物大量采食后常由于適口性差而導(dǎo)致采食量下降， 消化利用率降低，使其在畜禽飼料中應(yīng)用受到限制。

青貯發(fā)酵加工不僅可以改善構(gòu)樹的適口性和消化性能，也可以軟化構(gòu)樹中的木質(zhì)素和纖維素，還能解決青綠構(gòu)樹飼料不能長期貯存的問題［7-8］。已有研究表明，在發(fā)酵構(gòu)樹過程中，乳酸菌等微生物可降解構(gòu)樹粗纖維和復(fù)雜蛋白質(zhì)產(chǎn)生乳酸、揮發(fā)性脂肪酸等芳香物質(zhì)及小分子肽和氨基酸［9］。然而， 目前雜交構(gòu)樹青貯發(fā)酵加工工藝參數(shù)還不完善。為此，該研究首先通過測定雜交構(gòu)樹的營養(yǎng)成分和生物產(chǎn)量，確定適宜的收割高度；然后以生長適宜期的新鮮構(gòu)樹為原料，選用植物乳桿菌、乳酸片球菌、布氏乳桿菌作為發(fā)酵菌種，開展雜交構(gòu)樹青貯加工工藝參數(shù)研究， 以期為制作雜交構(gòu)樹青貯發(fā)酵飼料提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 雜交構(gòu)樹

新鮮雜交構(gòu)樹枝葉采集自安徽省六安市安徽華好生態(tài)養(yǎng)殖公司。

1.1.2 青貯發(fā)酵菌種及物料

植物乳桿菌、 布氏乳桿菌和乳酸片球菌購自中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心， 糖蜜購自濰坊豐冠生物有限公司， 纖維素酶購自滄州夏盛酶生物技術(shù)有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

以構(gòu)樹每茬收獲株高為參數(shù)， 在每畝地選擇株高為0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 m 的構(gòu)樹各10 棵，分為5 組，分別進(jìn)行營養(yǎng)價(jià)值和生物產(chǎn)量測定。

采用L16（45）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化確定構(gòu)樹青貯加工工藝參數(shù)。 設(shè)置發(fā)酵菌種組合比例（A）、糖蜜添加量（B）、纖維素酶添加量（C）、青貯時(shí)間（D）4個(gè)因素（見表1）。 由表1 可知，因素A 菌種組合比例設(shè)置植物乳桿菌∶乳酸片球菌∶布氏乳桿菌添加比例0∶0∶0、1∶1∶1、2∶1∶1、4∶1∶1 共4 個(gè)水平， 試驗(yàn)菌種添加總量為1.0×107CFU/g； 因素B 糖蜜添加量設(shè)置0、10、20、30 g/kg 共4 個(gè)水平；因素C 纖維素酶添加量設(shè)置0、3×103、6×103、9×103U/kg 共4 個(gè)水平； 因素D 青貯時(shí)間設(shè)置15、30、45、60 d 共4個(gè)水平。 試驗(yàn)共16 個(gè)處理組，每個(gè)處理組3 個(gè)重復(fù)。 構(gòu)樹青貯發(fā)酵質(zhì)量通過感官指標(biāo)、化學(xué)指標(biāo)、有氧穩(wěn)定性及營養(yǎng)成分評定， 最終確定最優(yōu)的加工工藝參數(shù)組合。

表1 新鮮構(gòu)樹青貯正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.2 培養(yǎng)基制備及菌種活化

MRS 培養(yǎng)基配制：胰蛋白胨2 g，葡萄糖4 g，牛肉膏2 g，酵母提取物1 g，MnSO4·4H2O 0.076 g，MgSO4·7H2O 0.04 g，K2HPO40.4 g， 檸檬酸胺0.4 g（固體培養(yǎng)基加瓊脂粉3.2 g），吐溫-80 0.2 mL，加入無菌水至200 mL，121 ℃高壓滅菌15 min，待培養(yǎng)基冷至50 ℃時(shí)傾入無菌平皿中，在24 h 內(nèi)使用。

植物乳桿菌、 乳酸片球菌和布氏乳桿菌菌種均在30 ℃、pH 值為6.8 的條件下，用MRS 培養(yǎng)基培養(yǎng)活化。

1.2.3 不同收割時(shí)期雜交構(gòu)樹生物產(chǎn)量測定

2020 年全年記錄構(gòu)樹生長茬數(shù)和每茬生長時(shí)間，每畝地收割不同高度的構(gòu)樹后稱重，分別記錄每畝地不同高度構(gòu)樹的重量，采樣烘干后測算干物質(zhì)量（DM）和粗蛋白（CP）量，估算構(gòu)樹在不同株高收獲時(shí)的生物產(chǎn)量。根據(jù)采集的每畝構(gòu)樹株數(shù)，計(jì)算畝產(chǎn)量，綜合評估確定構(gòu)樹飼料的適宜收割高度。

1.2.4 雜交構(gòu)樹常規(guī)營養(yǎng)成分測定

采集不同生長時(shí)間的構(gòu)樹莖葉樣品，烘干后測定其DM、CP、粗灰分（Ash）、粗脂肪（EE）、中性洗滌纖維（NDF）、酸性洗滌纖維（ADF）含量。 DM、Ash、CP、EE 含量參考張麗英［10］報(bào)道的方法測定；ADF和NDF 含量參照Van Soest 等［11］報(bào)道的方法測定。

1.2.5 雜交構(gòu)樹青貯制作

收集長勢良好、無病蟲害、適宜株高的新鮮構(gòu)樹，用鍘刀鍘成2～4 cm 長的小段，作為青貯原料。將原料按表1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案混合均勻，裝入25 cm×36 cm 的發(fā)酵袋中，每袋200 g，每個(gè)處理組3 個(gè)重復(fù)，真空封口，室溫下發(fā)酵一定時(shí)間后，收集樣品評定其有氧穩(wěn)定性、現(xiàn)場感官和化學(xué)指標(biāo)。

1.2.6 雜交構(gòu)樹青貯現(xiàn)場感官評定

參照《青貯飼料質(zhì)量評定標(biāo)準(zhǔn)》［12］，對雜交構(gòu)樹青貯飼料的pH 值、水分、氣味、色澤、質(zhì)地進(jìn)行評分，并計(jì)算總得分。 pH 值測定：收集30 g 青貯飼料于200 mL 容器中，加入120 mL 超純水，加塞，于4 ℃冰柜中浸提24 h 后，將浸提液通過定量濾紙過濾后分為兩部分：一部分濾液采用pHs-3C 型精密pH 計(jì)測定其pH 值， 另一部分濾液用于化學(xué)成分評定。 水分測定：取適量青貯料在105 ℃的烘箱內(nèi)烘18 h 后再進(jìn)行稱重，所失重量為青貯水分含量。

1.2.7 雜交構(gòu)樹青貯料化學(xué)成分評定

將“1.2.6”項(xiàng)下所得另一部分青貯飼料浸提液的濾液分裝在2 個(gè)5 mL 離心管中， 于-20 ℃冰箱中貯存，用于測定總氮（TN）、氨氮（NH3-N）和有機(jī)酸（乳酸、乙酸和丁酸）濃度。 NH3-N 濃度采用苯酚-次氯酸鈉法測定［13］；TN 利用凱氏定氮法測定［14］；有機(jī)酸濃度采用高效液相色譜法測定［15］，乙酸、丁酸和乳酸含量之和即為總有機(jī)酸含量。 化學(xué)評定總得分=氮/總氮（NH3-N/TN）得分+有機(jī)酸得分（乳酸、乙酸和丁酸得分之和除以2）。

1.2.8 雜交構(gòu)樹青貯有氧穩(wěn)定性評定

每個(gè)組合取200 g 樣品放入自封袋，并插入溫度計(jì)，每4 h 于陰暗處記錄1 次溫度變化，直至樣品的溫度超過環(huán)境溫度2 ℃為止。

1.2.9 雜交構(gòu)樹青貯營養(yǎng)成分評定

測定青貯飼料的CP、ADF 和NDF 含量，方法參照“1.2.4”項(xiàng)下。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行單因素方差分析和Duncan′s 多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”的形式表示，P＜0.05 為差異顯著，P＜0.01 為差異極顯著，P＞0.05 為差異不顯著。青貯發(fā)酵得分正交分析采用極差分析法和綜合平衡法進(jìn)行，ki為該因素i 水平的平均值，NH3-N/TN、ADF和NDF 指標(biāo)ki越小，水平越優(yōu)，其他指標(biāo)ki越大表明該水平越優(yōu)； 極差R 值為該因素各水平均值中最大值與最小值之差，R 值越大表明該因素對結(jié)果影響越大。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同收獲高度雜交構(gòu)樹的生物產(chǎn)量與營養(yǎng)價(jià)值

由表2 可以看出，構(gòu)樹鮮重畝產(chǎn)量、干物質(zhì)畝產(chǎn)量隨著收割高度升高而增加， 各組差異極顯著（P＜0.01）。 蛋白質(zhì)畝產(chǎn)量也隨著收割高度升高而增加，1.4 m 組最高，極顯著（P＜0.01）高于其他組；1.2 m 組極顯著（P＜0.01）高于0.6、0.8 m 組，顯著（P＜0.05）高于1.0 m 組；1.0 m 組極顯著（P＜0.01）高于0.6、0.8 m 組。 營養(yǎng)成分分析結(jié)果表明，構(gòu)樹CP 含量隨著收割高度升高而降低，1.4 m 組最低，顯著（P＜0.05）低于其他組；1.2 m 組顯著（P＜0.05）低于0.6、0.8、1.0 m 組，1.0 m 組顯著（P＜0.05）低于0.6、0.8 m 組。 NDF 和ADF 含量隨著收割高度升高而升高，1.4 m 組最高，顯著（P＜0.05）高于0.6、0.8 和1.0 組，其他各組之間差異不顯著（P＞0.05）。EE 含量隨著收割高度升高表現(xiàn)為先升高后降低，1.2 m 組最高，顯著（P＜0.05）高于0.6、0.8 m 組，而其他各組之間差異均不顯著（P＞0.05）。 綜合產(chǎn)量和營養(yǎng)價(jià)值分析，在雜交構(gòu)樹高度為1.2m 時(shí)收割最佳。

表2 不同收割高度對雜交構(gòu)樹產(chǎn)量和營養(yǎng)價(jià)值的影響

2.2 新鮮構(gòu)樹青貯感官評定結(jié)果

由表3 可知，處理1 組（試驗(yàn)號1）青貯的pH值顯著（P＜0.05）高于其他處理組，感官評定總得分最低；處理5 組（試驗(yàn)號5）青貯的pH 值最低，總得分最高。 通過正交分析發(fā)現(xiàn)影響新鮮構(gòu)樹青貯感官評定的因素由大到小為A＞C＞B＞D，最優(yōu)組合為A4C4B4D3。

表3 新鮮構(gòu)樹青貯感官評定正交分析

2.3 新鮮雜交構(gòu)樹青貯化學(xué)評定結(jié)果

由表4 可知，處理2 組（試驗(yàn)號2）的NH3-N/TN 最高，與處理3 組無顯著（P＞0.05）差異，顯著（P＜0.05）高于其他處理組；處理15 組（試驗(yàn)號15）的NH3-N/TN 最低；乳酸含量最高是處理9 組（試驗(yàn)號9），含量最低組為處理1 組（試驗(yàn)號1）；乙酸含量最高的是處理2 組（試驗(yàn)號2），處理9 組（試驗(yàn)號9）最低；處理1 組（試驗(yàn)號1）的丁酸含量最高，顯著（P＜0.05）高于其他處理組，丁酸含量最低組是處理13 組（試驗(yàn)號13）；化學(xué)評定總得分最高是處理16 組（試驗(yàn)號16），總得分最低為處理2 組（試驗(yàn)號2）。 正交分析可以發(fā)現(xiàn)化學(xué)評定的影響因素由大到小為A＞B＞C＞D，最優(yōu)組合為A4B4C3D4。

表4 新鮮構(gòu)樹青貯化學(xué)評定正交分析表

2.4 新鮮構(gòu)樹青貯有氧穩(wěn)定性評定結(jié)果

由表5 可知，處理5 組（試驗(yàn)號5）的有氧穩(wěn)定性最高，高于（P＞0.05）處理8 組（試驗(yàn)號8），顯著（P＜0.05）高于其他處理組；處理1 組（試驗(yàn)號1）的有氧穩(wěn)定性最低，顯著（P＜0.05）低于其他處理組。正交分析中，有氧穩(wěn)定性評定的影響因素由大到小為A＞B＞C＞D，最優(yōu)組合為A2B3C3D4。

表5 新鮮構(gòu)樹青貯有氧穩(wěn)定性評定正交分析表

2.5 新鮮構(gòu)樹青貯營養(yǎng)成分評定結(jié)果

由表6 可知，處理14 組（試驗(yàn)號14）的CP 含量最高，處理1 組（試驗(yàn)號1）的CP 含量最低；處理1 組（試驗(yàn)號1）的ADF 和NDF 含量最高，處理10 組（試驗(yàn)號10）ADF 和NDF 含量最低。 正交分析中， 影響CP 含量的因素由大到小為：A＞B＞D＞C，最優(yōu)組合為A4B4D3C4；影響ADF 含量的因素由大到小為A＞B＞C＞D， 最優(yōu)組合為A3B4C4D4；影響NDF 含量的因素由大到小為C＞A＞D＞B，最優(yōu)組合為C4A3B4D4。

表6 新鮮構(gòu)樹青貯營養(yǎng)成分評定正交分析表

2.6 新鮮構(gòu)樹青貯綜合平衡法分析

由表7 可知， 新鮮構(gòu)樹青貯中影響青貯品質(zhì)的因素由大到小為A＞B＞C＞D，菌種組合比例、糖蜜添加量、纖維素酶添加量、青貯時(shí)間分別以A4、B4、C4、D4 水平最優(yōu)， 即菌種組合為4∶1∶1， 糖蜜添加量為3%，纖維素酶添加量為9×103U/kg，青貯時(shí)間60 d。

表7 新鮮構(gòu)樹青貯正交試驗(yàn)綜合平衡法分析表

3 討論

3.1 不同收獲高度對構(gòu)樹產(chǎn)量和營養(yǎng)成分的影響

雜交構(gòu)樹是一種保護(hù)生態(tài)環(huán)境和水土保持優(yōu)良樹種，可以生長到10 m 以上，枝葉茂盛，樹葉寬大無毛，有白色樹汁［16］。 隨著收獲高度的增加，構(gòu)樹的生長時(shí)間延長，枝葉分支變多，構(gòu)樹的生物產(chǎn)量也隨之增加。但隨著收獲高度的增加，構(gòu)樹的枝干變粗，木質(zhì)素和纖維素積累也隨之增多。 因此，研究適宜的收割高度和收割期， 對構(gòu)樹營養(yǎng)成分控制具有重要的意義。劉玉等［17］研究表明，與莖稈相比， 構(gòu)樹葉中CP、EE 和Ca 含量較高，ADF 和NDF 含量較低。隨著收獲高度的增加，構(gòu)樹的莖葉比升高，導(dǎo)致全株構(gòu)樹的粗蛋白含量降低，纖維含量升高。 沈世華等［18］研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)構(gòu)樹生長到1 m左右時(shí)， 可連桿帶葉全株采收， 適宜用作加工飼料。收獲高度太低會導(dǎo)致構(gòu)樹總體生物產(chǎn)量降低，而高度太高又會導(dǎo)致構(gòu)樹營養(yǎng)品質(zhì)降低和收割茬數(shù)變少， 合適的收獲高度是構(gòu)樹資源利用最大化的保證。 因此該研究首先對構(gòu)樹的適宜收割期進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)隨著收獲高度的增加，構(gòu)樹的鮮重產(chǎn)量、 干物質(zhì)產(chǎn)量和粗蛋白產(chǎn)量都顯著升高，CP 含量顯著降低，EE、ADF 和NDF 含量顯著增加，這與劉玉等［17］的研究結(jié)果一致。 該試驗(yàn)綜合構(gòu)樹生物產(chǎn)量和營養(yǎng)指標(biāo)評估， 確定構(gòu)樹飼料的適宜收割高度為1.2 m，后期制作構(gòu)樹青貯飼料時(shí)均選擇這一高度時(shí)進(jìn)行收割。

3.2 不同因素組合對構(gòu)樹青貯感官評定的影響

感官評定是評價(jià)青貯發(fā)酵品質(zhì)的重要依據(jù)之一，可以簡單有效地判斷青貯飼料發(fā)酵的品質(zhì)，因此，在該研究中，感官評定作為構(gòu)樹青貯的評價(jià)指標(biāo)之一。pH 值是衡量青貯飼料感官發(fā)酵品質(zhì)的重要指標(biāo)，品質(zhì)優(yōu)良的青貯飼料pH 值為3.8～4.2，pH值越低，青貯飼料越容易保存［19］。 此外，在青貯發(fā)酵過程中，乳酸菌是青貯優(yōu)勢菌群，但其在原料表面附著較少。 研究表明加入適宜的乳酸菌制劑可以增加發(fā)酵初期乳酸菌數(shù)量，快速產(chǎn)生乳酸，降低pH 值， 促進(jìn)青貯初期盡快進(jìn)入乳酸發(fā)酵階段［20］。而植物乳桿菌和乳酸片球菌屬于同質(zhì)乳酸菌，能快速降低原料的pH 值，布氏乳桿菌屬于異質(zhì)乳酸菌，在發(fā)酵時(shí)能夠產(chǎn)生乙酸，提高青貯的有氧穩(wěn)定性［21］。 纖維素酶對青貯的改善效果主要體現(xiàn)在能夠分解構(gòu)樹中的纖維素、半纖維素等方面，為乳酸菌生長提供養(yǎng)分，改善青貯品質(zhì)［22］。 在該研究中，不進(jìn)行任何處理組構(gòu)樹青貯pH 值最高，顯著高于其他處理組，總得分也最低，也證實(shí)了前面的研究結(jié)果［19］，說明不添加輔料直接青貯構(gòu)樹，效果較差，添加輔料后構(gòu)樹的青貯效果明顯改善。從正交試驗(yàn)的極差分析中也可以看出， 隨著植物乳桿菌的添加比例、糖蜜含量、纖維素酶和青貯時(shí)間的增加，青貯的感官評分也隨之增加。正交分析結(jié)果說明青貯菌種對青貯感官評定的影響最大， 其次是纖維素酶，最后是糖蜜和青貯時(shí)間。

3.3 不同因素組合對構(gòu)樹青貯化學(xué)評定的影響

NH3-N/TN 的值能夠反映青貯飼料中蛋白質(zhì)與氨基酸的分解程度，比值越大，說明蛋白質(zhì)分解越多，青貯質(zhì)量不佳［23］。 在該研究中，發(fā)現(xiàn)青貯時(shí)添加了糖蜜和纖維素酶后NH3-N/TN 最高， 這可能是因?yàn)樘砑恿颂敲酆屠w維素酶后， 發(fā)酵底物增多而乳酸菌濃度較低， 導(dǎo)致短時(shí)間內(nèi)腐敗菌快速繁殖所致。 而在添加乳酸菌后，NH3-N/TN 含量降低，說明添加乳酸菌后，糖蜜和纖維素酶對青貯起著積極作用。一些研究表明，青貯過程中添加乳酸菌可加快發(fā)酵速度， 同時(shí)有效抑制有害微生物的繁殖，減少各種好氧腐敗菌繁殖，降低了青貯干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)和水溶性碳水化合物的損耗，降低乙酸和丁酸含量［24］。此外，陳雷等［25］發(fā)現(xiàn)全株玉米青貯過程中添加乳酸菌和糖蜜能夠顯著提高青貯品質(zhì)， 糖蜜和乳酸菌制劑的聯(lián)合使用加快了乳酸菌生長繁殖，提高了乳酸的生成速度。 該試驗(yàn)中，添加了混合青貯劑后， 各處理組的NH3-N/TN 均降低，乳酸含量均升高，丁酸含量均降低，說明混合青貯劑對構(gòu)樹青貯起到了明顯的改善作用， 這也與朱琳等［26］、司丙文等［27］的研究結(jié)果一致。從正交試驗(yàn)的極差分析中可以看出， 隨著植物乳桿菌比例、糖蜜含量和青貯時(shí)間的增加，構(gòu)樹青貯的化學(xué)評分也隨之升高。 正交分析中表明菌種組合對構(gòu)樹青貯化學(xué)評定的影響最大， 其次是糖蜜添加量和纖維素酶添加量，最后是青貯時(shí)間。

3.4 不同因素組合對構(gòu)樹青貯有氧穩(wěn)定性的影響

有氧穩(wěn)定性是指青貯飼料接觸氧氣后溫度上升，超過環(huán)境溫度2 ℃所需要的時(shí)間。 當(dāng)青貯窖開封時(shí)，一些有氧微生物接觸空氣開始復(fù)蘇，利用青貯中剩余的營養(yǎng)成分繁殖發(fā)酵， 導(dǎo)致青貯溫度升高，pH 值升高，營養(yǎng)成分降低［28］。 延長青貯飼料的有氧穩(wěn)定時(shí)間是保證青貯品質(zhì)的重要條件。 在該研究中，添加了混合青貯劑后，各處理組的有氧穩(wěn)定性均顯著升高。 Filya 等［29］研究也發(fā)現(xiàn)，添加同質(zhì)型乳酸菌制劑在提高青貯發(fā)酵品質(zhì)的同時(shí)降低了青貯的有氧穩(wěn)定性， 而添加異質(zhì)型乳酸菌能夠明顯提高青貯飼料的有氧穩(wěn)定性，此外，在青貯中添加纖維素酶后，能夠抑制腐敗菌的增殖，提高青貯有氧穩(wěn)定性［30］。該試驗(yàn)中，從正交試驗(yàn)的極差分析中可以看出， 隨著糖蜜含量和纖維素酶含量的增加，構(gòu)樹青貯的有氧穩(wěn)定性先升高后降低，隨著植物乳桿菌比例的增加，布氏乳桿菌比例的降低，構(gòu)樹青貯的有氧穩(wěn)定性逐漸降低。這也與黃媛等［31］的研究結(jié)果一致。 正交分析表明菌種比例對新鮮構(gòu)樹青貯有氧穩(wěn)定性影響最大， 其次是糖蜜添加量、纖維素酶添加量和青貯時(shí)間。

3.5 不同因素組合對構(gòu)樹青貯營養(yǎng)成分的影響

青貯發(fā)酵不僅能夠延長飼料的保存時(shí)間，還能改善飼料中的營養(yǎng)物質(zhì)含量，提高其營養(yǎng)價(jià)值。研究已經(jīng)證實(shí)， 乳酸菌可以分解飼料中溶性碳水化合物（WSC）產(chǎn)生乳酸，也可利用飼料中的含氮物質(zhì)合成菌體蛋白，提高青貯飼料中CP 的含量［32］。此外，Colombatto 等［33］在青貯中添加纖維素酶后，發(fā)現(xiàn)能提高纖維素、 半纖維素在青貯中的降解速率，降低原料中ADF 和NDF 含量，同時(shí)纖維素降解后產(chǎn)生的物質(zhì)能夠被乳酸菌吸收利用， 既加快了乳酸菌的生長繁殖， 又提高了乳酸菌合成的菌體蛋白含量，進(jìn)而提高飼料中CP 含量。該試驗(yàn)中，添加了混合青貯劑后，各處理組的CP 含量均顯著升高，ADF 和NDF 含量均顯著降低， 說明菌酶聯(lián)合制劑對構(gòu)樹青貯的營養(yǎng)品質(zhì)有改善效果。 與ADF 相比，NDF 的降低幅度更大， 且部分處理組中ADF 含量反而升高， 這與前面的研究結(jié)果類似［33］， 可能是由于ADF 中含有大量的木質(zhì)素，短時(shí)間內(nèi)較難被微生物降解， 而構(gòu)樹青貯過程中由于呼吸作用和微生物發(fā)酵，導(dǎo)致水分蒸發(fā)，干物質(zhì)降低，進(jìn)而導(dǎo)致ADF 含量升高。 該試驗(yàn)從正交試驗(yàn)的極差分析中可以看出， 隨著植物乳桿菌比例和糖蜜含量增加， 構(gòu)樹青貯的CP 含量逐漸增加，隨著植物乳桿菌比例、糖蜜含量、纖維素酶含量和青貯時(shí)間的增加， 構(gòu)樹青貯的ADF 和NDF 含量隨之降低，這與司丙文等［27］、黃媛等［31］研究結(jié)果一致。 正交分析發(fā)現(xiàn)菌種比例對CP 和ADF 的影響最大，其次是糖蜜添加量、青貯時(shí)間和纖維素酶添加量；此外，纖維素酶含量對NDF 的影響最大，其次是菌種比例、青貯時(shí)間和糖蜜添加量。

3.6 不同因素組合對構(gòu)樹青貯品質(zhì)影響的綜合平衡法分析

綜合不同因素對構(gòu)樹青貯品質(zhì)影響的正交分析發(fā)現(xiàn)：感官評定、化學(xué)評定、有氧穩(wěn)定性評定、CP和ADF 評定中因素A 的極差最大； 化學(xué)評定、有氧穩(wěn)定性評定、CP 和ADF 評定中，B 的極差均大于C、D；感官評定、化學(xué)評定、有氧穩(wěn)定性評定、ADF 和NDF 評定中C 的極差均大于D，說明不同因素對構(gòu)樹青貯品質(zhì)的影響為A＞B＞C＞D。 在菌種比例水平上，感官評定、化學(xué)評定和CP 評定中都以A4 水平最優(yōu)， 說明菌種組合中A4 水平最優(yōu)。在糖蜜含量水平上， 感官評定、 化學(xué)評定、CP 評定、ADF 和NDF 評定中，均以B4 水平最優(yōu)，即糖蜜含量中B4 水平最優(yōu)。 纖維素酶含量中，感官評定、CP 評定、ADF 和NDF 評定都以C4 水平最優(yōu)，即纖維素酶含量中C4 水平最優(yōu)。 青貯時(shí)間上，化學(xué)評定、 有氧穩(wěn)定性評定、ADF 和NDF 評定均以D4 水平最優(yōu)，即青貯時(shí)間中D4 水平最優(yōu)。 綜上，不同因素對新鮮構(gòu)樹青貯品質(zhì)的影響的大小順序?yàn)椋壕N組合＞糖蜜添加量＞纖維素酶添加量＞青貯時(shí)間，且分別以A4、B4、C4 和D4 水平最優(yōu)。

4 結(jié)論

構(gòu)樹青貯最佳工藝參數(shù)： 菌種組合為植物乳桿菌∶乳酸片球菌∶布氏乳桿菌（4∶1∶1）、糖蜜添加量為3%、纖維素酶添加量為9×103U/kg、青貯時(shí)間60 d。 該研究確定了雜交構(gòu)樹適宜的收割高度和構(gòu)樹青貯飼料最佳加工工藝參數(shù)。