腦膠質(zhì)瘤組織中HAS2、ADAMDEC1蛋白及VTN表達(dá)臨床意義

王浩巖,李英夫,王 鶴

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)外科,黑龍江 佳木斯 154003)

腦膠質(zhì)瘤為顱內(nèi)常見(jiàn)的原發(fā)性腫瘤,發(fā)病率約占全部原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的40%～60%[1]。腦膠質(zhì)瘤具有病情進(jìn)展快、復(fù)發(fā)率高等特征,常對(duì)患者身心健康及生存質(zhì)量造成嚴(yán)重影響。在評(píng)估和判斷顱內(nèi)膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)的位置時(shí),磁共振顯像(MRI)具有較高診斷靈敏度、特異度及準(zhǔn)確度[2];此外,有研究表明:MRI多序列掃描診斷不同腦膠質(zhì)瘤的強(qiáng)化方式和ADC值能評(píng)估腦膠質(zhì)瘤的高、低級(jí)別,可以為腦膠質(zhì)瘤的診斷提供精確的判斷[3]。術(shù)前無(wú)創(chuàng)的“綜合診斷”將為一些特殊部位的腫瘤且無(wú)法接受開(kāi)顱手術(shù)或針吸活檢的患者的治療和預(yù)后帶來(lái)極大的好處。Ki-67/MIB-1標(biāo)記指數(shù)(LI)在臨床上用于區(qū)分高級(jí)別和低級(jí)別的膠質(zhì)瘤,多變量分析顯示Ki-67/MIB-1-LI表達(dá)<15%與更長(zhǎng)的總生存期(OS)顯著相關(guān),獨(dú)立于患者的年齡、Karnofsky表現(xiàn)狀態(tài)量表、生存時(shí)間范圍和O-甲基鳥(niǎo)嘌呤(O6-MeG)-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶啟動(dòng)子甲基化狀態(tài);在其他集中于Ki-67/MIB-1-LI的研究中,有研究顯示表達(dá)野生型異檸檬酸脫氫酶(IDH)的GBM患者的OS與Ki-67/MIB-1-LI呈正相關(guān),并提出Ki-67/mi b-1-LI是這種GBM亞型的一個(gè)新的預(yù)測(cè)標(biāo)志物[4]?，F(xiàn)階段臨床治療腦膠質(zhì)瘤的方法具有多樣性,目前最流行的臨床治療策略是最大限度的手術(shù)切除結(jié)合放療和化療。一些侵襲性腦腫瘤,尤其是腦膠質(zhì)瘤,通常發(fā)生在大腦涉及語(yǔ)言和運(yùn)動(dòng)功能的功能區(qū),腦腫瘤切除最重要的目標(biāo)是安全地切除最大量的腫瘤,同時(shí)保留神經(jīng)功能,最大化切除腫瘤的量被認(rèn)為可以通過(guò)延長(zhǎng)患者的無(wú)進(jìn)展期和總生存期來(lái)改善預(yù)后[5]。有研究表明[6],由于血液難以滲透血-腦屏障(BBB),因此GBM對(duì)目前的化學(xué)療法反應(yīng)不佳,BBB會(huì)嚴(yán)重阻止治療藥物進(jìn)入大腦,同時(shí),藥物的非靶向分布還會(huì)對(duì)脆弱的腦組織造成不同程度的副作用,因此,具有血腦屏障滲透性和精確性的給藥對(duì)于腦膠質(zhì)瘤的治療非常必要。雖然,臨床上綜合治療的應(yīng)用為腦膠質(zhì)瘤患者的治療提供了新的思路和方法,但對(duì)于惡性程度較高的腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤來(lái)說(shuō),患者的治療效果還是不太理想,其生存時(shí)間大多低于2年[7]。腦膠質(zhì)瘤由于其生長(zhǎng)速度快,侵襲性強(qiáng),死亡率高,患者存活時(shí)間短,故腦膠質(zhì)瘤的早期治療極其重要[6]。因此,對(duì)腦膠質(zhì)瘤患者進(jìn)行早期診斷,及時(shí)施以個(gè)體化治療,對(duì)于改善患者的預(yù)后具有重要意義。近年,伴隨臨床對(duì)分子靶向治療研究的不斷深入,愈來(lái)愈多的與腫瘤診斷、預(yù)后及治療有關(guān)的基因被發(fā)現(xiàn)[8]。透明質(zhì)酸合酶2(HAS2)是一種糖基轉(zhuǎn)移酶,其可以合成多種不同分子量的透明質(zhì)酸(HA),HA是一種天然多糖,具有寬分子量范圍、負(fù)電荷表面、配體-受體結(jié)合能力和透明質(zhì)酸酶分解能力[9],它在腫瘤的生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移方面發(fā)揮著一定的作用。ADAMDEC1是一種蛋白水解活性金屬蛋白酶,參與細(xì)胞黏附、侵襲和遷移,其具有兩種結(jié)構(gòu)域,并與腫瘤的惡性程度成正相關(guān),會(huì)促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲,同時(shí)也會(huì)抑制細(xì)胞凋亡[10]。玻連蛋白(VTN)是一種具有多種生理功能的多功能糖蛋白,存在于血漿和細(xì)胞外基質(zhì)中,已知它可以通過(guò)某些途徑與整聯(lián)蛋白受體結(jié)合,參與細(xì)胞附著、擴(kuò)散和遷移。但臨床關(guān)于三者在腦膠質(zhì)瘤患者癌組織內(nèi)表達(dá)的報(bào)道較為少見(jiàn)?；诖?本研究以2021年8月至2022年8月本院收治的89例患者為研究對(duì)象,分析HAS2、ADAMDEC1蛋白、VTN在腦膠質(zhì)瘤患者體內(nèi)的表達(dá)及其意義。報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn),將2021年8月至2022年8月本院收治的89例腦膠質(zhì)瘤患者納入觀察組,另將同期本院行手術(shù)治療的無(wú)任何腫瘤疾病的90例腦外傷患者納入對(duì)照組。(1)納入標(biāo)準(zhǔn):經(jīng)病理檢查確診為腦膠質(zhì)瘤患者;對(duì)照組因撞傷等入院,無(wú)任何腫瘤疾病;患者的生命體征平穩(wěn);認(rèn)知清晰,可行正常交流;患者具有較為優(yōu)良的依從性;所有患者納入均遵循自愿原則,并簽訂同意書(shū)。(2)排除標(biāo)準(zhǔn):存在嚴(yán)重精神障礙者;伴有傳染性疾病者;伴有自身免疫性疾病者;合并酒精、藥物依賴史者;存在血液系統(tǒng)病癥者;伴有凝血功能紊亂者;合并其它惡性腫瘤者。對(duì)照組男48例,女42例;年齡41～75歲,平均(60.38±2.49)歲;體質(zhì)量指數(shù)(BMI)18.5～26.7kg/m2,平均BMI(24.86±0.49)kg/m2;文化程度:26例小學(xué),41例初高中,23例專科及以上。觀察組男50例,女39例;年齡42～78歲,平均(60.51±2.30)歲;BMI 18.6～27.0kg/m2,平均BMI(24.92±0.41)kg/m2;文化程度:23例小學(xué),38例初高中,28例?？萍耙陨?。兩組各項(xiàng)資料相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 方法

標(biāo)本采集:于術(shù)中遵循無(wú)菌操作原則,采集兩組患者的腦組織標(biāo)本,以免疫組織化學(xué)法測(cè)定HAS2、ADAMDEC1蛋白、VTN的表達(dá)。具體檢測(cè)方法:將收集到的腦組織標(biāo)本用10%甲醇溶液連續(xù)固定24h,固定完成之后用石蠟包埋,將其制備為4μm的厚片;然后以檸檬酸鈉緩沖液行抗原修復(fù),滴加3%過(guò)氧化氫溶液,在室溫條件下孵育15min,孵育完畢后再用磷酸緩沖鹽溶液(PBS)沖洗3次;用10%山羊血清于室溫環(huán)境下封存30min,滴入一抗,在4℃條件下過(guò)夜,第2d再用PBS沖洗3次,滴入二抗后在室溫下孵育30min,最終以蘇木素染色,脫水、封片,鏡檢。陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn):①染色強(qiáng)度:0分:不著色;1分:淡黃色;2分:棕黃色;3分:棕褐色。②陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)評(píng)分:1分:陽(yáng)性表達(dá)率為1%～10%;2分:陽(yáng)性表達(dá)率為11%～50%;3分:陽(yáng)性表達(dá)率>50%。其中染色強(qiáng)度與陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)評(píng)分相乘在3分以上者為陽(yáng)性,相反則為陰性。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)兩組HAS2、ADAMDEC1蛋白、VTN陽(yáng)性表達(dá)對(duì)比:統(tǒng)計(jì)對(duì)比對(duì)照組與觀察組的HAS2、ADAMDEC1蛋白、VTN陽(yáng)性表達(dá)差異。(2)HAS2、ADAMDEC1蛋白、VTN與腦膠質(zhì)瘤患者臨床病理特征間的關(guān)系:收集腦膠質(zhì)瘤患者的年齡(≥60歲、<60歲)、性別(男、女)、BMI(≥24kg/m2、<24kg/m2)、腫瘤部位(額葉、顳葉、頂葉)、腫瘤直徑(≥5cm、<5cm)、世界衛(wèi)生組織(WHO)分級(jí)(Ⅰ-Ⅱ級(jí)、Ⅲ-Ⅳ級(jí))、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(有、無(wú)),統(tǒng)計(jì)分析HAS2、ADAMDEC1蛋白、VTN的表達(dá)與患者各項(xiàng)病理特征間的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組HAS2、ADAMDEC1蛋白、VTN陽(yáng)性表達(dá)對(duì)比

觀察組HAS2、ADAMDEC1蛋白、VTN陽(yáng)性表達(dá)率高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表1。

表1 兩組HAS2、ADAMDEC1蛋白、VTN陽(yáng)性表達(dá)對(duì)比[n(%)]

2.2 HAS2、ADAMDEC1蛋白、VTN與腦膠質(zhì)瘤患者臨床病理特征間的關(guān)系

HAS2、ADAMDEC1蛋白、VTN表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤患者的年齡、性別、BMI、腫瘤部位無(wú)關(guān),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);與腫瘤直徑、WHO分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表2。

表2 HAS2、ADAMDEC1蛋白、VTN與腦膠質(zhì)瘤患者臨床病理特征間的關(guān)系[n(%)]

3 討論

腦膠質(zhì)瘤起源于腦神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,發(fā)生率與死亡率較高[11]。腦膠質(zhì)瘤的發(fā)病機(jī)制較復(fù)雜,尚未徹底明確,通常認(rèn)為與環(huán)境改變和基因變異有關(guān),而病毒、細(xì)菌感染等致癌因素亦與該病的發(fā)生與發(fā)展聯(lián)系緊密[12]。近年,以手術(shù)為主的綜合治療措施快速發(fā)展,使得腦膠質(zhì)瘤的死亡率有所降低[13]。然而,由于腦膠質(zhì)瘤具有高度侵襲性,手術(shù)很難將腫瘤完全切除,導(dǎo)致腫瘤極易復(fù)發(fā),尤其是膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者的預(yù)后仍較差[14]。因此,積極探明腦膠質(zhì)瘤的發(fā)病機(jī)制,制定更具個(gè)體化的治療方案,對(duì)于確保患者治療效果和預(yù)后具有重要意義[15]。

HA是一種大分子的酸性黏多糖,廣泛分布在機(jī)體的組織細(xì)胞內(nèi),在機(jī)體的生理與病理反應(yīng)過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。生理情況下,HA因其自身的黏性與保水能力,對(duì)于組織的平衡、生物力學(xué)和機(jī)構(gòu)的完整性有重要意義,而在病理狀態(tài)下,HA在損傷處的表達(dá)更為豐富。HAS2是HA合成酶家族的一員,通過(guò)特異性的合成不同分子量的HA,以此促進(jìn)腦膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移[16]。ADAMDEC1蛋白為ADAM的成員,具有整聯(lián)蛋白、金屬內(nèi)胎酶結(jié)合的活性[17]。同時(shí),ADAMDEC1蛋白能夠降解細(xì)胞膜內(nèi)的多種蛋白,并破壞阻止癌細(xì)胞侵襲的組織學(xué)屏障,在惡性腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移內(nèi)發(fā)揮關(guān)鍵作用[18]。ADAMDEC1蛋白不僅會(huì)增加腫瘤細(xì)胞的黏附與定植能力,還會(huì)通過(guò)一些途徑參與細(xì)胞因子的加工及胞外基質(zhì)的降解。VTN屬于膜相關(guān)蛋白,參與細(xì)胞外基質(zhì)的形成,在腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展中起間接促進(jìn)作用。VTN含有RGD序列,可通過(guò)與表達(dá)在癌細(xì)胞表層的整合素αvβ3相互結(jié)合,調(diào)節(jié)腫瘤干細(xì)胞的分化,間接促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[19]。腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展通常會(huì)伴有癌細(xì)胞的異常增殖,這會(huì)促進(jìn)VTN的合成與釋放。同時(shí),VTN表達(dá)的上升會(huì)刺激細(xì)胞貼壁,并對(duì)胃管蛋白結(jié)構(gòu)產(chǎn)生影響,降低其對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用,進(jìn)一步加速癌細(xì)胞的異常增殖,加重患者病情[20]。本研究結(jié)果顯示,觀察組的HAS2、ADAMDEC1蛋白、VTN陽(yáng)性表達(dá)率高于對(duì)照組,提示在腦膠質(zhì)瘤癌組織內(nèi),HAS2、ADAMDEC1蛋白、VTN三者呈異常的高表達(dá)狀態(tài)。本研究結(jié)果還顯示,HAS2、ADAMDEC1蛋白、VTN表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤患者的腫瘤直徑、WHO分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),提示HAS2、ADAMDEC1蛋白、VTN表達(dá)參與腦膠質(zhì)瘤的進(jìn)展、侵襲過(guò)程,可作為疾病活動(dòng)的指標(biāo)和靶向治療的重要輔助指標(biāo)。

綜上所述,HAS2、ADAMDEC1蛋白、VTN在腦膠質(zhì)瘤患者的癌組織內(nèi)呈異常的高表達(dá),與患者的腫瘤直徑、WHO分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有緊密聯(lián)系,參與腫瘤的發(fā)展與侵襲過(guò)程。