不同產(chǎn)地、部位、采收期及加工方式槐角中槐角苷的含量測(cè)定

李歡 馬夢(mèng)雪 劉華石 寧夏

【摘 要】 目的：優(yōu)選出槐角的最佳產(chǎn)地、采收期及加工方式，并探究槐角不同部位的槐角苷含量差異。方法：采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定。色譜柱Kromasil 100-5-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-乙腈-0.07%磷酸水溶液（12∶20∶68）；檢測(cè)波長(zhǎng)260 nm；流速1.0 mL/min；柱溫為室溫；進(jìn)樣量10 μL。結(jié)果：不同產(chǎn)地的槐角中槐角苷含量：河北衡水>陜西渭南>山東聊城>山西運(yùn)城。從9月初到12月初，槐角中槐角苷含量逐漸降低。不同加工方式中，曬干的槐角中槐角苷含量最高，炒炭的槐角中槐角苷含量最低。不同部位槐角中槐角苷含量：果皮>全藥材>種子。結(jié)論：槐角的最佳產(chǎn)地為河北。山西及陜西槐角最佳采收期為9月初，河北槐角最佳采收期為9月中旬，山東槐角最佳采收期為9月下旬?；苯堑淖罴鸭庸し绞綖闀窀?，不同部位中槐角果皮的槐角苷含量最高。

【關(guān)鍵詞】 槐角；HPLC；產(chǎn)地；采收期；加工方式；部位

【中圖分類(lèi)號(hào)】R284? ?【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A? ? 【文章編號(hào)】1007-8517（2023）14-0040-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2023.13.zgmzmjyyzz202314010

Abstract：Objective The best producing areas，harvest period，processing methods and medicinal parts of Sophora fruit are selected

and explore the difference of the content of sophoricoside in different parts of sophora fruit

to provide a basis for the quality control and resource development and utilization.Methods High performance liquid chromatography （HPLC） was used to determine. Kromasil 100-5-C18 column （250 mm×4.6 mm，5 μm）; The mobile phase consisted of methanol-acetonitrile-0.07% phosphoric acid aqueous solution （12∶20∶68）. The detection wavelength is 260 nm; The volumn flow rate was set to 1.0 mL/min; The column temperature is room temperature; Injection volume was 10 μL. Results The content of sophoricoside in sophora fruit from different producing areas was Hengshui，Hebei > Weinan，Shaanxi > Liaocheng，Shandong > Yuncheng，Shanxi. From early September to early December，the content of sophoricoside in sophora fruit decreased gradually. Among the different processing methods，the content of sophoricoside in dried sophora fruit was the highest，while that in charcoal fried sophora fruit was the lowest. The content of sophoricoside in different parts of sophora fruit： pericarp > whole medicinal material > seed. Conclusion The best producing area of sophora fruit is Hebei province. The best harvest period of sophora fruit in Shanxi and Shaanxi is in early September，that of sophora fruit in Hebei is in mid-September，and that of sophora fruit in Shandong is in late September. The best processing method of sophora fruit is drying in the sun，and the content of sophoricoside was highest in mesocarp in different parts of sophora fruit.

Keywords：Sophora Fruit; HPLC; Producing Areas; Harvest Time; Processing Mode; Medicinal Part

槐角是豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥成熟果實(shí)，藥用歷史可追溯到兩千多年前，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》［1］。研究［2］表明，槐角中所含的化學(xué)成分包括槐角苷、染料木素、染料木苷、槐屬雙苷、蘆丁、槲皮素、山奈酚等，且前四個(gè)成分為槐角中的主要化學(xué)成分，約占槐角異黃酮類(lèi)成分的86%以上，其中槐角苷含量最高，2020版《中國(guó)藥典》也以槐角苷作為槐角的指標(biāo)性成分。近年來(lái)，大量研究［3］表明槐角苷具有抗氧化、抗炎、抗癌、抑菌及抗骨質(zhì)疏松等作用，在動(dòng)物體內(nèi)，槐角苷主要通過(guò)轉(zhuǎn)化為染料木素來(lái)發(fā)揮作用。染料木素作為一種植物雌激素，對(duì)絕經(jīng)期婦女雌激素減少導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松癥、心腦血管疾病、腫瘤等疾病都具有一定的預(yù)防和治療作用［4］。杜寧等［5］對(duì)槐角苷的抗骨質(zhì)疏松作用進(jìn)行了研究，結(jié)果表明槐角苷在治療大鼠骨質(zhì)疏松癥的劑量下僅對(duì)生殖系統(tǒng)具有微弱的雌激素樣作用，具有開(kāi)發(fā)為天然選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑的可能。因此，對(duì)槐角苷進(jìn)行定量研究可為槐角創(chuàng)新藥物的研發(fā)奠定基礎(chǔ)。

由于槐角來(lái)源豐富，價(jià)格低廉，產(chǎn)區(qū)分布廣泛，但缺乏化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)的系統(tǒng)性研究，市場(chǎng)上的槐角藥材質(zhì)量參差不齊，資源浪費(fèi)嚴(yán)重，開(kāi)發(fā)利用受限。文獻(xiàn)研究［6］表明槐角中槐角苷含量易受產(chǎn)地、采收期、加工方式和藥用部位的影響。因此，本研究以槐角苷含量為檢測(cè)指標(biāo)，對(duì)不同產(chǎn)地、采收期、加工方式及不同部位的槐角進(jìn)行高效液相含量測(cè)定，為槐角資源的開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 LC-20A高效液相色譜儀（日本島津）；BSA224S-CW電子天平［賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司］；BP-10電子天平（德國(guó)賽多利斯集團(tuán)）；KQ-800KDB高功率數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；DHG-9140A電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；ATC2-5-U超純水系統(tǒng)（美國(guó)艾科浦國(guó)際有限公司）；AF-04A中藥粉碎機(jī)（溫嶺市奧力中藥機(jī)械有限公司）。

1.2 材料 槐角苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)111695-201703，質(zhì)量分?jǐn)?shù)> 98%）；甲醇（色譜級(jí)，默克股份兩合公司）和乙腈（色譜級(jí)，默克股份兩合公司）；色譜用磷酸（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；屈臣氏水飲用水（廣州屈臣氏食品飲料有限公司）；乙醇，AR級(jí)?；苯撬幉姆謩e于2021年9月下旬采摘于河北衡水、山西運(yùn)城、陜西渭南、山東聊城，山西運(yùn)城槐角藥材從2021年9月上旬至2021年12月上旬每半月采集一次。經(jīng)黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院霍金海研究員鑒定為豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥成熟果實(shí)。具體產(chǎn)地見(jiàn)表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品制備 對(duì)同一批槐角藥材分別進(jìn)行以下處理。

2.1.1 干燥 將采摘的槐角除去雜質(zhì)及果柄，分別進(jìn)行以下處理：曬干、陰干、50 ℃烘干、70 ℃烘干、90 ℃烘干。所有槐角藥材粉碎后過(guò)三號(hào)篩，備用。

2.1.2 炮制 生槐角：將采摘的槐角除去雜質(zhì)及果柄，放于烘箱中50 ℃烘干。蜜炙：取凈槐角，用文火炒至表面微黃或鼓起，再將適量煉蜜加適量開(kāi)水稀釋?zhuān)瑺F潤(rùn)。用文火炒至外皮光亮不黏手，放于烘箱中50 ℃烘干。炒黃：取凈槐角約100 g，文火炒至表面發(fā)黃膨脹。炒炭：取凈槐角約100 g，置于熱鍋中，用武火炒至表面焦黑，內(nèi)部焦褐，噴清水少許，熄滅火星，取出晾干。蒸制：取凈槐角，略潤(rùn)，置于適宜的蒸制容器內(nèi)，用蒸汽加熱至黑褐色，放于烘箱中50 ℃烘干。所有槐角藥材炮制品粉碎后過(guò)三號(hào)篩，備用。

2.1.3 部位 將采摘的槐角藥材除去雜質(zhì)及果柄，剝離果皮與種子，放于烘箱中50 ℃烘干。將槐角全藥材、果皮和種子粉碎后過(guò)三號(hào)篩，備用。經(jīng)測(cè)定，所有樣品的水分均小于13%，符合中國(guó)藥典（2020版）的相關(guān)規(guī)定。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；色譜柱型號(hào)Kromasil 100-5-C18，4.6 mm×250 mm；以甲醇-乙腈-0.07%磷酸水溶液（12∶20∶68）為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為260 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫為室溫；進(jìn)樣量10 μL。理論板數(shù)按槐角苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取槐角苷對(duì)照品12.42 mg于100 mL容量瓶中定容，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密稱(chēng)取2 g槐角藥材，置于100 mL錐形瓶中，精密加入70%乙醇50 mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理（功率250 W，頻率100 kHz）45 min，放置至室溫，再稱(chēng)定重量，用70%乙醇補(bǔ)足失去的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液2.5 mL，于100mL容量瓶中定容，即得［7］。

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液3 mL于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，制成濃度為37.26 μg/mL的溶液，分別進(jìn)樣8 μL、10 μL、12 μL、14 μL、16 μL，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程：Y＝219624X-7519.4（r2＝1）。表明槐角苷濃度在0.03～0.06 mg/mL的范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 精密稱(chēng)取槐角藥材2 g，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得6次槐角苷峰面積的RSD為0.11%。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱(chēng)取槐角藥材2 g，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h分別進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得槐角苷峰面積的RSD為0.11%，表明槐角供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱(chēng)取槐角藥材2 g，共5份，按“2.2.3”項(xiàng)下方法項(xiàng)制備供試品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得槐角苷峰面積RSD為0.97%，表明該樣品重復(fù)性良好。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知含量的槐角藥材粉末5份，精密加入一定量的槐角苷對(duì)照品溶液，分別按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2.9 樣品測(cè)定 分別按2.3.1和2.3.2項(xiàng)下方法制備對(duì)照品及供試品溶液，并采用“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果如下。槐角苷對(duì)照品色譜圖如圖1所示，槐角藥材樣品色譜圖如圖2所示。峰1為槐角苷色譜峰。

2.2.9.1 產(chǎn)地 從結(jié)果可以看出，4個(gè)產(chǎn)地中河北衡水的槐角中槐角苷含量最高，陜西渭南和山東聊城次之，山西運(yùn)城的槐角中槐角苷含量最低。這可能與地域的經(jīng)緯度，日照時(shí)間，降雨量及海拔等因素有關(guān)。見(jiàn)表3。

2.2.9.2 采收期 由表4可以看出，槐角中的槐角苷含量隨著時(shí)間的推移呈逐漸降低趨勢(shì)。

2.2.9.3 加工方式 由表5可知，在不同的加工方式中，曬干的槐角中槐角苷含量最高，炒炭的槐角中槐角苷含量最低。這可能是因?yàn)樵诨苯羌庸み^(guò)程中，高溫破壞了槐角苷的結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致槐角苷含量降低。

2.2.9.4 不同部位 表6表明槐角中槐角苷大多在果皮中，種子中的槐角苷含量極低。

3 討論

由于地域及生長(zhǎng)環(huán)境的不同，不同產(chǎn)地的槐角生長(zhǎng)期有一些差別。河北槐角的生長(zhǎng)期比山西及陜西推遲十天到半個(gè)月左右，山東槐角的生長(zhǎng)期比河北推遲一周左右。山西及陜西的槐角8月初開(kāi)始生長(zhǎng)，而河北槐角到8月中旬才開(kāi)始生長(zhǎng)，山東比河北更晚，因此推測(cè)槐角的生長(zhǎng)期可能與光照時(shí)間、降雨量、海拔、經(jīng)緯度等因素有關(guān)。9月初山西及陜西的槐角果實(shí)較飽滿，且種子還未成形，此時(shí)槐角苷含量較高，綜合產(chǎn)量較高。因此，就槐角苷而言，山西及陜西槐角的最佳采收期為9月初期，河北槐角的最佳采收期為9月中旬，山東槐角最佳采收期為9月下旬。本研究依據(jù)《中國(guó)藥典》（2020年版）、《河南省中藥飲片炮制規(guī)范》（2022年版）及《貴州省中藥飲片炮制規(guī)范》（2005年版）對(duì)槐角藥材進(jìn)行炮制，并對(duì)其進(jìn)行初加工方式的考察。結(jié)果表明，曬干的槐角中槐角苷含量最高。同時(shí)，曬干節(jié)省人力物力，成本較低，因此確定槐角的最佳加工方式為曬干。本研究還對(duì)槐角的不同部位進(jìn)行了考察，結(jié)果表明槐角中槐角苷主要存在于果皮中，槐角種子中含量很少。李彩霞等［8］對(duì)國(guó)槐種子進(jìn)行了一系列研究，結(jié)果表明，國(guó)槐種子中的蛋白質(zhì)含量較高，具有良好的抗氧化作用。因此，可以將槐角種子剝離出來(lái)，用于蛋白質(zhì)的開(kāi)發(fā)或抗氧化等其它方面的研究，以充分利用槐角資源。

槐角中的化學(xué)成分復(fù)雜多樣，單靠槐角苷的含量測(cè)定難以全面地評(píng)價(jià)藥材整體的質(zhì)量。今后可對(duì)槐角進(jìn)行指紋圖譜相關(guān)方面的研究，對(duì)中藥材的質(zhì)量進(jìn)行整體描述和評(píng)價(jià)。對(duì)于提高中藥材質(zhì)量，促進(jìn)中藥現(xiàn)代化具有重要意義。

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（收稿日期：2022-11-04 編輯：陶希睿）