干木耳中有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留氣相色譜測定方法研究

曹秀榮 聶 淼 徐 盼 路 康

（商洛市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全中心， 陜西 商洛 726000）

木耳， 隸屬于木耳科木耳屬[1]， 在我國栽培歷史悠久， 廣泛分布于東北、 華北、 西南等地， 是我國第二大食用菌， 年產(chǎn)量700 萬t 以上， 占世界總產(chǎn)量的90%以上[2]。 木耳不僅營養(yǎng)豐富， 而且具有很高的藥用價值， 是一種珍貴的食藥兼用膠質(zhì)真菌， 深受國內(nèi)外消費者喜愛[2]。 木耳作為陜西省商洛市的一個重要脫貧產(chǎn)業(yè)， 對于發(fā)展地方經(jīng)濟(jì)、 提高農(nóng)民收入、 實施鄉(xiāng)村振興戰(zhàn)略具有極其重要的意義。 2020 年習(xí)近平總書記考察陜西省商洛市柞水縣時點贊 “小木耳， 大產(chǎn)業(yè)”[3]， 給商洛市乃至整個陜西省木耳產(chǎn)業(yè)帶來了前所未有的發(fā)展機(jī)遇， 同時也對木耳產(chǎn)品質(zhì)量把控、 特色品質(zhì)保持和產(chǎn)品核心競爭力提升等方面提出了更高的要求， 而開展木耳產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測， 正是保障木耳產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵和基礎(chǔ)。

木耳通常均以干品銷售和食用， 質(zhì)量安全監(jiān)測應(yīng)以木耳干品為主。 但現(xiàn)有適用于食用菌中農(nóng)藥殘留檢測的方法標(biāo)準(zhǔn)僅適用于新鮮木耳， 且大多用的質(zhì)譜類檢測設(shè)備[4～9]， 基層質(zhì)檢機(jī)構(gòu)硬件設(shè)施難以滿足。 李艷芳等[10]、 姬曉靈等[11]雖然建立了黑木耳中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留氣相色譜檢測方法， 但其同樣不能對干木耳中農(nóng)藥殘留準(zhǔn)確定量。 本研究擬采用氣相色譜-火焰光度法建立干木耳中15 種有機(jī)磷類農(nóng)藥的殘留檢測方法， 旨在有效填補(bǔ)干木耳中農(nóng)藥殘留氣相色譜測定方法的空白， 為廣大基層質(zhì)檢機(jī)構(gòu)開展干木耳中農(nóng)藥殘留檢測提供參考。

一、 材料與方法

（一） 試驗材料

1.供試樣品。 隨機(jī)抽取干木耳樣品500 g， 四分法縮分取樣或全樣粉碎， 通過850 μm 網(wǎng)篩， 混勻，裝入聚乙烯袋中。 密封， 編號， 常溫下保存?zhèn)溆谩?/p>

2.主要儀器。 GC-2010plus 氣相色譜儀（帶有雙FPD 檢測器、 雙塔自動進(jìn)樣器、 雙分流/ 不分流進(jìn)樣口， 日本島津公司）； XS105DU 電子分析天平 （感量0.1 mg， 瑞士梅特勒-托利多集團(tuán)）；SE602FZH 電子分析天平 （感量0.01 g， 美國奧豪斯公司）； 組織搗碎機(jī)（轉(zhuǎn)速不低于30 000 r/min）；離心機(jī) （轉(zhuǎn)速不低于8 000 r/min）； 水浴鍋 （可控溫）； 氮吹儀（可控溫）； 渦旋振蕩器。

3.主要試劑。 乙腈 （AR 級）、 丙酮 （GC 級）、氯化鈉（AR 級）、 水（符合GB/T 6682 《分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法》 規(guī)定的一級水）。

4.標(biāo)準(zhǔn)品。 15 種有機(jī)磷類農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品， 名稱見表1， 純度≥96%。

表1 15 種有機(jī)磷類農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品名稱、 溶劑、 組別及保留時間

（二） 試驗方法

1.樣品制備。 稱取2 g 試樣 （精確至0.01 g）于120 mL 聚乙烯離心管中， 加入30 mL 水渦旋混勻， 靜置30 min。 加入50.0 mL 乙腈， 以15 000 r/min 勻漿2 min， 加入5～7 g 氯化鈉， 劇烈振蕩1 min， 以8 000 r/min 離心5 min。 從離心管中吸取10.00 mL 上清液于100 mL 燒杯中， 80℃水浴蒸發(fā)至近干， 取出燒杯， 待冷卻后加入2 mL 丙酮溶解殘留物， 溶液完全轉(zhuǎn)入15 mL 刻度試管中。 再用2 mL 丙酮沖洗燒杯， 溶液轉(zhuǎn)入上述同一刻度試管中， 并重復(fù)兩次。 將試管中溶液于50℃水浴條件下氮吹至小于2 mL， 丙酮定容至2.0 mL， 渦旋混勻， 過微孔濾膜， 移入兩個進(jìn)樣瓶各約1 mL， 待測定。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液配置。 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液： 按照性質(zhì)和保留時間將15 種有機(jī)磷類農(nóng)藥分為Ⅰ、 Ⅱ兩組。按照表1 中組別， 配制成2 組混合標(biāo)準(zhǔn)溶液， 使用前用丙酮稀釋成所需質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。 基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液： 取不含目標(biāo)農(nóng)藥的木耳樣品， 與待測樣品相同的步驟制備成空白木耳基質(zhì)溶液。 取1 mL 空白基質(zhì)溶液氮氣吹干， 用1 mL 所需質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液復(fù)溶， 過微孔濾膜。

3.儀器工作條件。 色譜柱： A 柱DB-1701 柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）； B 柱InertCap 1 柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm）。 進(jìn)樣口溫度： 220℃。檢測器溫度： 250℃。 色譜柱溫度： 150℃保持2 min； 以8℃/min 的速率升溫至250℃， 保持12 min。 載氣： 氮氣， 純度≥99.999%。 流速： A 柱1.6 mL/min， B 柱2.2 mL/min。 燃?xì)猓?氫氣， 純度≥99.999%， 流速62.5 mL/min。 助燃?xì)猓?空氣，流速為90 mL/min。 進(jìn)樣量： 1.0 μL。 進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣。 樣品溶液1 式2 份， 雙自動進(jìn)樣器同時進(jìn)樣。

4.色譜分析。 將基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和凈化后的試樣溶液依次注入色譜儀中進(jìn)行檢測， 以雙柱保留時間定性， 以A 柱獲得的目標(biāo)農(nóng)藥色譜峰面積與標(biāo)準(zhǔn)色譜峰面積比較定量。 Ⅰ、 Ⅱ兩組混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖分別見圖1、 圖2。

圖1 第I 組農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

圖2 第Ⅱ組農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

二、 結(jié)果與分析

（一） 線性關(guān)系試驗兩個變量之間存在的一次方函數(shù)關(guān)系即為線性關(guān)系， 通常用線性方程和相關(guān)系數(shù)表示。 用濃度為0、 0.05、 0.10、 0.50、1.00、 2.00 μg/mL 的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液制作各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)曲線， 以10 倍信噪比（S/N＝10） 確定各農(nóng)藥的方法定量限[12]， 結(jié)果見表2。

表2 15 種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程、 相關(guān)系數(shù)及方法定量限

由表2 可知， 15 種有機(jī)磷類農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程均為二元一次方程， 相關(guān)系數(shù)均大于0.99， 方法定量限在0.05～0.3 mg/kg 之間， 說明此方法在0～2.00 μg/mL 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液系列濃度范圍內(nèi)各農(nóng)藥線性關(guān)系良好， 方法靈敏度較高。

（二） 精密度試驗選取一個不含目標(biāo)農(nóng)藥的干木耳供試樣品， 設(shè)置定量限 （I 水平）、 0.8 mg/kg （II 水平）、 4.0 mg/kg （III 水平） 3 個濃度添加水平， 分別做6 次重復(fù)測定試驗， 并計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）， 結(jié)果見表3。

表3 精密度試驗結(jié)果 （n＝6）

由表3 可知， 15 種有機(jī)磷類農(nóng)藥在定量限 （I水平）、 0.8 mg/kg （II 水平）、 4.0 mg/kg （III 水平）3 個濃度添加水平下， 測定結(jié)果的RSD （n＝6） 在1.84%～10.97%之間， 均小于14%， 符合實驗室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差要求[13]， 說明此方法的精密度較好。

（三） 回收率試驗通常用回收率試驗驗證測量結(jié)果的準(zhǔn)確性。 選取一個不含目標(biāo)農(nóng)藥的干木耳供試樣品， 設(shè)置定量限 （低水平）、 0.8 mg/kg （中水平）、 4.0 mg/kg （高水平） 3 水平3 平行加標(biāo)回收試驗， 分別計算回收率， 結(jié)果見表4。

表4 回收率試驗結(jié)果 （n＝3）

由表4 可知， 干木耳中15 種有機(jī)磷類農(nóng)藥3個濃度添加水平的回收率均在72.0%～105.9%之間， 符合GB/T 27404-2008 《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測》[12]要求， 說明此方法的準(zhǔn)確性較好。

（四） 基質(zhì)效應(yīng)試驗基質(zhì)常常對分析物的分析過程有顯著的干擾， 并影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性，這些影響和干擾被稱為基質(zhì)效應(yīng) （Matrix effect，ME）[14～15]。 本研究用空白干木耳基質(zhì)溶液中添加0.80 μg/mL 濃度農(nóng)藥與純?nèi)軇┲型瑵舛绒r(nóng)藥測定結(jié)果的比值 （ME 值） 來定量分析各農(nóng)藥基質(zhì)效應(yīng)，結(jié)果見表5。

表5 15 種農(nóng)藥在干木耳基質(zhì)中的基質(zhì)效應(yīng)

由表5 可知， 氧樂果的ME 值為0.727＜0.85，其余14 種農(nóng)藥的ME 值在0.854～0.971 之間， 說明在干木耳基質(zhì)中， 氧樂果農(nóng)藥存在基質(zhì)負(fù)效應(yīng)，需要考慮基質(zhì)效應(yīng)的影響， 其余14 種農(nóng)藥基本無基質(zhì)效應(yīng)。

三、 結(jié)論

本研究建立了氣相色譜法測定干木耳中15 種有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留的分析方法。 結(jié)果顯示， 在基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為0～2.00 μg/mL 范圍內(nèi)， 各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好， 相關(guān)系數(shù)均大于0.99； 方法定量限在0.05～0.3 mg/kg 范圍內(nèi)， 方法靈敏度較高； 定量限、 0.80 mg/kg、 4.00 mg/kg 3 個濃度添加水平測定結(jié)果的RSD（n＝6）在1.84%～10.97%之間， 回收率在72.0%～105.9%之間， 結(jié)果的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性較好； 0.80 μg/mL 濃度水平下， 氧樂果的ME 值為0.727 （＜0.85）， 存在基質(zhì)負(fù)效應(yīng)， 很有必要考慮基質(zhì)效應(yīng)的影響。 通過方法學(xué)驗證表明， 本研究建立的測定方法科學(xué)， 靈敏度、 精密度和準(zhǔn)確性均較好， 同時兼具操作簡便、 成本低、 適用性廣等優(yōu)點， 是干木耳中有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留測定的有效方法。

本文引用格式： 曹秀榮， 聶淼， 徐盼， 等.干木耳中有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留氣相色譜測定方法研究 ［J］.農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與安全， 2023 （5）： 65-69.

CAO Xiurong， NIE miao， XU pan，et al.Study on gas chromatography method for the determination of organophosphorus pesticide residues in driedAuricularia［ J］.Quality and Safety of Agro-products，2023 （5）： 65-69.