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    不同方法測(cè)定復(fù)方曲安奈德水楊酸搽劑中曲安奈德含量及與搽劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)性研究

    2018-10-30 06:24:42梁藍(lán)月聶秀霞王榮侃
    關(guān)鍵詞:分光光度法高效液相色譜法

    梁藍(lán)月 聶秀霞 王榮侃

    【摘要】 目的:分析不同方法測(cè)定復(fù)方曲安奈德水楊酸搽劑中醋酸曲安奈德含量的效果,以及醋酸曲安奈德含量和搽劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)性。方法:收集3個(gè)批次復(fù)方曲安奈德水楊酸搽劑樣品,分別使用分光光度法及高效液相色譜法對(duì)其中的醋酸曲安奈德含量進(jìn)行測(cè)量,并對(duì)兩種方法測(cè)量的醋酸曲安奈德含量進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果:分光光度法的平均測(cè)得量、平均回收率、RSD(相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差)與高效液相色譜法比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。同時(shí)兩種方法對(duì)樣品的檢測(cè)結(jié)果均在規(guī)定范圍內(nèi)。結(jié)論:在對(duì)復(fù)方曲安奈德水楊酸搽劑中醋酸曲安奈德含量進(jìn)行測(cè)定過(guò)程中,通過(guò)分光光度法以及高效液相色譜法均能夠起到一定效果。分光光度法操作簡(jiǎn)單快速,但專屬性不強(qiáng),而高效液相色譜法相對(duì)關(guān)物質(zhì)測(cè)定更加準(zhǔn)確可靠,因此有更高使用價(jià)值。同時(shí)也可作為對(duì)復(fù)方曲安奈德水楊酸搽劑質(zhì)量控制的方法。

    【關(guān)鍵詞】 復(fù)方曲安奈德水楊酸搽劑; 分光光度法; 高效液相色譜法

    Determination of Triamcinolone Acetonide in Compound Triamcinolone Acetonide Salicylic Acid Liniment by Different Methods and Its Correlation with Liniment Quality Standards/LIANG Lanyue,NIE Xiuxia,WANG Rongkan,et al.//Medical Innovation of China,2018,15(19):0-027

    【Abstract】 Objective:To analyze the effect of different methods on the determination of triamcinolone acetonide in compound triamcinolone salicylate salicylic acid liniment and the correlation between triamcinolone acetonide and liniment quality standard.Method:A total of 3 batches of compound triamcinolone acetonide salicylic acid liniment samples were collected and their contents of triamcinolone acetonide were measured by spectrophotometry and high performance liquid chromatography respectively.The contents of triamcinolone acetonideof two methods were comparatively analyzed.Result:There were no significant difference in the average measured value,average recovery,RSD between the two methods(P>0.05).At the same time,the test results of the two methods were within the specified range.Conclusion:In the determination of triamcinolone acetonide in compound triamcinolone acetonide salicylic acid liniment,spectrophotometry and high performance liquid chromatography can all play a certain role.Spectrophotometry is simple and fast, but its specificity is not strong, and high performance liquid chromatography is more accurate and reliable than the relative substance determination, so it has higher use value.At the same time it can also be used as compound triamcinolone salicylic acid liniment quality control methods.

    【Key words】 Compound triamcinolone acetonide salicylic acid liniment; Spectrophotometry; High performance liquid chromatography

    First-authors address:Zhongshan Second Peoples Hospital,Zhongshan 528447,China

    doi:10.3969/j.issn.1674-4985.2018.19.007

    復(fù)方曲安奈德水楊酸搽劑是臨床較常見藥物,對(duì)手癬、體癬、足癬、股癬等皮膚類疾病均可起到較好臨床療效[1]。對(duì)于復(fù)方曲安奈德水楊酸搽劑而言,其中的主要成分為水楊酸、氯霉素和醋酸曲安奈德。此幾種藥物分別為單一制劑時(shí),對(duì)含量的測(cè)定方法主要有永停滴定法及比色法等。但在將兩種藥物混合后,這些方法已經(jīng)無(wú)法起到較為準(zhǔn)確有效的檢測(cè)效果。因此,更加準(zhǔn)確可靠的醋酸曲安奈德測(cè)定方法非常重要[2]。有研究顯示,分光光度法及高效液相色譜法均為測(cè)定藥物有效成分的主要手段,但兩種檢測(cè)方法的特性不同,其結(jié)果可能也會(huì)出現(xiàn)差異[3-4]。為了分析測(cè)定醋酸曲安奈德含量的有效方法,本文對(duì)此兩種測(cè)定方進(jìn)行了對(duì)比分析,并且分析了醋酸曲安奈德含量及與搽劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)性,具體報(bào)道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    1.1.1 研究?jī)x器 本研究中使用美國(guó)安捷倫科技有限公司生產(chǎn)的Agilent 1200高效液相色譜儀、日本島津制作所生產(chǎn)的UV-260紫外分光光度儀、日本日立U3000型紫外分光光度儀、瑞士梅特勒托利AE204十萬(wàn)分之一電子分析天平。

    1.1.2 研究試劑 本研究使用復(fù)方曲安奈德水楊酸搽劑(本院制劑部自制,批號(hào):20171101、20171115、20171201)作為樣品;醋酸曲安奈德工作對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所(批號(hào):100125-201404);對(duì)照品為中國(guó)食品藥品檢定研究院提供的醋酸曲安奈德(批號(hào):100125-201404)和曲安奈德(批號(hào):100055)。其中醋酸曲安奈德含量為97.8%。將甲醇作為色譜純,將10%的氫氧化四甲基銨溶液作為分析純,實(shí)驗(yàn)用水為雙蒸水。

    1.2 研究方法

    1.2.1 溶液制備方法 (1)曲安奈德對(duì)照溶液。首先需精密稱取曲安奈德對(duì)照品,劑量50 mg,放入50 mL的量瓶中,加入甲醇定容。將此溶液精密量取1 mL,放入到50 mL的量瓶中,并加入流動(dòng)相動(dòng)容,得到曲安奈德對(duì)照品溶液。(2)醋酸曲安奈德對(duì)照溶液。在制備醋酸曲安奈德對(duì)照溶液過(guò)程中,首先可精密稱取曲安奈德對(duì)照品50 mg,放入50 mL量瓶中,加入甲醇定容。將此溶液精密量取1 mL,放入到50 mL的量瓶中,加入流動(dòng)相定容,得到醋酸曲安奈德對(duì)照品溶液。(3)供試品溶液。首先精密量取1 mL復(fù)方曲安奈德水楊酸搽劑,轉(zhuǎn)入到50 mL量瓶中,加入流動(dòng)相,將其稀釋到刻度位置,搖勻。(4)陰性樣品溶液。按照相應(yīng)處方,配置出不加入醋酸曲安奈德的空白對(duì)照溶液。(5)系統(tǒng)適用性溶液。首先精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液A和對(duì)照品儲(chǔ)備液B,均為0.5 mL,放置在50 mL的量瓶中。并加入流動(dòng)相定容,得到混合對(duì)照品溶液。

    1.2.2 測(cè)定方法 (1)分光光度法。①含量測(cè)定:需精密吸取供試品及對(duì)照品溶液,劑量1 mL。將其分別放置在具塞刻度管中,并加入無(wú)水乙醇調(diào)整劑量為10 mL。另需取10 mL無(wú)水乙醇作為空白對(duì)照,加入1 mL氯化三苯四氮唑溶液搖勻,再加入1 mL氫氧化四甲基銨溶液搖勻。在25 ℃位置放置45 min,按照分光光度法要求,在485 nm波長(zhǎng)位置對(duì)吸收度進(jìn)行測(cè)定和計(jì)算,得出本研究中3批次樣品含量。②線性關(guān)系試驗(yàn):首先需吸取醋酸曲安奈德對(duì)照溶液,劑量為0.25、0.50、1.00、1.50、2.00 mL。分別將其放置在具塞刻度管中,分別加入無(wú)水乙醇,稀釋到劑量為10 mL后搖勻。使用和含量測(cè)定相同的方法,取10 mL無(wú)水乙醇作為空白對(duì)照,對(duì)其吸收度進(jìn)行測(cè)量。將濃度作為橫坐標(biāo),將吸收度設(shè)定為縱坐標(biāo),進(jìn)行回歸處理分析。③回收率試驗(yàn):本研究中使用添加法進(jìn)行回收率試驗(yàn)。使用6只50 mL量瓶,一次對(duì)其進(jìn)行編號(hào)。精密吸取已經(jīng)進(jìn)行過(guò)含量測(cè)定的樣品溶液,劑量5 mL,并分別放置進(jìn)入量瓶中。在1號(hào)和2號(hào)量瓶中加入對(duì)照溶液2 mL,在3號(hào)和4號(hào)量瓶中加入對(duì)照溶液5 mL,在5號(hào)和6號(hào)量瓶中加入對(duì)照溶液10 mL。使用和含量測(cè)定相同的方法對(duì)回收率進(jìn)行測(cè)定。④穩(wěn)定性試驗(yàn):通過(guò)測(cè)定RSD的方法對(duì)穩(wěn)定性進(jìn)行分析。將醋酸曲安奈德對(duì)照溶液進(jìn)行吸取,并在室溫條件下放置。在放置到0、10、20、30、40 min時(shí)對(duì)吸收度進(jìn)行測(cè)量,并計(jì)算出RSD值。(2)高效液相色譜法。本研究中,高效液相色譜法的色譜條件如下:色譜柱為5 μm,250×

    4.6 mm的Welch Materials Ultimate XB-C8。流動(dòng)相為6:4的甲醇-水溶液,檢測(cè)波長(zhǎng)240 nm,進(jìn)樣量設(shè)定為20 μL,流速1 mL/min。①含量測(cè)定:稱取適量樣品,通過(guò)流動(dòng)相將其稀釋成0.02 mg/mL溶液,稱取20 μL,加入到液相色譜儀中,對(duì)色譜圖實(shí)施全面記錄。另需精密稱取對(duì)照品,加入甲醇溶解,使用流動(dòng)相稀釋成為0.02 mg/mL溶液,精密稱取1 mL,加入50 mL量瓶中,使用流動(dòng)相稀釋到刻度位置搖勻。在測(cè)定完成后,需使用外標(biāo)法計(jì)算峰面積,得出含量。②線性關(guān)系試驗(yàn):精密稱取對(duì)照品0.6、0.8、1.0、1.2、1.6 mL,放置在50 mL的量瓶中,使用流動(dòng)相稀釋到刻度位置并搖勻。將此溶液20 μL注入到液相色譜儀中,對(duì)色譜進(jìn)行記錄。將濃度作為橫坐標(biāo),將峰面積作為縱坐標(biāo),對(duì)其實(shí)施線性回歸分析。③回收率試驗(yàn):需精密量取對(duì)照品3、5、7 mL,各2份,將其放置在50 mL的量瓶中,每份需精密加入到5 mL的樣品中,使用流動(dòng)相稀釋到刻度并搖勻。按照色譜條件分別量取20 μL對(duì)其進(jìn)行進(jìn)樣測(cè)定,計(jì)算出回收率。④穩(wěn)定性試驗(yàn):仍需使用測(cè)定RSD的方法對(duì)穩(wěn)定性進(jìn)行分析。需取得對(duì)照品溶液,劑量為0.3、0.5、0.7 mL各2份,將其分別放置在50 mL的量瓶中,每份樣品均需要加入已經(jīng)準(zhǔn)確測(cè)量過(guò)的樣品,劑量為0.5 mL,使用流動(dòng)相將其稀釋到刻度并搖勻。

    1.3 觀察指標(biāo) 本研究完成后,需對(duì)兩種方法檢測(cè)后的平均測(cè)得量、平均回收率、RSD進(jìn)行收集,并且對(duì)兩種方法的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 20.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料用(x±s)表示,比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,比較采用字2檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 分光光度法檢測(cè)后的回收率、樣品含量及RSD,見表1、2。

    2.2 高效液相色譜法檢測(cè)后的回收率、樣品含量及RSD,見表3、4。

    2.3 兩種方法檢測(cè)效果比較 本研究顯示,分光光度法的平均測(cè)得量、平均回收率、RSD與高效液相色譜法比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表5。

    2.4 醋酸曲安奈德含量和搽劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)性 通過(guò)分光光度法檢查后顯示,得出醋酸曲安奈德的回歸方程為A=26.375C-0.002 801,r=0.999 9。而在實(shí)施高效液相色譜法檢查后顯示,醋酸曲安奈德的線性方程為:A=3.651 8×104C+20.824,r=0.999。通過(guò)分析顯示,在試驗(yàn)過(guò)程中醋酸曲安奈德和峰面積呈現(xiàn)出較好的線性關(guān)系。其結(jié)果說(shuō)明醋酸曲安奈德含量和搽劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有著顯著相關(guān)性。

    3 討論

    復(fù)方曲安奈德水楊酸搽劑是臨床較常見的藥物類型,其中的主要成分為水楊酸、氯霉素、醋酸曲安奈德等。通過(guò)使用復(fù)方曲安奈德水楊酸搽劑,可對(duì)各類皮膚疾病起到較好治療效果,例如手癬、足癬、股癬或是體癬等[5-6]。復(fù)方曲安奈德水楊酸搽劑中的水楊酸為膠質(zhì)溶解軟化劑,有抗菌、去除角質(zhì)層的作用,可改善患者臨床癥狀。而醋酸曲安奈德屬于皮質(zhì)類固醇,又被稱為醋酸曲安縮松。在臨床治療時(shí),能夠起到抗炎、抗瘙癢及收縮血管等效果[7]。尤其是抗炎作用強(qiáng)而持久。對(duì)于常見的皮炎等皮膚類疾病,通過(guò)涂抹的方式即能夠被皮膚吸收[8]。由此可見,保證到復(fù)方曲安奈德水楊酸搽劑中的有效成分醋酸曲安奈德含量滿足要求非常重要。

    當(dāng)前在對(duì)復(fù)方曲安奈德水楊酸搽劑中的醋酸曲安奈德進(jìn)行測(cè)定過(guò)程中,其主要方法有兩種,即分光光度法和高效液相色譜法。

    分光光度法的主要原理為對(duì)被測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng),或是一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)光的吸收度,從而對(duì)這一物質(zhì)進(jìn)行定量和定性分析的方法[9]。而在對(duì)復(fù)方曲安奈德水楊酸搽劑中的醋酸曲安奈德含量測(cè)定時(shí),通過(guò)分光光度法也能夠取得較好效果[10]。

    高效液相色譜法又被稱為高壓液相色譜、高分力度液相色譜和高速液相色譜。在實(shí)際的檢測(cè)中,需以液體作為流動(dòng)相,使用高壓輸液系統(tǒng)將溶液等流動(dòng)相裝入到固定相的色譜柱中,在色譜柱中,各類成分被分離后可進(jìn)入到檢測(cè)器中接受檢測(cè),從而完成對(duì)各種物質(zhì)的檢測(cè)[11-13]。由于其特點(diǎn),也可對(duì)各類化學(xué)物質(zhì)起到更準(zhǔn)確的檢測(cè)效果,因而在對(duì)復(fù)方曲安奈德水楊酸搽劑中的醋酸曲安奈德進(jìn)行檢測(cè)時(shí),通過(guò)高效液相色譜法可取得較好效果[14-17]。

    本研究即分析了測(cè)定復(fù)方曲安奈德水楊酸搽劑中,醋酸曲安奈德含量的有效方法。通過(guò)本研究顯示,使用分光光度法及高效液相色譜法,均能夠較好測(cè)量醋酸曲安奈德的含量。兩種方法檢測(cè)后的平均測(cè)得量、平均回收率、RSD,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。而在以往的研究中也對(duì)檢測(cè)醋酸曲安奈德含量的方法進(jìn)行了分析。在Navin等[18]研究中,分析了使用高效液相色譜法測(cè)定紫杉醇、地塞米松等物質(zhì)在基質(zhì)中的含量。通過(guò)其研究顯示,使用高效液相色譜法,能夠較好地對(duì)這些物質(zhì)的含量進(jìn)行測(cè)定。而在曾建亭[19]研究中,則分析了使用高效液相色譜法對(duì)醋酸曲安奈德硫軟膏中的醋酸曲安奈德含量的測(cè)定效果。在其研究中顯示,通過(guò)使用高效液相色譜法能夠?qū)Υ姿崆材蔚潞科鸬捷^好的檢測(cè)效果。在張?jiān)伱返萚20]研究中,分析了高效液相色譜法測(cè)量復(fù)方曲安奈德乳膏中醋酸曲安奈德含量的效果。通過(guò)其研究顯示,高效液相色譜法有著靈敏度高和專屬性強(qiáng)等特點(diǎn),可對(duì)復(fù)方曲安奈德乳膏中曲安奈德含量進(jìn)行有效測(cè)量。對(duì)這些研究結(jié)果進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn),其均能夠說(shuō)明使用高效液相色譜法可對(duì)醋酸曲安奈德的測(cè)量起到較好效果,其結(jié)果也和本研究類似。

    綜上所述,雖然高效液相色譜法和分光光度法均可對(duì)醋酸曲安奈德含量進(jìn)行測(cè)定,相比高效液相色譜法,分光光度法的操作雖然簡(jiǎn)便,其檢測(cè)時(shí)間也更短,但容易在實(shí)際的檢測(cè)中出現(xiàn)偏差。由此可見,若條件允許,應(yīng)盡可能使用高效液相色譜法對(duì)醋酸曲安奈德含量進(jìn)行測(cè)定。

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    (收稿日期:2018-04-18) (本文編輯:張帥)

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