兒童急性淋巴細胞白血病血清miR-29b及miR-181b表達水平變化及臨床價值

彭 亮,喬 婕,徐 曉

三二〇一醫(yī)院:1.兒科;2.血液科,陜西漢中 723000

急性淋巴細胞白血病(ALL)是造血系統(tǒng)原發(fā)性惡性疾病,是兒童最常見的血液系統(tǒng)惡性腫瘤之一,其發(fā)病率占兒童及青少年白血病的75%,流行病學(xué)統(tǒng)計顯示近年來兒童ALL的發(fā)病率呈逐年上升趨勢[1-3]。ALL患兒若不能及時采取有效治療措施,不僅會影響ALL患兒的健康,在發(fā)生嚴重并發(fā)癥時還會危及患兒的生命安全,使其平均生存期僅有3個月左右[4-5]。因此尋找相關(guān)的特異性指標(biāo)提早確診ALL,對指導(dǎo)ALL患兒治療及改善預(yù)后狀態(tài)具有重要意義。微小RNA(miRNA)是由20～24個核苷酸組成的非編碼小分子RNA,能夠通過參與目標(biāo)靶基因的降解、翻譯過程來影響靶基因的功能。有研究表明,miRNA的表達水平與白血病的發(fā)生與復(fù)發(fā)具有相關(guān)性[6]。miR-29b作為miRNA家族的一員,能夠通過與目標(biāo)靶基因的靶點結(jié)合來調(diào)控細胞凋亡的信號通路,起到抑制或促進細胞凋亡的作用[7]。miR-181b同樣也可以調(diào)控多個靶基因的表達水平,參與影響癌細胞的增殖、凋亡和侵襲等過程[8]。有研究顯示,miR-181b在慢性淋巴細胞白血病、胃癌等多種癌癥中均有表達[9-10]。并且有相關(guān)研究表明,miR-29b和miR-181b在白血病患兒血清中均有表達,且二者均為通過調(diào)控靶基因的表達來影響疾病的發(fā)生與發(fā)展[11]。基于此,本研究將探討兒童ALL患兒血清miR-29b和miR-181b的表達水平及臨床價值,以期能夠為ALL患兒的診治提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年8月至2022年8月期間本院收治的93例ALL患兒作為研究組,年齡1～14歲,平均(8.36±3.42)歲。另選取同期在本院體檢且一般資料與研究組ALL患兒相匹配的93例健康兒童作為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合中華醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)分會血液學(xué)組制定的ALL診斷標(biāo)準(zhǔn)[12];(2)年齡≤14歲;(3)初次確診ALL且未接受任何相關(guān)治療;(4)患兒及家屬知曉且同意參與該研究,并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并心、肝、腎等疾病或其他惡性腫瘤;(2)心、肝、腎等重要器官功能異常;(3)合并自身免疫系統(tǒng)疾病;(4)合并其他血液系統(tǒng)疾病。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn),嚴格按照程序執(zhí)行。

1.2研究方法

1.2.1資料收集 收集所有研究對象的年齡、性別、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、白細胞計數(shù)(WBC)、血紅蛋白(Hb)、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)等一般資料。

1.2.2血清miR-29b和miR-181b表達水平的檢測 采集所有研究對象晨起空腹外周靜脈血5 mL,以3 000 r/min的速度離心10 min,取上層血清置入EP管中,置于-20 ℃冰箱中備用。采用RNA提取試劑盒(貨號:9112,Takara公司)從血清中提取總RNA,用分光光度計(UPT-100,上海尤尼柯儀器有限公司)測量A260/280,采用TaqMan MicroRNA Reverse Transcription逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(美國Life Technologies公司)以RNA為模板逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,使用ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix(貨號:Q711-02,Takara公司)對目的基因miR-29b、miR-181b進行擴增,儀器為7500型實時熒光定量PCR儀(美國ABI公司)。PCR反應(yīng)條件為:95 ℃預(yù)變性10 min;95 ℃變性15 s,60 ℃退火60 s,45個循環(huán)。以U6為內(nèi)參,進行數(shù)據(jù)分析,采用2-ΔΔCt法計算miR-29b及miR-181b的表達水平。引物序列見表1。

表1 引物序列

2 結(jié) 果

2.1兩組一般資料比較 對兩組一般資料的分析結(jié)果顯示,兩組研究對象的年齡、性別、BMI、Hb、SBP、DBP比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),而研究組的WBC顯著高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組一般資料比較或n(%)]

2.2兩組血清miR-29b和miR-181b表達水平 對兩組血清miR-29b和miR-181b表達水平的分析結(jié)果顯示,研究組患兒血清miR-29b和miR-181b表達水平均顯著低于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組血清miR-29b和miR-181b表達水平

2.3血清miR-29b和miR-181b表達水平與患兒一般臨床資料的關(guān)系 ALL患兒血清miR-29b和miR-181b表達水平與年齡、性別、BMI、Hb無顯著相關(guān)性(P>0.05),血清miR-29b和miR-181b表達水平均與WBC有關(guān)(P<0.05),見表4。

表4 血清miR-29b和miR-181b表達水平與患兒一般臨床資料的關(guān)系

2.4血清miR-29b和miR-181b表達水平相關(guān)性分析 采用Pearson法對ALL患兒血清miR-29b和miR-181b表達水平進行相關(guān)性分析,結(jié)果顯示,血清miR-29b和miR-181b表達水平呈正相關(guān)(r=0.887,P<0.05),見圖1。

圖1 血清miR-29b和miR-181b表達水平相關(guān)性

2.5Logistic回歸分析影響ALL發(fā)生的相關(guān)因素 以是否發(fā)生ALL為因變量(是=1,否=0),以研究組和對照組差異有統(tǒng)計學(xué)意義的因素-白細胞計數(shù)(連續(xù)變量)、miR-29b(連續(xù)變量)、miR-181b(連續(xù)變量)為自變量,行Logistic回歸分析,結(jié)果顯示,miR-29b和miR-181b均為發(fā)生ALL的保護因素,而WBC為發(fā)生ALL的危險因素(P<0.05)。見表5。

表5 Logistic回歸分析影響ALL發(fā)生的相關(guān)因素

2.6血清miR-29b和miR-181b對ALL的診斷價值分析 ROC曲線分析結(jié)果顯示,血清miR-29b、miR-181b以及二者聯(lián)合檢測診斷ALL的AUC分別為0.742、0.777、0.821,二者聯(lián)合檢測優(yōu)于血清miR-29b和miR-181b各自單獨檢測(Z二者聯(lián)合-miR-29b=2.327、Z二者聯(lián)合-miR-181b=2.163,P=0.014、0.011)。見圖2、表6。

圖2 血清miR-29b和miR-181b診斷ALL的ROC曲線

表6 血清miR-29b和miR-181b對ALL的診斷價值分析

3 討 論

ALL是血液系統(tǒng)常見的惡性腫瘤性疾病,是兒童最常見的惡性腫瘤之一[13-14]。ALL患兒常伴有免疫狀態(tài)紊亂、細胞因子網(wǎng)絡(luò)失衡,其主要臨床癥狀為發(fā)熱、肌肉疼痛、淋巴結(jié)腫大等[15-16]。目前臨床診斷常采用WBC、原始/幼稚細胞比例、體檢有無肝、脾、淋巴結(jié)腫大及胸骨壓痛等指標(biāo)診斷ALL、判斷患兒病情等,由于ALL發(fā)病機制復(fù)雜,需要確診的因素太多,若出現(xiàn)診斷不及時或者與其他疾病混淆時會延誤最佳治療時間,因此尋找能夠準(zhǔn)確診斷ALL的特異性指標(biāo),對ALL的診治、提高患兒的生命質(zhì)量具有重要意義。

miRNA是一類含有18～24個核苷酸的非編碼RNA,可參與調(diào)節(jié)細胞的增殖、分化、凋亡及腫瘤發(fā)生過程中,有研究表明,miRNA的表達水平與ALL的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后狀態(tài)密切相關(guān)[17-18]。其中miRNA家族的miR-29b能夠調(diào)控不同癌細胞凋亡、細胞增殖等過程,在多種疾病中均呈現(xiàn)低表達趨勢[19],并且VISONE等[20]通過實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)驗證了慢性淋巴細胞白血病相關(guān)的32種miRNAs,其中miR-29b在慢性淋巴細胞白血病中呈現(xiàn)低表達。基于此,本研究探討了兒童ALL患兒血清miR-29b和miR-181b的表達水平及臨床價值。本研究中,研究組血清miR-29b表達水平顯著低于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),寇珍等[21]的研究結(jié)果也表明,miR-181b在慢性淋巴細胞白血病患兒體液中呈低表達趨勢,這與本研究結(jié)果一致。陶石等[22]分析miR-181b呈現(xiàn)低表達的原因可能與miR-29b阻斷PI3K/AKT信號通路有關(guān),miR-29b通過參與該信號通路起到抑制白血病細胞K562的增殖作用,從而誘導(dǎo)細胞凋亡,抑制ALL的發(fā)生。

BAGHBANI等[23]的研究結(jié)果顯示,急性T細胞白血病患兒體液中miR-181b表達水平下調(diào),這與本研究結(jié)果一致。對研究組血清miR-29b和miR-181b表達水平的相關(guān)性分析結(jié)果顯示,血清miR-29b和miR-181b表達水平呈正相關(guān)(r=0.887,P<0.05),劉玲等[24]發(fā)現(xiàn)慢性淋巴細胞白血病患兒miR-29b、miR-181a、miR-181b等的表達水平均呈現(xiàn)下降趨勢。以上研究結(jié)果均表明,血清miR-29b和miR-181b表達水平與ALL的發(fā)生密切相關(guān),二者表達水平的升高均會抑制ALL的發(fā)生。進一步對影響ALL發(fā)生的相關(guān)因素進行分析的結(jié)果顯示,研究組WBC顯著高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),結(jié)合多因素分析結(jié)果來看,miR-29b和miR-181b均為發(fā)生ALL的保護因素,而WBC為發(fā)生ALL的危險因素(P<0.05),這與朱奕月等[25]的研究結(jié)果一致。最后采用ROC曲線分析了血清miR-29b和miR-181b對ALL的診斷價值,結(jié)果顯示,血清miR-29b、miR-181b以及二者聯(lián)合檢測診斷ALL的AUC分別為0.742、0.777、0.821(Z二者聯(lián)合-miR-29b=2.327、Z二者聯(lián)合-miR-181b=2.163,P=0.014、0.011),這表明二者聯(lián)合檢測的診斷效能較高,對ALL具有較好的診斷價值。

綜上所述,血清miR-29b和miR-181b表達水平與ALL的發(fā)生密切相關(guān),二者聯(lián)合檢測對ALL具有較好的診斷價值。但miR-29b和miR-181b對ALL的具體影響機制還需通過擴大樣本量、增加實驗指標(biāo)等措施來進一步的探究。