余甘子凍干粉對急、慢性高尿酸血癥小鼠的降尿酸及肝腎保護(hù)作用

李瑞婷，何 維，宋 賀，謝小亭，吳 杰，姜 燕,*

（1.大理大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，云南 大理 671000；2.川北醫(yī)學(xué)院，四川 南充 637000；3.川北醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院口腔科，四川 南充 637100；4.賓川佳泓園藝有限責(zé)任公司，云南 賓川 671600）

高尿酸血癥（hyperuricemia，HUA）是一種由嘌呤代謝異常引起的以血清尿酸水平異常升高為特征的常見代謝性疾病[1]，被列為繼高血壓、高脂血癥和高血糖之后的“第四高”疾病[2-3]。研究表明，HUA作為疾病獨立危險因素，與痛風(fēng)[4]、心血管疾病[5]、糖尿病[6]、高血壓[7]和腎損傷[8]等疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。目前，HUA的治療以飲食調(diào)節(jié)和藥物治療為主，西藥治療主要為黃嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XOD）抑制劑、尿酸鹽轉(zhuǎn)運體抑制劑和尿酸酶等[9]。然而西藥治療存在較多的不良反應(yīng)和顯著的副作用，如腎功能障礙、肝損傷、胃腸道刺激、皮疹和過敏等[10-11]。因此，通過膳食調(diào)節(jié)或?qū)ふ野踩行У奶烊唤的蛩嵛镔|(zhì)對于預(yù)防和治療HUA及其相關(guān)疾病具有重要的臨床意義。

余甘子（Phyllanthus emblicaL.）又稱滇橄欖，屬大戟科葉下珠屬[12]，是一種藥食同源植物[13]?，F(xiàn)代藥理學(xué)分析表明，余甘子果實具有抗菌[14]、抗氧化[15]、抗炎[16]、抗糖尿病[17]、抗衰老[18]、保肝[19]、降血壓[20]、降血脂[21]等作用。余甘子主要化學(xué)成分為鞣質(zhì)類、酚酸類、黃酮類、萜類、甾醇類、維生素類、揮發(fā)油類[22]。研究證明黃酮類、酚酸類、萜類、生物堿類等化合物具有良好的降尿酸作用[23]。李楠等[24]研究發(fā)現(xiàn)余甘子葉提取物羥基酪醇具有較強的抗氧化活性可緩解CS2致小鼠睪丸組織損傷。張炳森等[25]研究發(fā)現(xiàn)橄欖果汁凍干粉中胡椒堿與木犀草素可能具有一定的降尿酸作用。Tao Haolin等[26]研究表明余甘子醇提物可以用于治療大鼠的急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎。符曉暉[27]研究發(fā)現(xiàn)余甘子總酚可能通過抑制XOD活性而發(fā)揮降尿酸作用。余甘子可能具有抗HUA的功效，但對于其能否在體內(nèi)發(fā)揮抑制XOD和腺苷脫氨酶（adenosine deaminase，ADA）活性及其降尿酸作用潛在機(jī)制的研究尚有限。

課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，‘ 盈玉’‘熱農(nóng)1號’和野生余甘子品種中，野生余甘子藥用價值最高[28]。故本實驗以野生余甘子為研究對象，將其冷凍干燥、低溫研磨得到凍干粉，探討野生余甘子凍干粉（freeze-dried powder ofPhyllanthus emblicaL.，PEFP）對次黃嘌呤引起的急性HUA和氧嗪酸鉀誘導(dǎo)的慢性HUA小鼠的降尿酸及肝腎保護(hù)作用，以期為食藥物質(zhì)、功能食品及天然降尿酸藥物的開發(fā)提供實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

成熟野生余甘子鮮果由云南佳泓園藝有限責(zé)任公司提供。

KM雄性SPF級小鼠（體質(zhì)量18～22 g） 湖南斯萊克景達(dá)實驗動物有限公司，生產(chǎn)許可證號：SCXK（湘）2019-0004。經(jīng)大理大學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，批號：2021-P2-054。

別嘌醇（allopurinol，ALLO）（批號：315-30-0）、氧嗪酸鉀（批號：2207-75-2）、次黃嘌呤（批號：68-94-0）上海麥克林生化科技有限公司；羧甲基纖維素鈉（sodium carboxymethyl cellulose，CMC-Na）（批號：428U021）、4%組織細(xì)胞固定液 北京索萊寶科技有限公司；尿酸、血清尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、肌酐（creatinine，CRE）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate aminotransferase，AST）、谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT）、XOD和ADA檢測試劑盒 南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器與設(shè)備

SP-Max3500FL多功能熒光酶標(biāo)儀 上海閃譜生物科技有限公司；TGL-16C高速臺式離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠；SC-3610低速離心機(jī) 科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司；A11 B S25分析用研磨機(jī) 德國IKA公司；18ND冷凍干燥機(jī) 寧波新芝生物科技股份有限公司；BX46生物顯微鏡 日本Olympus公司。

1.3 方法

1.3.1 余甘子凍干粉的制備

野生余甘子鮮果清洗、去核，切成薄片，－25 ℃冷凍12 h后冷凍干燥15 h，用研磨機(jī)粉碎得PEFP，1 500 g野生余甘子鮮果約制備凍干粉100 g，將制備的PEFP密封，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 次黃嘌呤致急性HUA小鼠模型的建立、分組與給藥

參考文獻(xiàn)[29-30]，取KM雄性小鼠48 只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后隨機(jī)分為6 組：正常對照組（NC），模型對照組（MC），余甘子凍干粉低（75 mg/kgmb，PEFP-L）、中（150 mg/kgmb，PEFP-M）、高劑量組（300 mg/kgmb，PEFP-H），以及ALLO組（20 mg/kgmb），每組8 只。按2020年版《中國藥典》余甘子人體用量9 g/d推算余甘子凍干粉使用中等劑量，然后分別確定低、高劑量。每天按照10 mL/kgmb灌胃給藥1 次，連續(xù)7 d，PEFP組小鼠分別灌胃不同劑量PEFP（溶于質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.9%生理鹽水），ALLO和次黃嘌呤均混懸于質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5% CMC-Na溶液中，正常組與模型組給予等體積質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5% CMC-Na溶液。灌胃第7天末次給藥后1 h，除正常組腹腔注射等體積生理鹽水外，模型組與各給藥組小鼠腹腔注射次黃嘌呤溶液（1 000 mg/kgmb）誘導(dǎo)急性HUA。造模后0.5 h，摘眼球采血，4 ℃靜置2 h，3 500 r/min離心15 min，取上層清液待測。取腎臟與肝臟組織待測。

1.3.3 氧嗪酸鉀致慢性HUA小鼠模型的建立、分組與給藥

參照文獻(xiàn)[31-32]，取KM雄性小鼠48 只，分組情況同1.3.2節(jié)。ALLO和氧嗪酸鉀均混懸于0.5% CMC-Na溶液中，除正常組外，各組小鼠均每天腹腔注射給予氧嗪酸鉀（500 mg/kgmb，10 mL/kgmb）以建立慢性HUA模型，并于注射后1 h，各組小鼠灌胃相應(yīng)的藥物治療，正常組與模型組給予等量0.5% CMC-Na溶液，每天1 次，連續(xù)給藥14 d。第14天末次給藥后1 h，眼球采血后處死小鼠，血樣4 ℃靜置2 h后，離心（3 500 r/min離心15 min）分離出血清待測。取腎臟與肝臟組織待測。

1.3.4 指標(biāo)檢測

1.3.4.1 小鼠肝/腎系數(shù)

小鼠頸脫臼處死后取肝臟和腎臟，稱質(zhì)量，按下式計算各組小鼠的肝/腎系數(shù)。

1.3.4.2 血清及肝臟生化指標(biāo)檢測

按照試劑盒說明分別測定小鼠血清尿酸、BUN、CRE、AST、ALT、XOD、AOD水平。肝臟勻漿后，按試劑盒說明書測定XOD和ADA活力。

1.3.4.3 腎臟和肝臟病理學(xué)檢查

用質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%多聚甲醛溶液固定腎臟與肝臟組織，石蠟包埋，蘇木素-伊紅染色，觀察組織病理學(xué)變化。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

采用SPSS 26.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，GraphPad Prime 8軟件進(jìn)行圖表繪制。結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用Tukey檢驗，P＜0.05表示有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 PEFP對次黃嘌呤致急性HUA小鼠的影響

2.1.1 PEFP對急性HUA小鼠肝/腎系數(shù)的影響

臟器的腫大或萎縮可以反映其損傷情況，肝/腎系數(shù)降低表明肝臟和腎臟可能存在一定程度的萎縮，升高則表明肝臟和腎臟可能出現(xiàn)增生和水腫[33]。如表1所示，MC組小鼠相較于NC組的肝/腎系數(shù)均極顯著升高（P＜0.01），說明腹腔注射次黃嘌呤可引起小鼠肝臟和腎臟腫大，急性HUA造模成功。PEFP組小鼠相比MC組肝/腎系數(shù)均顯著降低（P＜0.05、P＜0.01），PEFP-H小鼠肝/腎系數(shù)最低，且PEFP-M和PEFP-H組的肝/腎系數(shù)均與NC組無顯著差異（P＞0.05），PEFP對降低小鼠肝/腎系數(shù)的效果呈劑量依賴性。初步判斷PEFP可緩解次黃嘌呤誘導(dǎo)的急性HUA小鼠的肝腎損傷。

表1 PEFP對急性HUA小鼠肝/腎系數(shù)的影響（n＝8）Table 1 Effect of PEFP on liver and kidney indexes of mice with acute hyperuricemia (n = 8)

2.1.2 PEFP對急性HUA小鼠血清尿酸、CRE和BUN水平的影響

血清尿酸濃度是檢測小鼠HUA模型是否成功的關(guān)鍵，HUA的主要評價指標(biāo)就是血清尿酸濃度升高。如圖1A顯示，KM小鼠給予次黃嘌呤后，血清尿酸濃度較NC組極顯著增加了28.04%（P＜0.01），表明急性HUA小鼠造模成功；相較于MC組，PEFP低、中、高劑量組小鼠血清尿酸濃度分別降低了10.22%、19.71%（P＜0.01）、14.64%（P＜0.05），即PEFP-M組尿酸水平最低，且與N C 組水平最為接近，表明150 mg/kgmbPEFP是下調(diào)次黃嘌呤所致急性HUA小鼠血清尿酸水平的最優(yōu)劑量。

圖1 PEFP對急性HUA小鼠血清尿酸（A）、CRE（B）和BUN（C）濃度的影響（n＝8）Fig.1 Effect of PEFP on serum UA (A), CRE (B) and BUN (C) levels in mice with acute hyperuricemia (n = 8)

臨床上常用血清CRE和BUN水平評估腎臟損傷程度。由圖1B、C可知，MC組小鼠血清CRE和BUN濃度較NC組均極顯著升高（P＜0.01），即次黃嘌呤誘導(dǎo)的HUA小鼠腎功能受到損傷。而灌胃不同劑量PEFP的HUA小鼠相比MC組血清CRE和BUN濃度均不同程度降低，且灌胃300 mg/kgmbPEFP（PEFP-H組）降低血清CRE和BUN濃度效果最好（P＜0.01），提示小鼠血清CRE和BUN水平與給藥劑量相關(guān)，呈劑量依賴性。推測PEFP可改善次黃嘌呤所致急性HUA小鼠的腎臟損傷。

2.1.3 PEFP對急性HUA小鼠血清AST和ALT活力的影響血清AST和ALT水平是臨床評價肝功能的重要指標(biāo)。由圖2可知，MC組小鼠血清AST和ALT活力均極顯著高于NC組（P＜0.01），即腹腔注射次黃嘌呤可導(dǎo)致小鼠肝臟功能損傷。灌胃PEFP的HUA小鼠血清AST和ALT活力均較MC組不同程度降低，提示PEFP能抑制血清AST和ALT活力，從而緩解由次黃嘌呤所致急性HUA小鼠的肝臟損傷。

圖2 PEFP對急性HUA小鼠血清AST（A）和ALT（B）活力的影響（n＝8）Fig.2 Effect of PEFP on serum AST (A) and ALT (B) levels in mice with acute hyperuricemia (n = 8)

2.1.4 PEFP對急性HUA小鼠血清及肝臟XOD和ADA活力的影響

ADA和XOD是嘌呤核苷酸分解代謝的關(guān)鍵酶，在體內(nèi)尿酸生成的過程中發(fā)揮著重要作用[34]。如圖3所示，MC組小鼠血清和肝臟的XOD和ADA活力均較于NC組極顯著升高（P＜0.01）。與MC組相比，各給藥組均可極顯著降低血清和肝臟XOD和ADA活力（P＜0.01），提示PEFP能顯著抑制由次黃嘌呤引起的急性HUA小鼠血清及肝臟XOD和ADA活力的升高，PEFP可能通過抑制XOD和ADA活力發(fā)揮降尿酸作用。

圖3 PEFP對急性HUA小鼠血清和肝臟XOD和ADA活力的影響（n＝8）Fig.3 Effect of PEFP on XOD and ADA activities in serum and liver of mice with acute hyperuricemia (n = 8)

2.1.5 急性HUA小鼠的腎臟組織病理變化

如圖4所示，NC組小鼠腎組織形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，腎小球大小正常，結(jié)構(gòu)清楚，未見炎細(xì)胞浸潤等明顯病理改變。MC組相比于NC組，腎小球明顯萎縮，腎間質(zhì)水腫，腎小管明顯擴(kuò)張伴上皮細(xì)胞水腫，可見炎細(xì)胞浸潤。ALLO組和PEFP各劑量組相比于MC組腎臟組織病理改變均得到不同程度改善，ALLO組腎小管明顯擴(kuò)張，但腎小球萎縮減輕；PEFP各劑量組腎小球萎縮和腎小管上皮細(xì)胞水腫明顯減輕。表明腹腔注射次黃嘌呤可誘導(dǎo)小鼠腎損傷，而灌胃PEFP可明顯改善小鼠腎損傷。

圖4 PEFP對急性HUA小鼠腎臟病理變化的影響（400×）Fig.4 Effect of PEFP on renal pathological changes in mice with acute hyperuricemia (400 ×)

2.1.6 急性HUA小鼠的肝臟組織病理變化

如圖5所示，NC組小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞大小正常，排列整齊，未見明顯病理學(xué)改變。MC組相較于NC組，中央靜脈周圍肝細(xì)胞明顯水腫，可見脂肪變性。與MC組相比較，ALLO組肝細(xì)胞輕度水腫，脂肪變性減輕；PEFP-L組肝細(xì)胞輕度脂肪變性，少許淋巴細(xì)胞浸潤，偶見點狀壞死；PEFP-M和PEFP-H組肝細(xì)胞輕度水腫，可見脂肪變性。提示次黃嘌呤可致HUA小鼠輕微肝損傷，灌胃PEFP可一定程度緩解肝損傷。

圖5 PEFP對急性HUA小鼠肝臟病理變化的影響（400×）Fig.5 Effect of PEFP on hepatic pathological changes in hypoxanthine-mice with acute hyperuricemia (400 ×)

2.2 PEFP對氧嗪酸鉀致慢性HUA小鼠的影響

2.2.1 PEFP對慢性HUA小鼠肝/腎系數(shù)的影響

由表2可知，MC組較NC組小鼠肝/腎系數(shù)極顯著升高（P＜0.01），表明腹腔注射氧嗪酸鉀可能導(dǎo)致小鼠肝臟和腎臟損傷。灌胃PEFP的HUA小鼠較MC組肝腎/系數(shù)均顯著降低（P＜0.05、P＜0.01），PEFP-H小鼠肝/腎系數(shù)最低，且PEFP-M和PEFP-H小鼠肝腎系數(shù)接近NC組（P＞0.05）。表明灌胃不同劑量的PEFP均可下調(diào)小鼠的肝/腎系數(shù)，且效果與給藥劑量呈正相關(guān)，實驗結(jié)果與PEFP對急性HUA小鼠的干預(yù)效果一致。

表2 PEFP對慢性HUA小鼠肝/腎系數(shù)的影響（n＝8）Table 2 Effect of PEFP on liver and kidney indexes of mice with chronic hyperuricemia (n = 8)

2.2.2 PEFP對慢性HUA小鼠血清尿酸、CRE和BUN水平的影響

如圖6A顯示，腹腔注射氧嗪酸鉀14 d后，MC組小鼠血清尿酸濃度較NC組顯著增加了81.79%（P＜0.01），說明造模成功；與MC組相比，PEFP低、中、高劑量組小鼠血清尿酸濃度分別降低32.97%、38.99%、43.60%，表明PEFP可極顯著降低由氧嗪酸鉀誘導(dǎo)的慢性HUA小鼠血清尿酸水平（P＜0.01），從而緩解小鼠的HUA。PEFP對慢性HUA小鼠降尿酸效果優(yōu)于其對急性HUA小鼠的干預(yù)效果，且對慢性HUA小鼠的降尿酸效果表現(xiàn)出劑量依賴性。

圖6 PEFP對慢性HUA小鼠血清尿酸（A）、CRE（B）和BUN（C）濃度的影響（n＝8）Fig.6 Effect of PEFP on serum UA (A), CRE (B) and BUN (C) levels in mice with chronic hyperuricemia (n = 8)

如圖6B、C所示，MC組小鼠血清CRE和BUN濃度均較NC組極顯著增加（P＜0.01），表明氧嗪酸鉀導(dǎo)致慢性HUA小鼠腎臟損傷。灌胃不同劑量的PEFP可有效降低慢性HUA小鼠血清CRE和BUN濃度，從而改善慢性HUA導(dǎo)致的腎損傷。與對急性HUA小鼠干預(yù)效果不同的是，PEFP對慢性HUA小鼠血清CRE和BUN水平干預(yù)效果無劑量依賴性，這與長時間灌胃高劑量PEFP可能會造成小鼠腎功能一定程度的損傷有關(guān)。

2.2.3 PEFP對慢性HUA小鼠血清AST和ALT活力的影響

由圖7可知，MC組小鼠血清AST和ALT活力相比NC組極顯著增高（P＜0.01），提示由氧嗪酸鉀誘導(dǎo)的慢性HUA小鼠肝功能損傷。灌胃不同劑量的PEFP均可顯著降低慢性HUA小鼠血清AST和ALT活力，且呈劑量依賴性，表明PEFP可有效抑制小鼠血清AST和ALT活力，從而改善慢性HUA小鼠的肝損傷。PEFP雖可有效下調(diào)急性HUA小鼠血清AST和ALT活力，AST活力的降低呈劑量依賴性，但ALT活力的下降并無劑量依賴性。

圖7 PEFP對慢性HUA小鼠血清AST（A）和ALT（B）活力的影響（n＝8）Fig.7 Effect of PEFP on serum AST (A) and ALT (B) levels in mice with chronic hyperuricemia (n = 8)

2.2.4 PEFP對慢性HUA小鼠血清及肝臟XOD和ADA活力的影響

如圖8所示，MC組小鼠血清和肝臟組織中XOD和ADA活力均較NC組極顯著升高（P＜0.01），說明腹腔注射氧嗪酸鉀可增加小鼠體內(nèi)XOD和ADA活力，從而促進(jìn)尿酸的生成。灌胃不同劑量的PEFP小鼠血清和肝臟組織中XOD和ADA活力均呈劑量依賴性降低，表明PEFP可有效抑制慢性HUA小鼠血清和肝臟組織中XOD和ADA活力。推測PEFP可能通過抑制慢性HUA小鼠的XOD和ADA活力發(fā)揮降尿酸作用，且與給藥劑量呈正相關(guān)。而對于急性HUA小鼠，PEFP對ADA活力的降低作用存在劑量依賴性，對XOD活力的影響無劑量依賴性。

圖8 PEFP對慢性HUA小鼠血清和肝臟中XOD和ADA活力的影響（n＝8）Fig.8 Effect of PEFP on XOD and ADA activities in serum and liver of mice with chronic hyperuricemia (n = 8)

2.2.5 慢性HUA小鼠的腎臟組織病理變化

如圖9所示，NC組小鼠腎臟組織學(xué)無明顯異常，細(xì)胞排列整齊，腎小管和腎小球大小正常，未見明顯病理變化。MC組相較于NC組腎小管嚴(yán)重擴(kuò)張，腎小管上皮細(xì)胞水腫，部分腎小球明顯萎縮。與MC組相比較，ALLO組和PEFP各劑量組病理變化情況得到不同程度的改善，ALLO組腎小管明顯擴(kuò)張，腎小管上皮細(xì)胞水腫減輕，腎小球萎縮減輕，可見炎細(xì)胞浸潤；PEFP各劑量組腎小管擴(kuò)張和腎小球萎縮均明顯減輕，未見炎細(xì)胞浸潤。提示腹腔注射氧嗪酸鉀可誘導(dǎo)慢性HUA小鼠明顯腎損傷，灌胃PEFP可明顯緩解小鼠腎損傷。

圖9 PEFP對慢性HUA小鼠腎臟病理變化的影響（400×）Fig.9 Effect of PEFP on renal pathological changes in mice with chronic hyperuricemia (400 ×)

2.2.6 慢性HUA小鼠的肝臟組織病理變化

如圖10所示，NC組小鼠肝細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞大小正常，結(jié)構(gòu)清晰，未見明顯病理改變。MC組小鼠相比于NC組肝細(xì)胞明顯水腫伴脂肪變性，可見點狀壞死，大量淋巴細(xì)胞浸潤。與模型組相比，ALLO組小鼠肝細(xì)胞水腫明顯伴脂肪變性；PEFP-L和PEFP-M組小鼠肝細(xì)胞未見明顯異常；PEFP-H小鼠肝細(xì)胞明顯水腫。表明氧嗪酸鉀可誘導(dǎo)慢性HUA小鼠明顯肝損傷，灌胃PEFP可明顯改善小鼠肝損傷。

圖10 PEFP對慢性HUA小鼠肝臟病理變化的影響（400×）Fig.10 Effect of PEFP on hepatic pathological changes in mice with chronic hyperuricemia (400 ×)

3 討 論

尿酸是嘌呤堿代謝終產(chǎn)物，尿酸生成過多或尿酸排泄障礙是導(dǎo)致HUA的直接原因[35-36]。次黃嘌呤是尿酸生成的直接前體物質(zhì)，XOD催化次黃嘌呤氧化為黃嘌呤，并進(jìn)一步催化黃嘌呤氧化為尿酸[37]，即注射次黃嘌呤可增加尿酸來源。氧嗪酸鉀為尿酸酶抑制劑，結(jié)構(gòu)與尿酸的嘌呤環(huán)相似，可競爭性抑制尿酸酶活性[38]，即注射氧嗪酸鉀可減少尿酸去路。本研究采用次黃嘌呤建立急性HUA模型，以氧嗪酸鉀誘導(dǎo)慢性HUA模型，采用化學(xué)誘導(dǎo)劑建立HUA模型具有穩(wěn)定、簡便和可重復(fù)的特點。兩種模型小鼠的MC組血清尿酸濃度均極顯著升高，表明造模成功，而灌胃不同劑量的PEFP可有效降低兩種模型的血清尿酸濃度，提示PEFP具有改善HUA作用。

余甘子富含沒食子酸、槲皮素、蘆丁、黃酮、多酚、鞣質(zhì)和VC等活性成分[39]，研究表明槲皮素可能通過抑制肝臟中XOD和ADA活力減少尿酸的生成[40]，從而降低血尿酸；藤茶總黃酮具有較好的抗HUA及腎功能保護(hù)作用[41]；牡丹花總黃酮對高尿酸血癥大鼠腎臟具有一定的保護(hù)作用[9]，其作用與促進(jìn)尿酸排泄、抑制氧化反應(yīng)、抑制尿酸合成關(guān)鍵酶活性、調(diào)節(jié)尿酸轉(zhuǎn)運蛋白表達(dá)有關(guān)；山楂葉總黃酮能調(diào)節(jié)XOD的活性，從而調(diào)節(jié)血清尿酸濃度[42]；余甘子總黃酮對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎有一定的干預(yù)作用[43]。故推測余甘子總黃酮及槲皮素可能為其抗HUA的活性成分，其具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

XOD和ADA是尿酸生成的關(guān)鍵酶，ADA催化腺嘌呤核苷分解為次黃嘌呤核苷，而后經(jīng)核苷磷酸化酶催化生成次黃嘌呤，再經(jīng)XOD氧化作用最終生成尿酸[44]。朱春勝等[45]研究發(fā)現(xiàn)菊苣發(fā)揮降尿酸的功效可能與抑制XOD、ADA活力有關(guān)。本實驗結(jié)果也表明，各劑量PEFP可顯著降低急性和慢性HUA小鼠血清和肝臟組織XOD和ADA活力。由此可推測各劑量PEFP在體內(nèi)可能通過抑制XOD和ADA活力，阻礙尿酸的合成途徑，減少尿酸的生成，從而發(fā)揮降尿酸作用。

腎是尿酸主要的排泄器官，HUA可造成不同程度的腎功能損傷，同時HUA與脂肪肝關(guān)系密切[46]。血清CRE、BUN濃度是檢測腎功能的靈敏指標(biāo)，血清AST和ALT活力則常用于反映肝功能情況，本研究兩種模型中MC組較NC組血清CRE、BUN、AST和ALT水平及肝/腎系數(shù)均極顯著升高（P＜0.01），表明急性和慢性HUA對小鼠的肝腎功能產(chǎn)生損傷；PEFP各劑量組相比于MC組血清CRE、BUN、AST、ALT水平及肝/腎系數(shù)均不同程度地降低，說明PEFP對急性和慢性HUA小鼠的肝腎功能有保護(hù)作用。同時病理組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，PEFP可明顯減輕急性HUA小鼠的腎小球萎縮和腎小管上皮細(xì)胞水腫，可一定程度緩解肝細(xì)胞水腫和脂肪變性；明顯減輕慢性HUA小鼠的腎小管擴(kuò)張和腎小球萎縮以及炎細(xì)胞浸潤，較好改善肝細(xì)胞水腫和脂肪變性。因此推測PEFP可能通過緩解小鼠腎損傷，從而促進(jìn)尿酸的排泄，發(fā)揮降尿酸功效，且對HUA所致的肝腎損傷有一定保護(hù)作用。

綜上所述，PEFP可能通過抑制XOD和ADA活力降低急性和慢性HUA小鼠血清尿酸濃度，也可能因改善小鼠腎功能從而促進(jìn)尿酸排泄，發(fā)揮降尿酸作用，同時對肝腎損傷有保護(hù)作用，其具體作用機(jī)制及有效作用成分還需進(jìn)一步研究。余甘子有望成為改善HUA的功能食品和治療藥物，本研究結(jié)果為野生余甘子的開發(fā)利用提供了新的思路。