• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    寄生原蟲嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶研究進(jìn)展

    2023-10-29 12:54:22余志會方肆云孫銘飛戚南山劉文俊胡俊菁廖申權(quán)
    廣東農(nóng)業(yè)科學(xué) 2023年8期
    關(guān)鍵詞:鳥嘌呤次黃嘌呤核糖

    余志會,方肆云,孫銘飛,戚南山,劉文俊,李 娟,胡俊菁,廖申權(quán)

    (1.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動物衛(wèi)生研究所/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部禽流感等家禽重大疫病防控重點實驗室/廣東省畜禽疫病防治研究重點實驗室,廣東 廣州 510640;2.仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院動物科技學(xué)院,廣東 廣州 510225;3.溫氏食品集團(tuán)股份有限公司,廣東 云浮 527400)

    寄生原蟲是一類單細(xì)胞真核生物,包括利什曼原蟲(Leishmaniaspp.)、錐蟲(Trypanosomaspp.)、瘧原蟲(Plasmodiumspp.)、剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)、隱孢子蟲(Cryptosporidiumspp.)和艾美耳球蟲(Eimeriaspp.)等,所引起的寄生原蟲病嚴(yán)重危害人類與動物健康,并造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[1-4]。嘌呤堿基是核苷酸合成的前體,在細(xì)胞分裂、生長、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、能量代謝和維生素合成等多種生理過程中都具有重要作用。寄生原蟲的入侵、發(fā)育和繁殖需要大量的嘌呤核苷酸,嘌呤核苷酸參與細(xì)胞和寄生原蟲的多個生化過程,在生物體和寄生原蟲中發(fā)揮重要作用,如核苷酸為核酸生物合成提供前體物質(zhì),ATP 為通用能量載體,核苷酸衍生物為多個生物合成反應(yīng)提供重要前體物質(zhì)[5]。生物體內(nèi),細(xì)胞可以通過從頭合成和補救途徑兩種不同方式合成嘌呤核苷酸,以從頭合成途徑為主;但寄生原蟲只能利用補救途徑合成嘌呤核苷酸,通過從宿主細(xì)胞攝取核酸分解產(chǎn)生的核苷和堿基在磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(Phosphoribosyltransferase,PRT)作用下合成嘌呤核苷酸[6-8]。寄生原蟲參與嘌呤核苷酸合成的主要為腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(Adenine phosphoribosyltransferase,APRT)和6-氧代嘌呤核糖轉(zhuǎn)移酶(6-oxopurine phosphoribosy ltransferase),后者在大多數(shù)寄生原蟲中以次黃嘌呤-鳥嘌呤-黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(Hypoxanthine-guanine-xanthine phosphoribosy ltransferase,HGXPRT)形式存在。腺嘌呤在APRT 的催化作用下轉(zhuǎn)化為嘌呤核苷酸;次黃嘌呤、鳥嘌呤和黃嘌呤在HGXPRT 的催化作用下分別轉(zhuǎn)化為次黃嘌呤核苷酸、鳥嘌呤核苷酸和黃嘌呤核苷酸,其中5-磷酸核糖焦磷酸(Phosphoribosylpyrophosphate,PRPP)是嘌呤補救途徑的主要底物。寄生原蟲的生長發(fā)育需要大量的嘌呤核苷酸,APRT 和HGXPRT 作為蟲體嘌呤補救途徑關(guān)鍵酶,在寄生原蟲嘌呤補救生物合成及生長發(fā)育過程中起重要作用[9-12]。由于寄生原蟲的嘌呤補救途徑明顯區(qū)別于宿主的從頭合成途徑,因而原蟲嘌呤補救途徑關(guān)鍵酶成為抗原蟲藥物靶標(biāo)研究的熱點之一,為抗寄生原蟲藥物研發(fā)提供了新思路。近年來,越來越多的研究關(guān)注寄生原蟲嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶的生物學(xué)特征與功能,并以其為藥物靶點進(jìn)行抑制劑篩選研究[8,13]。本文就寄生原蟲嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶的基本特征、生物學(xué)功能及其抑制劑研發(fā)等研究進(jìn)展作一綜述,以期為抗原蟲藥靶發(fā)現(xiàn)與抗原蟲藥物研制提供新的思路與理論依據(jù)。

    1 寄生原蟲PRT 的基本特征

    1.1 寄生原蟲HGXPRT 的基本特征

    寄生原蟲普遍存在HGXPRT。研究顯示,杜氏利什曼原蟲(L.donovani)的嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶包括次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase,LdHGPRT)和黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(Xanthine phosphoribosyltransferase,LdXPRT)兩個成員,其中LdHGPRT 由211 個氨基酸殘基組成,相對分子量為23.6 kD;LdXPRT 由241 個氨基酸殘基組成,相對分子量為26 kD,兩者氨基酸序列同源性達(dá)33%[14]。Zarella-boitz 等[15]發(fā) 現(xiàn),LdHGPRT 和LdXPRT 的羧基端均存在由1 個三肽分子組成的過氧化物酶體轉(zhuǎn)導(dǎo)肽,兩者均定位于利什曼原蟲的糖酵解酶體,其中糖酵解酶體為動基體目寄生原蟲所特有的微體,含有糖酵解反應(yīng)的大多數(shù)酶。研究表明,LdHGPRT 中保守的Ser-Tyr 氨基酸殘基是該蛋白家族的特征,對于嘌呤核苷酸的磷酸核糖化至關(guān)重要[16]。

    布氏錐蟲(T.brucei)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶由TbHGPRT-Ⅰ、TbHGPRT-Ⅱ和TbHGXPRT 共3 個同工酶組成。Dolezelova 等[17]研究發(fā)現(xiàn),TbHGPRT-I 和TbHGPRT-II 均由210 個氨基酸組成,兩者同源性高達(dá)98%;TbHGXPRT 由234 個氨基酸組成,與TbHGPRT-I 和TbHGPRT-II 的同源性僅為56%。隨后研究發(fā)現(xiàn)TbHGPRT-I、TbHGPRT-II 和TbHGXPRT 均以同源二聚體形式發(fā)揮作用[18]。Vidhya 等[19]發(fā)現(xiàn)TbHGPRT-II 和TbHGXPRT 定位于糖酵解酶體,而TbHGPRT-I定位于細(xì)胞質(zhì)。對蟲體不同時期表達(dá)量差異分析發(fā)現(xiàn),TbHGPRT-I 和TbHGXPRT 在前循環(huán)型和血流型蟲體中表達(dá)水平一致,而TbHGPRT-II 僅在前循環(huán)型蟲體中表達(dá)[18]。研究顯示,克氏錐蟲(T.cruzi)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶存在TcA、TcB、TcC 和TcD 等4 種亞型,其中TcA 與TcC均由221 個氨基酸組成,屬于TcHGPRTs;TcB 與TcD 均由231 個氨基酸組成,屬于TcHGXPRTs;TcHGPRTs 和TcHGXPRTs 氨基酸序列同源性達(dá)35%[20]。研究發(fā)現(xiàn),TcHGPRTs 主要在急性期的血流型蟲體中表達(dá),而TcHGXPRTs 主要在急性期發(fā)展至腦炎期的蟲體中表達(dá),以維持蟲體在腦組織中持續(xù)感染[21]。

    惡性瘧原蟲(P.falciparum)次黃嘌呤-鳥嘌呤-黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(PfHGXPRT)由231 個氨基酸組成,相對分子量為26.2 kD;間日瘧原蟲(P.vivax)次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(PvHGPRT)由233 個氨基酸組成,相對分子量為27.8 kD;PfHGXPRT 與PvHGPRT 氨基酸序列的同源性達(dá)77%[22-23],兩者在低離子濃度和高離子濃度下分別以同型四聚體和二聚體形式存在。研究發(fā)現(xiàn)瘧原蟲HGXPRT 蛋白極不穩(wěn)定,導(dǎo)致瘧原蟲HGXPRT 的重組、表達(dá)、純化和晶體培養(yǎng)均不易實現(xiàn),目前已解析PfHGXPRT與底物次黃嘌呤的共結(jié)晶,以及PfHGXPRT 與抑制劑ImmucilllnHP 復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu),發(fā)現(xiàn)PfHGXPRT 每個亞基由6 個α 螺旋與11 個β 折疊組成,其中46~149 氨基酸處于蛋白質(zhì)核心區(qū)[24]。

    剛地弓形蟲(T.gondii)6-氧代嘌呤核糖轉(zhuǎn)移酶存在TgHGXPRT-Ⅰ和TgHGXPRT-Ⅱ兩種亞型。研究發(fā)現(xiàn),編碼這兩種同工酶的為同一個基因Tghgxprt,其完整的編碼閱讀框為840 bp。Tghgxprt基因轉(zhuǎn)錄、翻譯后,通過不同的剪接方式形成兩種不同的cDNA,從而形成TgHGXPRT-Ⅰ和TgHGXPRT-Ⅱ兩種亞型。其中TgHGXPRT-Ⅰ由230 個氨基酸組成,相對分子量為26.7 kD;TgHGXPRT-Ⅱ由279 個氨基酸組成,與前者相比,僅在羧基端多49 個氨基酸,相對分子量為31.8 kD[25]。Chaudhary等[26]發(fā)現(xiàn)TgHGXPRT-Ⅰ定位于蟲體細(xì)胞質(zhì),TgHGXPRT-Ⅱ定位于內(nèi)膜復(fù)合物,該復(fù)合物為頂復(fù)門寄生原蟲細(xì)胞質(zhì)膜內(nèi)獨特的膜細(xì)胞器。

    1.2 寄生原蟲APRT 的基本特征

    杜氏利什曼原蟲腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(LdAPRT)由237 個氨基酸殘基組成,相對分子量為26.2 kD[27],定位于蟲體細(xì)胞質(zhì)[15]。Phillips 等[28]解析了LdAPRT 與底物腺嘌呤、產(chǎn)物AMP,以及硫酸鹽和檸檬酸鹽離子等結(jié)合的晶體結(jié)構(gòu),發(fā)現(xiàn)LdAPRT 屬于Ⅰ型磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,與該家族其他PRT 的晶核結(jié)構(gòu)相似,包含由13個氨基酸殘基組成的PRPP核糖環(huán)結(jié)合的結(jié)構(gòu)域,但在底物腺嘌呤結(jié)合的結(jié)構(gòu)域存在差異;利什曼原蟲APRT 羧基端均存在延伸結(jié)構(gòu),以組成二聚體的接合面,且APRT 活性位點由二聚體的兩個亞基共同組成,推測利什曼原蟲APRT 二聚體結(jié)構(gòu)對其催化活性至關(guān)重要。

    布氏錐蟲腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶由TbAPRT1和TbAPRT2 兩個成員組成,在布氏錐蟲基因組數(shù)據(jù)庫中可注釋到Tbaprt1和Tbaprt2兩個基因,TbAPRT1 和TbAPRT2 氨基酸序列的同源性僅為22%,TbAPRT1 和TbAPRT2 與LdAPRT 氨基酸序列的相似性分別為52%和27%;序列比對分析發(fā)現(xiàn),TbAPRT1 屬于Ⅰ型磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,而TbAPRT2 與乳清酸磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(Orotate phosphoribosyl-transferase,OPRT)具有結(jié)構(gòu)相似的活性中心[29-30]。研究發(fā)現(xiàn),TbAPRT1 定位于細(xì)胞質(zhì),在血流型和前循環(huán)型錐蟲中均有表達(dá);TbAPRT2 定位于糖酵解酶體,僅在前循環(huán)型錐蟲中表達(dá)[29]。目前仍未發(fā)現(xiàn)瘧原蟲與弓形蟲存在APRT,推測可能存在同工酶或代償路徑。

    2 寄生原蟲PRT 的生物學(xué)功能

    2.1 寄生原蟲HGXPRT 的生物學(xué)功能

    杜氏利什曼原蟲利用LdHGPRT 和LdXPRT兩種酶催化不同的6-氧代嘌呤底物,其中LdHGPRT 催化底物次黃嘌呤和鳥嘌呤,而LdXPRT 具有特殊的底物特異性,可催化黃嘌呤、次黃嘌呤和鳥嘌呤3 種底物,黃嘌呤是LdXPRT的最適底物表1)[14]。Patel 等[31]進(jìn)一步分析LdXPRT 底物特異性機制,發(fā)現(xiàn)LdXPRT(I209V)突變體對黃嘌呤的親和力降低,突變后的催化功能類似HGXPRT,提示I209 為LdXPRT底物特異性的關(guān)鍵位點。早期研究嘗試構(gòu)建杜氏利什曼原蟲Δhgprt/Δxprt雙缺失突變株,但均未成功,提示LdHGPRT 和LdXPRT 可能在利什曼原蟲嘌呤核苷酸合成中起重要作用[14,32]。隨后Boitz 等[33]構(gòu)建了條件性杜氏利什曼原蟲Δhgprt/Δxprt雙缺失突變株,證實LdHGPRT 和LdXPRT在蟲體嘌呤核苷酸合成中均發(fā)揮關(guān)鍵作用。已有研究發(fā)現(xiàn),黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(Xanthine phosphoribosyltransferase,XPRT)只存在利什曼原蟲以及一些特定真菌和細(xì)菌中,哺乳動物缺乏XPRT[34],因而LdXPRT 作為抗利什曼原蟲藥物靶點研究備受關(guān)注。

    表1 寄生原蟲6-氧代嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶動力學(xué)常數(shù)Table 1 Kinetic constants of the 6-oxopurine phosphoribosyltransferases of protozoan parasites

    研究發(fā)現(xiàn)布氏錐蟲嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶存在TbHGPRT-Ⅰ、TbHGPRT-Ⅱ和TbHGXPRT 亞型,每種亞型對6-氧代嘌呤的親和力存在差異,TbHGPRT-Ⅰ和TbHGPRT-Ⅱ可以利用次黃嘌呤和鳥嘌呤,對黃嘌呤無催化活性;TbHGXPRT 可以催化次黃嘌呤、鳥嘌呤和黃嘌呤3 種底物,且對3 種底物的催化效率相近(表1)[18]。Dolezelova 等[17]利用RNAi 技術(shù)將Tbhgprt-Ⅰ、Tbhgprt-Ⅱ和Tbhgxprt基因同時表達(dá)沉默,發(fā)現(xiàn)TbHGPRT-Ⅰ、TbHGPRT-Ⅱ和TbHGXPRT 對感染期布氏錐蟲的生存至關(guān)重要??耸襄F蟲TcHGPRT 包括TcA 和TcC 兩個亞型,可以催化底物次黃嘌呤和鳥嘌呤,幾乎不能利用黃嘌呤;TcHGXPRT 包括TcB 和TcD 兩個亞型,可以利用次黃嘌呤、鳥嘌呤和黃嘌呤3 種底物,對黃嘌呤的親和力高[35]。由于克氏錐蟲嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶存在4 種亞型,因此以該酶為潛在藥物靶標(biāo)篩選出的抑制劑需同時抑制TcHGPRT 和TcHGXPRT 活性,這些結(jié)果可為后續(xù)抑制劑篩選研究提供基礎(chǔ)。

    惡性瘧原蟲PfHGXPRT 可以利用次黃嘌呤、鳥嘌呤和黃嘌呤3 種底物,其中鳥嘌呤為最適底物;而間日瘧原蟲PvHGPRT 只能利用次黃嘌呤和鳥嘌呤,不能催化黃嘌呤合成嘌呤核苷酸[36],推測PfHGXPRT 與PvHGPRT 對黃嘌呤催化活性的差異可能與惡性瘧原蟲更易于從按蚊體內(nèi)攝取高濃度黃嘌呤相關(guān)。研究表明,PfHGXPRT 的酶活性需要低濃度PRPP 與次黃嘌呤進(jìn)行活化,其最佳活化條件為:PfHGXPRT 濃度為37 μmol/L,PfHGXPRT 與底物PRPP 和次黃嘌呤的比值為1∶7.4∶2.2,活化后的PfHGXPRT 最大反應(yīng)速率可達(dá)8.37 μmol/min·mg,是未活化酶的10.8 倍,推測活化過程與PfHGXPRT 聚合為具有更高活性的四聚體相關(guān);然而高濃度的底物可以抑制PfHGXPRT 酶活性,推測可能是高濃度底物PRPP或次黃嘌呤與PfHGXPRT 緊密結(jié)合從而抑制產(chǎn)物的生成[37],這些結(jié)果提示最佳的PfHGXPRT 酶活性反應(yīng)體系是體外評價抑制劑效果時需考慮的重要因素。

    剛地弓形蟲6-氧代嘌呤核糖轉(zhuǎn)移酶的TgHGXPRT-Ⅰ和TgHGXPRT-Ⅱ兩種亞型均以四聚體存在且均具有催化活性,TgHGXPRT-Ⅱ與底物親和力較TgHGXPRT-Ⅰ弱,其中Ⅱ型對鳥嘌呤的Km 值較Ⅰ型高6 倍[25]。根據(jù)已有研究結(jié)果,僅在弓形蟲中發(fā)現(xiàn)同一基因編碼的兩個亞型磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,且兩個亞型均能維持蟲體的繁殖與發(fā)育,具體機制仍不清晰,但推測兩種功能性亞型磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶與弓形蟲廣泛的寄生宿主特性相關(guān),可以有助于弓形蟲在不同宿主中利用攝取或轉(zhuǎn)運的嘌呤進(jìn)行嘌呤核苷酸合成[26]。

    2.2 寄生原蟲APRT 的生物學(xué)功能

    杜氏利什曼原蟲腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(LdAPRT)可利用腺嘌呤和PRPP,其對腺嘌呤和PRPP 的Km 值分別為2.3、25.1 μmol/L[27]。Boitz 等[38]構(gòu)建杜氏利什曼原蟲Δaprt缺失突變株,發(fā)現(xiàn)杜氏利什曼原蟲前鞭毛體Δaprt缺失株在腺嘌呤底物環(huán)境中不能存活,在腺苷環(huán)境中存活率降低50%;杜氏利什曼原蟲無鞭毛體Δaprt缺失株可以在腺嘌呤環(huán)境中存活;Δaprt缺失株也可以感染巨噬細(xì)胞,提示蟲體可以從宿主細(xì)胞攝取多種腺苷來源,利用其他補救途徑進(jìn)行嘌呤核苷酸合成。此外,利什曼原蟲不僅利用APRT 合成嘌呤核苷酸,還可以利用腺苷激酶(Adenosine kinase,AK)合成AMP,以及利用腺嘌呤氨基水解酶(Adenine aminohydrolase,AAH)生成次黃嘌呤,再經(jīng)HGPRT 催化生成IMP,進(jìn)而通過腺苷琥珀酸合成酶、腺苷琥珀酸裂解酶生成AMP[39]。利用代謝流分析發(fā)現(xiàn),利什曼原蟲主要運用腺嘌呤轉(zhuǎn)化為次黃嘌呤,再生成IMP,進(jìn)而轉(zhuǎn)化為AMP進(jìn)行嘌呤核苷酸合成,因此推測利什曼原蟲腺嘌呤氨基水解酶在嘌呤核苷酸合成中起重要作用[40]。

    布氏錐蟲APRT 存在TbAPRT1 和TbAPRT2兩種同工酶:TbAPRT1 具有催化活性,對腺嘌呤的Km 值為3.7 μmol/L;而TbAPRT2 對腺嘌呤的Km值為253 μmol/L,與TbAPRT1相比,被認(rèn)為幾乎無催化活性[30]。序列比對分析發(fā)現(xiàn),TbAPRT1 屬于Ⅰ型磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,而TbAPRT2與乳清酸磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(Orotate phosphoribosyltransferase,OPRT)具有結(jié)構(gòu)相似的活性中心,推測TbAPRT2 作用的底物可能是乳清酸。研究提示TbAPRT1 為布氏錐蟲功能性的磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶。

    弓形蟲、瘧原蟲和隱孢子蟲等不存在APRT酶催化活性,并且在基因組數(shù)據(jù)庫中也未能注釋到aprt基因[41]。研究發(fā)現(xiàn)弓形蟲和隱孢子蟲利用腺苷激酶催化腺苷ATP 磷酸化生成AMP[42]。瘧原蟲缺失AK 和APRT,利用腺苷脫氨酶(Ademosine deaminase,ADA)水解腺苷脫氨產(chǎn)生次黃苷,再通過嘌呤核苷磷酸化酶(Purine nucleoside phosphorylase,PNP)作用生成次黃嘌呤[43]。寄生原蟲因其寄生的宿主環(huán)境各有不同,可能導(dǎo)致各原蟲的嘌呤補救途徑有所不同。

    3 寄生原蟲PRT 的應(yīng)用研究

    目前,以寄生原蟲嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶為潛在靶點的抑制劑研究較為廣泛。研究結(jié)果顯示,嘌呤基雜環(huán)化合物和核苷類似物等與嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶的底物結(jié)構(gòu)相似,因此在抗利什曼原蟲、錐蟲、瘧原蟲和弓形蟲等的先導(dǎo)化合物研究中取得重要進(jìn)展。

    3.1 嘌呤基雜環(huán)化合物

    嘌呤基雜環(huán)化合物可抑制6-氧代PRT活性,并且在體外能有效抑制寄生原蟲繁殖。6-巰基嘌呤、6-硫鳥嘌呤、6-氯嘌呤和8-氮鳥嘌呤等能抑制PfHGXPRT 酶活性,半數(shù)抑制濃度(IC50)為1.3~67 μmol/L;這些抑制劑也可以體外抑制惡性瘧原蟲的繁殖,IC50值為2~18 μmol/L[44-45]。研究發(fā)現(xiàn),別嘌醇和硫唑嘌呤可以抑制體外利什曼原蟲繁殖,對杜氏利什曼原蟲的IC50值為1.9~17 μmol/L,對嬰兒利什曼原蟲的IC50值為0.6~2.8 μmol/L(表2)[46]。已有研究發(fā)現(xiàn)嘌呤基雜環(huán)化合物中別嘌醇的抗原蟲活性較好。

    表2 寄生原蟲嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶的活性抑制劑Table 2 Inhibitors against purine phosphoribosyltransferases of protozoan parasites

    3.2 核苷類似物

    核苷及核苷類似物是嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶的天然底物,核苷類似物等抑制劑的設(shè)計成為抑制劑開發(fā)的有效策略之一。硝基芐硫肌苷是TgHGXPRT 的競爭性抑制劑,其對TgHGXPRT的IC50值為10 μmol/L,對宿主細(xì)胞沒有明顯毒性,高劑量(100 μmol/L)對未感染的宿主細(xì)胞沒有顯著的毒性作用[47]。Keough 等[48]發(fā)現(xiàn),四酰胺苯丙氨酸對PfHGXPRT 的IC50值為7 nmol/L,其抑制活性較嘌呤基雜環(huán)類似物強。Immucillin 也是一類核苷類似物,Immucillin-H 和Immucillin-G 能抑制PfHGXPRT 和TcHGPRT 活性,其中對PfHGXPRT 的抑制活性比TcHGPRT強[20,49],但未見Immucillin 對惡性瘧原蟲和克氏錐蟲體外繁殖抑制效果的報道。Hazleton 等[50]發(fā)現(xiàn),非環(huán)化Immucillin 類似物(Acyclic immucillin phosphonate,AIP)可以有效抑制6-氧代PRT活性,其中衍生物AIP-2 和AIP-3 對PfHGXPRT 的抑制活性Ki 值分別為10、0.65 nmol/L,具有很強的抑制活性;對體外惡性瘧原蟲繁殖的IC50值分別為2.5、1.9 μmol/L。此外,非環(huán)化核苷類似物(acyclic nucleoside phosphonates,ANP)也具有抑制活性,利用分子對接等分析發(fā)現(xiàn),ANP 衍生物不僅對6-氧代嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶具有抑制活性,而且能抑制APRT 活性,其中衍生物ANP-2h 和ANP-2i 對TbrAPRT1 的抑制活性Ki 值分別為0.57、0.39 μmol/L[51-53];2(磷酸乙氧基)乙鳥嘌呤、2(磷酸乙氧基)乙次黃嘌呤、Guanine cyclic-(R)-HPMP 和Guanine-PME 對PfHGXPRT 的抑制活性Ki 值分別為0.1、0.3、1.0、1.6 μmol/L(表2)[54-57]。

    3.3 其他抑制劑

    異乙酸酯和醋酸熊果酸可以抑制PfHGXPT 活性,且抑制作用呈量效關(guān)系,兩者均對PfHGXPT表現(xiàn)出較強的親和力,解離常數(shù)分別為0.0833、2.8396 μmol/L,被認(rèn)為是具有潛力的抗瘧藥物[55]。研究發(fā)現(xiàn)楝科植物提取物對利什曼原蟲APRT 具有抑制作用,其中青花菜根、葉甲醇提取物分別使APRT 的比活性降低84.5%和80.1%;紅果菜果、枝、葉甲醇提取物分別使APRT 的比活性降低78.7%、90.8%和90.3%。在蕓香科植物提取物中發(fā)現(xiàn)3 個呋喃喹諾酮類生物堿,可使APRT 的比活性降低90.7%[58]。楝科植物提取物和呋喃喹諾酮類生物堿均具有酶抑制作用,這些化合物的抗利什曼原蟲效果仍有待進(jìn)一步開展體內(nèi)外試驗驗證[59]。

    4 展望

    寄生原蟲感染引起利什曼原蟲病、錐蟲病、瘧原蟲病、弓形蟲病和雞球蟲病等,不僅對畜牧業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失,而且嚴(yán)重威脅人類健康[60-62]。目前,寄生原蟲病的防治仍主要依賴抗原蟲藥物,隨著抗原蟲藥物的長期、廣泛應(yīng)用,寄生原蟲對藥物的抗藥性日益嚴(yán)重,已有抗原蟲藥物的毒副作用等嚴(yán)重限制了藥物的臨床應(yīng)用,因而篩選新的抗原蟲藥物靶標(biāo)并研制新型抗原蟲藥物成為當(dāng)務(wù)之急。嘌呤核苷酸具有重要的生物學(xué)功能,在寄生原蟲的入侵、發(fā)育和繁殖等多個階段需要大量的嘌呤核苷酸。宿主主要采用從頭途徑合成嘌呤核苷酸,然而,原蟲缺乏嘌呤從頭合成途徑,完全依賴補救途徑進(jìn)行嘌呤核苷酸的生物合成,寄生原蟲與宿主的嘌呤代謝機制存在的明顯差異使得寄生原蟲嘌呤補救途徑關(guān)鍵酶次黃嘌呤-鳥嘌呤-黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶和腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶成為備受關(guān)注的抗原蟲藥物靶標(biāo)。近年來,應(yīng)用生物化學(xué)、藥物化學(xué)、基因編輯技術(shù)等,揭示了利什曼原蟲、錐蟲、瘧原蟲和弓形蟲等寄生原蟲嘌呤代謝機制、嘌呤代謝關(guān)鍵酶特征與生物學(xué)功能,并在此基礎(chǔ)上針對嘌呤代謝關(guān)鍵酶次黃嘌呤-鳥嘌呤-黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶和腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶篩選特異性抑制劑,通過體內(nèi)外驗證試驗發(fā)現(xiàn)了一系列具有良好抗原蟲活性的先導(dǎo)化合物。目前,計算機輔助藥物設(shè)計在抗病毒、抗腫瘤藥物的研發(fā)中取得重要進(jìn)展,極大推進(jìn)了扎那米韋、伊馬替尼等藥物的研發(fā)效率并成功上市[63]。隨著計算機輔助藥物設(shè)計方法逐步成熟,在藥物研發(fā)中發(fā)揮越來越重要的作用,日益成為新藥研究的核心技術(shù)之一。因而,在前期基于寄生原蟲嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(APRT 和HGXPRT)篩選出系列先導(dǎo)化合物的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步解析寄生原蟲嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶的分子結(jié)構(gòu),明晰藥靶與配體的作用機制,利用計算機輔助虛擬篩選技術(shù)進(jìn)行高通量篩選特異、高效、安全的活性抑制劑,并開展體內(nèi)外試驗驗證抑制劑的抗原蟲活性,從而篩選出更高效安全的抗寄生原蟲先導(dǎo)化合物,這將為基于嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶為藥物靶標(biāo)的抗原蟲新藥研發(fā)提供新思路。

    猜你喜歡
    鳥嘌呤次黃嘌呤核糖
    枯草芽孢桿菌產(chǎn)腺苷補料發(fā)酵工藝的研究
    蘿卜硫素通過下調(diào)微小核糖酸-22改善缺氧誘導(dǎo)的心肌H9c2細(xì)胞凋亡
    8-羥基鳥嘌呤DNA糖苷酶與支氣管哮喘關(guān)系的研究進(jìn)展
    冷藏期間豬肌肉中肌苷酸沉積規(guī)律研究
    2-氨基-6-氯鳥嘌呤的合成工藝改進(jìn)研究
    D-核糖的生理功能及其應(yīng)用
    8-羥鳥嘌呤可促進(jìn)小鼠骨骼肌成肌細(xì)胞的增殖和分化
    添加次黃嘌呤對環(huán)磷酸腺苷發(fā)酵產(chǎn)苷的影響
    鳥嘌呤在聚L-甲硫氨酸/石墨烯修飾電極上的電化學(xué)行為及測定
    在世界上首報2型糖尿病尿核糖異常升高
    99久久精品国产亚洲精品| 曰老女人黄片| 国产91精品成人一区二区三区| 免费观看精品视频网站| 国产精品av久久久久免费| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 国产美女午夜福利| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 色在线成人网| 日韩精品中文字幕看吧| 伦理电影免费视频| 亚洲国产色片| 偷拍熟女少妇极品色| 精品久久久久久,| 国产av麻豆久久久久久久| www.www免费av| 国产精品久久久av美女十八| 一级毛片精品| 最近最新免费中文字幕在线| 少妇丰满av| 高清在线国产一区| 在线观看午夜福利视频| 色在线成人网| 国产黄片美女视频| 免费观看精品视频网站| 成人无遮挡网站| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 欧美日韩黄片免| 国产熟女xx| 免费av毛片视频| 婷婷精品国产亚洲av| 亚洲天堂国产精品一区在线| 嫩草影院入口| 亚洲在线观看片| 综合色av麻豆| 亚洲美女视频黄频| 日韩精品青青久久久久久| 成人三级做爰电影| 亚洲精品色激情综合| 小说图片视频综合网站| 最新在线观看一区二区三区| 男女视频在线观看网站免费| or卡值多少钱| av国产免费在线观看| 窝窝影院91人妻| 成年人黄色毛片网站| 日韩欧美精品v在线| 免费一级毛片在线播放高清视频| 校园春色视频在线观看| 国产成人精品无人区| 国产美女午夜福利| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产精品乱码一区二三区的特点| 亚洲av成人一区二区三| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 国产成年人精品一区二区| 我的老师免费观看完整版| 99久久国产精品久久久| 观看美女的网站| 久久香蕉精品热| 欧美一级毛片孕妇| 一个人免费在线观看电影 | 悠悠久久av| 免费一级毛片在线播放高清视频| 午夜激情福利司机影院| 亚洲国产精品999在线| 国产精品99久久久久久久久| 精品乱码久久久久久99久播| 无限看片的www在线观看| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲色图av天堂| 精品日产1卡2卡| 国产成人aa在线观看| 亚洲七黄色美女视频| 一级a爱片免费观看的视频| 91九色精品人成在线观看| 淫妇啪啪啪对白视频| 久久久久性生活片| 成在线人永久免费视频| 欧美极品一区二区三区四区| 热99在线观看视频| 免费在线观看影片大全网站| 免费av不卡在线播放| 亚洲性夜色夜夜综合| av中文乱码字幕在线| 看片在线看免费视频| 在线观看日韩欧美| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 五月玫瑰六月丁香| 欧美激情久久久久久爽电影| 最新美女视频免费是黄的| 久久久国产成人免费| 两个人视频免费观看高清| 久久精品国产清高在天天线| 91字幕亚洲| 国产精品国产高清国产av| 狂野欧美激情性xxxx| 亚洲黑人精品在线| 美女大奶头视频| 国产99白浆流出| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 国产一级毛片七仙女欲春2| 在线观看免费午夜福利视频| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 美女午夜性视频免费| 国产精品亚洲一级av第二区| 一本综合久久免费| 成年人黄色毛片网站| 成人无遮挡网站| 天堂√8在线中文| 大型黄色视频在线免费观看| 国产精品99久久久久久久久| 99久久成人亚洲精品观看| 男人的好看免费观看在线视频| 极品教师在线免费播放| 国产高清视频在线播放一区| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 国产av一区在线观看免费| 中亚洲国语对白在线视频| 免费av毛片视频| 精华霜和精华液先用哪个| 亚洲熟女毛片儿| 国产精品亚洲一级av第二区| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 亚洲成av人片免费观看| 日本一二三区视频观看| 他把我摸到了高潮在线观看| 香蕉久久夜色| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 少妇人妻一区二区三区视频| 精品午夜福利视频在线观看一区| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 婷婷精品国产亚洲av| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产激情偷乱视频一区二区| 美女 人体艺术 gogo| 一个人免费在线观看的高清视频| 日本与韩国留学比较| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 婷婷六月久久综合丁香| 午夜福利成人在线免费观看| 成人午夜高清在线视频| 国产av不卡久久| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 精品福利观看| 免费观看精品视频网站| 女人被狂操c到高潮| 久久亚洲真实| 国产一区二区在线av高清观看| 免费看a级黄色片| 99热精品在线国产| 黄色丝袜av网址大全| 亚洲五月婷婷丁香| 五月玫瑰六月丁香| 午夜影院日韩av| 国产精品永久免费网站| 两性夫妻黄色片| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 亚洲电影在线观看av| 欧美不卡视频在线免费观看| 99久久精品一区二区三区| av片东京热男人的天堂| 可以在线观看的亚洲视频| 亚洲人成电影免费在线| 久久久久性生活片| 久久久久国产一级毛片高清牌| 最近最新中文字幕大全免费视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 日本黄色视频三级网站网址| 天天一区二区日本电影三级| 波多野结衣巨乳人妻| 在线观看免费视频日本深夜| 国产成人系列免费观看| 九色成人免费人妻av| 香蕉丝袜av| 99精品欧美一区二区三区四区| 久久久久久大精品| 我的老师免费观看完整版| bbb黄色大片| 最近在线观看免费完整版| 高清毛片免费观看视频网站| 我要搜黄色片| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 人人妻人人澡欧美一区二区| 国产爱豆传媒在线观看| 日本与韩国留学比较| 国产不卡一卡二| 亚洲熟女毛片儿| 国产日本99.免费观看| 男女视频在线观看网站免费| 91久久精品国产一区二区成人 | 成人特级av手机在线观看| 手机成人av网站| 高清在线国产一区| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 亚洲,欧美精品.| 一进一出好大好爽视频| 波多野结衣高清无吗| 老汉色∧v一级毛片| 欧美日韩精品网址| 99国产精品99久久久久| 欧美大码av| 在线播放国产精品三级| 十八禁人妻一区二区| 欧美黄色片欧美黄色片| 香蕉av资源在线| 美女黄网站色视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 成人永久免费在线观看视频| 美女被艹到高潮喷水动态| 欧美乱码精品一区二区三区| 欧美激情久久久久久爽电影| 久久草成人影院| 久久久久国产一级毛片高清牌| 搡老妇女老女人老熟妇| 午夜福利在线观看吧| 欧美日韩一级在线毛片| 国产一区二区在线av高清观看| 国产精品免费一区二区三区在线| 日本 av在线| 天堂动漫精品| 精品免费久久久久久久清纯| 999精品在线视频| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产探花在线观看一区二区| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 欧美一级毛片孕妇| av黄色大香蕉| 亚洲av成人精品一区久久| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 欧美一级a爱片免费观看看| 一区二区三区国产精品乱码| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲午夜理论影院| 国产乱人伦免费视频| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 99国产极品粉嫩在线观看| 熟女电影av网| 亚洲国产精品久久男人天堂| 美女 人体艺术 gogo| av片东京热男人的天堂| 日本在线视频免费播放| 国产成人aa在线观看| 午夜福利在线观看吧| 我要搜黄色片| 国产黄色小视频在线观看| 国产伦人伦偷精品视频| 天天添夜夜摸| 国产成人精品无人区| 亚洲国产欧美人成| 精品免费久久久久久久清纯| 岛国在线免费视频观看| 禁无遮挡网站| 免费在线观看亚洲国产| 亚洲黑人精品在线| 这个男人来自地球电影免费观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 叶爱在线成人免费视频播放| or卡值多少钱| 淫秽高清视频在线观看| 日韩三级视频一区二区三区| 怎么达到女性高潮| 亚洲国产精品久久男人天堂| 可以在线观看毛片的网站| 高潮久久久久久久久久久不卡| xxx96com| 亚洲在线自拍视频| 99精品在免费线老司机午夜| 午夜成年电影在线免费观看| 性色av乱码一区二区三区2| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 国产欧美日韩一区二区三| 老熟妇仑乱视频hdxx| 97碰自拍视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 精品国产亚洲在线| 国产激情欧美一区二区| 亚洲欧美日韩高清专用| 免费大片18禁| 久久久水蜜桃国产精品网| 欧美zozozo另类| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 在线免费观看的www视频| 日本五十路高清| 婷婷精品国产亚洲av| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | www日本在线高清视频| 全区人妻精品视频| av中文乱码字幕在线| 国产精品久久久人人做人人爽| 88av欧美| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 久久久久久久午夜电影| 久久中文字幕一级| 舔av片在线| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 欧美色欧美亚洲另类二区| 99国产精品一区二区三区| 少妇的逼水好多| 亚洲精品456在线播放app | 伦理电影免费视频| 一二三四在线观看免费中文在| 美女午夜性视频免费| 青草久久国产| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 网址你懂的国产日韩在线| 丰满人妻一区二区三区视频av | 一级黄色大片毛片| av国产免费在线观看| 最近视频中文字幕2019在线8| 后天国语完整版免费观看| 高清在线国产一区| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 18美女黄网站色大片免费观看| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲成人久久性| 亚洲av免费在线观看| 中国美女看黄片| 精品久久久久久成人av| 国产免费男女视频| 午夜免费成人在线视频| 国产亚洲欧美在线一区二区| 男人和女人高潮做爰伦理| 欧美国产日韩亚洲一区| 少妇熟女aⅴ在线视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产主播在线观看一区二区| 国产伦人伦偷精品视频| 99久久综合精品五月天人人| 国产精品一区二区精品视频观看| 美女黄网站色视频| 成人av在线播放网站| 久久久久免费精品人妻一区二区| 成人国产综合亚洲| 免费电影在线观看免费观看| 国产精品久久视频播放| 精品一区二区三区四区五区乱码| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 身体一侧抽搐| 国产高清激情床上av| 男女视频在线观看网站免费| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 久久精品91蜜桃| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 精品无人区乱码1区二区| 窝窝影院91人妻| 婷婷精品国产亚洲av| 岛国视频午夜一区免费看| 无人区码免费观看不卡| 99精品在免费线老司机午夜| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产高清视频在线播放一区| 香蕉av资源在线| 免费看十八禁软件| 久久人妻av系列| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 久久国产精品人妻蜜桃| 亚洲精品在线观看二区| 搡老妇女老女人老熟妇| xxxwww97欧美| 一区二区三区国产精品乱码| 神马国产精品三级电影在线观看| av在线天堂中文字幕| 首页视频小说图片口味搜索| av天堂中文字幕网| 久久久成人免费电影| 一级作爱视频免费观看| 老司机深夜福利视频在线观看| 丰满的人妻完整版| 国产真实乱freesex| 超碰成人久久| 搡老岳熟女国产| 国产成人精品无人区| 高清在线国产一区| 97碰自拍视频| 欧美日韩乱码在线| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 精品国产亚洲在线| 免费大片18禁| 九色国产91popny在线| 久久人人精品亚洲av| 国产精品 国内视频| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国产精品综合久久久久久久免费| 色吧在线观看| 18美女黄网站色大片免费观看| 久久人妻av系列| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 久久中文字幕人妻熟女| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 欧美一区二区精品小视频在线| 久久中文字幕人妻熟女| 特大巨黑吊av在线直播| 曰老女人黄片| 在线永久观看黄色视频| 亚洲国产色片| 波多野结衣巨乳人妻| 丁香欧美五月| 久久久久九九精品影院| 成人一区二区视频在线观看| 成人av一区二区三区在线看| 久久久久久大精品| 久久久久国产一级毛片高清牌| 不卡一级毛片| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产精品久久电影中文字幕| 久久国产精品影院| 长腿黑丝高跟| 国产日本99.免费观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 亚洲片人在线观看| 午夜福利视频1000在线观看| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产野战对白在线观看| 色播亚洲综合网| 中文在线观看免费www的网站| 久久国产精品影院| 天堂√8在线中文| 国产视频内射| 国产精品一区二区精品视频观看| 欧美黑人欧美精品刺激| 在线免费观看不下载黄p国产 | 成人精品一区二区免费| 一级a爱片免费观看的视频| 国模一区二区三区四区视频 | 88av欧美| 99精品久久久久人妻精品| 欧美高清成人免费视频www| 五月伊人婷婷丁香| 久久久色成人| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 日本精品一区二区三区蜜桃| 久久久国产成人精品二区| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国模一区二区三区四区视频 | 俄罗斯特黄特色一大片| 高清在线国产一区| 成年女人看的毛片在线观看| 国产三级黄色录像| 国产av一区在线观看免费| 国产男靠女视频免费网站| 国产精品av视频在线免费观看| 在线观看一区二区三区| av女优亚洲男人天堂 | 亚洲av美国av| 特大巨黑吊av在线直播| 成人国产一区最新在线观看| 免费看十八禁软件| 又黄又粗又硬又大视频| or卡值多少钱| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 女同久久另类99精品国产91| 国产高清有码在线观看视频| 九色国产91popny在线| 亚洲精品一区av在线观看| a级毛片在线看网站| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲 国产 在线| 色综合站精品国产| 99久久综合精品五月天人人| 悠悠久久av| 天天添夜夜摸| 免费看日本二区| 久久久久久人人人人人| 成人特级av手机在线观看| 老熟妇仑乱视频hdxx| 日本 欧美在线| 久久精品国产综合久久久| 香蕉av资源在线| 成人鲁丝片一二三区免费| 久久国产精品影院| 国产伦人伦偷精品视频| 一级毛片高清免费大全| 99热只有精品国产| 亚洲av电影不卡..在线观看| av天堂在线播放| 在线观看免费午夜福利视频| 国产精品国产高清国产av| 国产精品九九99| 亚洲第一电影网av| 无遮挡黄片免费观看| 在线观看日韩欧美| 国产精品1区2区在线观看.| 俄罗斯特黄特色一大片| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 精品国产三级普通话版| 99热6这里只有精品| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 舔av片在线| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 他把我摸到了高潮在线观看| 狂野欧美激情性xxxx| 亚洲专区中文字幕在线| 性色avwww在线观看| 无限看片的www在线观看| 变态另类丝袜制服| www.精华液| 免费看a级黄色片| 亚洲欧美日韩高清专用| 欧美日韩精品网址| 露出奶头的视频| 国产在线精品亚洲第一网站| www日本黄色视频网| 无人区码免费观看不卡| 亚洲电影在线观看av| 成人午夜高清在线视频| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产精品一区二区三区四区久久| 色尼玛亚洲综合影院| av欧美777| 久久久久国产一级毛片高清牌| 久久精品人妻少妇| 国产淫片久久久久久久久 | 99久久久亚洲精品蜜臀av| 老鸭窝网址在线观看| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 亚洲性夜色夜夜综合| 可以在线观看毛片的网站| 国产成年人精品一区二区| 国产高清videossex| 欧美在线黄色| e午夜精品久久久久久久| 国产三级中文精品| 操出白浆在线播放| 欧美一区二区精品小视频在线| 精品欧美国产一区二区三| 国产精品久久久久久久电影 | 成人午夜高清在线视频| 中文字幕av在线有码专区| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产单亲对白刺激| 神马国产精品三级电影在线观看| 精品欧美国产一区二区三| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 黄片大片在线免费观看| 小说图片视频综合网站| 免费搜索国产男女视频| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| а√天堂www在线а√下载| 欧美日韩国产亚洲二区| 淫秽高清视频在线观看| 日韩大尺度精品在线看网址| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 一进一出抽搐动态| 免费无遮挡裸体视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 熟女人妻精品中文字幕| 国产亚洲精品av在线| 草草在线视频免费看| x7x7x7水蜜桃| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲一区二区三区色噜噜| 日本免费a在线| 观看免费一级毛片| 国产三级中文精品| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲国产欧美网| 婷婷六月久久综合丁香| 熟女人妻精品中文字幕| 欧美乱色亚洲激情| 久久久久久久久久黄片| 精品一区二区三区四区五区乱码| 黄色成人免费大全| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲精品在线观看二区| 俺也久久电影网| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲18禁久久av| 国产精品亚洲av一区麻豆| 在线a可以看的网站| 亚洲无线在线观看| 特大巨黑吊av在线直播| 12—13女人毛片做爰片一| 欧美激情在线99| 亚洲av片天天在线观看| 免费电影在线观看免费观看| 亚洲人成伊人成综合网2020| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 听说在线观看完整版免费高清| 久久久久精品国产欧美久久久| 老汉色∧v一级毛片| 青草久久国产| 麻豆久久精品国产亚洲av| 成人av在线播放网站| 男人舔女人的私密视频| 亚洲人与动物交配视频| 日韩人妻高清精品专区| 久久这里只有精品19| 国产三级在线视频| 精品久久蜜臀av无| 最新中文字幕久久久久 | 免费一级毛片在线播放高清视频| 美女黄网站色视频| 亚洲av成人精品一区久久| 九色成人免费人妻av| 亚洲av片天天在线观看| 日本a在线网址| 成年版毛片免费区|