鐵皮石斛低聚糖分離純化及其益生活性

丁凱莉,魏明,吳萍香,聶風(fēng),錢森和,趙世光

(安徽工程大學(xué) 生物與食品工程學(xué)院,安徽 蕪湖,241000)

低聚糖是一種新型功能性糖源,已廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、飼料添加劑等領(lǐng)域[1-2]。研究表明,功能性低聚糖具有抗氧化、降血脂、降血糖和促進(jìn)腸道益生菌增殖等功效[3-4],在預(yù)防便秘、結(jié)腸癌、肥胖、糖尿病、調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)等方面具有積極作用[5-6]。低聚糖不能被人體直接消化利用,但是可以通過腸道菌的發(fā)酵產(chǎn)生有機(jī)酸,維持腸道內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,對人體健康至關(guān)重要。

短鏈脂肪酸(short chain fatty acids,SCFAs)是腸道菌群代謝的有機(jī)酸,膳食纖維、抗性淀粉和低聚糖是微生物發(fā)酵產(chǎn)短鏈脂肪酸的主要底物。短鏈脂肪酸可以調(diào)節(jié)腸道的酸堿平衡,抑制腸道內(nèi)病原菌的繁殖,維持腸道微生態(tài)平衡[7-8]。此外,短鏈脂肪酸能為結(jié)腸細(xì)胞提供能量,作為信號(hào)分子調(diào)控人體的不同生物過程[9-10]。短鏈脂肪酸進(jìn)入肝臟后可以參與膽固醇合成的調(diào)控,降低人體血液中的膽固醇,在維持人體健康方面發(fā)揮了重要作用[11-12]。大量研究顯示,低聚糖和膳食纖維能夠促進(jìn)腸道益生菌增殖,調(diào)節(jié)腸道pH。酸解米糠和木薯漿得到的低聚糖能促進(jìn)乳酸桿菌、雙歧桿菌、擬桿菌的增殖[13]。大豆膳食纖維可以促進(jìn)腸道菌產(chǎn)生乙酸[14]。山藥低聚糖能促進(jìn)植物乳桿菌產(chǎn)生乳酸,而對保加利亞乳桿菌產(chǎn)生乙酸有促進(jìn)作用[15]。從靈芝孢子粉中提取的兩種低聚糖均能被腸道微生物利用,促進(jìn)短鏈脂肪酸的積累[16]。短鏈脂肪酸的形成受益生元的種類和菌群結(jié)構(gòu)的影響,研究特定的低聚糖對益生菌短鏈脂肪酸代謝的影響,可以反映菌群的活性。

鐵皮石斛屬于蘭科石斛屬植物,為名貴中藥材,多糖是其主要活性成分[17]。渠婷等[18]從金釵石斛中分離出一個(gè)低聚糖純品,能顯著提高乳桿菌增殖和對環(huán)境的耐受性。WONG等[19]采用酶解的方法從鐵皮石斛多糖制備了低聚糖,并對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析。這些研究表明鐵皮石斛中可能存在低聚糖。本研究通過鐵皮石斛低聚糖的分離純化,探討其對益生菌增殖和有機(jī)酸代謝的影響,明確鐵皮石斛低聚糖的益生功能。低聚糖是石斛多糖提取時(shí)的副產(chǎn)物,結(jié)果為石斛低聚糖的開發(fā)和利用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

新鮮鐵皮石斛購于安徽省霍山縣;嗜酸乳桿菌 (Lactobacillusacidophilus) CICC6075、干酪乳桿菌 (Lactobacilluscasei) CICC20995,中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心;兩歧雙歧桿菌 (Bifidobacteriumbifidum) CCFM16,江南大學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)室;腸道菌來自小鼠糞便;Sephadex G-10、DEAE-52纖維素,各種分子質(zhì)量的右旋糖苷,北京瑞達(dá)恒輝科技發(fā)展有限公司;甘露糖、核糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、巖藻糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸,分析純,美國Sigma公司;乳酸、乙酸、丙酸、丁酸、磷酸二氫鉀、甲醇、三氟乙酸(均為色譜純)、低聚果糖(分析純),北京索萊寶科技有限公司;其他試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器,上海亞榮生化儀器廠;SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵,鄭州長城科工貿(mào)有限公司;YQX-2厭氧培養(yǎng)箱,上海新苗器械制造有限公司;JK-JH01超凈臺(tái),安徽杰克歐德實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司;Imark酶標(biāo)儀,美國伯樂有限公司;JY-1002電子天平,上海良平天平廠;THZ-98AB搖床,上海一恒科學(xué)儀器有限公司;LC-20A高效液相色譜儀,日本島津公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 鐵皮石斛低聚糖的提取

將新鮮的鐵皮石斛烘干粉碎后過60目篩,按料液比1：50(g：mL)加入蒸餾水,60 ℃水浴浸提3 h,然后離心取上清液濃縮,加入無水乙醇至體系乙醇體積分?jǐn)?shù)達(dá)80%,4 ℃靜置24 h沉淀多糖,離心后取上清液,采用活性炭脫色、Sevage法脫蛋白,進(jìn)行初步的分離純化,濃縮后進(jìn)行真空冷凍干燥得粗低聚糖。

1.3.2 鐵皮石斛低聚糖的純化

1.3.2.1 DEAE-52陰離子纖維素純化鐵皮石斛低聚糖

利用DEAE-52陰離子纖維素色譜柱分離低聚糖,色譜柱規(guī)格16 mm×500 mm,上樣量為4 mL,上樣質(zhì)量濃度為10 g/L,用不同濃度NaCl溶液(pH 7.0)洗脫,流速為 2 mL/min,每隔5 min收集1管,采用苯酚-硫酸法[20]檢測低聚糖,以低聚糖質(zhì)量濃度(g/L)為縱坐標(biāo),洗脫管數(shù)為橫坐標(biāo)作洗脫曲線圖。

1.3.2.2 Sephadex G-10葡聚糖凝膠純化鐵皮石斛低聚糖

利用Sephadex G-10葡聚糖凝膠柱對DEAE-52陰離子纖維素分離后的低聚糖進(jìn)行二次分離純化,色譜柱規(guī)格16 mm×500 mm,上樣量為4 mL,上樣質(zhì)量濃度為10 g/L,用蒸餾水洗脫,流速為0.5 mL/min,每隔10 min收集1管,苯酚-硫酸法檢測低聚糖,以低聚糖質(zhì)量濃度(g/L)為縱坐標(biāo),洗脫管數(shù)為橫坐標(biāo)作洗脫曲線圖。

1.3.3 鐵皮石斛低聚糖分子質(zhì)量測定

利用凝膠滲透色譜法測定低聚糖的相對分子質(zhì)量,取10 mg樣品,配制成10 g/L溶液,用0.22 μm濾膜過濾后備用。

色譜條件:P230型GPC-凝膠滲透色譜系統(tǒng),色譜柱 Pl aquagel-OH MIXED(7.5 mm×300 mm),進(jìn)樣流速1.0 mL/min,柱溫40 ℃,流動(dòng)相0.1 mol/L NaNO3,標(biāo)準(zhǔn)樣品:不同相對分子質(zhì)量的右旋糖苷。

1.3.4 鐵皮石斛低聚糖單糖組成測定

精密稱取樣品1 mg至10 mL安培瓶中,加入3.0 mL、2 mol/L 三氟乙酸,然后定容10 mL,充氮,封管,120 ℃酸解4 h,取出加入甲醇氮吹干三氟乙酸,加3.0 mL水復(fù)溶備用。

檢測條件:色譜柱Xtimate C18 (4.6 mm×200 mm, 5 μm);柱溫30 ℃;流速1.0 mL/min。檢測波長250 nm;進(jìn)樣量20 μL;流動(dòng)相V(0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液)：V(乙腈)=83：17。

1.3.5 鐵皮石斛低聚糖體外模擬消化

參考王如月[21]的方法配制胃與小腸消化液,將鐵皮石斛低聚糖溶于20 mL胃液中至糖終質(zhì)量濃度為2 g/L,同時(shí)取等體積的胃液做空白對照,于37 ℃,90 r/min保溫,在0、2、4、6 h后,分別取出1.0 mL樣品,在水中煮沸10 min以滅酶,最后用1.0 mol/L NaHCO3溶液中和。

將10 mL上述反應(yīng)6 h后的胃液(模擬胃消化6 h 后的溶液用1.0 mol/L NaHCO3中和)與3 mL模擬小腸液混合,此為A組,B組為3 mL蒸餾水與10 mL胃消化液,C組為10 mL蒸餾水與3 mL小腸液,于37 ℃、120 r/min保溫,在0、2、4、6 h后,分別取出1.0 mL 樣品,在水中煮沸10 min以滅酶,最后用1.0 mol/L NaHCO3溶液中和。

1.3.6 鐵皮石斛低聚糖對菌體生長的影響

乳酸菌菌種活化:在無菌操作條件下,從乳酸菌凍存管中吸取400 μL接種到MRS培養(yǎng)基中活化,活化處理12 h,活化處理3次后用于接種。

兩歧桿菌菌種活化:在無菌無氧操作條件下,從凍存管中吸取400 μL接種到MRS培養(yǎng)基中培養(yǎng)24 h,活化處理3次后用于接種。

腸道菌獲得:新鮮的小鼠糞便從皖南醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心獲得,以無菌糞便收集盒收集小鼠糞便,立即用無菌磷酸鹽緩沖液(PBS,0.1 mol/L)轉(zhuǎn)移至厭氧操作箱內(nèi)。小鼠糞便與PBS緩沖液以1：20(g：mL)比例配制。經(jīng)渦旋振蕩器充分混勻后,以5層無菌紗布過濾得到糞便勻漿用于接種[22]。

以添加5 g/L鐵皮石斛低聚糖為唯一碳源代替培養(yǎng)基中的葡萄糖,以葡萄糖(陰性)、低聚果糖(陽性)為對照,每瓶分裝30 mL培養(yǎng)基,分別接種嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、兩歧雙歧桿菌和腸道菌,接種量為5%(體積分?jǐn)?shù)),置于厭氧工作站37 ℃下恒溫培養(yǎng)。在(0、4、8、12、24、36、48 h)取出發(fā)酵液,采用平板計(jì)數(shù)法,測定培養(yǎng)基中活菌數(shù),比較不同碳源對菌體增殖的影響。

1.3.7 發(fā)酵液pH測定

取不同培養(yǎng)階段的發(fā)酵液(0、4、8、12、24、36、48 h),用精密pH計(jì)進(jìn)行pH測定。

1.3.8 發(fā)酵液中殘?zhí)堑臏y定

取不同時(shí)間點(diǎn)的發(fā)酵液,用苯酚-硫酸法測定發(fā)酵液中殘?zhí)呛俊?/p>

1.3.9 發(fā)酵液中有機(jī)酸的測定

利用高效液相色譜測定有機(jī)酸的含量,色譜條件:Supersil AQ-C18(2.6 mm×150 mm,5 μm);流動(dòng)相A:濃度為0.05 mol/L 磷酸二氫鉀(磷酸調(diào)節(jié)其pH為2.8±0.02);流動(dòng)相B:甲醇;檢測波長210 nm;流速1.0 mL/min;柱溫40 ℃;進(jìn)樣量10 μL;洗脫程序:[0～7 minV(A)：V(B)=95：5,7～25 minV(A)：V(B)=85：15]。

取乳酸、乙酸、丙酸和丁酸4種標(biāo)準(zhǔn)品各10.00 mg,以雙蒸水定容至10.00 mL,配制成標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別取各標(biāo)準(zhǔn)溶液50、100、200、400、800 μL,以雙蒸水定容至1.00 mL,配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。以標(biāo)準(zhǔn)有機(jī)酸濃度為橫坐標(biāo),相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到線性回歸方程。乳酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y1=518 386X+610.0,R2=0.999 8;乙酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y2=289 046X+1 527.1,R2=0.999 9;丙酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y3=335 849X-2 578.8,R2=0.999 5;丁酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y4=331 719X+1 269.0,R2=0.999 5。

取各個(gè)時(shí)間段發(fā)酵液1 mL于4 ℃下離心(10 000 r/min,5 min),取其上清液經(jīng)0.22 μm濾膜過濾后,使用高效液相色譜法進(jìn)行測定,樣品中待測組分用保留時(shí)間和峰高增量法定性,標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。

1.3.10 發(fā)酵過程中小鼠腸道特定菌群數(shù)量測定

參考鄭志昌等[23]的研究方法,按說明書要求分別配制雙歧桿菌、乳桿菌、擬桿菌和大腸桿菌檢測培養(yǎng)基,于121 ℃滅菌30 min備用。取不同時(shí)間點(diǎn)的發(fā)酵液,并用無菌生理鹽水進(jìn)行梯度稀釋,取合適稀釋度的菌液200 μL均勻涂布在不同的培養(yǎng)基中,然后將平板置于厭氧工作站37 ℃恒溫培養(yǎng)48 h,每個(gè)樣本做3個(gè)平行試驗(yàn)。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)結(jié)果采用平均值附加標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示;運(yùn)用SPSS 26軟件,采用方差分析(ANOVA)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析;各處理組間的差異比較用最小顯著差別(least significant difference,LSD)法,P<0.05數(shù)據(jù)差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 鐵皮石斛低聚糖的純化

2.1.1 DEAE-52陰離子纖維素分離純化鐵皮石斛低聚糖

利用DEAE-52陰離子纖維素交換柱對鐵皮石斛粗低聚糖進(jìn)行純化,結(jié)果如圖1-a所示,用蒸餾水和不同濃度梯度的NaCl溶液洗脫得到3個(gè)組分,分別為DOO-1,DOO-2和DOO-3,其中DOO-1為中性糖,其含量為83.25%,DOO-2和DOO-3為酸性糖,含量分別為6.65%和10.08%。由于DOO-1含量很高,DOO-2和DOO-3含量很低,故后續(xù)實(shí)驗(yàn)選用DOO1組分進(jìn)行分離純化。

a-DEAE-52陰離子纖維素;b-Sephadex G-10圖1 鐵皮石斛低聚糖洗脫曲線Fig.1 Elution profile of Dendrobium officinale oligosaccharides on DEAE-52 cellulose and Sephadex G-10 column

2.1.2 Sephadex G-10葡聚糖凝膠分離純化鐵皮石斛低聚糖

利用 Sephadex G-10葡聚糖凝膠柱對DOO-1組分進(jìn)一步分離純化,結(jié)果如圖1-b所示,葡聚糖凝膠洗脫出4個(gè)組分,分別為DOO1-1(81.37%)、DOO1-2(5.40%)、DOO1-3(3.79%)、DOO1-4(9.43%),由于DOO1-1組分含量最高,其余組分含量很低,故合并收集DOO1-1組分進(jìn)行后續(xù)研究。

2.2 鐵皮石斛低聚糖相對分子質(zhì)量及其單糖組成

由圖2可知,鐵皮石斛低聚糖DOO1-1組分均一性良好,峰形單一且對稱。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到其相對分子質(zhì)量為2 270 Da,說明DOO1-1為低聚糖。由圖3-b可知,鐵皮石斛低聚糖DOO1-1主要是由葡萄糖(65.0%)、甘露糖(28.0%)構(gòu)成,還含有少量葡萄糖醛酸(2.6%)、半乳糖(3.1%)、阿拉伯糖(1.4%)。其百分摩爾比葡萄糖：甘露糖：葡萄糖醛酸：半乳糖：阿拉伯糖為1.00：0.43：0.04：0.05：0.02。

圖2 低聚糖DOO1-1的相對分子質(zhì)量Fig.2 The relative molecular mass of oligosaccharide DOO1-1

2.3 鐵皮石斛低聚糖體外模擬消化

利用模擬胃腸液對鐵皮石斛低聚糖DOO1-1降解的影響,模擬胃腸液中總糖和還原糖變化情況如表1所示。經(jīng)過模擬胃和腸液消化6 h后,鐵皮石斛低聚糖DOO1-1的總糖和還原糖含量均沒有明顯變化。說明鐵皮石斛低聚糖DOO1-1能夠抵抗人體胃腸環(huán)境的消化,初步認(rèn)為其符合益生元的標(biāo)準(zhǔn)。

表1 DOO1-1在模擬胃腸液中的水解情況Table 1 Hydrolysis of DOO1-1 in simulated gastrointestinal fluid

2.4 鐵皮石斛低聚糖對菌體生長的影響

圖4表示嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、兩歧雙歧桿菌和腸道菌在不同碳源培養(yǎng)基中的生長狀況。由圖4可知,隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長,葡萄糖組、低聚果糖組和鐵皮石斛低聚糖組菌體數(shù)量均隨著時(shí)間的延長而增加。與鐵皮石斛低聚糖和低聚果糖相比,前4 h葡萄糖組各種菌體生長速率較高,可能是因?yàn)槠咸烟菫閱翁?更容易被菌體利用,而低聚糖需要被降解成單糖后才能利用。在4～24 h,鐵皮石斛低聚糖與低聚果糖組菌體數(shù)量顯著升高;24～48 h,菌體數(shù)量幾乎沒有增加,菌體代謝緩慢,可能是營養(yǎng)物質(zhì)耗盡,菌體生長進(jìn)入穩(wěn)定期。不同低聚糖益生特性不同[23],鐵皮石斛低聚糖DOO1-1對干酪乳桿菌、嗜酸乳桿菌、兩歧雙歧桿菌和腸道菌均具有促生作用,其效果好于低聚果糖,這表明鐵皮石斛低聚糖DOO1-1具有良好的益生活性,是一種極具開發(fā)潛能的益生元。

a-干酪乳桿菌;b-嗜酸乳桿菌;c-兩歧雙歧桿菌;d-腸道菌圖4 鐵皮石斛低聚糖DOO1-1對益生菌生長的影響Fig.4 Effect of oligosaccharide DOO1-1 from Dendrobium officinale on the growth of probiotics

2.5 發(fā)酵液pH的變化

圖5表示嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、兩歧雙歧桿菌和腸道菌在不同碳源培養(yǎng)基中pH變化。由圖5可知,隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長,發(fā)酵液的pH逐漸降低,24 h之前pH變化較大,說明菌體生長較快,24～48 h發(fā)酵液pH較為穩(wěn)定。在菌體培養(yǎng)過程中,以鐵皮石斛低聚糖為碳源的發(fā)酵液pH均低于以低聚果糖為碳源的發(fā)酵液的pH。pH變化反映了菌體對碳源的利用和產(chǎn)酸能力[24]。鐵皮石斛低聚糖能促進(jìn)各種菌體的生長和有機(jī)酸的代謝,降低發(fā)酵液的pH,其效果好于低聚果糖。

a-干酪乳桿菌;b-嗜酸乳桿菌;c-兩歧雙歧桿菌;d-腸道菌群圖5 不同碳源發(fā)酵液中pH變化Fig.5 Changes of pH in fermentation broth with different carbon sources

2.6 發(fā)酵液中殘?zhí)亲兓?/h3>

圖6表示嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、兩歧雙歧桿菌和腸道菌在不同碳源培養(yǎng)基中殘?zhí)呛孔兓?。由圖6可知,隨著發(fā)酵時(shí)間的增加,葡萄糖組、低聚果糖組、鐵皮石斛低聚糖組的殘?zhí)呛烤S發(fā)酵時(shí)間的延長而逐漸降低,說明它們都能被各種菌體利用,但兩歧雙歧桿菌對碳源利用速度慢一點(diǎn)。培養(yǎng)48 h后,在腸道菌培養(yǎng)基中的殘?zhí)呛孔畹?各種菌體對鐵皮石斛低聚糖利用率高于低聚果糖,表明鐵皮石斛低聚糖比低聚果糖益生效果好。這可能與糖的聚合度、單糖組成、鏈連接方式等因素有關(guān)[22]。

a-干酪乳桿菌;b-嗜酸乳桿菌;c-兩歧雙歧桿菌;d-腸道菌群圖6 在不同碳源發(fā)酵液中殘?zhí)呛孔兓疐ig.6 Changes of residual sugar in fermentation broth with different carbon sources

2.7 菌體發(fā)酵鐵皮石斛低聚糖產(chǎn)酸分析

圖7表示鐵皮石斛低聚糖DOO1-1對干酪乳桿菌、嗜酸乳桿菌、兩歧雙歧桿菌和腸道菌產(chǎn)有機(jī)酸的影響。由圖7可知,各種菌體都能利用鐵皮石斛低聚糖DOO1-1發(fā)酵產(chǎn)生乳酸、乙酸、丙酸和丁酸,且它們的含量均隨發(fā)酵時(shí)間延長而增加。DOO1-1能促進(jìn)乳酸和乙酸的積累,但產(chǎn)丙酸和丁酸能力較差。在各種菌體中,干酪乳桿菌產(chǎn)酸能力最好,隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長,部分短鏈脂肪酸能被腸道菌利用,導(dǎo)致含量有所降低。

圖7 低聚糖DOO1-1對益生菌發(fā)酵產(chǎn)短鏈脂肪酸的影響Fig.7 Effect of oligosaccharides DOO1-1 on the production of short chain fatty acids by probiotics注:不同小寫字母表示差異顯著。

短鏈脂肪酸是腸道微生物利用難消化的碳水化合物的代謝產(chǎn)物,在降低腸道pH,調(diào)控腸道菌群結(jié)構(gòu)和免疫調(diào)節(jié)等方面起著重要作用[21]。此外,短鏈脂肪酸可以被宿主利用,被認(rèn)為是宿主腸道的重要能量來源。因此,可推測鐵皮石斛低聚糖促進(jìn)短鏈脂肪酸的積累可能對機(jī)體表現(xiàn)出一定的益生作用。

2.8 不同碳源發(fā)酵過程中小鼠腸道特定菌群數(shù)量的變化

與葡萄糖相比,鐵皮石斛低聚糖DOO1-1與低聚果糖顯著增加了腸道菌群中雙歧桿菌和乳桿菌的豐度(P<0.05),同時(shí)了降低了大腸桿菌和擬桿菌的豐度(P<0.05)(表2)。鐵皮石斛低聚糖DOO1-1的效果好于低聚果糖,這表明鐵皮石斛低聚糖DOO1-1具有良好的調(diào)節(jié)腸道菌群的功能。

表2 不同碳源發(fā)酵過程中小鼠腸道特定菌群數(shù)量的變化Table 2 Changes of the number of special intestinal flora in mice in different carbon source during fermentation

3 結(jié)論

經(jīng)水提和乙醇沉淀去除多糖,得到鐵皮石斛粗低聚糖,再經(jīng)DEAE-52陰離子纖維柱和Sephadex G-10凝膠色譜柱分離純化得到一個(gè)鐵皮石斛低聚糖組分DOO1-1,其含量為81.37%,相對分子質(zhì)量為2 270,鐵皮石斛低聚糖主要由葡萄糖(65.0%)、甘露糖(28.0%)構(gòu)成,還含有少量葡萄糖醛酸(2.6%)、半乳糖(3.1%)、阿拉伯糖(1.4%)。其百分摩爾比葡萄糖：甘露糖：葡萄糖醛酸：半乳糖：阿拉伯糖為1.00：0.43：0.04：0.05：0.02。鐵皮石斛低聚糖DOO1-1具有較強(qiáng)的抗胃腸消化能力。

益生試驗(yàn)結(jié)果表明,鐵皮石斛低聚糖DOO1-1能促進(jìn)干酪乳桿菌、嗜酸乳桿菌、兩歧雙歧桿菌以及腸道菌的增殖,其效果好于低聚果糖。鐵皮石斛低聚糖能顯著提高小鼠腸道菌群中乳桿菌和雙歧桿菌的豐度,降低大腸桿菌和擬桿菌的豐度,調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)。

鐵皮石斛低聚糖DOO1-1能被干酪乳桿菌、嗜酸乳桿菌、兩歧雙歧桿菌和腸道菌利用產(chǎn)生乳酸、乙酸、丙酸和丁酸,其中乳酸和乙酸含量較高,而丙酸和丁酸含量較低。