改良葛根芩連湯對蛋雞生產(chǎn)性能、腸道菌群及氮磷排泄率的影響

封曉慧，趙兵令，郗艷菊，李育明，李紅梅，朱永明

（1.河北維爾利動物藥業(yè)集團有限公司，石家莊 050227；2.河北省功能性飼料添加劑技術創(chuàng)新中心，石家莊 050200；3.石家莊市獸用功能性添加劑工程技術中心，石家莊 050200；4.河北省中獸藥產(chǎn)業(yè)技術研究院，石家莊 050200）

我隨著減抗替抗的大趨勢，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第194號和246號公告發(fā)布，實施藥物飼料添加劑退出行動，自2020年7月1日起，飼料生產(chǎn)企業(yè)停止生產(chǎn)含有促生長類藥物飼料添加劑（中藥類除外）的商品飼料，2018 年啟動實施獸用抗菌藥使用減量化行動。家禽養(yǎng)殖業(yè)迫切需要一種綠色、無殘留的添加劑應用于蛋雞腸道保健過程中，達到提高生產(chǎn)性能、改善蛋品質的功效，因此益生元、益生菌、中藥等飼料添加劑應運而生。葛根芩連湯源于張仲景的《傷寒論》[1]，主要由葛根、黃芩、黃連、甘草組成。本方劑主要具有解表清里之功效，常用來治療濕熱泄瀉及痢疾[2]。鄭晨曦[3]研究表明，葛根芩連湯通過對乳酸桿菌、擬桿菌等一些有益菌數(shù)量的提升，來降低腸道有害菌的豐富度，調節(jié)腸道菌群紊亂狀態(tài)，增強腸道免疫屏障功能。張儒奇等[4]研究表明，葛根芩連湯對大鼠腸道菌群有一定影響，主要通過參與碳水化合物、氨基酸等多種代謝途徑，改善腸道菌群結構，調節(jié)腹瀉，緩解腸道炎癥?，F(xiàn)代研究表明，改良葛根芩連湯及加減方，有提高免疫能力、改善腸道黏膜、抑制腸道炎癥、調節(jié)腸道菌群等作用[5]。

海蘭褐蛋雞具有飼料報酬高、產(chǎn)蛋多和成活率高的優(yōu)良特點，特別是雞蛋口感醇香、卵磷脂含量高等獨特特點，深受廣大消費者青睞。河北某動物藥業(yè)公司研發(fā)的復方中藥制劑“改良葛根芩連湯”是純中藥制劑，具有防治畜禽產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的腸炎腹瀉、消除不明原因引起的畜禽頑固性下痢和腸道疾病的功效。本試驗通過在飲水中添加不同水平的改良葛根芩連湯，探討其對海蘭褐蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質、腸道菌群、氮磷排泄率的影響，以期為改良葛根芩連湯在海蘭褐蛋雞生產(chǎn)中的應用提供參考依據(jù)。

1 試驗材料

1.1 試驗動物及添加劑

31 周齡健康狀況良好、體重及產(chǎn)蛋率相近的海蘭褐蛋雞400只，山東煙臺某蛋雞養(yǎng)殖場提供。

改良葛根芩連湯，由河北省某動物藥業(yè)公司提供，商品名為常安康，主要由葛根、馬齒莧、生白術、炙甘草、牛蒡子、黃芩、穿心蓮、功能性益生菌、黏膜修復劑等組成。產(chǎn)品中的主要成分及含量：葛根素3.0 mg·mL-1，黃芩苷6.4 mg·mL-1，甘草酸1.1 mg·mL-1，甘草苷0.4 mg·mL-1，丁酸梭菌1.0×106cfu·mL-1。

方解：葛根生津止渴，熱瀉熱痢，脾虛泄瀉；馬齒莧解毒消腫、消炎；生白術健脾益氣，燥濕利水；黃芩、穿心蓮清熱燥濕、瀉火解毒；功能性益生菌具有抑菌、抗菌功效；黏膜修復劑對黏膜有修復和還原作用；諸藥合用共奏消炎、止瀉和強脾胃之功效。

1.2 主要儀器

游標卡尺（型號為530-108），日本三豐公司產(chǎn)品；蛋品質測定儀（型號為EA-O1）、蛋殼強度測定儀（型號為EFR-01），以色列奧卡公司產(chǎn)品；電子計重秤（型號為JM-C15 kg），余姚市貝奇計量衡器有限公司產(chǎn)品；蛋殼厚度測定儀（型號為MA3），南京銘奧儀器設備有限公司產(chǎn)品；蛋黃分離器（型號為RB4001），廣州萊貝有限公司產(chǎn)品；紫外分光光度計（型號為T6新世紀），北京普析儀器有限公司產(chǎn)品；生化培養(yǎng)箱（型號為SPX-150B-Z），上海博迅實業(yè)有限公司產(chǎn)品；凱氏定氮儀（型號為ZDDN-11），浙江托普云農(nóng)科技有限公司產(chǎn)品。

2 試驗方法

2.1 試驗設計及日糧組成

選取31 周齡的海蘭褐蛋雞400 只，隨機分為4組（對照組、試驗1組、試驗2組和試驗3組），每組4個重復，每個重復25只雞。4組蛋雞飼喂相同基礎日糧，對照組正常飲水不添加任何藥物，3個試驗組分別在飲水中添加0.1%、0.2%和0.3%的改良葛根芩連湯，試驗分組情況詳見表1。預試期7 d，正試期14 d。飼糧營養(yǎng)水平參照NY/T 33—2004《雞飼養(yǎng)標準》和NRC（1994）標準配制，飼糧組成及營養(yǎng)水平見表2。

表1 試驗分組情況

表2 飼糧組成及營養(yǎng)水平（風干基礎）

2.2 飼養(yǎng)管理

試驗蛋雞采用三層全階梯式籠養(yǎng)，每籠2 只，日喂3 次（07: 00、11: 00 和16: 00），自由采食和飲水。采用人工光照+自然光照方式，光照強度為15 lx，光照時間為16 h，雞舍溫度控制在25 ℃左右。自然通風，人工清糞，常規(guī)免疫。開產(chǎn)后每天16:00撿蛋。

2.3 指標測定

2.3.1 生產(chǎn)性能

在相同管理條件下，以重復為單位記錄每天試驗蛋雞產(chǎn)蛋總數(shù)，并在試驗結束后計算平均產(chǎn)蛋率。統(tǒng)計各組每天的沙皮蛋、破殼蛋數(shù)量，試驗結束后計算每組平均的沙皮蛋和破殼蛋數(shù)量。記錄每天的采食量，計算平均日采食量。

平均日采食量=總采食量/（試驗天數(shù)×蛋雞數(shù)量）

平均產(chǎn)蛋率=產(chǎn)蛋數(shù)/蛋雞數(shù)量×100%

2.3.2 蛋品質

試驗結束時，每個重復隨機取20 枚雞蛋進行蛋品質測定。

采用游標卡尺測量雞蛋最大長徑和短徑，統(tǒng)計蛋形指數(shù)；使用蛋品質測定儀對蛋黃顏色進行評價；使用蛋黃分離器分離出蛋黃，并稱量蛋黃的重量，統(tǒng)計蛋黃重量；用電子計重秤稱量蛋殼的重量并統(tǒng)計；使用蛋殼強度測定儀測定蛋殼強度；用蛋殼厚度測定儀分別測量除去殼膜的蛋殼銳端、中部、鈍端3 個部位的蛋殼厚度，計算平均值。

哈氏單位=100×lg（濃蛋白的高度+7.56-1.7×平均蛋重0.37）

2.3.3 腸道菌群數(shù)量

在相同管理條件下，以重復為單位采集雞糞，并將采好的雞糞放入無菌試管中，-20 ℃保存。在無菌條件下采用涂布法進行檢測，試驗用1 g雞糞中所含細菌總數(shù)的對數(shù)表示[lg（cfu·g-1）]。通過檢測對照組、試驗組糞便中細菌總數(shù)、大腸桿菌數(shù)、沙門氏菌數(shù)、乳酸菌數(shù)，檢驗改良葛根芩連湯在調節(jié)腸道菌群平衡方面的作用。

2.3.4 腸道氮磷排泄率

在相同的管理條件下，試驗結束前3 d進行連續(xù)采樣，以每組的重復為單位，每24 h 收集一次雞糞（樣品中無其他雜物），將3 d 糞樣進行混合，混勻后按照四分法進行取樣100 g，100 g鮮糞中加入10%HCl 進行固氮，剩余糞便不加HCl，等待檢測其他指標。

糞樣于65 ℃條件下烘干至恒重，粉碎后制成風干樣品，依據(jù)康永剛等[6]的氮磷排泄率檢測方法，采用凱氏定氮法和分光光度法分別測定氮、磷的含量，統(tǒng)計匯總數(shù)據(jù)。

2.4 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2020軟件進行試驗數(shù)據(jù)整理，使用SPSS 20.0 軟件進行單因素方差分析，采用鄧凱氏法（Duncan's）進行數(shù)據(jù)多重比較，結果以“平均值±標準差”表示，P＜0.05表示差異顯著，P＞0.05表示差異不顯著。

3 結果與分析

3.1 改良葛根芩連湯對海蘭褐蛋雞生產(chǎn)性能的影響

試驗雞生產(chǎn)性能測定結果見表3。由表3 可知，水線中添加不同比例的改良葛根芩連湯對平均產(chǎn)蛋率和平均日采食量影響均不顯著（P＞0.05），試驗3 組平均日產(chǎn)蛋率最高，較對照組、試驗1 組、試驗2 組分別提高3.60%、0.64%、0.05%（P＞0.05）。使用不同水平的改良葛根芩連湯平均日沙皮蛋數(shù)逐漸降低，其中試驗3組平均日沙皮蛋數(shù)比對照組降低了28.07%（P＜0.05），試驗2組平均日沙皮蛋數(shù)比對照組降低了27.20%（P＜0.05），但是試驗3 組較試驗2 組變化差異不顯著（P＞0.05）?？紤]到用藥成本，推薦使用試驗2組的用量，即水線中添加0.2%的改良葛根芩連湯。

表3 改良葛根芩連對海蘭褐蛋雞生產(chǎn)性能的影響

3.2 改良葛根芩連湯對海蘭褐蛋雞蛋品質的影響

蛋品質測定結果見表4。由表4 可知，水線中加入不同比例改良葛根芩連湯對蛋重、蛋殼強度、蛋黃顏色、蛋殼厚度、蛋白高度的影響均不顯著（P＞0.05）；水線中添加改良葛根芩連湯對哈氏單位影響顯著，其中試驗3組增加最明顯，較對照組提高2.64%（P＜0.05），試驗2 組次之，較對照組提高2.19%（P＜0.05），但試驗3組較試驗2組變化差異不顯著（P＞0.05）。根據(jù)蛋品質檢測數(shù)據(jù)分析，推薦使用試驗2組用量，即水線中添加0.2%的改良葛根芩連湯。

表4 改良葛根芩連湯改對海蘭褐蛋雞蛋品質的影響

3.3 改良葛根芩連湯對海蘭褐蛋雞糞便中菌群的影響

改良葛根芩連對海蘭褐糞便中菌群數(shù)量的影響見表5。試驗組的大腸桿菌、沙門氏菌等有害菌數(shù)量相比對照組呈降低的趨勢，乳酸菌和雙歧桿菌數(shù)量呈上升的趨勢。與對照組相比，試驗組雞糞便中的大腸桿菌數(shù)分別降低了13.46%（P＞0.05）、25.70%（P＜0.05）和27.27%（P＜0.05），沙門氏菌數(shù)分別降低了25.04%（P＜0.05）、39.09%（P＜0.05）和38.80%（P＜0.05），乳酸菌數(shù)量分別提高了24.61%（P＜0.05）、35.42%（P＜0.05）和33.71%（P＜0.05），雙歧桿菌數(shù)量分別提高了23.36%（P＜0.05）、34.11%（P＜0.05）和33.33%（P＜0.05）。說明改良葛根芩連湯可以調節(jié)腸道內環(huán)境、調節(jié)腸道菌群平衡。

表5 糞便中菌群種類及數(shù)量的檢測結果lg(cfu·g-1)

3.4 改良葛根芩連湯對海蘭褐腸道氮磷排泄率的影響

糞便中氮磷排泄率檢測結果見表6。通過表6可以看出，試驗組的氮磷排泄率低于對照組，其中氮排泄率存在顯著差異，試驗2組、試驗3組較對照組分別降低了13.71%（P＜0.05）、14.28%（P＜0.05）；磷排泄率呈下降趨勢，但較對照組下降的差異不顯著（P＞0.05）。說明水線中加入改良葛根芩連湯能在一定程度上促進蛋雞對營養(yǎng)物質的吸收，尤其是含氮營養(yǎng)物質，減少氮磷的排放，降低對環(huán)境的污染。

表6 糞便中氮磷排泄率的檢測結果%

4 討 論

4.1 改良葛根芩連湯對海蘭褐蛋雞平均蛋重及產(chǎn)蛋率的影響

對于蛋雞養(yǎng)殖行業(yè)，提高產(chǎn)蛋率可以獲得最直接的經(jīng)濟效益，提升海蘭褐蛋雞的生產(chǎn)性能和蛋品質是提高養(yǎng)殖效益的關鍵。中草藥飼料添加劑對海蘭褐蛋雞的蛋品質有一定影響，蛋重、哈氏單位、蛋黃顏色、蛋比重有顯著提高[7]。葛根素在抗氧化、提高免疫力方面有很大的作用，能夠提高雞的生長性能[8]。王建[9]研究發(fā)現(xiàn)，在日糧中添加50 g·kg-1葛根粉，較未添加組產(chǎn)蛋率提高4.81%，平均蛋重提高5.46%，說明葛根粉能夠顯著提高林地海蘭褐蛋雞的生產(chǎn)性能。梁麗芬等[10]研究表明，菌酶協(xié)同發(fā)酵通過微生物將大分子物質分解為小分子，更有利于營養(yǎng)物質的吸收，提高生產(chǎn)性能，提高飼料的利用率和營養(yǎng)價值。高靖等[11]研究表明，葛根中的葛根異黃酮有雌激素樣作用，能促進子宮增重。本試驗中，在水線中添加0.2%的改良葛根芩連湯，能顯著降低沙皮蛋數(shù)量，對平均日采食量和產(chǎn)蛋率有一定影響，但不顯著。這說明中藥和益生菌具有協(xié)同作用，能夠提高雞的產(chǎn)蛋率和降低沙皮蛋數(shù)，可在一定程度上提高產(chǎn)蛋性能。

4.2 改良葛根芩連湯對海蘭褐蛋雞蛋品質的影響

雞蛋的外殼品質和蛋黃顏色是顯示蛋品質的重要指標之一，也是消費者較為關注的指標，蛋雞產(chǎn)蛋期的生產(chǎn)性能和蛋品質會受很多因素的影響，例如環(huán)境、營養(yǎng)等。有研究表明，中草藥中除含有多種氨基酸、維生素、蛋白質等有效成分及營養(yǎng)成分外，還富有鈣、磷等礦物質、植物色素及多種微量元素[12-13]。營養(yǎng)成分有助于蛋白質沉淀；礦物質可以轉化為蛋殼成分，可以提升蛋殼質量；植物色素可以通過機體吸收后轉移到卵巢中，改善蛋黃顏色。李鵬升[14]研究表明，日糧中添加0.2%的中草藥飼料添加劑，對蛋品質有顯著提高。在水線中添加0.2%的改良葛根芩連湯對哈氏單位有明顯提高，對雞蛋品質有一定改善作用。

4.3 改良葛根芩連湯對海蘭褐蛋雞腸道菌群的影響

機體對營養(yǎng)物質的吸收和消化主要在胃腸道中進行，腸道中的微生物能夠較好地消化一些營養(yǎng)物質，促進生長和發(fā)育，并且能夠對有害菌進行抵御，從而提高免疫水平[15]；宋瓊莉等[16]研究表明，丁酸鈉、黃芪素和復合益生菌聯(lián)合添加替代抗生素，結果表明，在飼糧中添加500 mg·kg-1丁酸鈉、500 mg·kg-1黃芪素和20 mg·kg-1復合益生菌，改善了寧都黃雞小腸的結構，維持腸道的平衡，促進了腸道中的菌群平衡分布和生長。顧艷麗等[17]研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵中藥對禽腸道菌群結構有調節(jié)作用，可促進有益菌的生長，降低有害菌的滋生。葛根素對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等有害菌有很好的抑制作用，對在禽上引起腹瀉的大腸桿菌有較好的抑制作用和抑菌效果[18]；有研究發(fā)現(xiàn)，200 μg·mL-1葛根素和1 μg·mL-1黃芩苷對大腸桿菌有很強的抑制作用，能降低大腸桿菌的數(shù)量，可抑制大腸桿菌外毒素的分泌，降低黏附性，保護腸道結構[19]。

4.4 改良葛根芩連湯對海蘭褐蛋雞氮磷排泄的影響

氨氣是對蛋雞危害較嚴重的一種有害氣體，由于雞的消化道較短，飼糧的消化吸收有限，大部分營養(yǎng)物質未被機體消化吸收而直接排出體外，其中含有糖類物質、脂肪、蛋白質、礦物質、維生素及其代謝產(chǎn)物等，組成的復雜化合物，尤其以蛋白質含量最高。馬曉婷等[20]研究表明，部分未吸收的蛋白質會以氨氣和硫化氫等氣體為主的代謝產(chǎn)物排泄體外，從而污染雞舍空氣，日糧中添加乳酸菌可以降低有害氣體的排放，提高日糧轉化率；元娜等[21]研究了復合微生態(tài)制劑對蛋種雞舍內氨氣濃度、養(yǎng)分吸收率及腸道菌群的影響，結果表明試驗期末試驗組雞舍內氨氣濃度比對照組顯著下降。謝謙等[22]研究表明，肉雞飼糧中添加蛋白酶和益生菌復合制劑能夠顯著提高粗蛋白利用率，提高腸道菌群中有益菌的數(shù)量，有降低糞便中氨氣含量的趨勢。趙玉娥[23]研究表明，微生物發(fā)酵飼料可以改善雞腸道菌群平衡，提高飼料的轉化率，減少氮磷的排泄率。本試驗發(fā)現(xiàn)，改良葛根芩連湯可以顯著降低蛋雞糞中氮磷排泄率，與上述結果基本一致。有可能是飼料中大分子物質被酶解為易被吸收的小肽、氨基酸等，降低了腸道中未消化的蛋白質含量，減少了氨氣和有毒物質在大腸內的產(chǎn)生。申慧敏等[24]研究發(fā)現(xiàn)，益生菌通過降低腸道pH，豐富腸道菌群，促進氮沉積以及降低糞尿中的蛋白質含量，從而減少氨氣排量。同時，結合本試驗中氮的排泄率檢測結果分析，明顯表明益生菌和中藥制劑有協(xié)同作用，改良葛根芩連湯中添加益生菌促進蛋白質的吸收，降低氮磷的排泄，從而降低氨氣的排放，減少對環(huán)境的污染。

5 結 論

綜上所述，推薦在海蘭褐水線中添加0.2%的改良葛根芩連湯，能夠顯著提高海蘭褐蛋雞的消化吸收，降低氮磷排泄率，改善腸道益生菌群、產(chǎn)蛋率、蛋品質，益生菌通過競爭占位、免疫調節(jié)、抗菌蛋白抑制或殺滅腸道內的病原菌、黏膜修復因子修復受損腸道黏膜，促進對飼料的消化與利用。