血清LncRNA MYLK-AS1水平對(duì)早期肝癌的診斷效果

黃穎　季仙依　王欽君　季沈杰

【摘要】? 目的? 探討血清長鏈非編碼肌球蛋白輕鏈激酶反義RNA1（LncRNA MYLK-AS1）水平對(duì)早期肝癌診斷價(jià)值。方法? 選取2018年4月- 2021年4月醫(yī)院收治的72例早期肝癌患者為病例組，并選取同期70例肝炎以及肝硬化患者為對(duì)照組。比較兩組患者血清LncRNA MYLK-AS1水平，評(píng)價(jià)血清LncRNA MYLK-AS1水平對(duì)早期肝癌的診斷價(jià)值。結(jié)果? 病例組患者血清LncRNA MYLK-AS1水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。病例組患者不同年齡、性別、是否存在包膜、TNM分期之間血清LncRNA MYLK-AS1相對(duì)表達(dá)量比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；而高分化和存在微血管侵犯的病例組患者血清LncRNA MYLK-AS1相對(duì)表達(dá)量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。血清LncRNA MYLK-AS1對(duì)于早期肝癌診斷的AUC曲線下面積為0.827（95%CI：0.756～0.898），以血清LncRNA MYLK-AS相對(duì)表達(dá)量≥102為早期肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)，診斷的靈敏度=97.22%，特異度=91.43%，Kappa=0.893，其在早期肝癌診斷價(jià)值較高。結(jié)論? 早期肝癌患者血清LncRNA MYLK-AS1水平明顯升高，且與分化程度和微血管侵犯存在一定關(guān)系，其水平對(duì)于早期肝癌診斷的真實(shí)性及一致性均較高，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】? LncRNA MYLK-AS1；肝癌；診斷價(jià)值

中圖分類號(hào)? R446? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼? A? ? 文章編號(hào)? 1671-0223（2023）21--04

肝癌是臨床上較為多見的惡性腫瘤，具有發(fā)病快和惡性程度高的特點(diǎn)[1]。由于肝癌早期癥狀和體征并不明顯，多數(shù)患者出現(xiàn)癥狀就醫(yī)時(shí)已經(jīng)進(jìn)展至中晚期，錯(cuò)失了最佳治療時(shí)期，因此早期診斷極為重要[2]。CT和磁共振成像是臨床上的常見診斷方式，但兩種方法的靈敏度和特異度并不高，容易出現(xiàn)漏診和誤診的情況[3]。目前血清學(xué)檢測已逐步運(yùn)用在惡性腫瘤的早期篩查中。長鏈非編碼RNA（long noncoding RNA，lncRNA）是一種長度大于200的非編碼RNA，可通過蛋白質(zhì)、信號(hào)通路以及MicroRNA（miRNA）等在肝癌的發(fā)展中起到關(guān)鍵作用[4]。相關(guān)的研究發(fā)現(xiàn)[5-6]lncRNAs參與蛋白質(zhì)編碼基因的染色質(zhì)修飾、轉(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)節(jié)，或通過特異性結(jié)合調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)功能和活性。LncRNAs的表達(dá)失調(diào)與包括癌癥在內(nèi)的多種疾病發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[7-9]，例如lncRNA與胰腺癌進(jìn)展有關(guān)，lncRNAs表達(dá)異?？勺鳛橐认侔┰\斷和預(yù)后的良好生物標(biāo)志物[10]。肌球蛋白輕鏈激酶反義RNA1（myosin light chain kinase antisense，MYLK-AS1）是信息轉(zhuǎn)導(dǎo)中的重要蛋白質(zhì)，在腫瘤細(xì)胞和血管生成中起到關(guān)鍵的作用[11]。但尚未出現(xiàn)關(guān)于MYLK-AS1對(duì)于肝癌的早期診斷研究，因此本研究旨在探究血清長鏈非編碼肌球蛋白輕鏈激酶反義RNA1（LncRNA MYLK-AS1）水平對(duì)早期肝癌診斷價(jià)值。

1? 對(duì)象與方法

1.1? 研究對(duì)象

選取2018年4月- 2021年4月醫(yī)院收治的72例早期肝癌患者為病例組，并選取同期70例肝炎以及肝硬化患者為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①觀察組患者符合《現(xiàn)代肝癌診斷治療學(xué)》[12]中肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)，且以病理活體組織檢查為金標(biāo)準(zhǔn)；②觀察組患者均為BCLCA期肝癌；③患者神經(jīng)意志正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患者合并其他部位惡性腫瘤；②患者入院前已接受其他藥物治療；③患者合并血液系統(tǒng)嚴(yán)重病變。觀察組男性50例，女性22例；年齡35～70歲，平均52.77±4.38歲。對(duì)照組男性49例，女性23例；年齡34～71歲，平均52.13±4.46歲，兩組患者性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2? 資料收集

內(nèi)容包括患者年齡、性別、是否存在包膜、TNM分期、分化程度和微血管侵犯情況等。

1.3? 實(shí)驗(yàn)室檢測方法

入院后次日取空腹靜脈血5ml，高速離心分層取血清送實(shí)驗(yàn)室檢查。采用RNA提取試劑盒（北京索萊寶科技公司）以及cDNA合成試劑盒（上海聯(lián)邁生物工程有限公司）進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA。通過熒光定量PCR儀（南京貝登醫(yī)療股份有限公司）完成擴(kuò)增反應(yīng)。采用引物（上海英駿生物技術(shù)有限公司），正向引物：5′-TTGCAGTGTTCAGCACTGGCACA-3′;反向引物：5′-ATTCGACGACCAGTGTTTCAGT-3′。反應(yīng)條件：在95℃下反應(yīng)3min，在95℃下反應(yīng)30s，在60℃下反應(yīng)30s，在72℃下反應(yīng)40s，以上步驟連續(xù)完成38個(gè)循環(huán)。隨后通過２-ΔΔCt計(jì)算MYLK-AS1的相對(duì)表達(dá)量。

1.4? 數(shù)據(jù)處理方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理，計(jì)量資料用“±s”表示，組間均數(shù)比較用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料計(jì)算百分率，組間率的比較用χ2檢驗(yàn)。采用ROC曲線評(píng)價(jià)血清LncRNA MYLK-AS1診斷早期肝癌的效能。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。。

2? 結(jié)果

2.1? 兩組患者血清LncRNA MYLK-AS1水平比較

病例組患者血清LncRNA MYLK-AS1的相對(duì)表達(dá)量高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2? 病例組患者不同臨床特征血清LncRNA MYLK-AS1水平比較

病例組患者不同年齡、性別、是否存在包膜、TNM分期之間血清LncRNA MYLK-AS1相對(duì)表達(dá)量比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；而高分化和存在微血管侵犯的病例組患者血清LncRNA MYLK-AS1相對(duì)表達(dá)量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

2.3? 血清LncRNA MYLK-AS1對(duì)于早期肝癌的診斷效能

ROC結(jié)果顯示（見圖1），血清LncRNA MYLK-AS1對(duì)于早期肝癌診斷的AUC曲線下面積為0.827（95%CI：0.756～0.898），表明血清LncRNA MYLK-AS1對(duì)于早期肝癌具有一定的診斷效能（P<0.05）。根據(jù)約登指數(shù)結(jié)合臨床需要，以血清LncRNA MYLK-AS相對(duì)表達(dá)量=102為診斷的界值。

2.4? 血清LncRNA MYLK-AS1對(duì)于早期肝癌的診斷效果

以血清LncRNA MYLK-AS相對(duì)表達(dá)量≥102為早期肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)，樣本的診斷結(jié)果顯示，血清LncRNA MYLK-AS診斷早期肝癌靈敏度及特異度均達(dá)到90%以上，并且與實(shí)際結(jié)果具有高度一致性（Kappa=0.893），表明血清LncRNA MYLK-AS對(duì)早期肝癌的診斷價(jià)值較高，見表3。

3? 討論

肝癌是我國常見的惡性腫瘤，由于該病初期并無明顯癥狀，多數(shù)患者確診時(shí)已經(jīng)進(jìn)展到中晚期[13]。雖然肝癌的治療已取得顯著進(jìn)展，但總體發(fā)病率和死亡率尚無明顯改觀，進(jìn)一步提高患者生存預(yù)后仍面臨嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。目前早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療是防治原發(fā)性肝癌的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。臨床上肝癌診斷金標(biāo)準(zhǔn)是組織活檢，但這種方法有創(chuàng)傷性，尚需要更有效的診斷指標(biāo)[14]。研究發(fā)現(xiàn)[15]甲胎蛋白、癌胚抗原、糖蛋白抗原199等生物標(biāo)志物作為篩選原發(fā)性肝癌的重要指標(biāo)，其靈敏度、特異性均不高，部分原發(fā)性肝癌患者用上述指標(biāo)檢測無法確診。

LncRNA能夠在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵的作用，是目前臨床上常見的抑癌或者抑癌基因，其可作為miRNA的“分子海綿”，與miRNA共同調(diào)控目的基因的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞增殖、炎性因子分泌、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞遷移等細(xì)胞生物學(xué)行為，進(jìn)而影響癌癥進(jìn)展[16-18]。LncRNA MYLK-AS1處在第3號(hào)染色體上，最初被證實(shí)具有人類基因內(nèi)替代啟動(dòng)因子的功能，且在近幾年已被證實(shí)是人類的致癌基因[19]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[20]，較高M(jìn)YLK-AS1表達(dá)的胃癌患者生存期明顯縮短，且其表達(dá)的上調(diào)明顯促進(jìn)了胃癌的增殖和分化。本研究結(jié)果顯示，相較于對(duì)照組患者，觀察組患者血清LncRNA MYLK-AS1水平更高。提示，肝癌患者血清LncRNA MYLK-AS1存在明顯的升高。高度表達(dá)的LncRNA MYLK-AS1會(huì)促進(jìn)肝細(xì)胞周期的發(fā)展，同時(shí)還能夠抑制肝癌細(xì)胞的凋亡，說明表示其水平在細(xì)胞增殖中起到一定的作用[21-22]。本研究結(jié)果顯示，中低分化和存在微血管侵犯患者血清LncRNA MYLK-AS1水平明顯高于高分化和不存在微血管侵犯患者。這也進(jìn)一步證實(shí)了LncRNA MYLK-AS1與肝癌的增殖分化存在的關(guān)系。本研究發(fā)現(xiàn)，本研究進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，血清LncRNA MYLK-AS1對(duì)于早期肝癌診斷的AUC曲線下面積為0.827（95%CI：0.756～0.898），以血清LncRNA MYLK-AS相對(duì)表達(dá)量≥102為早期肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)，診斷的靈敏度=97.22%，特異度= 91.43% ，Kappa= 0.893。說明LncRNA MYLK-AS1對(duì)于早期肝癌的診斷價(jià)值較高。

綜上所述，早期肝癌患者血清LncRNA MYLK-AS1水平明顯升高，且與分化程度和微血管侵犯存在一定關(guān)系，其水平對(duì)于早期肝癌診斷的真實(shí)性和一致性均較高，有臨床應(yīng)用價(jià)值。但本次研究樣本量較小，且未進(jìn)行外推實(shí)驗(yàn)，需要繼續(xù)深入研究，進(jìn)一步明確臨床應(yīng)用效果。

4? 參考文獻(xiàn)

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[2023-07-05收稿]

作者單位：226200? 江蘇省啟東市人民醫(yī)院/啟東肝癌防治研究所/南通大學(xué)附屬啟東醫(yī)院檢驗(yàn)科

*通訊作者