高效液相色譜法同時(shí)測定非發(fā)酵豆制品中苯甲酸、山梨酸、安賽蜜和糖精鈉

◎ 繆少霞

（建德市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，浙江 建德 311600）

我國是大豆的原產(chǎn)地，也是最早生產(chǎn)加工豆制品的國家。傳統(tǒng)非發(fā)酵豆制品，包括豆腐、豆腐皮、豆腐干、腐竹等，口感細(xì)膩、質(zhì)地柔軟、味道鮮美[1]。其蛋白質(zhì)組分含量較高，包含人體必需的8 種氨基酸成分，可以降低血液中膽固醇的含量，對(duì)防止心血管硬化有很好的效果[2]。另外，還含有多種礦物質(zhì)，能補(bǔ)充鈣、鐵、鎂等無機(jī)鹽的含量，促進(jìn)骨骼發(fā)育，提高蛋白質(zhì)的消化吸收率[3]。在非發(fā)酵豆制品生產(chǎn)過程中，為增加產(chǎn)品的色、香、味，延長保質(zhì)期，廠商會(huì)添加一定量的食品添加劑。防腐劑和甜味劑廣泛應(yīng)用于食品行業(yè)中，且經(jīng)常被混合添加使用。目前，同時(shí)測定食品中防腐劑和人工合成甜味劑的研究較多[4-6]，但應(yīng)用于非發(fā)酵豆制品的報(bào)道較少。因此，為探究市售非發(fā)酵豆制品是否存在超范圍使用食品添加劑，本實(shí)驗(yàn)建立了同時(shí)測定安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的高效液相色譜法，檢測了市售豆腐干等非發(fā)酵豆制品的安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的含量。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 1260 高效液相色譜儀系統(tǒng)（配置DAD 檢測器）：美國安捷倫科技有限公司；FA2004N 電子分析天平：上海菁海儀器有限公司；Direct-pureup 10 超純水及RO 純水組合型一體機(jī)：Rephile；KQ-500 超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；sigma 3K15高速離心機(jī)：曦瑪離心機(jī)（揚(yáng)州）有限公司。

安賽蜜、苯甲酸和糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（1 000 μg·mL-1），壇墨質(zhì)檢科技股份有限公司；山梨酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（1.00 mg·mL-1），中國計(jì)量科學(xué)研究院；甲醇：天津四友精細(xì)化學(xué)品有限公司，色譜純；乙酸銨：天津市福晨化學(xué)試劑廠，分析純；乙酸鋅：西隴化工股份有限公司，分析純；亞鐵氰化鉀：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純；實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 方法

1.2.1 溶液的配制

亞鐵氰化鉀溶液：準(zhǔn)確稱取106 g 亞鐵氰化鉀，加水溶解并定容至1 000 mL 容量瓶中。

乙酸鋅溶液：準(zhǔn)確稱取220 g 乙酸鋅，加適量水溶解，加30 mL 冰乙酸，并用水定容至1 000 mL。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制

分別吸取10 mL 苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用水定容至50 mL，配制成濃度為200 mg·L-1的混標(biāo)液。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制

分別準(zhǔn)確吸取4 種添加劑標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0 mL、0.05 mL、0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL 和2.50 mL，用水定容到10 mL，即得4 種添加劑濃度分別為0 mg·L-1、1 mg·L-1、5 mg·L-1、10 mg·L-1、20 mg·L-1和50 mg·L-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.4 樣品制備與提取

稱取約2.0 g 樣品于50 mL 具塞離心管中，加水25 mL 渦旋混勻，超聲20 min 后加亞鐵氰化鉀2 mL、乙酸鋅2 mL，混勻后離心5 min，將上清液轉(zhuǎn)移至容量瓶中，用水定容至50 mL。吸取上清液，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾后，作為供試品溶液。

1.2.5 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：20 μL；流速：1 mL·min-1；流動(dòng)相：甲醇∶乙酸銨溶液=5 ∶95（V/V）；檢測波長：230 nm。

1.2.6 樣品的測定

準(zhǔn)確吸取供試品溶液20 μL 用于進(jìn)樣，按1.2.5 項(xiàng)下條件進(jìn)行分析，根據(jù)保留時(shí)間定性，峰面積定量。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)圖譜及樣品分析

在1.2.5 色譜條件下，50.0 mg·L-1混標(biāo)溶液、樣品H-9 的色譜圖分別見圖1、圖2。

圖1 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖

圖2 樣品H-9 的色譜圖

2.2 線性關(guān)系和靈敏度

按上述實(shí)驗(yàn)條件檢測混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，以橫坐標(biāo)為質(zhì)量濃度，以縱坐標(biāo)為峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

4 種添加劑在0～50 mg·L-1，各組分線性關(guān)系良好，線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限（S/N=3）、定量限（S/N=10）見表1。結(jié)果表明，本方法檢出限和定量限均小于GB 5009.28ü 2016[7]和GB/T 5009.140ü 2003[8]中的限量，靈敏度較高。

表1 4 種添加劑標(biāo)準(zhǔn)溶液線性關(guān)系表

2.3 加標(biāo)回收和精密度實(shí)驗(yàn)

通過在樣品H-10（空白樣品）中添加3 個(gè)質(zhì)量濃度分別為0.005 g·kg-1、0.010 g·kg-1、0.050 g·kg-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別進(jìn)行6 次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，從而得出加標(biāo)回收率、精密度。如表2 所示，該條件下4 種添加劑的回收率為96.7%～108.2%，RSD 為0.22%～3.00%。該實(shí)驗(yàn)研究表明，本方法的回收率和精密度符合GB/T 27404ü 2008[9]標(biāo)準(zhǔn)要求。

表2 精密度和回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

2.4 樣品的測定

按上述處理方法和色譜條件，檢測市售10 批次非發(fā)酵豆制品豆腐干中苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉的含量，結(jié)果詳見表3。在GB 2760ü 2014[10]中規(guī)定，非發(fā)酵豆制品豆腐干類不允許添加苯甲酸、安賽蜜，山梨酸的最大使用量為1.0 g·kg-1，其中新型豆制品中糖精鈉的限量為1.0 g·kg-1。從表3 可以看出，10 批次樣品中，有4 批次檢出含有安賽蜜，檢出率為40%，均為非法添加；1 批次樣品檢出苯甲酸，檢出率為10%，為非法添加；9 批次樣品檢出山梨酸，均未超出最大使用量；1 批次樣品檢出含有糖精鈉，H-4樣品為新型豆制品，在合理添加使用范圍內(nèi)。

表3 實(shí)際樣品的測定結(jié)果表 單位：g·kg-1

3 結(jié)論

采用高效液相色譜法同時(shí)測定了非發(fā)酵豆制品豆腐干中苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉的含量，結(jié)果顯示，在0～50 mg·L-1內(nèi)4 種添加劑的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均高于0.999，回收率為96.7%～108.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.22%～3.00%，方法檢出限等達(dá)到實(shí)際檢測工作要求。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)非發(fā)酵豆制品豆腐干類中苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉含量的初步研究調(diào)查發(fā)現(xiàn)，商家為改善產(chǎn)品感官和品質(zhì)，延長食品保存期限，存在使用非法添加劑的現(xiàn)象，應(yīng)引起公眾和相關(guān)政府部門的注意。