鴿Ⅰ型副黏病毒(S-1株)滅活疫苗保存期試驗研究

張俊平　蔣鳳英　張春玲　王瑞陽　趙本進　丁衛(wèi)星　楊惠萍　李春華

摘? 要：為了確定鴿Ⅰ型副黏病毒（S-1株）滅活疫苗的保存期，對不同溫度下保存不同時間的3批鴿Ⅰ型副黏病毒（S-1株）滅活疫苗實驗室制品的物理性狀、安全性和免疫效力進行了檢測。試驗結果表明，該疫苗冷藏（2～8 ℃）保存12個月、室溫（25 ℃左右）保存6個月，其物理性狀、安全性和免疫效力無明顯變化，均能達到《鴿Ⅰ型副黏病毒（S-1株）滅活疫苗質量標準》的要求。因此，在《鴿Ⅰ型副黏病毒（S-1株）滅活疫苗制造及檢驗試行規(guī)程》中規(guī)定該疫苗的保存期為：冷藏（2～8 ℃）保存，保存期為12個月。

關鍵詞：鴿Ⅰ型副黏病毒；滅活疫苗；保存期

中圖分類號：S858.39 文獻標志碼：A ? ? ? ?文章編號：1001-0769（2023）05-0073-04

鴿Ⅰ型副黏病毒（pigeon paramyxovirus 1，PPMV-Ⅰ）病俗稱鴿瘟或鴿新城疫，是一種由禽Ⅰ型副黏病毒引起的、流行于鴿群的急性、熱性、高度接觸性傳染病，以腸炎、嚴重腹瀉和神經癥狀為特征，迄今為止，鴿新城疫仍然是嚴重危害養(yǎng)鴿業(yè)的主要病毒性傳染病之一[1-4]。? ? ? ? ? ?Dortmans等[5]認為，PPMV-Ⅰ是適應了宿主鴿的新城疫病毒（Newcastle disease viruse，NDV）變異株。PPMV-Ⅰ與雞的NDV具有一定的同源性，也有一定的血清學交叉反應，但PPMV-Ⅰ經在鴿體內傳代，已適應鴿體內寄生和增殖，使PPMV-Ⅰ與雞NDV在抗原性上有了很大差異，因此在使用新城疫疫苗免疫鴿群后，出現(xiàn)抗體水平不高，保護率低，免疫期短，不能完全抵抗強毒的攻擊[6]。因此，分離、培育出免疫原性良好的毒株，研制出具有良好免疫原性的鴿Ⅰ型副黏病毒滅活疫苗，對預防該病至關重要[7]。本實驗室在分離鑒定的基礎上研制了鴿Ⅰ型副黏病毒（S-1株）滅活疫苗，并對疫苗進行了前期研究，現(xiàn)對該疫苗進行不同保存條件、不同保存時間的物理性狀、安全性和免疫效力的測定，為鴿Ⅰ型副黏病毒（S-1株）滅活疫苗的保存期提供科學的理論依據。

1? 試驗材料

1.1 試驗疫苗

鴿Ⅰ型副黏病毒（S-1株）滅活疫苗的批號分別為20200801、20200802和20200803，均由上海佳牧生物制品有限公司制備。按照《鴿Ⅰ型副黏病毒（S-1株）滅活疫苗制造及檢驗試行規(guī)程》制造和檢驗，符合要求。

1.2 試驗儀器

TDZ4-WS低速自動平衡離心機購自上海盧湘儀離心機儀器有限公司；DVNXLVCJC黏度計購自美國博勒飛公司；DNP-9272電熱恒溫培養(yǎng)箱購自上海精宏實驗設備有限公司；BPC-250F生化培養(yǎng)箱購自上海一恒科學儀器有限公司；SPF雞隔離器購自蘇州市馮氏實驗動物設備有限公司。

1.3 培養(yǎng)基

硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（fluid thioglycollate medium，TG）、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（tryplic soy broth，TSB）、酪胨瓊脂培養(yǎng)基（casein peptone agar medium，GA）均購自北京中海生物科技有限公司。

1.4 試驗動物

30日齡非免疫銀王幼鴿（HI抗體水平≤2log2）由上海申裕鴿業(yè)養(yǎng)殖專業(yè)合作社提供。

1.5 攻毒毒株

鴿Ⅰ型副黏病毒強毒株（川沙株E5代）由上海市農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所分離、鑒定和保存，病毒含量為107.5 ELD50/0.1 mL。

2? 試驗方法

2.1 試驗方案設計

將鴿Ⅰ型副黏病毒（S-1株）滅活疫苗樣本分別保存在冷藏（2～8 ℃）、室溫（25 ℃左右）溫度條件下，按以下時間點檢測物理性狀、安全性和免疫效力。

冷藏保存，分別在保存3、6、9、12、15個月后抽取樣本進行檢測；室溫保存，分別在保存1、2、3、6、9個月后抽取樣本進行檢測。

2.2 疫苗物理性狀檢驗

按現(xiàn)行《中華人民共和國獸藥典》三部[8]中常規(guī)油乳劑滅活疫苗檢驗方法進行。

2.3 疫苗安全性檢驗

給10羽試驗幼鴿分別接種在不同溫度下保存不同時間的疫苗，每羽肌內注射疫苗? ?1.0 mL，觀察14 d，記錄試驗鴿的臨床反應情況。

2.4 疫苗免疫效力檢驗

給10羽試驗幼鴿分別接種下不同溫度下保存不同時間的疫苗，每羽肌內注射疫苗? ? ? 50 μL。接種后28 d，每羽采血，分離血清，進行HI抗體效價測定，統(tǒng)計抗體效價的幾何平均值。

3? 試驗結果

3.1 鴿Ⅰ型副黏病毒（S-1株）滅活疫苗冷藏保存試驗結果

實驗室試制的3批（生產批號分別為：20200801、20200802、20200803）鴿Ⅰ型副黏病毒（S-1株）滅活疫苗冷藏保存12個月，疫苗的物理性狀、安全性和免疫效力檢驗均合格；保存15個月，生產批號為20200802的疫苗免疫效力檢驗不合格。根據試驗結果確定鴿Ⅰ型副黏病毒（S-1株）滅活疫苗冷藏保存期為12個月。具體試驗結果見表1。

3.2 鴿Ⅰ型副黏病毒（S-1株）滅活疫苗室溫保存試驗結果

實驗室試制的3批鴿Ⅰ型副黏病毒（S-1株）滅活疫苗室溫保存6個月，疫苗的物理性狀、安全性和免疫效力檢驗均合格，保存9個月的生產批號為20200802的疫苗經物理性狀和免疫效力檢驗均不合格，根據試驗結果確定鴿Ⅰ型副黏病毒（S-1株）滅活疫苗室溫保存期為6個月。具體試驗結果見表2。

4? 分析與討論

鴿Ⅰ型副黏病毒病是危害養(yǎng)鴿業(yè)的主要疾病之一，迄今尚無有效治療藥物，接種疫苗是預防該病的關鍵。盡管鴿副黏病毒與雞新城疫病毒為同一屬，但兩種病毒在抗原性上有一定差異，在致病性上也有一定區(qū)別，許多報道表明，用現(xiàn)有的雞新城疫疫苗接種鴿子雖具有一定的效果，但保護率并不理想[9-10]。因此，研制一種安全有效的鴿Ⅰ型副黏病毒滅活疫苗迫在眉睫。疫苗研制過程中疫苗保存期的確定是必不可少的環(huán)節(jié)。

本研究是在鴿Ⅰ型副黏病毒（S-1株）滅活疫苗前期研究的基礎上，進行的不同保存條件、不同保存時間的鴿Ⅰ型副黏病毒（S-1株）滅活疫苗的物理性狀、安全性和免疫效力檢測，根據試驗結果判定，疫苗冷藏（2～ 8 ℃）可保存12個月，室溫（25 ℃左右）可保存6個月?？紤]到實際生產及疫苗運輸過程中存在很多影響因素，并且目前絕大部分生產、經營、使用單位都具備冷藏（2～8 ℃）保存條件。因此，將鴿Ⅰ型副黏病毒（S-1株）滅活疫苗保存期定為：冷藏（2～8 ℃）保存，保存期為12個月。

參考文獻

[1] MARLIER D，VINDEVOGEL H．Viral infections in pigeons[J]．The Veterinary Journal，2006，172（1）：40-51.

[2] KIM L M，KING D J，GUZMAN H，et al．Biological and phylogenetic characterization of pigeon paramyxovirus serotype 1 circulating in wild North American pigeons and doves[J]．Journal of Clinical Microbiology，2008，46（10）：3303-3310.

[3] KALETA E F，ALEXANDER D J，RUSSELL P H．The first isolation of the PPMV-1 virus responsible for the current panzootic in Pigeons[J]．Avian Pathology，1985，14：553-557.

[4] （美）Y. M. 塞弗（SAIF Y M）主編．蘇敬良，高福，索勛主譯．禽病學[M]．第十一版．北京：中國農業(yè)出版社，2005：108-130.

[5] DORTMANS J C F M，ROTTIER P J M，KOCH G，et al．Passaging of a Newcastle disease virus pigeon variant in chickens results in selection of viruses with mutations in the polymerase complex enhancing virus replication and virulence[J]．Journal of General Virology，2011，92（Pt2）：336-345.

[6] 秦彤，劉小惠，崔奕杰，等．鴿Ⅰ型副黏病毒HT40克隆株的篩選及其生物學特性鑒定[J]．中國獸醫(yī)雜志，2007，43（6）：11-12.

[7] 仇微紅，葉賀佳，李敏，等．1株鴿新城疫病毒的分離、鑒定及生物學特性研究[J].養(yǎng)禽與禽病防治，2012（3）：7-10.

[8] 中國獸藥典委員會．中華人民共和國獸藥典2020年版三部[S]．北京：中國農業(yè)出版社，2021.

[9] 張淑霞，楊增歧，趙余放，等．鴿禽I型副粘病毒油佐劑滅活苗對肉種鴿免疫效果觀察[J]．中國預防獸醫(yī)學報，1999，21（3）：163-165.

[10] 古靜，黨安坤，蘭鄒然．鴿I型副黏病毒病研究進展[J]．中國獸醫(yī)雜志，2019，55（1）：95-97.