APN基因-11426A/G位點(diǎn)多態(tài)性及血清APN水平與GDM發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)及分娩結(jié)局的關(guān)系*

張靜, 王帥, 郭秀秀, 白穎, 李芳

保定市第二醫(yī)院 1產(chǎn)科, 2檢驗(yàn)科(河北保定 071051); 3天津市第四中心醫(yī)院病理科(天津 300142)

妊娠期糖尿病(GDM)的病因較為復(fù)雜,既往的研究已經(jīng)證實(shí),多種基因的多態(tài)性以及環(huán)境的因素共同參與了妊娠期糖尿病的疾病進(jìn)展[1]。目前的研究已經(jīng)證實(shí)多種脂肪細(xì)胞因子與妊娠期糖尿病存在密切的相關(guān)性[2]。脂聯(lián)素(adiponectin, APN)以及基因的多態(tài)性與肥胖以及胰島素抵抗呈現(xiàn)顯著的相關(guān)性[3]。脂聯(lián)素基因(AdipoQ)啟動(dòng)子區(qū)域rs16861194 (-11426A/G)主要位于機(jī)體的3號(hào)染色體的長(zhǎng)臂末端,該種區(qū)域的堿基變異均可以造成結(jié)合位點(diǎn)的缺失,進(jìn)一步影響DNA-核蛋白的相互作用,對(duì)于APN基因的啟動(dòng)子以及轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合能力均具有顯著的影響[4]。本研究主要通過(guò)APN基因-11426A/G位點(diǎn)多態(tài)性及血清APN水平與GDM發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)及分娩結(jié)局的關(guān)系分析,為臨床診斷以及預(yù)后判定提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究采用前瞻性研究,以2019年6月至2021年6月在我院進(jìn)行診斷并進(jìn)行治療的80例GDM患者(GDM組)作為研究對(duì)象,選擇同期在我院孕周10～14周行糖耐量篩查的妊娠期糖耐量異常者(GIGT組)以及妊娠期糖耐量正常者(NGT組)各80例作為對(duì)照組。所有研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū),并經(jīng)保定市第二醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理管理委員會(huì)批準(zhǔn)(HX2023001)。

納入標(biāo)準(zhǔn):(1)所有患者均符合妊娠期糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)[5];(2)患者年齡22-38歲;(3)研究對(duì)象經(jīng)B超確定懷孕。

排除標(biāo)準(zhǔn):(1)感染性疾病患者;(2)腫瘤患者;(3)精神疾病患者;(4)孕前糖尿病患者;(5)經(jīng)臨床評(píng)估有心、腦、腎、胎盤(pán)等器官受損者。

1.2 方法 rs16861194 (-11426A/G)檢測(cè):抽取患者治療前的外周靜脈血,使用EDTA抗凝處理后的全血(3 mL)在2 500 r/min狀態(tài)下離心2 min,取細(xì)胞上清液得到血漿,通過(guò)QIAAMPDNABloodMiniKit試劑盒進(jìn)一步純化血漿DNA,得到血漿后放置-20℃保存待測(cè)。根據(jù)Genebank發(fā)布的人RAGE基因序列采用Primer5.0軟件分別對(duì)相關(guān)位點(diǎn)設(shè)計(jì)引物。上游3′-CTCCCTACTTGTAAACTTGT-5′,下游3′-ATAGGGTTCATTCCCATACG-5′,PCR反應(yīng)體系為25 μL,其中含10×buffer 2.5 μL、dNTPS 1 μL、TaqDNA聚合酶0.4 μL、DNA模板1 μL、引物1 μL、ddH2O補(bǔ)足。擴(kuò)増方法:95℃條件下預(yù)變性5 min,94℃變性半分鐘,50～60℃退火時(shí)間30 s,72℃延伸10 min,一共35個(gè)循環(huán)。通過(guò)試劑盒對(duì)目標(biāo)片段回收,處理后通過(guò)DNA測(cè)序儀完成測(cè)定?；虻姆中筒捎冒氤彩骄酆厦告?zhǔn)椒磻?yīng)連接的限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析方法對(duì)患者樣本的基因進(jìn)行多態(tài)性分型[6]。

1.3 觀察指標(biāo) 分別對(duì)GDM組、GIGT組、NGT組患者的年齡、空腹血糖、體質(zhì)指數(shù)、餐后2 h血糖以及產(chǎn)次、孕周之間的差異進(jìn)行比較。 rs16861194 (-11426A/G)的多態(tài)性基因頻率的觀察值以及預(yù)測(cè)值的比較采用Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)。分別對(duì)GDM組、GIGT組、NGT組的-11426A/G多態(tài)性進(jìn)行分析。 本研究中妊娠期糖尿病患者的流產(chǎn)、早產(chǎn)、宮內(nèi)窘迫等作為不良妊娠結(jié)局,比較正常妊娠結(jié)局與不良妊娠結(jié)局的-11426A/G多態(tài)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)均采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行匯總分析。兩組患者的基因型差異采用2檢驗(yàn),其中計(jì)數(shù)資料以例(%)表示,P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,采用spearman相關(guān)性分析,研究GDM風(fēng)險(xiǎn)與不同妊娠結(jié)局與-11426A/G多態(tài)性的相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1 3組患者的一般資料比較 GDM組、GIGT組、NGT組患者的年齡、體質(zhì)指數(shù)、產(chǎn)次、孕周之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見(jiàn)表1。

表1 3組患者的一般資料比較

2.2 Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn) 通過(guò)對(duì)患者的Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)分析,患者的-11426A/G(2=0.052,P=0.776)位點(diǎn)基因多態(tài)性分布符合Hardy-Weinberg平衡,數(shù)據(jù)來(lái)自同一個(gè)樣本群體。

2.3 三組患者的-11426A/G基因型以及等位基因比較 GDM組、GIGT組、NGT組的-11426A/G的基因型以及等位基因、血清APN之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表2。

表2 三組患者的-11426A/G基因型以及等位基因比較 例(%)

2.4 兩組最小等位基因頻率對(duì)比 通過(guò)對(duì)兩組患者的最小等位基因頻率進(jìn)行對(duì)比觀察,進(jìn)入本研究的所有基因均符合溫伯格平衡,通過(guò)對(duì)兩組患者的最小等位基因進(jìn)行對(duì)比觀察,-11426A/G基因的AA、AG等位基因差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表3。

表3 兩組最小等位基因頻率對(duì)比

2.5 不同妊娠結(jié)局的患者的-11426A/G基因型以及等位基因比較 正常妊娠結(jié)局與不良妊娠結(jié)局的-11426A/G的基因型以及等位基因、血清APN之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表4。

表4 不同妊娠結(jié)局的患者的-11426A/G基因型以及等位基因比較 例(%)

2.6 相關(guān)性分析 GDM風(fēng)險(xiǎn)與不同妊娠結(jié)局與-11426A/G多態(tài)性呈現(xiàn)顯著的相關(guān)性,見(jiàn)表5。

表5 GDM風(fēng)險(xiǎn)與不同妊娠結(jié)局與-11426A/G多態(tài)性相關(guān)性分析

3 討論

近年來(lái),隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)水平的不斷發(fā)展,人們生活方式的不斷改變,人群的肥胖率以及高齡產(chǎn)婦的發(fā)生率呈現(xiàn)顯著的升高趨勢(shì)[7]。既往的流行病學(xué)調(diào)查顯示[8],全球妊娠期糖尿病的發(fā)病率約為1%到14%,而我國(guó)的流行病學(xué)調(diào)查顯示,妊娠期糖尿病的發(fā)病率約為1.7%到16.7%。妊娠期糖尿病是孕婦妊娠期間較為常見(jiàn)的并發(fā)癥之一[9]。隨著疾病的進(jìn)展,在一定程度上增加了孕婦發(fā)生不良妊娠結(jié)局的風(fēng)險(xiǎn)。大量的研究顯示[10],妊娠期糖尿病還在一定程度上增加了產(chǎn)婦以及新生兒日后發(fā)生2型糖尿病以及心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn),同時(shí)產(chǎn)生一系列的后遺癥以及并發(fā)癥,對(duì)于產(chǎn)婦以及新生兒的生活質(zhì)量造成嚴(yán)重的影響[10]。目前,對(duì)于妊娠期糖尿病的發(fā)病機(jī)制尚未明確[11],普遍的認(rèn)為,遺傳因素以及環(huán)境因素的相互作用,造成了患者的胰島素抵抗以及胰島素分泌缺失[12]。所以,通過(guò)對(duì)患者的發(fā)病機(jī)制,尤其是基因?qū)W的研究,對(duì)于預(yù)防、診斷以及治療妊娠期糖尿病具有顯著的意義。脂聯(lián)素是由國(guó)外專(zhuān)家最早從老鼠的脂肪細(xì)胞中分離得到,通過(guò)脂肪細(xì)胞的特異性分泌功能形成的224個(gè)氨基酸的多肽[13-14],與人體的第三號(hào)染色體中進(jìn)行基因的編碼。其含有3個(gè)外顯子大小,從18～4 277 bp,2個(gè)內(nèi)含子分別為0.8～12 kb。妊娠期糖尿病的疾病進(jìn)展以及病因較為復(fù)雜[15],其發(fā)病的過(guò)程與機(jī)體的肥胖以及胰島素抵抗呈現(xiàn)顯著的相關(guān)性。以往的研究已經(jīng)證實(shí)[16],妊娠期糖尿病疾病的進(jìn)展與機(jī)體的遺傳以及環(huán)境等因素顯著相關(guān)性。脂肪細(xì)胞在分泌脂聯(lián)素的過(guò)程中對(duì)于胰島素的抵抗功能具有顯著的保護(hù)作用。而通過(guò)全基因組的掃描顯示,機(jī)體的代謝綜合癥的敏感基因位于三號(hào)染色體,正是脂聯(lián)素編碼基因的重要位置。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的13個(gè)脂聯(lián)素單核苷酸基因多態(tài)性外顯子2中的單核苷酸基因多態(tài)性與機(jī)體的血液循環(huán)當(dāng)中的脂聯(lián)素的濃度增加呈現(xiàn)密切關(guān)系。

本研究中,通過(guò)對(duì)3組患者的-11426A/G多態(tài)性進(jìn)行分析,3組患者的-11426A/G基因多態(tài)性存在顯著的差異。脂聯(lián)素可以通過(guò)多種途徑對(duì)患者的胰島素抵抗作用進(jìn)行調(diào)控。在生理學(xué)的研究中已經(jīng)證實(shí),脂聯(lián)素處于較低水平的孕婦,其發(fā)生胰島素抵抗的風(fēng)險(xiǎn)也隨之升高,在一定程度上增加了孕婦發(fā)生妊娠糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)。脂聯(lián)素與胰島素的抵抗呈現(xiàn)顯著的負(fù)相關(guān)性。分析認(rèn)為,脂聯(lián)素與其受體結(jié)合過(guò)程中,主要通過(guò)信號(hào)傳導(dǎo)通路對(duì)胰島素的分泌以及敏感性進(jìn)行調(diào)控。在此過(guò)程中,主要通過(guò)肌肉攝取葡萄糖以及促進(jìn)脂肪酸的氧化,在一定程度上抑制了肝糖原的分解以及糖異生,進(jìn)一步提升了胰島素的敏感性。而隨著機(jī)體的脂聯(lián)素水平的降低,其對(duì)于糖分以及脂肪代謝功能相對(duì)減弱,進(jìn)一步造成了機(jī)體血糖水平的升高,在一定程度上,也造成了妊娠期糖尿病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的升高。莊麗穎等[17]通過(guò)對(duì)妊娠期糖尿病患者的rs16861194突變情況的分析,患者的rs16861194突變是機(jī)體局部病灶部位的炎性反應(yīng)以及代謝綜合征的負(fù)向調(diào)控因素。羅金英等[18]通過(guò)對(duì)妊娠糖尿病的相關(guān)性分析,rs16861194的基因突變與疾病的發(fā)病呈現(xiàn)顯著的相關(guān)性。列海濤等[19]通過(guò)對(duì)妊娠期糖尿病患者的rs16861194的基因突變與機(jī)體的生化指標(biāo)的分析,rs16861194的基因突變與生化指標(biāo)呈現(xiàn)顯著的相關(guān)性,與本研究結(jié)果一致。

綜上所述,APN基因-11426A/G位點(diǎn)多態(tài)性及血清APN水平與GDM發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)及分娩結(jié)局呈現(xiàn)顯著的相關(guān)性。

利益相關(guān)聲明:本研究所有作者均無(wú)利益沖突。

作者貢獻(xiàn)說(shuō)明:張靜、王帥負(fù)責(zé)撰寫(xiě)論文和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)研究;郭秀秀、白穎負(fù)責(zé)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和數(shù)據(jù)收集; 李芳負(fù)責(zé)搜集文獻(xiàn)和相關(guān)數(shù)據(jù)。