河南省第七輪結(jié)核病分子診斷技術(shù)能力驗證結(jié)果分析

蘇茹月，常文靜，王少華，朱巖昆，鄭丹薇，孫國清

（河南省疾病預(yù)防控制中心,河南 鄭州 450016）

《2020 年世界衛(wèi)生組織結(jié)核病報告》[1]顯示2019年新發(fā)結(jié)核病患者996 萬，140 萬人死于結(jié)核病，結(jié)核病依然是嚴(yán)危害人民群眾健康的全球頭號傳染病殺手之一。為進(jìn)一步提高肺結(jié)核病原學(xué)陽性率，發(fā)現(xiàn)更多的結(jié)核病患者，除了提升傳統(tǒng)的實驗室結(jié)核病檢測技術(shù)，還需要不斷研發(fā)新的肺結(jié)核診斷技術(shù)和檢測方法。近年來我省及省外專家評估和應(yīng)用了多種結(jié)核病和耐藥結(jié)核病的分子檢測方法[2-7]，為規(guī)范各種新型結(jié)核病檢測技術(shù)，國家結(jié)核病參比實驗室組織開展第七輪全國分子診斷技術(shù)能力驗證，河南省疾控中心結(jié)核病參比實驗室根據(jù)要求組織省內(nèi)各級結(jié)核病實驗室開展分子診斷技術(shù)能力驗證?，F(xiàn)將全省第七輪結(jié)核病分子診斷技術(shù)能力驗證進(jìn)行分析，有助了解河南省結(jié)核病分子診斷能力情況。

1 材料和方法

1.1 受試實驗室范圍 河南省各級疾控機(jī)構(gòu)、結(jié)核病?？漆t(yī)院、定點醫(yī)療機(jī)構(gòu)和其他開展分子檢測機(jī)構(gòu)共130 家單位參與本次能力驗證測試工作。

1.2 測試項目 主要包括基因芯片、熔解曲線技術(shù)、半巢式實時熒光定量核酸擴(kuò)增（GeneXpert）和實時熒光核酸恒溫擴(kuò)增、交叉引物法、實時熒光定量PCR 等方法。

1.3 測試樣品 每套測試樣品含10 份人工痰樣本（經(jīng)過滅活處理），每個實驗室根據(jù)實際情況使用一套或多套測試樣品。測試樣品由國家結(jié)核病參比實驗室下發(fā)到河南省疾控中心結(jié)核病參比實驗室，再由河南省結(jié)核病參比實驗室下發(fā)到各市縣開展分子生物學(xué)檢測技術(shù)的實驗室。

1.4 統(tǒng)計分析 各測試單位將測試結(jié)果錄入EXCLE 數(shù)據(jù)庫，并將錄入數(shù)據(jù)和原始記錄報送到河南省結(jié)核病參比實驗室，省參比實驗室將數(shù)據(jù)匯總，核對后進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 參加單位級別和類型 根據(jù)參加單位級別分為省級單位4 家，市級單位21 家，縣級結(jié)核病實驗室105 家；根據(jù)參加單位類型分為疾控中心98家，獨立結(jié)防所13 家，?？漆t(yī)院7 家，定點醫(yī)院11 家，綜合醫(yī)院1 家。

2.2 技術(shù)使用情況 共使用GeneXpert、熔解曲線、實時恒溫?zé)晒鈹U(kuò)增、交叉引物法、實時熒光定量PCR、基因芯片6 種方法。開展1 種檢測技術(shù)的為125 家單位，其中105 家為縣級單位；二種檢測技術(shù)的為4 家市級單位；三種檢測技術(shù)的為1 家省級單位。

2.3 河南省第七輪分子能力驗證整體合格率情況全省共130 家單位參加第七輪分子檢測能力驗證，完成1 360 份質(zhì)控品測試，并上報測試結(jié)果，能力驗證合格率為92%（119/130），見表1。

表1 河南省第七輪分子診斷統(tǒng)計分析

2.4 省級和市級檢測情況 4 家省級單位，共檢測60 份樣品；21 家市級單位共檢測230 份樣品。所有檢測項目均通過測試，樣品檢測錯誤率為0，見表2。

表2 河南省第七輪分子診斷市級檢測情況分析

2.5 縣級檢測情況 縣級105 家實驗室進(jìn)行了能力驗證工作，見表3。

表3 河南省第七輪分子診斷縣級檢測情況分析

2.6 失控原因分析 11 個未通過測試的全為縣級單位實驗室，失控項目主要集中在恒溫?zé)晒鈹U(kuò)增方法，見表4。

表4 河南省第七輪分子診斷失控分析

3 討論

結(jié)核病分子診斷技術(shù)檢測在提高病原學(xué)陽性率，發(fā)現(xiàn)更多的結(jié)核病患者上具有很明顯的優(yōu)勢。河南省第七輪分子診斷能力驗證市級單位實驗室全部通過測試，其中市級使用GeneXpert 和熔解曲線方法最多。GeneXpert 是集核酸提取、擴(kuò)增、檢測一體化的同時并能檢測MTB 基因及利福平常見耐藥決定區(qū)域，檢測過程生物安全性較高，不易污染、操作簡單、檢測時長只需2 h，可用于除血液以外的各種臨床標(biāo)本的檢測[8-9]。熔解曲線法可以對利福平、異煙肼、鏈霉素、乙胺丁醇和氟喹諾酮常見耐藥決定區(qū)域的檢測，并輔助診斷MDR-TB 和XDR-TB[10-11]。交叉引物法和實時熒光定量PCR 法僅能用于診斷結(jié)核病，不能用于耐藥結(jié)核病的診斷。通過本輪數(shù)據(jù)分析對我省結(jié)核病分子診斷技術(shù)質(zhì)量控制工作具有重要指導(dǎo)和改進(jìn)意義，有效促進(jìn)我省結(jié)核病防治工作開展[13]。

本次能力驗證縣級使用恒溫?zé)晒鈹U(kuò)增和GeneXpert 最多，其次是交叉引物法，實時恒溫?zé)晒鈹U(kuò)增錯誤率較GeneXpert 高。雖然WHO 推薦使用GeneXpert，但由于GeneXpert 儀器昂貴、試劑成本和維護(hù)費(fèi)用較高在基層的使用受限，而恒溫?zé)晒鈹U(kuò)增也是一種結(jié)核分枝桿菌快速分子診斷技術(shù)方法，并且有研究表明恒溫?zé)晒夥ǖ臋z測敏感度顯著高于痰涂片和羅氏培養(yǎng)法[12]，檢測結(jié)果與羅氏培養(yǎng)法具有中等程度的一致性，因此恒溫?zé)晒鈹U(kuò)增法陽性率高、操作簡單、耗時短、準(zhǔn)確性好，適用于在基層實驗室推廣使用，對早期結(jié)核病的發(fā)現(xiàn)具有診斷價值，但是此方法不能用于耐藥結(jié)核病的診斷。

截止2020 年底，據(jù)河南省結(jié)核病參比實驗室數(shù)據(jù)統(tǒng)計核查，全省具備分子檢測診斷能力的地市級達(dá)到100%，縣級達(dá)到88%。但從本次分子診斷技術(shù)能力驗證來看，仍有一些問題亟須解決，如對于縣級儀器設(shè)備相對單一，分子檢測項目開展相對較少，對非結(jié)核分枝桿菌以及耐藥結(jié)核病的診斷比較困難以及縣級單位實驗室分子質(zhì)控存在不合格現(xiàn)象，因此縣級單位實驗室需進(jìn)一步加強(qiáng)自身能力和硬件建設(shè)，同時市級也要加大對縣級技術(shù)指導(dǎo)頻次，全省加強(qiáng)對各級結(jié)核病實驗室分子診斷能力的培訓(xùn)和質(zhì)量控制，以提高結(jié)核病病原學(xué)診斷的陽性率和正確診斷率。2021 年是“十四五”開局之年，為終結(jié)結(jié)核病的流行，分子檢測需要不斷的更新觀念和方法[14]，采取更加符合各地實際情況，更加適宜的技術(shù)進(jìn)行實驗室診斷。