兒童哮喘嚴重程度與miR-26a 的相關(guān)性分析

王興，亢楊，白明輝，鄧李玲，林紅嬌，曲芯蕊

齊齊哈爾醫(yī)學院附屬第三醫(yī)院兒科，黑龍江齊齊哈爾 161000

哮喘是兒童期最常見的慢性呼吸道疾病，因為是遺傳性的，多種細胞和炎癥介質(zhì)共同作用，但其病因復雜，具體發(fā)病機制尚不完全清楚[1-2]。miRNA是一種由23 個左右核苷酸組成的單鏈小分子RNA，越來越多的證據(jù)表明，miRNA 在哮喘氣道重塑中發(fā)揮關(guān)鍵作用[3-4]。最近有報道顯示上調(diào)miR-26a 能夠緩解LPS 誘導炎癥反應所導致的膿毒癥大鼠線粒體損傷和免疫紊亂[5]，但miR-26a 在炎癥反應中的抑制作用仍在很大程度上未知，需要進一步研究[6-7]。本研究選取2021 年7 月—2022 年12 月在齊齊哈爾醫(yī)學院附屬第三醫(yī)院呼吸科住院的100 例哮喘急性發(fā)作患兒和同期在本院需擇期手術(shù)但無哮喘指征的100 例患兒為研究對象，旨在探討miR-26a 是否通過Nrf2/HO-1 信號通路減輕兒童哮喘氣道炎癥，以期為哮喘治療提供新思路?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取在本院呼吸科住院的哮喘急性發(fā)作患兒100 例作為研究組，按照支氣管哮喘急性發(fā)作的嚴重程度等級將急性發(fā)作患兒分為輕度組（n=36）、中度組（n=41）和重度組（n=23）。選取同期在本院需擇期手術(shù)但無哮喘指征的100 例患兒作為對照組，本院醫(yī)學倫理委員會批準本次研究，患兒監(jiān)護人同意抽血檢查，并簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標準

納入標準：研究組患兒符合中華醫(yī)學會兒科學分會呼吸學組《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南》[8]診斷標準，且具有哮喘急性發(fā)作臨床表征；對照組兒童無個人或家族過敏性疾病史，近期無感染史，且未接受過抗感染、抗過敏性藥物治療；年齡12 歲以下。

排除標準：合并有感冒、支氣管、肺結(jié)核等原因引發(fā)咳嗽患兒，或呼吸道支氣管發(fā)育畸形患兒；合并有慢性感染或嚴重器質(zhì)性病變疾病患兒；有其他變態(tài)反應性病史的兒童；近期接受過激素類藥物治療的兒童。

1.3 方法

采集所有患兒入院24 h 內(nèi)及出院前24 h 內(nèi)的肘部靜脈血5 mL，分置于肝素抗凝管中，3 000～5 000 rpm 離心15 min，取上清，所有標本保存于-70℃冰箱待測。采用實時定量PCR 檢測所有患兒血漿中miR-26a 的表達。按照試劑盒方法提取血液標本中總RNA，用反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄為cDNA，用U6 作為內(nèi)參，實時定量PCR 檢測miR-26a 水平。

1.4 統(tǒng)計方法

本次研究采用SPSS 26.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計學分析，采用K-S 檢驗確定連續(xù)變量的正態(tài)分布情況，符合正態(tài)分布的miR-26a 相對表達量等描述為（±s），組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用ANOVA 檢驗。Pearson 相關(guān)分析用于分析miR-26a與哮喘之間的關(guān)系。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患兒一般數(shù)據(jù)及血漿miR-26a 表達量比較

兩組兒童性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。與對照組相比，輕度組、中度組和重度組哮喘患兒的miR-26a 相對表達量較高，且隨著疾病加重，miR-26a 表達顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組患兒基本信息比較

2.2 哮喘患兒外周血miR-26a 的表達與病情嚴重程度相關(guān)性分析

Spearman 相關(guān)性分析顯示，miR-26a 水平與兒童哮喘程度呈正相關(guān)（r=0.732，P＜0.001）。

3 討論

哮喘是兒童常見的慢性病，作為一種慢性氣道炎癥性疾病，其特點是氣道高反應性和可逆性氣道阻塞，導致氣短、反復喘息、胸悶和咳嗽。如果不及時治療，可能會導致肺功能下降，并嚴重影響兒童的生活質(zhì)量[8-10]，找到哮喘的早期診斷指標，有助于有效控制該疾病，具有重要意義。目前，廣泛使用的哮喘診斷標準主要側(cè)重于呼吸道癥狀病史和肺功能檢查，存在一些弊端，如當患者患有多種疾病（心力衰竭、貧血等）而導致呼吸困難時，哮喘可能會被忽視。此外，1 s 用力呼氣量是檢測氣道阻塞的有效方法，也是診斷哮喘的重要工具，但不能單獨用于對哮喘的不同類型和階段進行分類。因此，臨床實踐中需要一種通用且高特異性的生物標志物來輔助哮喘的診斷。

越來越多的證據(jù)表明，miRNA 在調(diào)節(jié)細胞增殖、遷移、分化和凋亡方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用，且miRNA 可參與多種過敏性疾病的發(fā)病機制，如哮喘、過敏性鼻炎、嗜酸粒細胞性食管炎和濕疹[11]。miRNA 可能在協(xié)調(diào)免疫和氣道上皮細胞的表型編程中發(fā)揮作用，以增加細胞因子和其他介質(zhì)的產(chǎn)生，從而導致炎癥特征。Jiang C 等[12]在分析細胞外miRNA 是否與伴有哮喘風險的兒童期反復喘息有關(guān)的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)喘息兒童和抗原誘導肺部炎癥的大鼠的血漿miR-26a 顯著增加，干預miR-26a-5p表達可以改善過敏性哮喘小鼠的支氣管組織，減少纖維化并降低血清炎性因子水平。本研究的臨床數(shù)據(jù)表明，與正常兒童（0.88±0.37）相比，輕、中、重度哮喘兒童血清中的miR-26a 分別為（1.04±0.25）、（1.28±0.33）、（1.51±0.52），均隨病情嚴重程度顯著增加，且與疾病嚴重程度顯著相關(guān)（P＜0.05），與上述研究基本一致，這提示miR-26a 在兒童哮喘的發(fā)展中起著調(diào)節(jié)作用。一些研究報告了miR-26a 在肺部疾病中的作用。在肺損傷的新生兒中，miR-26a 的過度表達與新生兒呼吸窘迫綜合征相關(guān)[13]。這些發(fā)現(xiàn)支持了本文關(guān)于miR-26a 在哮喘中潛在作用的假設(shè)，然而，miR-26a 在兒童哮喘作用機制并沒有得到分析，這對未來發(fā)現(xiàn)新的治療靶點具有重要意義[14-16]。

綜上所述，血漿miR-26a 水平可以區(qū)分健康個體和哮喘兒童，調(diào)控哮喘中的炎癥反應，并暗示靶向miR-26a 信號通路相關(guān)蛋白是治療哮喘的一種有前途的策略。