復方麻黃甘油劑的質(zhì)量標準研究

趙桂法，劉冬梅，王光照，鄭才友，譚永梅，孫光娟，尹繼旺

(山東省臨朐縣中醫(yī)院，濰坊 262600)

復方麻黃甘油劑是我院研制的制劑，主要組成成分有麻黃、苦參、牡丹皮、葛根、甘油。配制方法采取先以甘油為溶媒，適當加溫增加其流動性，續(xù)用60 ℃純化水為溶媒，連續(xù)兩步滲漉法提取(控溫滲漉裝置已申請專利)，制成杏黃色至黃棕色的液體制劑。復方麻黃甘油劑氣辛香，味苦、微甜；具有清熱燥濕、抗炎消腫、止痛止癢功能；主要用于治療接觸性皮炎、蕁麻疹、濕疹、帶狀皰疹及關節(jié)、肌肉腫痛等；外用局部濕敷，外涂穴位貼敷，隔藥灸，刮痧等；是我院常用的外用液體制劑。本研究參考了有關文獻[1-7]，通過對復方麻黃甘油劑的性狀、麻黃堿和苦參堿的TLC法鑒別實驗、鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量測定實驗等研究，最后確定本制劑質(zhì)量標準，為其制劑生產(chǎn)和臨床應用提供質(zhì)量保證。

1 材料

1.1 儀器

LC-20A高效液相色譜儀[島津企業(yè)管理(中國)有限公司]；AUW120電子天平[島津企業(yè)管理(中國)有限公司]；色譜柱：QinertSustain C18 5 μm，250 mm×4.6 mm(上海屹利科學儀器有限公司)；KQ-500DE數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；TL-2型二孔恒溫水浴鍋(上海昀躍儀器設備有限公司)；TU-Ⅱ暗箱式紫外觀察儀(上?？普苌萍加邢薰?。

1.2 試藥

復方麻黃甘油劑(本院研制，批號：20190618、20190812、20191013，規(guī)格：250 ml/瓶)；對照品均為中國食品藥品檢定研究院提供：鹽酸麻黃堿對照品(批號：171241-201809，含量：100.0%)，鹽酸偽麻黃堿對照品(批號：171237-201510，含量：99.8%)，苦參堿(批號：110805-201709，含量：98.7%)；硅膠G薄層板(青島海洋化工廠)；甲醇、乙腈、磷酸為色譜純，水為純化水，其他試劑為化學純。

2 方法與結果

2.1 鑒別

2.1.1麻黃

取本品25 ml加濃氨試液數(shù)滴、三氯甲烷15 ml，振搖提取，分取三氯甲烷液，蒸干，殘渣加甲醇1 ml使之溶解，作為供試品溶液。另取鹽酸麻黃堿對照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作為對照品溶液。按照薄層色譜法(《中國藥典》2015年版四部通則0502)試驗，吸取上述兩種溶液各2 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-濃氨試液(20∶5∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點(見圖1A)。

2.1.2苦參

取本品30 ml加三氯甲烷30 ml、濃氨試液1 ml，振搖提取，分取三氯甲烷液，蒸干，殘渣加三氯甲烷1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取苦參堿對照品，加三氯甲烷制成每1 ml含2 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2015年版四部通則0502)試驗，吸取上述兩種溶液各 2 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-丙酮-濃氨試液(2∶4∶3∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點(見圖1B)。

注：溫度16 ℃，相對濕度40%；供試品1：20190618，供試品2：20190812，供試品3：20191013圖1 麻黃(A)和苦參(B)TLC色譜圖

2.2 鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量測定

2.2.1色譜條件

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-0.1%磷酸溶液(5∶95)為流動相，檢測波長為210 nm，流速1.0 ml/min，溫度30 ℃，進樣量20 μl。

2.2.2對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸麻黃堿對照品6.00 mg、鹽酸偽麻黃堿對照品2.91 mg置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得到濃度分別為0.0600 mg/ml和0.0290 mg/ml的對照品溶液。

2.2.3供試品溶液的制備

取本品，混勻，精密量取50 ml置分液漏斗中，加入三氯甲烷50 ml、濃氨試液1 ml，振搖提取，分取三氯甲烷液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至100 ml量瓶中，加鹽酸1滴，加甲醇稀釋至刻度線，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4陰性對照樣品溶液的制備

按照復方麻黃甘油劑的處方和制法制備缺麻黃的陰性對照樣品，取約50 ml，按“2.2.3”項下的方法制成陰性對照樣品溶液。

2.2.5取樣量的考察

分別精密吸取對照品溶液及上述供試品溶液各20 μl，注入液相色譜儀進行測定，以外標法計算鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的含量之和。取樣量分別為25、50、75 ml，測得含量分別為0.149、0.149、0.150 mg/ml。結果表明，三種取樣量所測得的含量結果無顯著性差異，為了保證取樣量的均勻性，確定取樣量為50 ml。

2.2.6線性關系的考察

分別精密吸取濃度為0.0600、0.0290 mg/ml的鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿對照品溶液各5、10、15、20、25 μl，注入液相色譜儀，分別測定峰面積。以對照品的進樣量為橫坐標(x)，峰面積為縱坐標(y)，進行線性回歸，得回歸方程。結果見表1和表2。

表1 鹽酸麻黃堿線性關系考察結果

表2 鹽酸偽麻黃堿線性關系考察結果

回歸方程y=2 331 508.3333x-52 019.7000，相關系數(shù)r=0.9986。結果表明，鹽酸麻黃堿進樣量在0.3000～1.5000 μg之間與峰面積呈良好的線性關系。見圖2。

圖2 鹽酸麻黃堿標準曲線

回歸方程y=2 259 646.2069x+17 720.3000，相關系數(shù)r=0.9957。結果表明，鹽酸偽麻黃堿進樣量在0.1450～0.7250 μg之間與峰面積呈良好的線性關系。見圖3。

圖3 鹽酸偽麻黃堿標準曲線

2.2.7儀器精密度試驗

分別精密吸取鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿對照品溶液20 μl，注入液相色譜儀，連續(xù)進樣6次，測其峰面積。鹽酸麻黃堿峰面積分別為2 754 610、2 753 660、2 752 551、2 750 000、2 750 321、2 754 534 mAU，RSD為0.07%；鹽酸偽麻黃堿峰面積分別為1 377 305、1 376 009、1 378 765、1 379 009、1 375 006、1 377 349 mAU，RSD為0.11%。結果顯示，儀器精密度良好。

2.2.8穩(wěn)定性試驗

取本品照“2.2.3”項下的方法制成供試品溶液，每隔4 h進樣一次，測定鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的峰面積，共考察20 h(n=6)，計算RSD，以觀察供試品溶液在檢測過程中待測成分的穩(wěn)定性。結果分別見表3和表4。

表3 鹽酸麻黃堿穩(wěn)定性試驗結果

表4 鹽酸偽麻黃堿穩(wěn)定性試驗結果

結果表明，供試品溶液在20 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，能夠滿足測定需要。

2.2.9重復性試驗

取本品50 ml，按照“2.2.3”項下的方法制成供試品溶液6份。按“2.2.1”項下的色譜條件進行測定，以外標法計算鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的含量之和。結果表明，含量測定方法的重復性良好。見表5。

2.2.10加樣回收率試驗

精密量取已測知含量的本品(鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量之和為0.1490 mg/ml)50 ml共6份，置分液漏斗中，精密加入鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿對照品80 ml(濃度分別為0.0600、0.0290 mg/ml)及三氯甲烷100 ml、濃氨試液1 ml，按“2.2.3”項下方法制成6份供試品溶液。分別精密吸取上述供試品溶液各10 μl，注入液相色譜儀進行測定，以外標法計算鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的含量之和。結果表明，測定方法回收率良好。見表6和表7。

表5 重復性試驗結果

表6 鹽酸麻黃堿加樣回收率試驗結果

表7 鹽酸偽麻黃堿加樣回收率試驗結果

2.2.11專屬性實驗

分別精密吸取“2.2.2”“2.2.3”“2.2.4”項下配制的對照品溶液、供試品溶液及陰性對照樣品溶液各20 μl，注入液相色譜儀進行測定。結果供試品色譜中，在與對照品色譜保留時間相同的位置上，有相應色譜峰，而陰性對照樣品色譜中無相應的色譜峰。說明處方中其他藥味對測定結果無干擾。見圖4。

A：對照品;B：供試品;C：陰性對照樣品;1:鹽酸麻黃堿;2:鹽酸偽麻黃堿圖4 復方麻黃甘油劑中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的HPLC色譜圖

2.2.12樣品測定

按“2.2.1”項下的色譜條件，對所收集到的樣品進行含量測定，結果見表8。

表8 樣品含量測定結果 mg/ml

根據(jù)樣品含量測定結果，并結合《中國藥典》2015年版一部麻黃飲片中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的含量限度，暫定本品每毫升含麻黃以鹽酸麻黃堿(C10H15NO·HCl)、鹽酸偽麻黃堿(C10H15NO·HCl)計，不得少于0.064 mg。

3 討論

對麻黃、苦參進行TCL法鑒別時，麻黃中鹽酸麻黃堿成分在未加入濃氨試液時萃取效果不佳，主斑點顯色不明顯，加入濃氨試液數(shù)滴之后，能有效地將鹽酸麻黃堿分離至三氯甲烷層，萃取效果明顯改善。本研究分別考察比較了在不同展開溫濕度下的分離效果，結果供試品圖譜在對照斑點相應位置上均能有效分離并顯相同顏色的清晰斑點。

在選定含量測定指標成分時，考慮到鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿為君藥麻黃的主要活性成分之一，故選定鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿作為指標成分，建立了含量測定方法。本研究結果顯示，鹽酸麻黃堿進樣量在0.3000～1.5000 μg之間、鹽酸偽麻黃堿進樣量在0.1450～0.7250 μg之間，峰面積呈良好線性關系，因此確定在此進樣量之間進行含量測定；對儀器精密度進行試驗，證明儀器精密度良好；對供試品穩(wěn)定性進行考察，表明供試品溶液在20 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，能夠滿足測定需要；對方法重復性進行考察，按實驗方法制備6份供試品溶液，測定鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰面積之和，RSD為0.38%，方法重復性良好；加樣回收率測定試驗，分別加入鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿各制成6份供試品溶液，鹽酸麻黃堿平均回收率為98.23%、RSD為0.29%，鹽酸偽麻黃堿平均回收率為98.28%、RSD為0.40%，加樣回收率良好，表明鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿在樣品分析過程中損失程度非常小，可忽略不計；專屬性試驗，供試品色譜在與對照品色譜保留時間相同的位置上有相應色譜峰，而陰性對照樣品色譜中無相應的色譜峰，說明處方中其他藥味對測定結果無干擾。

綜上，采用TLC法對君藥麻黃及臣藥苦參進行定性鑒別，采用HPLC法測定制劑中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量，能有效提高復方麻黃甘油劑的質(zhì)量可控性，為保障制劑質(zhì)量提供科學依據(jù)。