燕窩中結(jié)合唾液酸調(diào)節(jié)5種益生菌生長以及孕婦腸道菌群組成的研究

魯佩涵,吳劍榮*,柳訓(xùn)才,華玉蓉,詹曉北,高敏杰,張洪濤

1(糖化學(xué)與生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(江南大學(xué)),江蘇 無錫,214122)2(廈門燕之屋絲濃食品有限公司燕窩研究院,福建 廈門,361000)3(江南大學(xué)附屬醫(yī)院,江蘇 無錫,214122)

唾液酸是一類神經(jīng)氨酸衍生物的總稱,廣泛存在于哺乳動(dòng)物組織、乳汁和卵類中,主要以低聚糖、糖蛋白或糖脂的形式存在[1]。其中N-乙酰神經(jīng)氨酸(Neu5Ac)和N-羥乙酰神經(jīng)氨酸(Neu5Gc)是最常見的存在形式,主要有抗炎、協(xié)助神經(jīng)發(fā)育和抑制病菌等作用[2]。另外,人類生存所需的動(dòng)物源膳食如乳品、禽蛋和肉類等含有豐富的唾液酸,這類唾液酸多以結(jié)合態(tài)的形式存在,主要通過α2-6/α2-3糖苷鍵連接在半乳糖/半乳糖胺上,如燕窩糖蛋白、卵黏蛋白、酪蛋白糖巨肽、3′-唾液酸乳糖等[3]。

燕窩(edible bird’s nest, EBN)是金絲燕及多種同屬燕類利用唾液分泌物建造的巢穴,經(jīng)過處理后可以作為食品。中醫(yī)理論認(rèn)為燕窩具有補(bǔ)中益氣、入胃補(bǔ)脾和化痰止咳等功能[4]。許多研究表明燕窩具有促進(jìn)大腦發(fā)育、改善記憶[5]和抗病毒[6]等功效。燕窩的主要成分為富含唾液酸的黏蛋白,唾液酸含量占干重的7%～15%,不同產(chǎn)地來源的燕窩唾液酸含量差別較大[7]。

女性在妊娠期會(huì)通過自身的代謝對(duì)胎兒的生長發(fā)育產(chǎn)生影響。孕婦血液中的唾液酸會(huì)隨著妊娠階段的不同有所改變,研究表明母體會(huì)合成唾液酸并通過胎盤提供給7～9個(gè)月的胎兒,以供其生長發(fā)育所需[8]。BRIESE等[9]發(fā)現(xiàn)母體是胎兒唾液酸的主要來源,對(duì)胎兒在妊娠晚期的發(fā)育起重要作用。研究表明,攝入外源唾液酸可以提高妊娠期女性血液中唾液酸含量[10],而燕窩經(jīng)過消化后糖鏈結(jié)構(gòu)的改變可能對(duì)人類,特別是妊娠期女性的腸道健康產(chǎn)生影響。

腸道微生物對(duì)宿主健康至關(guān)重要[11]。腸道微生物可以發(fā)酵糖類物質(zhì)產(chǎn)生短鏈脂肪酸(short chain fatty acids, SCFAs),主要包括乙酸、丙酸和丁酸,它們對(duì)機(jī)體生理代謝的調(diào)節(jié)起重要作用[12]。益生菌是指對(duì)宿主有益并有利于腸內(nèi)菌群生態(tài)平衡的活性微生物,在改善腸道環(huán)境,參與免疫調(diào)節(jié)等方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值[13]。本研究以富含唾液酸的燕窩為研究對(duì)象,通過酸處理切除燕窩糖蛋白末端唾液酸(acidolysis bird’s nest,ABN)為對(duì)照,分別比較EBN、ABN和Neu5Ac的功能,探究燕窩糖蛋白末端唾液酸完整性對(duì)其抗氧化活性的影響,以及對(duì)益生菌生長和孕婦腸道菌群調(diào)節(jié)的作用。

1 材料與方法

1.1 菌株與培養(yǎng)基

短雙歧桿菌FWX346、動(dòng)物雙歧桿菌ZJTZ1M2、干酪乳桿菌FJSSZ4L6、鼠李糖乳桿菌FFJLY7L1、嗜黏蛋白阿克曼黏細(xì)菌(Akkermansiamuciniphila),江南大學(xué)(中國無錫)食品微生物菌種保藏中心;燕窩樣品,廈門燕之屋生物工程有限公司,將即食的燉煮燕窩用去離子水沖洗過濾3次,收集沉淀凍干制成EBN凍干粉備用。

EBN脫唾液酸的方法參照文獻(xiàn)[14],略作修改。將凍干得到的EBN粉末以1 mol/L鹽酸在37 ℃下處理12 h,再次清洗過濾,收集沉淀,得到ABN作為對(duì)照。

MRS培養(yǎng)基(g/L):胰蛋白胨10、酵母提取物5、葡萄糖3、CH3COONa 5、K2HPO42、MnSO40.2、MgSO40.2、CaCl20.45、L-半胱氨酸0.5、檸檬酸銨2和1 mL吐溫-80,pH 6.5。

基礎(chǔ)營養(yǎng)培養(yǎng)基(g/L):蛋白胨2、酵母提取物2、NaCl 0.1、KH2PO40.04、K2HPO40.04、NaHCO32、膽鹽0.5、L-半胱氨酸鹽酸鹽0.5、MgSO40.01、CaCl20.025、維生素K 0.002、氯化血紅素0.025、2 mL 吐溫-80,pH 6.5。

1.2 體外模擬消化

1.2.1 模擬唾液消化

將KCl(1.126 g/L)、NaHCO3(1.143 g/L)、NaCl(0.12 g/L)、CaCl2(0.167 g/L)和α-淀粉酶(150 U/mL)溶解于去離子水中制備唾液消化液。然后,以1∶1體積比例分別與EBN、ABN溶液在EP管中混合,在80 r/min、37 ℃水浴振蕩。消化15 min后,在100 ℃水中煮沸10 min滅酶。

1.2.2 模擬胃液消化

將人工胃液與模擬唾液消化液按1∶1體積比混合,使用0.1 mol/L鹽酸將所得溶液的pH值調(diào)節(jié)至2.0,在80 r/min、37 ℃水浴振蕩。消化4 h后,在100 ℃的水中煮沸10 min滅酶。

1.2.3 模擬小腸液消化

將上述得到的胃消化液用1 mol/L的NaHCO3溶液將pH值調(diào)為7.0,再向其中加入等體積的人工小腸液,80 r/min、37 ℃水浴振蕩。消化6 h后,在100 ℃的水中煮沸10 min滅酶,得到最終的消化液。

1.3 唾液酸的檢測方法

參考文獻(xiàn)[15]的方法使用間苯二酚-鹽酸法測定唾液酸的含量。

1.4 抗氧化活性的檢測方法

1.5 雙歧桿菌和乳桿菌的培養(yǎng)方法

在厭氧培養(yǎng)箱進(jìn)行單個(gè)細(xì)菌的體外培養(yǎng)。在MRS培養(yǎng)基中激活菌株。將EBN和ABN作為碳源以5 g/L的終質(zhì)量濃度、Neu5Ac和菊粉作為對(duì)照以0.5 g/L的終質(zhì)量濃度取代MRS培養(yǎng)基中的葡萄糖。不含葡萄糖的MRS作為空白。每組進(jìn)行3個(gè)平行,以10%(體積分?jǐn)?shù))的接種量于37 ℃培養(yǎng)24 h,使用紫外分光光度計(jì)測量光密度(OD600nm)。

1.6 SCFAs的氣相色譜檢測方法

使用GC進(jìn)行測定,HP-INNOWAX色譜柱,Agilent-7890A氣相色譜儀。取1 mL離心后的發(fā)酵上清液,添加終濃度為1 mmol/L的2-甲基丁酸作為內(nèi)標(biāo),再向其中添加250 μL濃鹽酸和1 mL乙醚,混勻。收集有機(jī)層,使用0.22 μm的有機(jī)濾膜過濾雜質(zhì)后備用。以1∶20的分流比將5 μL樣品注入儀器,進(jìn)樣器溫度220 ℃,檢測器溫度250 ℃。使用N2作為載氣,流速為1.5 mL/min。計(jì)算SCFAs的含量。

1.7 志愿者和糞便的收集

使用無菌的糞便收集管從3名適齡未妊娠健康女性(食用中國傳統(tǒng)膳食,年齡20～30歲)志愿者收集健康女性的糞便樣本,從無錫市江南大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科的6名孕晚期孕婦志愿者收集孕晚期孕婦的糞便樣本(江南大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)號(hào):LS2021066),并且收集了所有志愿者的書面知情同意書。主要收集的信息包括年齡和孕周(表1),按照年齡差距分為2組,組Ⅰ的年齡較小,組Ⅱ的年齡較高。參與者在糞便樣本捐贈(zèng)前至少2個(gè)月沒有服用益生菌或益生元,并且沒有胃腸道疾病史。收集的糞便樣品立即保存在厭氧培養(yǎng)袋中,置于冰盒,在6 h內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室作下一步處理。

表1 糞便捐贈(zèng)者的基本信息Table 1 Basic information of feces donors

1.8 健康女性和不同年齡段孕晚期孕婦糞便微生物的體外發(fā)酵

將EBN和ABN消化液作為碳源以5 g/L的終質(zhì)量濃度、唾液酸單體(Neu5Ac)作為對(duì)照以0.5 g/L的終質(zhì)量濃度添加到基礎(chǔ)營養(yǎng)培養(yǎng)基中。將每組3個(gè)人的糞便樣本等量混合,并用無菌的生理鹽水梯度稀釋,無菌的4層紗布過濾。將糞便稀釋液以10%的體積分?jǐn)?shù)轉(zhuǎn)接到培養(yǎng)基中?；A(chǔ)營養(yǎng)培養(yǎng)基作為空白組,每組3個(gè)平行,37 ℃培養(yǎng)24 h。分別收集0 h和24 h的發(fā)酵液樣品。

1.9 糞便菌群組成的檢測方法

使用CTAB方法從樣品中提取細(xì)菌基因組DNA,帶Barcode的特異引物擴(kuò)增16S rRNA基因的V3～V4區(qū)。使用TruSeq-DNA PCR-Free樣品制備試劑盒生成測序文庫并進(jìn)行測序。根據(jù)Barcode序列和PCR擴(kuò)增引物序列從下機(jī)數(shù)據(jù)中拆分出各樣本數(shù)據(jù),進(jìn)行拼接和過濾處理,得到的有效數(shù)據(jù)利用Uparse算法聚類成為OTUs。對(duì)OTUs序列進(jìn)行物種注釋,用Mothur方法與Silva 138.1的SSUrRNA數(shù)據(jù)庫進(jìn)行物種注釋分析,獲得分類學(xué)信息并分別在各個(gè)分類水平統(tǒng)計(jì)各樣本的群落組成。使用Qiime軟件(Version 1.9.1)計(jì)算α多樣性指數(shù)等。

1.10 統(tǒng)計(jì)分析

所有樣品均設(shè)置3個(gè)平行,使用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。使用單因素方差分析數(shù)據(jù),在P<0.05時(shí)確定具有顯著差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 燕窩中結(jié)合唾液酸對(duì)其抗氧化活性的影響

a-DPPH自由基清除率;b-·OH清除率;清除率;d-還原力測定圖1 抗氧化活性Fig.1 Antioxidant activity注:維生素C;▲EBN:燕窩;▼ABN:酸處理燕窩;62N-乙酰神經(jīng)氨酸

2.2 燕窩中結(jié)合唾液酸對(duì)雙歧桿菌和乳桿菌生長的影響

雙歧桿菌和乳桿菌是受到廣泛認(rèn)可的益生菌,有益于宿主健康。例如雙歧桿菌在免疫增強(qiáng)、改善胃腸道功能和抵抗病原菌等方面發(fā)揮著關(guān)鍵的作用[18]。我們進(jìn)一步研究EBN、ABN和Neu5Ac對(duì)雙歧桿菌和乳桿菌生長的影響,結(jié)果如圖2所示。在發(fā)酵24 h后,EBN和Neu5Ac顯著增加短雙歧桿菌的生物量分別至0.97±0.03和0.85±0.03,顯著高于ABN和菊粉組。這可能是由于雙歧桿菌的生長與代謝來自多種多聚寡糖和糖蛋白的復(fù)雜碳水化合物的能力有關(guān)。CHEN等[19]發(fā)現(xiàn)在人腸道菌群體外發(fā)酵過程中添加唾液酸化免疫球蛋白G能夠顯著促進(jìn)雙歧桿菌的生長。短雙歧桿菌具有去糖基化糖蛋白和利用聚糖作為碳源的能力,還可以通過胞外唾液酸酶從低聚糖中釋放唾液酸[20]。因此,脫去唾液酸的ABN無法像EBN那樣顯著改善短雙歧桿菌的生長。EBN和ABN顯著增加了干酪乳桿菌和動(dòng)物雙歧桿菌的生物量,空白、菊粉和Neu5Ac組之間的差異不大?？赡苁怯捎谶@2種益生菌可以利用燕窩中的其他營養(yǎng)成分導(dǎo)致的。鼠李糖乳桿菌在添加了菊粉的培養(yǎng)基中生長最好,EBN、ABN和Neu5Ac組則沒有顯著差異。

a-短雙歧桿菌;b-動(dòng)物雙歧桿菌;c-干酪乳桿菌;d-鼠李糖乳桿菌圖2 燕窩中結(jié)合唾液酸對(duì)雙歧桿菌和乳桿菌生物量的影響Fig.2 Effect of bound sialic acid of EBN on the growth of Bifidobacterium and Lactobacillus注:圖中不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05),下同。

SCFAs對(duì)人體健康起重要作用,如乙酸是結(jié)腸上皮細(xì)胞的能量來源,丙酸在降低脂肪的合成及血清膽固醇水平方面具有關(guān)鍵作用,丁酸可以通過刺激抗菌肽的生成改善腸道屏障[21]。檢測在發(fā)酵24 h內(nèi)積累SCFAs的濃度,如圖3所示。4株益生菌在體外發(fā)酵EBN過程中分別產(chǎn)生(83.22±16.46)、(106.76±6.09)、(73.09±1.78)、(101.4±4.58) mmol/L的乙酸,顯著高于其他組(P<0.05),2株乳桿菌產(chǎn)生的丙酸總體高于雙歧桿菌。短雙歧桿菌、動(dòng)物雙歧桿菌和鼠李糖乳桿菌在體外發(fā)酵EBN過程中產(chǎn)生的丁酸濃度顯著高于其他組(P<0.05)?？梢钥闯?燕窩能夠促進(jìn)雙歧桿菌和乳桿菌的生長,糖鏈結(jié)構(gòu)完整的EBN可以顯著促進(jìn)能夠利用唾液酸的益生菌生長(如短雙歧桿菌)并增加益生菌產(chǎn)生有機(jī)酸的量以改善腸道環(huán)境,而脫去唾液酸的ABN則無此效果。

a-乙酸;b-丙酸;c-丁酸圖3 燕窩中結(jié)合唾液酸對(duì)雙歧桿菌和乳桿菌產(chǎn)SCFAs的影響Fig.3 Effect of bound sialic acid of EBN on the production of SCFAs by Bifidobacterium and Lactobacillus

2.3 燕窩中結(jié)合唾液酸對(duì)阿克曼黏細(xì)菌生長的影響

嗜黏蛋白阿克曼黏細(xì)菌(Akkermansiamuciniphila)被認(rèn)為是一種很有應(yīng)用潛力的候選益生菌,具有多種對(duì)宿主有益的活性功能。它在體內(nèi)的豐度與結(jié)腸炎、Ⅱ型糖尿病[22]、肥胖、動(dòng)脈粥樣硬化[23]等諸多疾病呈負(fù)相關(guān),可以改善脂代謝、調(diào)節(jié)免疫、改善腸道屏障[24]等。如圖4-a所示,在體外發(fā)酵過程中,EBN和菊粉都可以很好的促進(jìn)A.muciniphila的生長,在24 h內(nèi)細(xì)菌生物量的生長顯著高于ABN和Neu5Ac組(P<0.05)。檢測A.muciniphila在發(fā)酵24 h積累SCFAs的濃度,在體外發(fā)酵過程中EBN組的乙酸濃度在24 h內(nèi)顯著高于ABN組(P<0.05),丙酸和丁酸產(chǎn)量較少且差別不大。A.muciniphila的特征是高度適應(yīng)在黏蛋白降解物中生存,EBN中豐富的唾液酸黏蛋白含量也印證了這一點(diǎn),但是破壞了末端唾液酸的ABN則沒有顯著促進(jìn)A.muciniphila生長的能力,據(jù)此我們推測,EBN末端唾液酸是發(fā)揮其生物活性的重要結(jié)構(gòu)組成。

a-細(xì)菌生物量;b-乙酸;c-丙酸;d-丁酸圖4 燕窩中結(jié)合唾液酸對(duì)阿克曼黏細(xì)菌生物量和產(chǎn)SCFAs的影響Fig.4 Effect of bound sialic acid of EBN on the growth and the production of SCFAs of Bifidobacterium and Lactobacillus

2.4 燕窩中結(jié)合唾液酸對(duì)健康女性和孕婦腸道菌群的影響

2.4.1 燕窩中結(jié)合唾液酸對(duì)糞便微生物有機(jī)酸生成的影響

腸道微生物在結(jié)腸發(fā)酵常常伴隨著SCFAs的產(chǎn)生,這些有機(jī)酸具有抑制有害病原體生長、調(diào)節(jié)上皮屏障功能、降低結(jié)腸pH值和預(yù)防結(jié)直腸癌等作用[25]。用健康女性和孕婦的糞菌發(fā)酵EBN、ABN和Neu5Ac,SCFAs生成結(jié)果如圖5所示。與健康女性組相比,EBN在孕婦組產(chǎn)生的乙酸比其他組的差異更加顯著(P<0.05)。妊娠期的女性易發(fā)妊高癥,乙酸鹽能夠誘導(dǎo)血管舒張和降低血壓[26],乙酸積累量的增加對(duì)孕婦健康有益。健康組、孕婦組Ⅰ和孕婦組Ⅱ發(fā)酵EBN的丙酸積累量分別為(2.16±0.34)、(5.73±0.93)、(9.72±0.25) mmol/L。丙酸經(jīng)結(jié)腸吸收后由肝臟代謝用作能源,還能降低血糖和胰島素水平[27],有助于妊娠期女性調(diào)節(jié)血糖,降低妊娠期糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)。

a-乙酸;b-丙酸;c-丁酸圖5 燕窩中結(jié)合唾液酸在體外糞菌發(fā)酵中SCFAs的影響Fig.5 Effect of bound sialic acid of EBN in vitro fecal bacteria fermentation on the production of SCFAs

2.4.2 燕窩中結(jié)合唾液酸對(duì)健康女性和孕婦糞便菌群組成的影響

人體腸道菌群結(jié)構(gòu)容易受飲食、年齡、生活方式及藥物等因素影響。如CHANG等[28]研究發(fā)現(xiàn)靈芝多糖能夠逆轉(zhuǎn)肥胖小鼠腸道微生態(tài)失衡,促進(jìn)腸道屏障完整,降低厚壁菌門與擬桿菌門間的比值。本研究通過16S rRNA高通量測序探究EBN、ABN和Neu5Ac對(duì)體外發(fā)酵過程中糞便菌群變化的影響,結(jié)果如圖6所示。

a-健康組門水平;b-健康組屬水平;c-孕婦組Ⅰ門水平;d-孕婦組Ⅰ-屬水平;e-孕婦組Ⅱ-門水平;f-孕婦組Ⅱ-屬水平圖6 燕窩中結(jié)合唾液酸在體外糞菌發(fā)酵中對(duì)菌群組成的影響Fig.6 Changes in bacterial composition during in vitro fecal fermentation of bound sialic acid of EBN

在門水平上,與空白和Neu5Ac組相比,EBN和ABN在健康女性和孕婦的糞菌發(fā)酵中均可顯著地增加厚壁菌門(Firmicutes)和擬桿菌門(Bacteroidetes)的相對(duì)豐度,降低變形菌門(Proteobacteria)的相對(duì)豐度。在屬水平上,與空白和Neu5Ac相比,在EBN和ABN兩組燕窩發(fā)酵中擬桿菌屬(Bacteroides)、糞桿菌屬(Faecalibacterium)和糞球菌屬(Coprococuus)的相對(duì)豐度更高,而空白組和Neu5Ac組中大腸桿菌-志賀氏菌屬(Escherichia-Shigella)、腸桿菌屬(Enterobacter)和克雷伯氏菌屬(Klebsiella)的相對(duì)豐度較高。糞桿菌屬(Faecalibacterium)是丁酸的重要產(chǎn)生者之一,具有抗炎作用,能夠維持細(xì)菌酶的活性,保護(hù)消化系統(tǒng)免受腸道病原體的侵害[29]。糞球菌屬(Coprococcus)是厚壁菌門毛螺菌科重要成員,是腸道重要的菌屬,積極發(fā)酵碳水化合物,和Faecalibacterium一樣可以產(chǎn)生丁酸。糞球菌可用作評(píng)估人體胃腸道健康狀況的微生物生物標(biāo)志物,可能有助于抑制免疫反應(yīng),降低過敏反應(yīng)的嚴(yán)重程度[30]。2組燕窩均有效抑制了以上病原菌的富集,孕婦組的EBN在富集有益菌和抑制病原菌上的效果優(yōu)于ABN組。

LEfSe分析顯示了EBN、ABN、Neu5Ac和空白之間具有顯著差異的菌群(LDA值>4),如圖7所示。

在健康女性組,擬桿菌科(Bacteroidales)和擬桿菌屬(Bacteroides)分別在EBN和ABN發(fā)酵中顯著富集。擬桿菌科和擬桿菌屬擁有強(qiáng)大的碳水化合物利用系統(tǒng),可以分解利用腸道中的糖類物質(zhì)產(chǎn)生乙酸鹽和丙酸鹽等,改善腸道環(huán)境,是潛在的益生菌[31]?？瞻捉M會(huì)在發(fā)酵過程中顯著增加腸桿菌屬(Enterobacter)和克雷伯氏菌屬(Klebsiella)等致病菌的豐度,而EBN組可以在不同水平顯著富集擬桿菌,同時(shí),在健康女性組還可增加乳桿菌目(Lactobacillales)和普雷沃氏菌屬(Prevotalla_9),在孕婦組Ⅰ可以富集梭菌綱(Closteridia)和顫螺菌目(Oscillospirales),在孕婦組Ⅱ也可富集梭菌綱(Closteridia)和厚壁菌門(Firmicutes)。結(jié)果顯示,空白組會(huì)增加病原菌的生長,而EBN對(duì)以上主要病原菌有明顯抑制作用。

研究顯示,人或動(dòng)物體內(nèi)的黏蛋白具有抵御微生物入侵的作用,是維持包括腸道在內(nèi)的消化系統(tǒng)健康的重要保障[32]。如酪蛋白糖巨肽是一種含有唾液酸的活性糖基磷酸肽,具有多樣化的生物功能活性,如抑制細(xì)菌與病毒黏附、促進(jìn)腸道益生菌增殖等[33]。卵黏蛋白主要存在于禽蛋中,是一種糖基化程度很高的蛋白質(zhì),有研究發(fā)現(xiàn)其對(duì)大腸桿菌和幽門螺桿菌有顯著抑制作用[34]。燕窩是富含唾液酸的優(yōu)質(zhì)外源黏蛋白,本研究發(fā)現(xiàn)EBN在抗氧化、促進(jìn)益生菌生長和抑制病原菌富集等方面具有顯著效果,其末端唾液酸在被破壞后,生物活性明顯下降。因此,黏蛋白糖鏈結(jié)構(gòu)的完整性對(duì)其生理活性的影響值得進(jìn)一步探究。

3 結(jié)論

本文主要研究了燕窩唾液酸糖蛋白經(jīng)過消化后的生理功能,驗(yàn)證了EBN經(jīng)過消化后具有良好的抗氧化活性,EBN糖鏈末端唾液酸的缺失會(huì)導(dǎo)致其抗氧化活性有所降低。EBN可以改善乳桿菌和雙歧桿菌的生長情況,對(duì)于能夠分解利用Neu5Ac的菌株如短雙歧桿菌,ABN與EBN相比在促進(jìn)細(xì)菌生長和積累有機(jī)酸方面有明顯差異。EBN還可以顯著促進(jìn)嗜黏蛋白阿克曼黏細(xì)菌(A.muciniphila)的生長。通過健康女性和孕婦糞便的體外發(fā)酵驗(yàn)證了EBN對(duì)腸道菌群的影響:相比健康女性的糞菌結(jié)構(gòu),EBN能夠降低孕晚期孕婦糞菌中大腸桿菌-志賀氏菌屬(Escherichia-Shigella)、腸桿菌屬(Enterobacter)和克雷伯氏菌屬(Klebsiella)等致病菌的相對(duì)豐度,增加潛在益生菌擬桿菌屬(Bacteroides)的相對(duì)豐度,提高糞桿菌屬(Faecalibacterium)和糞球菌屬(Coprococuus)等產(chǎn)SCFAs菌的相對(duì)豐度。ABN和Neu5Ac在抗氧化、改善益生菌生長和調(diào)節(jié)腸道菌群等生理活性與EBN存在明顯差距,EBN中結(jié)合唾液酸糖鏈結(jié)構(gòu)的完整性對(duì)其生物活性具有重要意義。