松蘿提取物對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠HMGB1-RAGE自噬通路及關(guān)節(jié)炎性損傷的影響

謝良山　安陽　張軍　黃穎　潘曉藝　徐暉

【摘 要】目的：探討松蘿提取物對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎（CIA）大鼠高遷移率族蛋白B1（HMGB1）-晚期糖基化終產(chǎn)物受體（RAGE）自噬通路及關(guān)節(jié)炎性損傷的影響。方法：將54只大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組，模型對(duì)照組，松蘿提取物低、中、高劑量組和羥氯喹組，每組9只。除空白對(duì)照組外，其余組采用Ⅱ型膠原乳劑建立CIA模型。松蘿提取物低、中、高劑量組分別給予2 mg·kg-1·d-1、6 mg·kg-1·d-1、54 mg·kg-1·d-1松蘿提取物灌胃，羥氯喹組給予36 mg·kg-1·d-1羥氯喹灌胃，空白對(duì)照組及模型對(duì)照組則予以等量的生理鹽水灌胃。觀察各組大鼠關(guān)節(jié)炎評(píng)分、腫脹程度和滑膜病理的變化，采用ELISA檢測腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、HMGB1的含量，PCR、WB檢測蛋白HMGB1、RAGE、Beclin1、B淋巴細(xì)胞瘤-2基因（Bcl-2）、哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶點(diǎn)（mTOR）、p38絲裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）的蛋白濃度及表達(dá)情況。結(jié)果：模型大鼠出現(xiàn)關(guān)節(jié)腫脹、變形，活動(dòng)量減少，關(guān)節(jié)炎評(píng)分提示造模成功。經(jīng)松蘿提取物治療后，大鼠的關(guān)節(jié)腫脹減輕，活動(dòng)量增加，炎癥反應(yīng)減輕。與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組血清TNF-α、MMPs、VEGF、HMGB1含量均增高，且HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK蛋白表達(dá)量均上升，Beclin1蛋白表達(dá)量下降（P < 0.05）。與模型對(duì)照組比較，松蘿提取物中、高劑量組及羥氯喹組HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK、TNF-α、MMPs、VEGF含量均降低，Beclin1蛋白表達(dá)量上升（P < 0.05）；與羥氯喹組比較，松蘿提取物中、高劑量組抑制HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK表達(dá)，激活Beclin1的效果相當(dāng)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。結(jié)論：松蘿提取物能減輕CIA大鼠關(guān)節(jié)腫脹程度，降低血清TNF-α、MMPs、VEGF、HMGB1含量，抑制HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK蛋白的表達(dá)，提升Beclin1表達(dá)，增強(qiáng)細(xì)胞自噬，減少滑膜炎癥反應(yīng)。

【關(guān)鍵詞】 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎；松蘿提取物；HMGB1；RAGE；細(xì)胞自噬；炎性損傷；大鼠

Effects of Usnea Extract on HMGB1-RAGE Autophagy Pathway and Arthritis Induced Injury in Collagen Induced Arthritis Rats

XIE Liang-shan，AN Yang，ZHANG Jun，HUANG Ying，PAN Xiao-yi，XU Hui

【ABSTRACT】Objective：To investigate the effects of usnea extract on HMGB1-RAGE autophagy pathway and arthritis induced injury in collagen induced arthritis（CIA）rats.Methods：Fifty-four rats were randomly divided into a blank control group，a model control group，low，medium and high dose groups of usnea extract and an Hydroxychloroquine control group，with 9 rats in each group.Except the blank control group，the other groups used type Ⅱcollagen emulsion to establish CIA models.The low，middle and high dose groups were given 2 mg·kg-1·d-1，6 mg·kg-1·d-1 and 54 mg·kg-1·d-1 respectively by gavage，the Hydroxychloroquine group was given36 mg·kg-1·d-1 of Hydroxychloroquine by gavage，and the blank control group and the model control group were given the same amount of normal saline by gavage.Observe the changes in joint score，swelling degree measurement，and synovial pathology of rats in each group，and detect the content of TNF-α，MMPs，VEGF and HMGB1 by ELISA.The protein concentration and expression of HMGB1，RAGE，Beclin1，Bcl-2，mTOR，p38 MAPK were detected by PCR and WB.Results：The model rats showed joint swelling and deformation，reduced activity，and arthritis scores indicating successful modeling.After treatment with usnea extract，the joint swelling of rats decreased，the activity increased，and the inflammatory response decreased.Compared with the blank control group，the concentrations of TNF-α，MMPs，VEGF，HMGB1 increased，and the expression levels of HMGB1，RAGE，Bcl-2，mTOR，and p38 MAPK proteins increased，while the expression levels of Beclin1 protein decreased（P < 0.05）.Compared with the model control group，the content of HMGB1，RAGE，Bcl-2，mTOR，p38 MAPK，TNF-α，MMPs and VEGF in the middle and high dose groups and the Hydroxychloroquine group decreased，while the expression of Beclin1 protein increased（P < 0.05）.Compared with the Hydroxychloroquine group，the middle and high dose groups had similar effects in inhibiting the expression of HMGB1，RAGE，Bcl-2，mTOR，p38 MAPK and activating Beclin1，with no statistically significant difference（P > 0.05）.Conclusion：Usnea extract can reduce the degree of joint swelling and concentrations of TNF-α，MMPs，VEGF，and HMGB1 in CIA rats，inhibit the expression of HMGB1，RAGE，Bcl-2，mTOR，and p38 MAPK proteins，increase the expression of Beclin1，and enhance cell viability.

【Keywords】 rheumatoid arthritis;collagen induced arthritis;usnea extract;HMGB1;RAGE;cellular autophagy;inflammatory injury;rats

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種常見的以對(duì)稱性、侵蝕性關(guān)節(jié)炎為主癥的慢性自身免疫性疾病，以滑膜炎為典型病理特征，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形。研究發(fā)現(xiàn)，高遷移率族蛋白1（HMGB1）介導(dǎo)的細(xì)胞自噬與RA的疾病進(jìn)程密切相關(guān)，是RA關(guān)節(jié)滑膜炎癥反應(yīng)及關(guān)節(jié)破壞的關(guān)鍵因素［1］。晚期糖基化終產(chǎn)物受體（RAGE）是與HMGB1結(jié)合最具親和力的受體，兩者結(jié)合，可啟動(dòng)經(jīng)典的核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）信號(hào)通路，促進(jìn)炎癥因子釋放，誘發(fā)炎癥反應(yīng)，大量的炎癥又會(huì)引發(fā)機(jī)體HMGB1及其受體RAGE的表達(dá)增加，從而形成雙向反饋，導(dǎo)致炎癥持續(xù)。因此，通過阻斷HMGB1-RAGE通路可能是減輕炎癥反應(yīng)的重要手段。

侗族藥松蘿具有祛風(fēng)除濕、通絡(luò)止痛之功，松蘿有效成分松蘿酸具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抑制血管生成、減少炎性滲出等作用［2-3］。課題組前期研究顯示，松蘿制劑對(duì)RA具有良好療效［4］，能夠有效減輕膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎（CIA）模型大鼠關(guān)節(jié)腫脹，下調(diào)NF-κB相關(guān)蛋白的表達(dá)，降低滑膜炎癥反應(yīng)［5- 6］。本研究觀察松蘿提取物對(duì)CIA大鼠HMGB1-RAGE細(xì)胞自噬通路及關(guān)節(jié)炎性損傷的影響，現(xiàn)總結(jié)報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取SPF級(jí)5周齡Wistar雌性大鼠54只（由湖南省長沙市天勤生物技術(shù)有限公司提供），實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（湘）2019-0013，體質(zhì)量160～180 g，免檢合格。喂養(yǎng)環(huán)境室溫20～25 ℃，濕度70%，自由進(jìn)食、自由飲水，適應(yīng)環(huán)境1周后開始實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)ky2020035。本研究已通過貴州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理審查委員會(huì)審批。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品 松蘿提取物，其主要成分為松蘿酸（純度 > 98%）（Solarbio，批號(hào)IU0130）；羥氯喹（Solarbio，批號(hào)IH0720）。

1.3 試劑與儀器 全自動(dòng)酶標(biāo)儀（Thermo Scientific，型號(hào)Multiskan MK3）；PCR儀（東勝創(chuàng)新生物科技有限公司，型號(hào)EDC-810）；垂直電泳槽（北京六一儀器廠，型號(hào)DYCZ-40）；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（ABI，型號(hào)QuantStudio 6）；微量移液器（北京大龍公司，型號(hào)TopPette）；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司，型號(hào)DHG9203A）；Aquapro超級(jí)純水儀（艾科浦，型號(hào)AJY-0501）；紫外分析儀（北京君意東方電泳設(shè)備有限公司，型號(hào)JY02S）；水平電泳儀（北京君意東方電泳設(shè)備有限公司，型號(hào)JY300）；分光光度計(jì)（上海舜宇恒科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)752）。BCA蛋白濃度測定試劑盒（碧云天，批號(hào)P0010）；RIPA裂解液（碧云天，批號(hào)P0013B）；磷酸酶抑制劑（碧云天，批號(hào)S1873）。

2 方 法

2.1 CIA大鼠模型的構(gòu)建 將54只大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為空白對(duì)照組，模型對(duì)照組，松蘿提取物低、中、高劑量組和羥氯喹組，每組9只。除空白對(duì)照組外，其余組建立CIA模型，將Ⅱ型膠原蛋白溶于0.1 mol·L-1的冰醋酸中，配成1 mg·mL-1溶液，搖勻置于4 ℃冰箱過夜后，加入等體積的完全弗氏佐劑與之混合，充分混勻，乳化配制成Ⅱ型膠原乳劑，現(xiàn)配現(xiàn)用。分別于大鼠尾根部多點(diǎn)皮下注射配置好的膠原蛋白溶液0.1 mL致炎，復(fù)制穩(wěn)定的CIA大鼠模型［7］。

2.2 模型大鼠關(guān)節(jié)炎評(píng)分 末次注射后，觀察大鼠關(guān)節(jié)紅腫程度及范圍，對(duì)每只大鼠進(jìn)行關(guān)節(jié)炎癥評(píng)分。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0分，無紅腫、疼痛；1分，小趾關(guān)節(jié)紅斑或輕度腫脹；2分，趾關(guān)節(jié)、跖趾關(guān)節(jié)中度腫脹；3分，踝關(guān)節(jié)以下足爪重度腫脹；4分，跖趾關(guān)節(jié)至踝關(guān)節(jié)均腫脹。計(jì)算四肢關(guān)節(jié)的得分總和為該大鼠所得積分，> 4分為造模成功，最高為16分［8］。

2.3 給藥處理 松蘿提取物低、中、高劑量組分別給予2 mg·kg-1·d-1、6 mg·kg-1·d-1、54 mg·kg-1·d-1松蘿提取物灌胃。成人羥氯喹用量為400 mg·d-1，參照成人與動(dòng)物藥物劑量研究換算，其相對(duì)應(yīng)的換算系數(shù)為5.4，最終確定大鼠羥氯喹用藥量為36 mg·kg-1·d-1?？瞻讓?duì)照組及模型對(duì)照組則予以等量生理鹽水灌胃。治療28 d后進(jìn)行取材。

2.4 樣本采集 末次給藥后，以0.4 mL·（100 g）-1烏拉坦溶液進(jìn)行腹腔注射，麻醉后于股動(dòng)脈取血4～6 mL，靜置30 min后，置于離心機(jī)以3000 r·min-1離心15 min，離心半徑10 cm，制備血清。處死大鼠后，解剖大鼠膝關(guān)節(jié)分離滑膜組織，提取組織蛋白。再將左踝關(guān)節(jié)滑膜以體積分?jǐn)?shù)為10%的福爾馬林液固定，用于病理切片分析。

2.5 觀察指標(biāo)

2.5.1 ELISA檢測血清致炎因子 按照ELISA試劑盒說明書，檢測血清致炎因子腫瘤壞死因子-α（TNF-α）以及細(xì)胞上清液中HMGB1、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）水平。按照試劑盒說明書，分別加樣，37 ℃溫育1 h，棄去液體，洗板3次；每孔加入酶標(biāo)試劑，同等反應(yīng)條件再洗板5 次；每孔加顯色劑，酶標(biāo)板加上覆膜37 ℃避光孵育15 min；最后加入終止液，立即用酶標(biāo)儀測量各孔的光密度，反復(fù)3次，取平均值。

2.5.2 關(guān)節(jié)滑膜組織中HMGB1、RAGE、Beclin1、B淋巴細(xì)胞瘤-2基因（Bcl-2）、哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶點(diǎn)（mTOR）、p38絲裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）蛋白濃度檢測 采用Western Blot法檢測，將組織細(xì)胞加入裂解液裂解，在自動(dòng)勻漿機(jī)中勻漿完成后，置于冰上充分裂解。裂解30 min后，在4 ℃條件下離心機(jī)以12 000 r·min-1離心5 min，離心半徑6 cm，取上清并置于-20 ℃保存。將蛋白樣品以BSA為標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行稀釋，稀釋后每孔加入20 μg蛋白樣品，SDS-PAGE電泳分離1.5 h后，準(zhǔn)備PVDF膜和濾紙后開始轉(zhuǎn)膜。用封閉液室溫?fù)u床封閉2 h，并用封閉液稀釋相應(yīng)的一抗。洗膜后，用TBST稀釋相應(yīng)的HRP標(biāo)記二抗。反復(fù)洗膜5次后，放入顯影液顯影、定影液定影，用Western blot印跡觀察，圖像分析測定各帶吸光度（A）值做定量分析。

2.5.3 關(guān)節(jié)滑膜組織中HMGB1、RAGE、Beclin1、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK mRNA表達(dá)檢測 采用RT-PCR法檢測HMGB1、RAGE、Beclin1、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK mRNA表達(dá)量。提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，反應(yīng)條件為50 ℃ 2 min，95 ℃10 min，95 ℃ 30 s，60 ℃30 s，40個(gè)循環(huán)。引物序列見表1，每個(gè)樣本3個(gè)副孔，重復(fù)3次。

2.5.4 透射電鏡觀察細(xì)胞自噬 待觀察組織經(jīng)固定、離心、洗滌、再固定、脫水、浸泡、包埋、修塊、定位、切片、染色，然后在電鏡下觀察細(xì)胞自噬小體和自噬泡的形成。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 26.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料符合正態(tài)分布以表示，多組間比較采用單因素方差分析。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 松蘿提取物對(duì)CIA大鼠血清中HMGB1、TNF-α、MMPs和VEGF含量的影響 與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組HMGB1、TNF-α、MMPs和VEGF含量增高（P < 0.05）；與模型對(duì)照組比較，松蘿提取物低、中、高劑量組及羥氯喹組HMGB1、TNF-α、MMPs、VEGF含量均降低（P < 0.05）；與羥氯喹組比較，松蘿提取物中、高劑量組降低HMGB1、TNF-α、MMPs、VEGF含量效果相當(dāng)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表2。

3.2 松蘿提取物對(duì)CIA大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織中HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK、Beclin1 mRNA表達(dá)的影響 與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組，松蘿提取物低、中、高劑量組及羥氯喹組HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK均增加，Beclin1下降（P < 0.05）；與模型對(duì)照組比較，松蘿提取物中、高劑量組及羥氯喹組均能激活Beclin1蛋白自噬，抑制HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK表達(dá)（P < 0.05）；與羥氯喹組比較，松蘿提取物中、高劑量組抑制HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK表達(dá)，激活Beclin1的效果相當(dāng)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表3。

3.3 松蘿提取物對(duì)CIA大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織中HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK、Beclin1蛋白表達(dá)的影響 與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組，松蘿提取物低、中、高劑量組及羥氯喹組滑膜組織中HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK蛋白相對(duì)表達(dá)量水平增高，Beclin1相對(duì)下降（P < 0.05）。與模型對(duì)照組比較，松蘿提取物中、高劑量組及羥氯喹組HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR及p38 MAPK蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著下降，Beclin1增加（P < 0.05）。與羥氯喹組比較，松蘿提取物中、高劑量組抑制HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK表達(dá)，激活Beclin1的效果相當(dāng)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表4。

3.4 松蘿提取物對(duì)滑膜組織中細(xì)胞自噬病理變化的影響 空白對(duì)照組與模型對(duì)照組細(xì)胞中線粒體結(jié)構(gòu)完整，有少量自噬體形成，維持正常細(xì)胞代謝需求；與空白對(duì)照組比較，松蘿提取物中、高劑量組和羥氯喹組可見自噬小體數(shù)量增加，松蘿提取物低劑量組自噬小體數(shù)量未見明顯改變，松蘿提取物中、高劑量組與羥氯喹組自噬小體數(shù)量明顯增加，而炎癥因子減少，細(xì)胞凋亡增加，提示松蘿提取物可能通過調(diào)控細(xì)胞自噬達(dá)到抑制滑膜細(xì)胞炎癥反應(yīng)的作用。見圖1。

4 討 論

RA是一種病因未明的慢性炎性疾病，血管翳是關(guān)節(jié)炎性損害的病理基礎(chǔ)。因CIA大鼠的癥狀表現(xiàn)與RA的表現(xiàn)相似，是研究RA的理想模型，故本文以CIA大鼠作為研究對(duì)象。研究發(fā)現(xiàn)，HMGB1作為一種炎癥因子，與健康人相比，在RA患者關(guān)節(jié)滑膜及血清中的表達(dá)明顯增高［9］，說明HMGB1可能與疾病的發(fā)生有關(guān)。RAGE作為一種免疫球蛋白，是HMGB1最具親和力的受體。HMGB1通過與RAGE結(jié)合后，RAGE依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制被激活，RAGE表達(dá)量增加，促使MAPK磷酸化、NF-κB向核內(nèi)轉(zhuǎn)移，抑制哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白C1（mTOR C1）的磷酸化，調(diào)節(jié)自噬的啟動(dòng)［10］，并通過激活胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK），使Beclin1磷酸化，推動(dòng)Beclin1與Bcl-2分離，調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬的水平［11］。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明，在自噬刺激因素作用下，細(xì)胞核內(nèi)HMGB1轉(zhuǎn)移至細(xì)胞質(zhì)直接與自噬因子Beclin1結(jié)合［12］，將Beclin1從凋亡抑制因子Bcl-2中分離［13］，激活自噬，最終導(dǎo)致炎癥持續(xù)。另外，HMGB1介導(dǎo)的自噬通路還可導(dǎo)致關(guān)節(jié)的破壞。研究證明，在動(dòng)物關(guān)節(jié)中單獨(dú)注入HMGB1可誘導(dǎo)出類似于RA的關(guān)節(jié)炎破壞［14-17］，在關(guān)節(jié)炎模型動(dòng)物中注入HMGB1抑制劑，可以控制炎癥反應(yīng)，使關(guān)節(jié)損傷的病情得以緩解［14］。當(dāng)HMGB1與RAGE受體結(jié)合后，上調(diào)RAGE，啟動(dòng)經(jīng)典的NF-κB炎癥信號(hào)通路，釋放TNF-α、MMPs等炎性因子，促進(jìn)炎性細(xì)胞因子、趨化因子的產(chǎn)生，加重關(guān)節(jié)的損傷［17-19］。大量的促炎因子通過聚集于關(guān)節(jié)進(jìn)一步促進(jìn)HMGB1的分泌，形成正反饋環(huán)［20］。同時(shí)刺激VEGF、NF-κB等蛋白，HMGB1通過作用于p38 MAPK和NF-κB通路上調(diào)RAGE的表達(dá)，同時(shí)刺激VEGF的活化與增加，引起血管翳的形成，促使滑膜的異常增生及軟骨破壞，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)破壞、受損［21］。

本研究結(jié)果顯示，CIA模型大鼠均表現(xiàn)出相應(yīng)的關(guān)節(jié)炎癥癥狀，血清中TNF-α、MMPs、VEGF、HMGB1含量明顯上升，HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK蛋白表達(dá)量均上升，Beclin1蛋白表達(dá)量下降，關(guān)節(jié)表現(xiàn)出明顯炎癥癥狀。通過松蘿提取物、羥氯喹干預(yù)治療后，CIA大鼠癥狀緩解，顯著降低滑膜炎癥反應(yīng)，減少關(guān)節(jié)的腫脹，增加運(yùn)動(dòng)量，降低HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR及p38 MAPK mRNA的表達(dá)量，促使Beclin1表達(dá)升高，同時(shí)血清中TNF-α、MMPs、VEGF水平明顯下調(diào)，減輕關(guān)節(jié)炎癥癥狀，阻斷HMGB1-RAGE自噬通路，達(dá)到控制炎癥及保護(hù)關(guān)節(jié)的目的。實(shí)驗(yàn)提示炎癥時(shí)自噬是抑制狀態(tài)，表明松蘿提取物和羥氯喹對(duì)促進(jìn)細(xì)胞自噬具有相同的作用。課題組在前期的臨床和預(yù)實(shí)驗(yàn)研究中已證實(shí)松蘿有效成分可以減少炎性細(xì)胞因子的分泌與釋放，抑制滑膜的增生，改善RA患者的臨床癥狀和體征，降低炎癥指標(biāo)，有效控制關(guān)節(jié)滑膜炎癥。由此推測，松蘿提取物可通過阻斷HMGB1-RAGE自噬通路治療CIA大鼠，控制炎癥反應(yīng)，防止炎性損傷導(dǎo)致的骨破壞。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)通過構(gòu)建CIA大鼠模型，證明松蘿提取物通過抑制細(xì)胞自噬通路對(duì)其具有良好的治療效果，明顯改善了CIA大鼠癥狀以及滑膜組織中炎性細(xì)胞的浸潤，作用機(jī)制可能與其阻斷HMGB1-RAGE自噬通路從而減少促炎因子產(chǎn)生有關(guān)，該實(shí)驗(yàn)研究將為臨床治療RA提供理論研究基礎(chǔ)。因其研究的方面略有不足，所以還有待于更進(jìn)一步的研究。

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收稿日期：2023-05-16；修回日期：2023-06-27