不同果袋對(duì)瑞雪蘋果果皮褐變的影響

賀穎 王輝 胡宇 馮郁晨 王子盾 劉振中 史濤 趙政陽

摘? ? 要：【目的】探究不同果袋對(duì)瑞雪蘋果（Malus × domestica ‘Ruixue）果皮褐變及抗氧化物質(zhì)的影響，為減緩瑞雪蘋果果皮褐變并提高瑞雪蘋果在隴東地區(qū)的經(jīng)濟(jì)效益和市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力提供參考?！痉椒ā恳?年生瑞雪蘋果為試材，于盛花后84 d采用綠色波點(diǎn)單層袋（G1）、袋口露白綠色波點(diǎn)單層袋（G2）和白色單層袋（G3）進(jìn)行套袋處理，以普通雙層袋為對(duì)照，研究不同果袋對(duì)瑞雪果皮褐變及抗氧化物質(zhì)的影響。【結(jié)果】相較于對(duì)照，G1、G2和G3處理降低了瑞雪果皮褐變率，其褐變率從78.6%分別降至7.0%、6.0%和1.4%。其中對(duì)照一至四級(jí)褐變指數(shù)均為最高，與對(duì)照相比，G1和G2出現(xiàn)果皮一級(jí)褐變和二級(jí)褐變，G3僅出現(xiàn)果皮一級(jí)褐變，褐變指數(shù)為1.4%，與對(duì)照果皮發(fā)生褐變現(xiàn)象時(shí)間相比，G1和G2推遲了11 d，G3推遲了13 d。對(duì)抗氧化物質(zhì)含量的測(cè)定結(jié)果表明，與對(duì)照相比，G1、G2和G3抗氧化物質(zhì)含量顯著增加，其中G3的含量又顯著高于G1和G2。而對(duì)照、G1、G2和G3的SOD和POD活性整體依次升高，PPO活性依次降低?！窘Y(jié)論】白色單層果袋（G3）顯著提高了果皮抗氧化物質(zhì)含量和抗氧化酶活性，降低了瑞雪果皮褐變率及褐變指數(shù)。因此，在瑞雪套袋栽培生產(chǎn)時(shí)，推薦使用白色單層果袋（G3）。

關(guān)鍵詞：瑞雪蘋果；果袋；透光率；果皮褐變；抗氧化物質(zhì)

中圖分類號(hào)：S661.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1009-9980（2023）09-1848-12

收稿日期：2023-04-07 接受日期：2023-05-19

基金項(xiàng)目：財(cái)政部和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部：國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系（CARS-27）

作者簡(jiǎn)介：賀穎，女，在讀碩士研究生，研究方向?yàn)楣麡湓耘嗌怼el：13891460377，E-mail：heying01128@163.com

*通信作者Author for correspondence. Tel：13891819690，E-mail：zhaozy@nwsuaf.edu.cn

Effects of different fruit bags on the peel browning of Ruixue apple

HE Ying1， WANG Hui1， HU Yu1， FENG Yuchen1， WANG Zidun1， LIU Zhenzhong1， SHI Tao2， ZHAO Zhengyang1， 2*

（1College of Horticulture， Northwest A & F University， Yangling 712100， Shaanxi， China; 2Qingcheng Station of Apple Experiment and Demonstration， Qingcheng 745199， Gansu， China）

Abstract： 【Objective】 The study aimed to reveal the effects of different fruit bags on the browning and antioxidant substances of the peel of Ruixue apple （Malus × domestica Ruixue）， in order to mitigate the browning of the peel and enhance the economic benefits and market competitiveness of Ruixue apple in the Longdong region. 【Methods】 Six-year-old Ruixue apple trees were used as experimental materials. The single-layer bags with green dot （G1）， the single-layer bag with green polka dot and exposed white rim （G2）， the white single-layer bags （G3） were used 84 days after blooming for bagging treatment. The ordinary double-layer bags （control） were used as control. The fruit peel browning rate and browning index were counted 189 days after blooming. Meanwhile， a temperature and humidity probe was used to measure the temperature inside the different fruit bags from 84 d to 189 d after flowering， and the antioxidant substances and antioxidant enzyme activities of the Ruixue fruit peel were measured. 【Results】 Based on the statistics of peel browning rate and browning index of the fruits with different bags during the harvest period， it was observed that G1， G2， and G3 treatments resulted in a significant reduction of peel browning rate in Ruixue fruit in comparison with the control， the peel browning rate of Ruixue decreased from 78.6% to 7.0%， 6.0%， and 1.4%， respectively. The browning indices of the 1 to 4 degree browning of the control peel was the highest. Compared with control， G1 and G2 exhibited 1 and 2 degree peel browning， while G3 only exhibited 1 degree peel browning with a browning index of 1.4%. Compared with the control， G1 and G2 delayed the occurrence of browning by 11 days and G3 delayed by 13 days. The daily average temperature of the fruits inside the different fruit bags showed a downward trend， and the downward trend was consistent in all the fruits with different treatments. Among them， the differences in daily average low temperature and daily average temperature among the fruits with different fruit bags were not significant， while the effective accumulated temperature of the control was the lowest. Compared with the control， the effective accumulated temperature of G3 increased by 36.9 ℃. An illuminometer was used to measure the transmittance of different fruit bags. The Transmittance of the control was zero， and the transmittance of G1 and G3 were 36.6% and 51.2%， respectively， while the transmittance of G2 in the exposed area of the bags was 51.2%， and the transmittance of G2 in the other area of the bags was 32%. The Vitamin C content of G3 was significantly higher than those of the other treatments. Compared with the control， the total phenolic content of G1， G2， and G3 significantly increased by 38.9%， 42.4%， and 57.7%， respectively; The flavonoids of G3 was significantly higher than those of the other treatments， while the flavonoids of G2 was 34.0% higher that of the control; the flavonoids of G1 was 21.0% higher that of the control， while there was no significant difference in the total flavonoid content between G2 and G3. Compared with the control， G3 treatment significantly reduced the content of MDA in the peel， while G2 and G3 treatments significantly reduced the content of [O2] in the peel. There were significant differences in antioxidant enzyme activity among the fruits with different fruit bags. The SOD activity of G3 was significantly higher than those of the other treatments. The POD activity of G3 was the highest， followed by G2， G1. The CAT activity of G1 and G3 was significantly higher than that of G1. The PPO activity of the control and G1 was significantly higher than those of the other treatments. The comprehensive evaluation indexes of the four fruit bags on the browning and antioxidant quality indicators of Ruixue apple peel were ranked as follows： G3＞G2＞G1＞control， according to the above indicators and the comprehensive evaluation of the membership function. 【Conclusion】 The antioxidant content and antioxidant enzyme activity of Ruixue apple peel were strongly influenced by the type of fruit bags used during cultivation. G3 fruit bag was particularly effective in increasing the antioxidant content and antioxidant enzyme activity， and decreasing both the browning rate and the degree of peel browning of Ruixue apples. The use of G3 fruit bag would be a promising strategy to mitigate the peel browning and maintain the nutritional quality of Ruixue apples.

Key words： Ruixue apple; Fruit bags; Light transmittance; Peel browning; Antioxidant

蘋果（Malus × domestica Borkh.）是我國(guó)主要的果樹作物，蘋果產(chǎn)業(yè)也是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)和鄉(xiāng)村振興的支柱產(chǎn)業(yè)[1]。瑞雪是由秦富1號(hào)和粉紅女士雜交選育而成，是一種黃綠色晚熟新品種，其具有果形端正、果面光潔、口感酸甜適中，極耐貯藏等優(yōu)點(diǎn)[2-3]，深受消費(fèi)者喜歡。科學(xué)的套袋技術(shù)是生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)果實(shí)的重要措施之一，具有提高果實(shí)外觀品質(zhì)、減少病蟲果等多方面的優(yōu)勢(shì)[4-6]。栽培者發(fā)現(xiàn)種植瑞雪采用不套袋處理時(shí)，果點(diǎn)變大、果面較粗糙并會(huì)產(chǎn)生著色現(xiàn)象，影響了瑞雪蘋果的外觀品質(zhì)，因此果實(shí)套袋已成為提升瑞雪果實(shí)商品價(jià)值的重要技術(shù)措施。甘肅隴東地區(qū)自然生態(tài)條件優(yōu)越，有極大的區(qū)域優(yōu)勢(shì)，是我國(guó)蘋果生產(chǎn)的核心區(qū)域[7]。隨著隴東地區(qū)現(xiàn)代蘋果栽培技術(shù)的快速發(fā)展[8]，近幾年隴東地區(qū)瑞雪栽培面積迅速增長(zhǎng)，但在瑞雪蘋果套袋栽培過程中發(fā)現(xiàn)，若果袋選擇不當(dāng)，果皮便會(huì)發(fā)生褐變現(xiàn)象[9]。果皮褐變屬于生理性病害，嚴(yán)重影響果實(shí)的外觀和商品價(jià)值，給果農(nóng)造成一定的經(jīng)濟(jì)損失[10]。因此，針對(duì)以上生產(chǎn)栽培中亟待解決的實(shí)際問題，探究不同果袋與瑞雪果皮褐變及抗氧化物質(zhì)的關(guān)系具有十分重要的意義。

果實(shí)套袋技術(shù)的應(yīng)用改變了袋內(nèi)溫度、光照等條件[11]，進(jìn)而影響果實(shí)的抗逆性[6]。樊淼淼[12]的研究發(fā)現(xiàn)套袋會(huì)顯著提高瑞雪果實(shí)的外觀品質(zhì)。王爽[9]探究了果袋溫濕度對(duì)瑞雪褐變的影響，結(jié)果表明套袋瑞雪蘋果果皮褐變與果實(shí)發(fā)育后期的溫度因子有關(guān)，其中果袋內(nèi)的有效積溫是導(dǎo)致褐變的主要因素。前人研究均未涉及不同果袋與瑞雪果皮褐變及抗氧化物質(zhì)之間的關(guān)系[9，10，13]。因此，筆者在本研究中擬采用3種瑞雪專用果袋和普通雙層袋，通過監(jiān)測(cè)不同果袋內(nèi)的溫度及測(cè)定果皮抗氧化物質(zhì)含量，結(jié)合果皮褐變率，探討不同果袋與瑞雪果皮褐變的關(guān)系，旨在降低瑞雪果皮褐變率及緩解其褐變程度，為制定優(yōu)質(zhì)瑞雪蘋果的生產(chǎn)栽培管理技術(shù)方案提供新思路。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)于2022年7—11月在甘肅省慶陽市西北農(nóng)林科技大學(xué)慶城蘋果試驗(yàn)站進(jìn)行（35°42′～36°17′ N，107°16′～108°05′ E）。試驗(yàn)站海拔為1300 m，年平均降雨量為538 mm，年平均氣溫為9.5 ℃。試驗(yàn)材料為6年生瑞雪蘋果樹，基砧為新疆野蘋果，中間砧為M26。定植株行距為1 m×4 m，按細(xì)長(zhǎng)紡錘形樹體結(jié)構(gòu)整形，周年進(jìn)行正常肥水管理與病蟲害防治。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取長(zhǎng)勢(shì)一致的瑞雪植株。根據(jù)物候期確定套袋時(shí)期，于盛花期（4月13日）后84 d進(jìn)行套袋。所用果袋為綠色波點(diǎn)單層袋（G1）、袋口露白綠色波點(diǎn)單層袋（G2）和白色單層袋（G3），以普通雙層袋為對(duì)照（表1）。每個(gè)處理選5株樹，每株樹隨機(jī)選取60個(gè)果實(shí)進(jìn)行套袋處理。采用溫濕度探頭儀測(cè)定自然環(huán)境及不同果袋內(nèi)花后84～189 d的溫度，在花后189 d進(jìn)行連袋采收，并統(tǒng)計(jì)褐變率及褐變指數(shù)，采收后每個(gè)處理隨機(jī)選取6個(gè)蘋果作為樣品。將待測(cè)樣品及時(shí)置于液氮中冷凍，隨后置于-80 ℃冰箱保存，用于后期的生化指標(biāo)測(cè)定。果袋信息見表1。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1? ? 果袋內(nèi)溫度的測(cè)定及溫度參數(shù)的計(jì)算? ? 果袋內(nèi)溫度的測(cè)定。在樹體中部（距離地面1.5 m左右）同一方向用路格溫濕度記錄儀（L92-1）設(shè)定好起止時(shí)間，連續(xù)監(jiān)測(cè)果袋內(nèi)和自然環(huán)境的溫度（±0.5 ℃），每1 h記錄1次果袋內(nèi)的數(shù)據(jù)。將溫濕度探頭放入果袋內(nèi)，要避免探頭與果面接觸，并用細(xì)繩扎緊果袋口，另外將一個(gè)溫濕度探頭放在果袋的附近，監(jiān)測(cè)自然環(huán)境的溫度[9]。記錄時(shí)間從瑞雪果實(shí)套袋（花后84 d）至果實(shí)采收為止（花后189 d）。

溫度參數(shù)的計(jì)算。日平均溫度為24 h記錄點(diǎn)的平均值；日最高溫度為24 h記錄點(diǎn)的最大值；日最低溫為24 h記錄點(diǎn)的最小值；日最高平均溫度為花后84～189 d日最高溫的平均值；日最低平均溫度為花后84～189 d日最低溫的平均值；有效積溫的計(jì)算參照王爽[9]的方法：以10 ℃作為瑞雪蘋果的生物學(xué)零度，日平均溫度高于10 ℃作為有效溫度，花后84～189 d中有效溫度的積累量為有效積溫。

1.3.2? ? 果袋透光率的測(cè)定和計(jì)算? ? 用TES-1399照度計(jì)測(cè)定不同果袋的透光率。首先將探頭置于光照培養(yǎng)箱中測(cè)量其環(huán)境光照度，其次將裁剪后的果袋緊密覆蓋在照度計(jì)探頭上方，待光照度值穩(wěn)定后讀數(shù)，同一環(huán)境中3次重復(fù)，取平均數(shù)。

果袋透光率/%=不同果袋內(nèi)光照度/環(huán)境光照度×100。

1.3.3? ? 果皮褐變率及褐變指數(shù)的測(cè)定? ? 每組處理調(diào)查285個(gè)果實(shí)以統(tǒng)計(jì)褐變率和褐變指數(shù)，統(tǒng)計(jì)參照王爽[9]的方法。

褐變率/%=（褐變果數(shù)/抽取樣品果數(shù)）×100。

褐變分級(jí)：

0級(jí)：無褐變；1級(jí)：褐變面積S，0

褐變指數(shù)/%=Σ（褐變級(jí)別×該級(jí)果實(shí)數(shù)）/（總果數(shù)量×最高褐變級(jí)別）×100。

1.3.4? ? 抗氧化物質(zhì)及抗氧化酶活性的測(cè)定? ? 維生素C含量的測(cè)定通過鉬藍(lán)比色法，利用紫外分光光度計(jì)測(cè)定760 nm處吸光度值，用于后續(xù)計(jì)算維生素C含量。稱取1.0 g果皮，液氮研磨，加入1.5 mL乙醇-丙酮混合液（體積比7∶3）在37 ℃溫育1 h。勻漿在20 ℃、8000×g高速離心20 min，取上清液立即存放在-20 ℃用于總酚、類黃酮、總黃酮含量的測(cè)定。總酚含量的測(cè)定參照Folin-Ciocalteu法，用紫外分光光度計(jì)測(cè)定765 nm波長(zhǎng)處的吸光度，每一試樣重復(fù)測(cè)定3次，用于后續(xù)計(jì)算總酚的含量；類黃酮含量的測(cè)定參照趙靜[14]的方法，取0.15 mL提取液于10 mL玻璃試管中，加入3.4 mL 30%乙醇，0.15 mL 0.5 mol·L-1 NaNO2溶液，0.15 mL 0.3 mol·L-1 Al（NO3）3溶液充分混合，反應(yīng)5 min后，加入1.0 mL 1 mol·L-1 NaOH溶液，用紫外分光光度計(jì)測(cè)定510 nm處的吸光度，每一試樣重復(fù)測(cè)定3次，用于后續(xù)計(jì)算類黃酮的含量；總黃酮含量的測(cè)定參照DMACA法，640 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值，每個(gè)試樣重復(fù)測(cè)定3次，用于后續(xù)計(jì)算總黃酮含量。

MDA和[O2]含量的測(cè)定。MDA含量參照趙靜[14]的方法測(cè)定，取0.3 g果皮粉，用50 mmol·L-1 PBS（pH 7.8）研磨成勻漿，定容到6 mL，離心取上清液。取1.5 mL樣品和2.5 mL 0.5%的2-硫代巴比妥酸（TBA）溶液于10 mL的離心管中，在100 ℃的水浴鍋中放置20 min后，溫度下降至室溫離心，取上清液進(jìn)行測(cè)定。[O2]含量采用羥胺氧化法測(cè)定，反應(yīng)后在530 nm處測(cè)量溶液的吸光度值。

抗氧化酶活性的測(cè)定。SOD活性采用試劑盒WST-8法測(cè)定；POD活性參照李心草[15]的方法測(cè)定，磷酸緩沖液（pH 7.0）、0.125 mL愈創(chuàng)木酚，250 ?L 30%的H2O2組成POD反應(yīng)液。20 ?L酶提取液加入4 mL POD反應(yīng)液，迅速混合均勻，測(cè)定OD值，波長(zhǎng)為470 nm；PPO活性參照鄰苯二酚法測(cè)定，1 mL酶液，加入1.5 mL 0.1 mol·L-1 pH 6.8的磷酸緩沖液，0.5 mL 0.1 mol·L-1的鄰苯二酚，立即于420 nm處測(cè)定OD值；CAT活性參照趙靜[14]的方法測(cè)定，1 mL反應(yīng)體系中含有50 mmol·L-1磷酸緩沖液（pH 7.0），粗酶提液20 ?L，25 ℃預(yù)熱，加入H2O2（0.1 mol·L-1）0.1 mL，啟動(dòng)反應(yīng)。以磷酸緩沖液作為空白對(duì)照，記錄240 nm波長(zhǎng)下吸收值的降低速度。

1.4 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)測(cè)定取3次生物學(xué)重復(fù)，用Microsoft Office Excel 2010軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理和作圖，采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同果袋內(nèi)微域環(huán)境的比較

2.1.1? ? 不同果袋內(nèi)的溫度比較? ? 不同果袋內(nèi)的日平均溫度變化如圖1所示，不同果袋內(nèi)日平均溫呈下降趨勢(shì)，且所有處理下降趨勢(shì)一致。在瑞雪果實(shí)生長(zhǎng)發(fā)育過程中，日平均溫度出現(xiàn)兩次較大波動(dòng)的下降，分別是花后120～140 d與花后170～180 d。第一次溫度出現(xiàn)短暫回溫后繼續(xù)下降，第二次溫度驟減15 ℃左右。

圖2-A可見，G1的日平均最高溫度高于其他處理，為27.6 ℃，而后依次為G3、G2、對(duì)照，分別為27.0 ℃、26.7 ℃、26.4 ℃；圖2-B可見，日平均溫度遵循G1＞G3＞G2＞對(duì)照的規(guī)律；圖2-C可見，日平均低溫遵循G1＞對(duì)照＞G3＞G2的規(guī)律；圖2-D可見，對(duì)照的有效積溫最低，為986.3 ℃，與對(duì)照相比，G3的有效積溫增加了36.9 ℃，為1 023.2 ℃；其中G1和G2的有效積溫?zé)o顯著差異，分別為1 019.4 ℃和1 010.6 ℃。綜上所述，不同果袋內(nèi)日平均低溫和日平均溫?zé)o顯著差異，但G3果袋顯著提高了袋內(nèi)的有效積溫。

2.1.2? ? 不同果袋透光率的比較? ? 對(duì)照透光率為0%，G1和G3透光率分別為36.6%和51.2%，G2露白處透光率為51.2%，綠色單層透光率為32%。綜上，果袋透光率由高到低依次是G3、G2、G1。

2.2 不同果袋內(nèi)果皮褐變率及增長(zhǎng)情況

2.2.1? ? 不同果袋內(nèi)果皮褐變率及褐變指數(shù)的比較 如圖3所示，不同套袋處理的果實(shí)呈現(xiàn)不同色澤，尤其是對(duì)照的果實(shí)和其他處理的果實(shí)色澤相差較大。如圖4-A所示，不同果袋瑞雪果皮褐變率統(tǒng)計(jì)結(jié)果中，對(duì)照果皮褐變率顯著高于其他處理，為78.6%；G1和G2果皮褐變率無顯著差異，分別為7.0%和6.0%；G3果皮褐變率最低，為1.4%。不同果袋瑞雪果皮褐變指數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果如圖4-B所示，對(duì)照中一至四級(jí)褐變指數(shù)高于其他處理，分別為11.6%、8.9%、6.8%和5.3%。與對(duì)照相比，G1和G2出現(xiàn)果皮一級(jí)褐變和二級(jí)褐變，G3僅出現(xiàn)果皮一級(jí)褐變，褐變指數(shù)為1.4%。綜合分析表明，對(duì)照瑞雪果皮褐變率與褐變指數(shù)均高于其他套袋處理。其中，與G3相比，G1和G2的褐變率分別是G3的5倍和4.29倍。

2.2.2? ? 不同果袋內(nèi)果皮褐變率增長(zhǎng)情況? ? 不同果袋褐變率增長(zhǎng)情況如圖5所示，在花后174 d 對(duì)照開始出現(xiàn)褐變現(xiàn)象，并在花后180～184 d期間瑞雪果皮褐變率迅速增長(zhǎng)，褐變率由8.0%增長(zhǎng)至24.0%。與對(duì)照相比，G1和G2果皮發(fā)生褐變現(xiàn)象推遲了11 d，且褐變?cè)鲩L(zhǎng)較慢，直至花后189 d，G1和G2的褐變率僅為7.0%和6.0%，而G3果皮發(fā)生褐變現(xiàn)象較對(duì)照推遲了13 d，褐變率為1.4%。綜上所述，不同果袋處理的瑞雪果皮褐變呈顯著差異。

2.3 不同果袋內(nèi)果皮抗氧化物質(zhì)含量的比較

2.3.1? ? 不同果袋內(nèi)果皮抗氧化物質(zhì)含量的比較? ? 維生素C含量（w，后同）的測(cè)定表明，G3的含量顯著高于其他處理，為5.19 mg·100 g-1，其次為G2＞G1＞對(duì)照，分別為4.74、4.41、4.32 mg·100 g-1；與對(duì)照相比，G1、G2、G3總酚含量均有顯著增加，分別增加了38.9%、42.4%、57.7%；與對(duì)照果皮中的類黃酮含量相比，G1、G2和G3處理的果皮類黃酮含量顯著增加，其中，G3處理的類黃酮含量最高（3.97 mg·100 g-1），G1和G2的類黃酮含量分別為3.84 mg·100 g-1和3.44 mg·100 g-1；與對(duì)照果皮總黃酮的含量相比，G1顯著提高了21.0%，G2和G3總黃酮含量增加量并無顯著差異，分別提高了43.9%和49.1%。綜合分析表明，與對(duì)照相比，G1、G2和G3抗氧化物質(zhì)含量顯著增加，其中，G3處理提升果皮抗氧化物質(zhì)含量的效果更好（表2）。

2.3.2? ? 不同果袋內(nèi)果皮MDA和[O2]含量的比較? ? 由圖6-A可見，與對(duì)照相比，G1、G2和G3果皮的MDA含量分別降低了8.6%、19.7%和21.1%，其中G3果皮的MDA含量下降幅度最大且達(dá)到差異顯著水平；由圖6-B可見，與對(duì)照相比，G1果皮的 [O2] 含量無顯著變化，分別為248.32 ?g·g-1和252.30 ?g·g-1，但G2和G3處理中果皮的 [O2] 含量與對(duì)照差異顯著，分別下降了4.1%和2.1%。綜上，與對(duì)照相比，G3處理顯著降低了果皮MDA含量，而G2和G3處理顯著降低了果皮 [O2] 含量。

2.3.3? ? 不同果袋內(nèi)果皮抗氧化酶活性的比較? ? 由圖7-A可知，與對(duì)照相比，G2和G3處理的SOD活性顯著升高，其中G3處理的SOD活性最高，為21.22 U·g-1·min-1；由圖7-B可知，G3果皮中的POD活性最高，其次為G2和對(duì)照，而G1果皮中的POD活性最低，為7.86 U·g-1·min-1。與G1相比，G2、G3的POD活性顯著提高11.8%和28.6%；由圖7-C可知，與對(duì)照相比，G1、G2和G3果皮CAT活性均顯著提高，其中G1和G3果皮CAT活性提高效果最為顯著，分別提高了59.7%和54.0%，而G2果皮提高了25.2%；由圖7-D可知，對(duì)照和G1果皮的PPO活性顯著高于其他處理，分別為174.45 U·g-1·min-1和172.75 U·g-1·min-1，而G2和G3果皮中的PPO活性無顯著差異，分別為141.12 U·g-1·min-1和140.00 U·g-1·min-1。綜上，從對(duì)照至G1、G2和G3處理，SOD和POD活性整體呈上升趨勢(shì)，PPO活性呈下降趨勢(shì)。

2.4 應(yīng)用隸屬函數(shù)法對(duì)4種果袋的綜合評(píng)價(jià)

通過選取具有顯著差異的抗氧化物質(zhì)指標(biāo)，以褐變率、維生素C含量、總酚含量、類黃酮含量、總黃酮含量、丙二醛含量、超氧陰離子含量、SOD活性、POD活性、CAT活性、PPO活性作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。各指標(biāo)的隸屬函數(shù)值如表3所示，通過隸屬函數(shù)綜合評(píng)價(jià)得出，4種果袋對(duì)瑞雪蘋果果皮褐變及抗氧化品質(zhì)指標(biāo)影響效果的綜合評(píng)價(jià)指數(shù)排序?yàn)椋篏3＞G2＞G1＞對(duì)照，這表明G3果袋在降低瑞雪果皮褐變率和提升瑞雪果皮抗氧化品質(zhì)方面的綜合效果最優(yōu)，其次是G2果袋和G1果袋。

3 討 論

3.1 不同果袋對(duì)溫度和光照的影響

蘋果生長(zhǎng)發(fā)育離不開自然環(huán)境。不套袋果主要受自然環(huán)境的影響，而套袋果主要受袋內(nèi)微域環(huán)境的影響[4，11]。不同材質(zhì)的果袋營(yíng)造的微域環(huán)境不同，進(jìn)而影響果袋內(nèi)光照和溫度環(huán)境。張建光等[5]的研究發(fā)現(xiàn)，光照是通過影響袋內(nèi)的溫度進(jìn)而制約果面的溫度，此溫度差異必然會(huì)造成果實(shí)的生理狀態(tài)差異，從而間接對(duì)套袋果產(chǎn)生影響。本研究中雖然不同果袋內(nèi)日平均低溫和日平均溫?zé)o顯著差異，但是不同果袋內(nèi)日平均最高溫和有效積溫存在一定的差異，例如對(duì)照和G3的有效積溫累積量相差36.9 ℃，這必定會(huì)對(duì)果實(shí)的生理指標(biāo)產(chǎn)生影響。厲恩茂等[11]的研究指出完全遮光袋會(huì)導(dǎo)致袋內(nèi)溫度升高，光照度顯著降低，也會(huì)減小溫度的變化幅度。程智慧等[16]對(duì)黃瓜進(jìn)行套袋栽培，發(fā)現(xiàn)套袋后溫度均有不同程度的提高，而光照度減弱，并得出套袋營(yíng)造的微環(huán)境可以調(diào)節(jié)黃瓜發(fā)育、品質(zhì)及其商品價(jià)值。這與本研究的結(jié)果一致，通過對(duì)瑞雪蘋果采用不同果袋的套袋栽培管理，改變了袋內(nèi)的微域環(huán)境，進(jìn)而緩解瑞雪果皮的褐變現(xiàn)象并提高瑞雪的品質(zhì)。

3.2 不同果袋溫度對(duì)果皮褐變及MDA和 [O2] 含量的影響

Tong等[17]的研究指出當(dāng)蜜脆蘋果處于易感成熟期時(shí)，日平均溫的下降可能會(huì)提升果肉褐變的發(fā)生率。日平均溫下降之所以可能是誘發(fā)果皮褐變的重要因素，是因?yàn)榈蜏貢?huì)破壞果樹體內(nèi)正常的氧化還原關(guān)系，從而導(dǎo)致果實(shí)抗氧化能力的變化，進(jìn)而影響果樹體內(nèi)其他生理代謝過程[18]。與此同時(shí)，低溫脅迫也會(huì)促進(jìn)胞內(nèi)活性氧產(chǎn)生，過多的活性氧容易誘發(fā)果皮的膜脂過氧化，從而導(dǎo)致膜脂過氧化產(chǎn)物MDA大量積累[19]。Sun等[20]的研究也證明了在低溫逆境下，南果梨果皮中PuMYB21和PuMYB54結(jié)合下游結(jié)構(gòu)基因PuPLDβ1促進(jìn)了膜脂代謝，進(jìn)而引起果皮褐變。王爽[9]的研究得出渭北地區(qū)套袋瑞雪在果實(shí)發(fā)育后期，袋內(nèi)較低的日平均溫和日最高溫造成較低的有效積溫，使果實(shí)處于低溫脅迫環(huán)境中，從而導(dǎo)致瑞雪果皮褐變的產(chǎn)生。本研究中通過測(cè)定果袋內(nèi)溫度，發(fā)現(xiàn)在花后170～180 d溫度驟降15 ℃，對(duì)照開始發(fā)生褐變并且褐變率上升較快；此外，對(duì)照果袋的有效積溫遠(yuǎn)低于G1、G2和G3，而對(duì)照果皮褐變率和褐變程度遠(yuǎn)高于G1、G2和G3，這與王爽[9]的研究結(jié)果一致。因此推測(cè)在隴東地區(qū)，當(dāng)瑞雪果實(shí)發(fā)育后期日平均溫大幅度下降時(shí)，果皮容易發(fā)生褐變現(xiàn)象。當(dāng)蘋果[21]、葡萄[22]在低溫脅迫下，活性氧含量和MDA含量都顯著升高，這與筆者的研究結(jié)果一致。G1果袋內(nèi)有效積溫較低，而 [O2] 和MDA含量顯著高于其他處理，進(jìn)而果皮褐變現(xiàn)象較為嚴(yán)重。與此相反，G3果袋內(nèi)有效積溫較高， [O2] 和MDA含量顯著低于對(duì)照和其他處理組，同時(shí)其果皮褐變率最低。

3.3 不同果袋光照對(duì)果皮褐變、抗氧化物質(zhì)及抗氧化酶活性的影響

光照是影響植物抗氧化能力的重要因子之一[23-24]。Wang等[25]的研究發(fā)現(xiàn)，在黑暗條件下，MdWRKY31與MdLAC7的啟動(dòng)子結(jié)合，可調(diào)節(jié)其活性，進(jìn)而加速套袋果實(shí)的果皮褐變；而在光照環(huán)境下，光響應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子MdHY5與MdWRKY31的啟動(dòng)子結(jié)合并抑制該基因的表達(dá)，從而間接抑制MdLAC7的功能，因此抑制了采前果皮的褐變。這與筆者的研究結(jié)果一致，透光率為0%的對(duì)照果袋會(huì)加速袋內(nèi)瑞雪果皮褐變，而透光率為51.2%的G3果袋果皮褐變延遲13 d，這表明透光率高的果袋降低了袋內(nèi)果皮的褐變程度。在梨的研究中發(fā)現(xiàn)光照度會(huì)影響梨果實(shí)內(nèi)的抗氧化性能[20]。在枇杷套袋后也發(fā)現(xiàn)枇杷果實(shí)的抗氧化能力有不同程度的下降，這主要?dú)w因于酚類物質(zhì)和類黃酮含量下降[26]。本研究中，瑞雪套袋后果皮抗氧化能力均有所下降，但以高透光率的G3（白色單層袋）內(nèi)果實(shí)抗氧化能力降幅小，而以低透光率的對(duì)照（普通雙層袋）抗氧化能力降幅大。在套袋薄皮甜瓜果實(shí)研究中同樣發(fā)現(xiàn)果袋的透光性和類黃酮含量呈正相關(guān)[27]，不套袋黃桃中較高的總酚和總黃酮含量有利于抑制黃桃果肉的褐變[28]。本研究中，雙層袋的透光性低于單層袋，且雙層袋的總酚和類黃酮的含量顯著低于單層袋的含量，其中，隨著不同單層袋透光率降低，瑞雪果皮總酚和類黃酮的含量呈下降趨勢(shì)。因此光照可能影響了瑞雪果皮中總酚和類黃酮等抗氧化物質(zhì)的代謝，進(jìn)而影響了瑞雪果皮褐變率和褐變指數(shù)。

蘋果梨酵素總酚含量上升抑制了PPO活性，從而控制酶促褐變的發(fā)生[29]。受光程度較強(qiáng)的不套袋黃桃會(huì)延遲PPO活性的降低，減輕果實(shí)的氧化脅迫[28]，而總酚含量與抗氧化酶活性升高和PPO活性降低緊密相關(guān)[30]。本研究中隨著果袋透光率的升高，瑞雪果皮中的酚類物質(zhì)含量上升，而PPO活性下降。Lin等[31]研究發(fā)現(xiàn)龍眼果皮發(fā)生褐變歸因于SOD活性的降低和 [O2] 的累積量增加，進(jìn)而導(dǎo)致膜脂質(zhì)過氧化嚴(yán)重，細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的完整性受損，最終使PPO與酚類物質(zhì)接觸發(fā)生褐變。PPO同樣也是影響石榴果皮褐變的主導(dǎo)酶類[32]，在本研究中同樣發(fā)現(xiàn)在褐變率較高的瑞雪果皮中，PPO活性較高。Zhao等[33]得出采收前的陽光照射顯著提升了收獲時(shí)梨果皮中抗氧化酶的活性。這是因?yàn)楣庹斩鹊脑黾訒?huì)調(diào)控SOD基因的表達(dá)，使抗氧化酶活性提高[18]。在本研究中，隨著果袋透光率的升高，瑞雪果皮中SOD活性提高。SOD、POD及CAT等抗氧化酶系統(tǒng)的存在可以有效地清除ROS[34]，保持體內(nèi)活性氧的平衡，因而SOD、POD及CAT的活性可以作為判定果實(shí)抗氧化的指標(biāo)[35]。本研究中，隨果袋透光率的升高，瑞雪果皮SOD、POD整體的活性提升，即果皮抗氧化能力增強(qiáng)，進(jìn)而降低了瑞雪果皮褐變率及褐變指數(shù)。

4 結(jié) 論

不同果袋顯著影響瑞雪蘋果果皮抗氧化物質(zhì)含量和抗氧化酶活性。白色單層果袋（G3）顯著提高了果皮抗氧化物質(zhì)含量和抗氧化酶活性，降低了瑞雪果皮褐變率及褐變指數(shù)。因此，在瑞雪套袋栽培生產(chǎn)中，推薦使用白色單層果袋（G3）。

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