• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    杏仁核N-甲基-D-天冬氨酸受體在芬太尼誘發(fā)痛覺過敏大鼠中的作用

    2023-11-07 01:34:52尹平平許睿周張胡曉榆于明良
    中國老年學(xué)雜志 2023年21期
    關(guān)鍵詞:阿片亞基氯胺酮

    尹平平 許睿 周張 胡曉榆 于明良

    (武漢市第四醫(yī)院麻醉科,湖北 武漢 430034)

    芬太尼是人工合成的阿片受體激動(dòng)劑,與其他阿片類藥物一樣,具有強(qiáng)效的鎮(zhèn)痛作用,但重復(fù)使用會(huì)引起機(jī)體對(duì)疼痛的敏感性增強(qiáng),即阿片誘發(fā)的痛覺過敏(OIH)〔1〕,這種副作用嚴(yán)重干擾了臨床醫(yī)生對(duì)疼痛的管理和治療〔2〕,亟待探明其發(fā)生機(jī)制。N-甲基-D-天冬氨酸受體(NMDAR)廣泛存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng),包括杏仁核(CeA),且NMDAR與疼痛的發(fā)生密切相關(guān)〔3〕。研究表明,脊髓NMDAR可被細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK)激活,使NMDAR磷酸化增加,導(dǎo)致其功能增強(qiáng),最終參與炎性O(shè)IH的產(chǎn)生〔4〕,而下調(diào)脊髓NMDAR的表達(dá)可以減弱瑞芬太尼誘導(dǎo)的OIH〔5〕。研究證明,CeA內(nèi)ERK與OIH的產(chǎn)生有關(guān)〔6,7〕,但CeA內(nèi)NMDAR在OIH中的作用尚待進(jìn)一步研究。因此,本研究擬探討CeA內(nèi)NMDAR在芬太尼誘發(fā)的OIH大鼠中的作用,以便為臨床預(yù)防和治療OIH提供思路。

    1 材料與方法

    1.1動(dòng)物選擇 健康清潔級(jí)(SPF級(jí))雄性SD大鼠36只,體質(zhì)量70~110 g,由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供,室溫飼養(yǎng),自由攝食和飲水,白天與黑夜時(shí)間12 h∶12 h。本實(shí)驗(yàn)所用的大鼠均嚴(yán)格遵循中國衛(wèi)生機(jī)構(gòu)制定的實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物應(yīng)用指南。

    1.2實(shí)驗(yàn)分組 實(shí)驗(yàn)一:采用隨機(jī)數(shù)字表法,將24只SD大鼠隨機(jī)分為3組(n=8):芬太尼+氯胺酮組(K1組)皮下注射芬太尼制備OIH模型,1 d后腹腔注射NMDAR拮抗劑氯胺酮(15 mg/kg);芬太尼誘發(fā)OIH組(H1組)皮下注射芬太尼制備OIH模型,1 d后腹腔注射等容量生理鹽水;對(duì)照組(C1組)皮下注射等容量生理鹽水,1 d后腹腔注射等容量生理鹽水。分別于皮下注射芬太尼或生理鹽水前(T0)、注射后1 d(T1)和腹腔注射氯胺酮或生理鹽水后30 min(T2)時(shí)檢測(cè)大鼠機(jī)械痛閾和熱痛閾。實(shí)驗(yàn)二:將實(shí)驗(yàn)一最后一次測(cè)痛結(jié)束的各組大鼠處死,取右側(cè)CeA區(qū)組織,Western印跡檢測(cè)NMDAR亞基NR2B磷酸化(P-NR2B)的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)三:另取12只雄性SD大鼠,隨機(jī)分為3組(n=4):對(duì)照組(C2組)、芬太尼誘發(fā)OIH組(H2組)和芬太尼+氯胺酮組(K2組)按實(shí)驗(yàn)一處理后,制備含有中央CeA的腦片,采用CeA區(qū)神經(jīng)元電生理記錄各組右側(cè)CeA區(qū)神經(jīng)元NMDAR微小興奮性突觸后電流(mEPSCs)的幅值和頻率。

    1.3芬太尼誘發(fā)OIH模型的制備 枸櫞酸芬太尼(湖北宜昌人福藥業(yè)有限公司,批號(hào)1130411)使用前用生理鹽水配制。采用文獻(xiàn)〔8〕的方法制備芬太尼誘導(dǎo)的OIH模型。具體操作是:大鼠頸背部皮下注射芬太尼,每次60 μg/kg,共4次,給藥間隔15 min,累積藥量240 μg/kg。給藥期間及給藥后2 h內(nèi)注意給大鼠保暖及吸氧。

    1.4疼痛行為測(cè)定 分別于T0、T1和T2時(shí)測(cè)定大鼠的機(jī)械痛閾和熱痛閾。測(cè)定機(jī)械痛閾時(shí),具體方法是將大鼠置于金屬籠內(nèi),靜置30 min后,用不同壓力的von Frey絲(North Coast公司,美國)垂直刺激大鼠左足掌面,力度以von Frey絲輕微彎曲為準(zhǔn),持續(xù)10 s或直至出現(xiàn)縮足反應(yīng)。當(dāng)大鼠在規(guī)定時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)縮足反應(yīng),則記為陽性。采用up-and-down方法計(jì)算50%縮足反應(yīng)閾即為機(jī)械痛閾值。測(cè)定熱痛閾時(shí),采用的熱痛刺激儀(BME-410C)購于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程研究所。具體方法是將大鼠置于底部為玻璃板的透明小室中,安靜放置30 min后,使用輻射燈對(duì)準(zhǔn)大鼠左足掌正中照射,自動(dòng)記錄大鼠的縮足潛伏期作為熱痛閾,停止時(shí)間為15 s,以免造成大鼠左足掌組織損傷。

    1.5Western印跡檢測(cè)CeA組織P-NR2B的表達(dá) 測(cè)痛完畢后處死大鼠,并取出右側(cè)CeA區(qū)組織凍存于-80 ℃冰箱備用。取適量組織稱重后,加入一定量含有蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液(碧云天,中國)并勻漿,12 000 r/min,4 ℃離心10 min取上清,二喹啉甲酸(BCA)法測(cè)蛋白濃度。加入十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)上樣緩沖液(碧云天,中國),95 ℃煮沸8~10 min使蛋白變性,制備SDS-PAGE(10%),電泳后濕轉(zhuǎn)至聚偏氟乙烯(PVDF)膜上。5%脫脂奶粉TBST緩沖液室溫震蕩封閉1 h后洗膜,加入封閉液稀釋的兔抗P-NR2B抗體 (1∶500稀釋,Millipore公司,德國)和小鼠抗GAPDH(1∶500,博士德,中國),4 ℃孵育過夜,洗膜,加入TBST稀釋的辣根過氧化酶(HRP)-山羊抗兔和HRP-山羊抗小鼠的二抗(1∶5 000),室溫孵育2 h,洗膜后在避光條件下將電化學(xué)發(fā)光(ECL)試劑盒中的A、B兩種試劑等體積混合,振蕩混勻后均勻加到膜上,用化學(xué)發(fā)光凝膠圖像系統(tǒng)拍照。P-NR2B表達(dá)量以P-NR2B與GAPDH光密度的比值表示。

    1.6全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn) 全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄大鼠CeA區(qū)神經(jīng)元NMDAR mEPSCs。采用LEICA VT1000 S切片機(jī),將含有CeA區(qū)的大鼠右腦組織塊冠狀切成厚度為350 μm的腦片。切片液成分(mmol/L):213蔗糖,3 KCl,1 NaH2PO4,0.5 CaCl2,5 MgCl2,26 NaHCO3和10葡萄糖,切片液溫度為4 ℃。將切片所得的含有CeA區(qū)的腦片在25 ℃的人工腦脊液(ACSF)中孵育,時(shí)間至少1 h,人工ACSF成分(mmol/L):125 NaCl,5 KCl,1.2 NaH2PO4,2.6 CaCl2,1.3 MgCl2,26 NaHCO3和10葡萄糖。其中切片液及人工ACSF均為氧飽和溶液,且調(diào)節(jié)PH至7.2~7.4,滲透壓維持在290~310 mOsm。使用的持續(xù)灌流ACSF的溫度控制在31 ℃,灌流速度為2 ml/min。膜片鉗放大器為HEKA EPC-10 (Molecular Devices),記錄軟件為patchmaster (Molecular Devices),應(yīng)用紅外線微分干涉相差顯微鏡在可視化模式下記錄CeA區(qū)神經(jīng)元mEPSCs。確認(rèn)封接電阻(>2 GΩ)和串聯(lián)電阻(<20 MΩ)以保證細(xì)胞封接質(zhì)量。記錄電極為玻璃微電極(WPI),電極內(nèi)液成份(mmol/L):100葡萄糖酸鉀、30 KCl、5 NaCl、1 MgCl2、10 HEPES、 3 EGTA、2 Na2-ATP,用1 mmol/L NaOH調(diào)節(jié)PH值為7.4。持續(xù)灌流ACSF中加入 50 μmol/L木防已苦毒素(PTX)阻斷抑制性突觸后電流,1 μmol/L河豚毒素(TTX,阻斷動(dòng)作電位)和20 μmol/L CNQX(AMPA受體和海人藻受體的拮抗劑),且鉗制電壓+60 mV的條件下進(jìn)行CeA區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞的高阻封接,從而獲得NMDA受體mEPSCs。

    1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0軟件進(jìn)行方差分析、t檢驗(yàn)。

    2 結(jié) 果

    2.1芬太尼誘發(fā)的OIH可以被NMDAR拮抗劑所逆轉(zhuǎn) H1組T1、T2時(shí)及K1組T1時(shí)機(jī)械縮足閥值和熱縮足潛伏期均明顯低于本組T0時(shí)(均P<0.05);與C1組比較,H1組T1、T2時(shí)、K1組T1時(shí)機(jī)械縮足閾值和熱縮足潛伏期均明顯降低(P<0.05);而給予氯胺酮后可逆轉(zhuǎn)OIH,即與H1組比較,K1組T2時(shí)機(jī)械痛閾和熱縮足潛伏期均明顯升高(均P<0.05),見表1。

    表1 各組不同時(shí)間點(diǎn)機(jī)械縮足閾值和熱縮足潛伏期比較

    2.2芬太尼誘發(fā)的OIH與大鼠CeA中P-NR2B的過度表達(dá)有關(guān) 與C1組CeA區(qū)P-NR2B水平(0.28±0.01)相比,H1組(0.48±0.05)明顯增多(P<0.05),K1組(0.28±0.02)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖1。

    圖1 Western印跡檢測(cè)3組P-NR2B水平

    2.3芬太尼誘發(fā)的OIH大鼠CeA區(qū)神經(jīng)元NMDAR介導(dǎo)的突觸傳遞發(fā)生改變 CeA區(qū)神經(jīng)元電生理記錄示,與C2組比較,H2組CeA區(qū)NMDAR mEPSCs幅值及頻率均明顯增加(均P<0.05),而K2組差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。見表2、圖2。

    圖2 各組NMDAR mEPSCs的典型波形(10 s)

    表2 各組mEPSCs的幅值和頻率比較

    3 討 論

    阿片藥物芬太尼主要用于臨床麻醉和鎮(zhèn)痛,但其有潛在的誘發(fā)OIH的風(fēng)險(xiǎn),即采用阿片藥物鎮(zhèn)痛,卻反而引起機(jī)體對(duì)疼痛的敏感性增加〔9〕。這種矛盾的現(xiàn)象給臨床使用阿片類藥物帶來了困惑,亟待探明其機(jī)制,以指導(dǎo)臨床用藥和治療OIH。NMDAR廣泛存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng),參與多種疼痛機(jī)制的調(diào)節(jié)〔10〕,包括神經(jīng)病理性疼痛和中樞痛敏。已有研究表明,脊髓NMDAR參與阿片藥物瑞芬太尼誘導(dǎo)的OIH的產(chǎn)生〔11〕,但NMDAR是否參與脊髓上中樞神經(jīng)系統(tǒng)來調(diào)節(jié)OIH尚待研究。本研究結(jié)果表明CeA NMDAR可能與芬太尼誘發(fā)的OIH產(chǎn)生有關(guān)。值得注意的是,NMDAR的拮抗劑氯胺酮,除了具有分離麻醉的特性外,還具有鎮(zhèn)痛、抗炎和抗抑郁的作用。不同劑量的氯胺酮所產(chǎn)生的作用不同,研究表明,氯胺酮產(chǎn)生麻醉作用所需的劑量遠(yuǎn)大于其產(chǎn)生鎮(zhèn)痛、抗炎和抗抑郁作用所需的劑量〔12〕。鑒于氯胺酮的鎮(zhèn)痛作用與給藥劑量有關(guān),本研究OIH大鼠單次腹腔注射低劑量(15 mg/kg)氯胺酮,該劑量遠(yuǎn)低于產(chǎn)生麻醉作用所需的氯胺酮。且氯胺酮小鼠腹腔注射后的半衰期是13~25 min〔13~15〕,在注射30 min后,大鼠并未出現(xiàn)麻醉相關(guān)表現(xiàn),大鼠完全清醒,活動(dòng)自如,推斷氯胺酮此時(shí)主要產(chǎn)生的是鎮(zhèn)痛作用。在Abelaira等〔16〕研究中,給予大鼠15 mg/kg單次劑量的氯胺酮30 min后,即開始進(jìn)行大鼠強(qiáng)迫游泳的行為學(xué)測(cè)試,說明大鼠是完全清醒的,也與本文觀察的結(jié)果一致。該研究結(jié)果提示,NMDAR拮抗劑氯胺酮可以改善OIH大鼠的疼痛閾值,產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用,從而緩解OIH。

    NR2B是NMDAR執(zhí)行調(diào)節(jié)功能的重要亞基,其磷酸化水平與NMDAR介導(dǎo)產(chǎn)生的慢性疼痛密切相關(guān)〔17〕,在NR2B亞基激活Ca2+內(nèi)流之后,特定的鳥嘌呤核苷酸交換因子(GEFs)會(huì)刺激ERK的磷酸化(pERK)。pERK隨后從神經(jīng)元細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)位到細(xì)胞核。在細(xì)胞核中,pERK刺激核糖體激酶2,導(dǎo)致133絲氨酸上的環(huán)磷腺苷效應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)磷酸化(pCREB)。pCREB進(jìn)一步調(diào)節(jié)含有CRE的某些基因與CREB結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合。通過與c-fos,神經(jīng)激肽/P物質(zhì)受體,腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF),降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)和環(huán)氧化酶(COX)-2等結(jié)合,導(dǎo)致傷害性感受反應(yīng)的產(chǎn)生。這些神經(jīng)調(diào)節(jié)劑會(huì)引發(fā)更多的NR2B亞基的激活,導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)的可塑性改變,這條途徑的最終結(jié)果是OIH和異常性疼痛的產(chǎn)生。本研究發(fā)現(xiàn),OIH時(shí),NMDAR亞基P-NR2B表達(dá)增加,給予NMDAR拮抗劑氯胺酮后,P-NR2B表達(dá)降低,可以逆轉(zhuǎn)OIH。

    已有研究表明,NR2B亞基在NMDAR調(diào)控神經(jīng)元突觸可塑性中起關(guān)鍵性作用,其表達(dá)水平與NMDAR產(chǎn)生的興奮性突觸傳遞正相關(guān)〔18〕。本研究中,OIH大鼠CeA NMDAR mEPSCs的幅值和頻率增加,給予NMDAR拮抗劑氯胺酮后,可以減少OIH大鼠CeA NMDAR介導(dǎo)的mEPSCs的幅值和頻率。mEPSCs的幅值體現(xiàn)的是作用于突觸后膜神經(jīng)遞質(zhì)釋放量,而mEPSCs的頻率體現(xiàn)的是突觸前膜神經(jīng)遞質(zhì)釋放概率,該研究結(jié)果提示OIH大鼠CeA神經(jīng)元間突觸傳遞功能增強(qiáng),CeA神經(jīng)元間可能發(fā)生了功能上的突觸可塑性,且這種改變與NMDAR有關(guān)。本研究結(jié)果證實(shí)了阿片藥物芬太尼可能通過某種途徑作用于大鼠CeA神經(jīng)元上的NMDAR亞基NR2B,從而調(diào)控神經(jīng)元間突觸傳遞,使CeA發(fā)生突觸可塑性,從而產(chǎn)生OIH。但NMDAR是通過何種途徑調(diào)控大鼠OIH的產(chǎn)生尚待進(jìn)一步研究。

    猜你喜歡
    阿片亞基氯胺酮
    心臟鈉通道β2亞基轉(zhuǎn)運(yùn)和功能分析
    氯胺酮及其異構(gòu)體和代謝物抗抑郁研究進(jìn)展☆
    基于阿片受體亞型的藥物研究進(jìn)展
    阿片受體類型和功能及其在豬腦中的個(gè)體發(fā)育特點(diǎn)
    氯胺酮對(duì)學(xué)習(xí)記憶能力的影響
    氯胺酮聯(lián)合丙泊酚在小兒麻醉中的應(yīng)用效果觀察
    胰島素通過mTORC2/SGK1途徑上調(diào)肺泡上皮鈉通道α亞基的作用機(jī)制
    μ阿片受體在嗎啡鎮(zhèn)痛耐受中的研究進(jìn)展
    氯胺酮依賴腦內(nèi)作用靶點(diǎn)的可視化研究
    同位素(2014年2期)2014-04-16 04:57:16
    小RNA干擾蛋白酶體亞基α7抑制K562細(xì)胞增殖
    内射极品少妇av片p| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 国产黄a三级三级三级人| 亚洲成人久久性| 免费看光身美女| 中文资源天堂在线| 日本在线视频免费播放| 欧美国产日韩亚洲一区| 99久久成人亚洲精品观看| 嫩草影院入口| 少妇熟女aⅴ在线视频| 最近最新免费中文字幕在线| 床上黄色一级片| 亚洲激情在线av| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 国产精品久久视频播放| 91九色精品人成在线观看| 十八禁人妻一区二区| 精品福利观看| a级一级毛片免费在线观看| 午夜激情欧美在线| 毛片女人毛片| 国产日本99.免费观看| 亚洲美女搞黄在线观看 | 亚洲精品在线观看二区| 成人av一区二区三区在线看| 日韩欧美在线乱码| 伊人久久精品亚洲午夜| 免费无遮挡裸体视频| 精品国产亚洲在线| 久久欧美精品欧美久久欧美| www日本黄色视频网| 国产精品免费一区二区三区在线| 久久久成人免费电影| 2021天堂中文幕一二区在线观| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 精品人妻视频免费看| 午夜精品在线福利| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产 一区 欧美 日韩| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 欧美+日韩+精品| 欧美一级a爱片免费观看看| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲,欧美精品.| 色尼玛亚洲综合影院| 欧美另类亚洲清纯唯美| 日本在线视频免费播放| 麻豆av噜噜一区二区三区| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 亚洲av不卡在线观看| 99精品久久久久人妻精品| 免费av不卡在线播放| 极品教师在线视频| 亚洲人成网站高清观看| 国产精品亚洲美女久久久| 亚洲av二区三区四区| 亚洲精品亚洲一区二区| 他把我摸到了高潮在线观看| 99国产综合亚洲精品| 久久久久久久精品吃奶| 精品无人区乱码1区二区| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 中文字幕久久专区| 久久久久久久久久成人| 国产精品亚洲一级av第二区| 悠悠久久av| 国产野战对白在线观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 欧美一区二区国产精品久久精品| 69av精品久久久久久| 免费观看的影片在线观看| 日本免费a在线| 9191精品国产免费久久| 成人欧美大片| 亚洲三级黄色毛片| 99热精品在线国产| 在线国产一区二区在线| 少妇高潮的动态图| 一级黄色大片毛片| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 无人区码免费观看不卡| 国产精品永久免费网站| 成人永久免费在线观看视频| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 精品人妻视频免费看| 国产黄a三级三级三级人| 久久人人爽人人爽人人片va | 精品久久久久久久末码| 最新在线观看一区二区三区| 欧美潮喷喷水| av福利片在线观看| 亚洲乱码一区二区免费版| 婷婷六月久久综合丁香| 国产一区二区三区视频了| 看黄色毛片网站| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 久久人人爽人人爽人人片va | 国产主播在线观看一区二区| 一a级毛片在线观看| 亚洲片人在线观看| 高清日韩中文字幕在线| 欧美一区二区国产精品久久精品| 性色av乱码一区二区三区2| 欧美精品啪啪一区二区三区| 黄色日韩在线| 国产乱人视频| 精品人妻1区二区| 午夜精品一区二区三区免费看| 亚洲无线观看免费| 国内精品一区二区在线观看| 国产视频一区二区在线看| 久久精品人妻少妇| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产成人aa在线观看| 一个人观看的视频www高清免费观看| 91久久精品国产一区二区成人| 国产精品久久视频播放| 久9热在线精品视频| 又爽又黄无遮挡网站| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 免费在线观看影片大全网站| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 97热精品久久久久久| 国产成人av教育| 亚洲不卡免费看| 国产伦精品一区二区三区四那| 少妇的逼水好多| 动漫黄色视频在线观看| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产精品爽爽va在线观看网站| 欧美成人a在线观看| av女优亚洲男人天堂| 亚洲精品456在线播放app | 十八禁人妻一区二区| 免费在线观看成人毛片| 国产成人a区在线观看| 亚洲最大成人中文| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 毛片一级片免费看久久久久 | 少妇高潮的动态图| 日本黄大片高清| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 午夜影院日韩av| 色综合亚洲欧美另类图片| 麻豆国产97在线/欧美| 99久久无色码亚洲精品果冻| 97热精品久久久久久| 亚洲欧美激情综合另类| 国产成人影院久久av| 亚洲av熟女| 好男人在线观看高清免费视频| 婷婷丁香在线五月| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 小说图片视频综合网站| 又紧又爽又黄一区二区| 国产一区二区三区视频了| 国产精品影院久久| 最新中文字幕久久久久| 热99在线观看视频| a级毛片免费高清观看在线播放| 十八禁人妻一区二区| 婷婷丁香在线五月| 午夜福利成人在线免费观看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲精品在线美女| 国产成年人精品一区二区| 日韩av在线大香蕉| 国产日本99.免费观看| 91麻豆av在线| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 婷婷色综合大香蕉| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国产精品一区二区三区四区久久| 一区二区三区四区激情视频 | 成年女人永久免费观看视频| 观看美女的网站| 日韩高清综合在线| 热99re8久久精品国产| 老女人水多毛片| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 制服丝袜大香蕉在线| 精品人妻偷拍中文字幕| 永久网站在线| eeuss影院久久| 国产精品女同一区二区软件 | 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国产黄色小视频在线观看| 很黄的视频免费| 欧美最黄视频在线播放免费| 99视频精品全部免费 在线| 久久中文看片网| 亚洲精品影视一区二区三区av| 欧美3d第一页| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产在线精品亚洲第一网站| 白带黄色成豆腐渣| 两个人的视频大全免费| 亚洲成av人片在线播放无| 国语自产精品视频在线第100页| 好男人电影高清在线观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看| www.www免费av| 国产色婷婷99| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 91麻豆精品激情在线观看国产| 91在线精品国自产拍蜜月| 精品人妻熟女av久视频| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 亚洲美女视频黄频| 亚洲av.av天堂| 亚洲专区国产一区二区| 国产高清激情床上av| www.www免费av| 国产在视频线在精品| 免费在线观看影片大全网站| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产成人aa在线观看| 亚洲无线观看免费| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 69人妻影院| 成人性生交大片免费视频hd| 内地一区二区视频在线| 在线十欧美十亚洲十日本专区| h日本视频在线播放| 久久人妻av系列| 熟女电影av网| 97超视频在线观看视频| 亚洲欧美日韩高清专用| 高潮久久久久久久久久久不卡| 伦理电影大哥的女人| 久久国产乱子伦精品免费另类| 欧美一区二区亚洲| 亚洲人成伊人成综合网2020| netflix在线观看网站| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 我要搜黄色片| 麻豆av噜噜一区二区三区| 白带黄色成豆腐渣| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 看片在线看免费视频| 国产极品精品免费视频能看的| 日韩欧美三级三区| 91久久精品国产一区二区成人| 久久久久精品国产欧美久久久| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产精品日韩av在线免费观看| 99久国产av精品| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 久久久久久久久久黄片| 欧美色欧美亚洲另类二区| 日韩国内少妇激情av| 男女下面进入的视频免费午夜| 两个人视频免费观看高清| 人妻久久中文字幕网| 国产乱人伦免费视频| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 十八禁人妻一区二区| 真人一进一出gif抽搐免费| 波多野结衣高清作品| 一本久久中文字幕| 天堂网av新在线| 日韩免费av在线播放| 国产高清视频在线观看网站| 十八禁人妻一区二区| 亚洲在线观看片| 久久久久亚洲av毛片大全| 久久久久久久精品吃奶| 国产大屁股一区二区在线视频| 激情在线观看视频在线高清| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 午夜影院日韩av| 舔av片在线| 男人和女人高潮做爰伦理| 日韩中字成人| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 尤物成人国产欧美一区二区三区| 悠悠久久av| 欧美性感艳星| 欧美丝袜亚洲另类 | 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国产黄片美女视频| 日本在线视频免费播放| 午夜精品久久久久久毛片777| 成人美女网站在线观看视频| 999久久久精品免费观看国产| 国产精品av视频在线免费观看| 久久午夜亚洲精品久久| 午夜日韩欧美国产| www日本黄色视频网| 欧美乱妇无乱码| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 国产精品,欧美在线| 国产成人av教育| 国产黄片美女视频| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产伦精品一区二区三区视频9| av在线蜜桃| 深夜精品福利| 性欧美人与动物交配| 三级国产精品欧美在线观看| 欧美成人性av电影在线观看| 99热这里只有是精品50| 久久国产乱子免费精品| 高清毛片免费观看视频网站| 中文字幕av在线有码专区| 91av网一区二区| 午夜精品在线福利| 少妇熟女aⅴ在线视频| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 欧美3d第一页| 亚洲成av人片在线播放无| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产成人福利小说| 国产三级在线视频| 我的女老师完整版在线观看| 亚洲专区中文字幕在线| 国产精品女同一区二区软件 | 国内精品久久久久久久电影| 一个人看视频在线观看www免费| 久久国产乱子免费精品| 国产不卡一卡二| 两个人的视频大全免费| 深夜精品福利| 亚洲欧美激情综合另类| 欧美不卡视频在线免费观看| 草草在线视频免费看| 久久性视频一级片| 欧美潮喷喷水| 人妻夜夜爽99麻豆av| 亚洲精品色激情综合| 日本一二三区视频观看| 俺也久久电影网| 国产精品精品国产色婷婷| 欧美高清性xxxxhd video| 国产精品综合久久久久久久免费| 国产三级黄色录像| 亚洲欧美激情综合另类| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 露出奶头的视频| 亚洲欧美精品综合久久99| 欧美日韩综合久久久久久 | 一级黄色大片毛片| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产 一区 欧美 日韩| 色在线成人网| 俺也久久电影网| 亚洲人成网站高清观看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲国产色片| 国产成+人综合+亚洲专区| 丰满的人妻完整版| 简卡轻食公司| 成人国产综合亚洲| АⅤ资源中文在线天堂| 国产成人欧美在线观看| 99精品在免费线老司机午夜| 2021天堂中文幕一二区在线观| 最后的刺客免费高清国语| 成人永久免费在线观看视频| 亚洲三级黄色毛片| 精品人妻1区二区| 国产精品三级大全| 精品久久久久久久久久免费视频| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲国产色片| 成人国产综合亚洲| 深夜精品福利| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 97热精品久久久久久| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲精品粉嫩美女一区| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产成人a区在线观看| 婷婷六月久久综合丁香| 在线看三级毛片| 12—13女人毛片做爰片一| 99riav亚洲国产免费| 国内精品一区二区在线观看| 露出奶头的视频| 99精品在免费线老司机午夜| 村上凉子中文字幕在线| 久久九九热精品免费| 免费av不卡在线播放| 听说在线观看完整版免费高清| 久久人妻av系列| 日本与韩国留学比较| 美女xxoo啪啪120秒动态图 | 精品免费久久久久久久清纯| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 永久网站在线| 久久久精品欧美日韩精品| 久久草成人影院| 欧美日韩综合久久久久久 | 人妻制服诱惑在线中文字幕| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 欧美成人一区二区免费高清观看| 久久久成人免费电影| 最后的刺客免费高清国语| 午夜日韩欧美国产| 亚洲乱码一区二区免费版| 免费人成视频x8x8入口观看| 日本在线视频免费播放| 12—13女人毛片做爰片一| 精品免费久久久久久久清纯| 国产精品久久电影中文字幕| 精品国产亚洲在线| 超碰av人人做人人爽久久| 亚洲成人久久爱视频| 老女人水多毛片| 99热6这里只有精品| 亚洲成av人片在线播放无| 婷婷色综合大香蕉| 18美女黄网站色大片免费观看| 直男gayav资源| 亚洲电影在线观看av| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 国产真实乱freesex| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产精品,欧美在线| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 久久久久久久午夜电影| 欧美丝袜亚洲另类 | 中文字幕高清在线视频| 91久久精品电影网| 成人无遮挡网站| 欧美日韩国产亚洲二区| 黄片小视频在线播放| 国产三级中文精品| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲成人中文字幕在线播放| 欧美一区二区精品小视频在线| 99在线人妻在线中文字幕| 久久精品国产亚洲av天美| 91字幕亚洲| 简卡轻食公司| 成年女人看的毛片在线观看| 成人午夜高清在线视频| 人人妻人人看人人澡| 国产精品,欧美在线| 亚洲av电影不卡..在线观看| 久久久久久久久久成人| 18美女黄网站色大片免费观看| 中国美女看黄片| 国产在视频线在精品| 国产伦精品一区二区三区视频9| 又爽又黄无遮挡网站| 婷婷精品国产亚洲av在线| 成人无遮挡网站| 国产黄片美女视频| 久久6这里有精品| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 国产三级黄色录像| 国产探花在线观看一区二区| 欧美午夜高清在线| 热99re8久久精品国产| 欧美中文日本在线观看视频| 国产精品综合久久久久久久免费| 老鸭窝网址在线观看| 91九色精品人成在线观看| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 欧美一级a爱片免费观看看| 我的女老师完整版在线观看| 久久伊人香网站| 亚洲成人中文字幕在线播放| 午夜激情福利司机影院| 欧美最新免费一区二区三区 | 欧美成人性av电影在线观看| 亚洲无线观看免费| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 级片在线观看| 草草在线视频免费看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 美女大奶头视频| 99热这里只有是精品在线观看 | 美女cb高潮喷水在线观看| 色综合婷婷激情| 国产黄片美女视频| 制服丝袜大香蕉在线| 成年女人看的毛片在线观看| 91麻豆精品激情在线观看国产| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 热99在线观看视频| 高清在线国产一区| 亚洲av.av天堂| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产精品av视频在线免费观看| 日韩欧美在线二视频| 美女免费视频网站| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲精品日韩av片在线观看| 精品午夜福利视频在线观看一区| 成人三级黄色视频| 欧美丝袜亚洲另类 | 2021天堂中文幕一二区在线观| 亚洲人与动物交配视频| 日本免费一区二区三区高清不卡| 热99re8久久精品国产| 日韩精品青青久久久久久| 国内精品久久久久久久电影| 欧美+亚洲+日韩+国产| 最近在线观看免费完整版| 国产成+人综合+亚洲专区| 最近中文字幕高清免费大全6 | 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲,欧美精品.| 高清在线国产一区| 88av欧美| 久久人妻av系列| 长腿黑丝高跟| 免费人成在线观看视频色| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国内精品久久久久精免费| 精品久久久久久久久av| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| a级毛片免费高清观看在线播放| 在线观看舔阴道视频| 超碰av人人做人人爽久久| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲av熟女| 网址你懂的国产日韩在线| 天天躁日日操中文字幕| 伊人久久精品亚洲午夜| 男女之事视频高清在线观看| 99国产精品一区二区三区| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 9191精品国产免费久久| 露出奶头的视频| 搡老熟女国产l中国老女人| 淫秽高清视频在线观看| 99久久精品一区二区三区| 一二三四社区在线视频社区8| 国产色婷婷99| 欧美精品国产亚洲| 国产精品电影一区二区三区| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲精品粉嫩美女一区| 脱女人内裤的视频| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产午夜精品论理片| 免费观看人在逋| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产精品98久久久久久宅男小说| 亚洲欧美清纯卡通| 免费在线观看影片大全网站| 嫁个100分男人电影在线观看| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 最近在线观看免费完整版| 我的老师免费观看完整版| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 免费在线观看亚洲国产| 美女大奶头视频| 在线播放国产精品三级| 高清日韩中文字幕在线| 欧美一级a爱片免费观看看| 精品午夜福利在线看| 国产成人福利小说| 欧美另类亚洲清纯唯美| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 乱码一卡2卡4卡精品| 男女床上黄色一级片免费看| 波多野结衣巨乳人妻| 最近视频中文字幕2019在线8| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 狠狠狠狠99中文字幕| 亚洲专区国产一区二区| 99在线视频只有这里精品首页| 国产三级中文精品| 如何舔出高潮| 亚洲综合色惰| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产伦一二天堂av在线观看| 欧美zozozo另类| 国产精品98久久久久久宅男小说| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 欧美三级亚洲精品| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲真实伦在线观看| 国产视频内射| 久久这里只有精品中国| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲自偷自拍三级| 久久久成人免费电影| 老女人水多毛片| 变态另类丝袜制服| 免费在线观看日本一区| av在线天堂中文字幕| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 久久6这里有精品| 99久久九九国产精品国产免费| 18美女黄网站色大片免费观看| 日本黄色视频三级网站网址| 国产人妻一区二区三区在| 91午夜精品亚洲一区二区三区 |