子宮內(nèi)膜癌組織中整合素α5、轉(zhuǎn)移相關(guān)基因2 的表達(dá)及與預(yù)后的相關(guān)性

陳湧彧 呂承宇

（1 福建省漳浦縣醫(yī)院 漳浦 363200；2 福建省婦幼保健院 漳浦 350001）

子宮內(nèi)膜癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率占全部婦科腫瘤的20%～30%。子宮內(nèi)膜癌臨床以陰道異常出血為主要表現(xiàn)，疾病早期的異常出血量相對(duì)較少，部分可出現(xiàn)陰道異常排液與惡臭膿血樣的液體，且會(huì)合并下腹部隱痛，而至病情晚期則可觸及下腹部增大子宮，部分合并積膿的患者可有明顯的觸痛感[1]。已有研究表明[2]，子宮內(nèi)膜癌的早期癥狀相對(duì)明顯，且癌細(xì)胞生長(zhǎng)略微緩慢，大部分患者在就診時(shí)病灶相對(duì)局限，預(yù)后較好、生存率較高。故盡早分析子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制可提高早期診斷率，制定治療方案并改善子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后。目前，臨床已有大量研究證明，原癌與抑癌基因在子宮內(nèi)膜癌、子宮內(nèi)膜癌等多種癌癥中異常表達(dá)，但對(duì)于具體的分子機(jī)制尚未完全明確[3～4]。轉(zhuǎn)移相關(guān)基因2（MTA2）是近年發(fā)現(xiàn)的重要核受體調(diào)節(jié)因子，在核酸、族蛋白、生物胺、族蛋白及蛋白質(zhì)甲基化過程中作為合成多胺與谷胱甘肽的主要甲基供體，故推測(cè)調(diào)節(jié)MAT2 表達(dá)可影響細(xì)胞生長(zhǎng)、分化與功能[5]。整合素α5（ITGα5）在諸多腫瘤細(xì)胞中呈高水平表達(dá)，可對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲等生物行為均有一定的調(diào)節(jié)作用[6]。目前，兩者在子宮內(nèi)膜癌組織的表達(dá)已有諸多研究證實(shí)，但對(duì)于兩者與預(yù)后之間關(guān)系的報(bào)道鮮有。本研究將分析子宮內(nèi)膜癌組織中ITGα5、MTA2 表達(dá)及與預(yù)后的相關(guān)性?，F(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 前瞻性選取2019年1月至2020年1月醫(yī)院收治的98 例子宮內(nèi)膜癌患者為研究對(duì)象。年齡40～73 歲，平均年齡（48.37±5.68）歲；腫瘤直徑1.3～7.8 cm，平均腫瘤直徑（4.48±1.37）cm；體質(zhì)量指數(shù)（BMI）19.8～29.4 kg/m2，平均BMI（22.65±2.73）kg/m2；宮頸癌國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）分期：Ⅰ期67 例，Ⅱ期31 例；病理分級(jí)：低/中分化59 例，高分化39 例；子宮內(nèi)膜癌類型：內(nèi)膜樣癌86 例，非內(nèi)膜樣癌12 例；浸潤(rùn)情況：較淺肌層受侵69 例，深肌層受侵29 例。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)通過。

1.2 入組標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合《子宮內(nèi)膜癌診斷與治療指南（第四版）》[7]中子宮內(nèi)膜癌相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診；（2）癌旁組織均為診刮、宮腔鏡或手術(shù)所收集的組織；（3）入組前均未接受過放化療、激素治療等；（4）均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并其他惡性腫瘤者；（2）合并多臟器功能不全者；（3）合并嚴(yán)重自身免疫系統(tǒng)、凝血功能障礙者；（4）伴認(rèn)知及精神功能障礙者。

1.3 研究方法

1.3.1 ITGα5、MTA2 檢測(cè)方法 收集所有患者子宮內(nèi)膜癌組織與癌旁組織標(biāo)本，制作組織勻漿，以2900 r/min 離心20 min（半徑為10 cm），分離上清液，存于-80℃的環(huán)境中待檢。采用免疫組織化學(xué)法（SP）檢測(cè)ITGα5、MTA2 的表達(dá)。MTA2：采用Trizol法提取組織中總RNA，將總RNA 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒按照說明書相關(guān)操作步驟反轉(zhuǎn)錄為cDNA，反轉(zhuǎn)錄的條件為35℃環(huán)境下30 min，75℃環(huán)境下10 min；以U 6 為 內(nèi) 參 ，U 6 上 游 序 列 ：5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′，下游序列：5′-CGCTTCACGAATTTGCGT-3′。MTA2 上游序列：5′-TGTACCGGGTGGGAGATTAC-3′，下游序列：5′-TGAGGCTACTYAGAAATGTCCCTG-3′。反應(yīng)條件如下：95℃預(yù)變性10 min，95℃變性15 s，60℃退火30 s，72℃下延伸30 s，連續(xù)進(jìn)行40 個(gè)循環(huán)。ITGα5 采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）檢測(cè)ITGα5 的表達(dá)，提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，進(jìn)行PCR 的擴(kuò)增，U 6 正向序列：5′-GGCTACAGCAACAGGGTA-3′，反向序列：5′-TTTGGTTGAGCACAGGGT-3′ ；ITGα5 正向序列：5′-AACGCTGGCTCCGAAAACTT-3′，反向序列：5′-CCTAAGGCGGTAAAATGCC-3′。在擴(kuò)增后構(gòu)建溶解曲線，ITGα5、MTA2 均以2-△△CT法計(jì)算表達(dá)量。

1.3.2 預(yù)后 對(duì)所有患者進(jìn)行3年的隨訪，以死亡為終點(diǎn)事件，統(tǒng)計(jì)生存率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS23.0 軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以%表示，采用χ2檢驗(yàn)；采用線性回歸分析檢驗(yàn)ITGα5、MTA2 表達(dá)與預(yù)后的相關(guān)性；繪制受試者工作特征（ROC）曲線分析ITGα5、MTA2 表達(dá)量與子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 預(yù)后 隨訪3年，98 例患者死亡23 例（23.47%），生存75 例（76.53%），分別納入生存組與死亡組。

2.2 子宮內(nèi)膜癌中ITGα5、MTA2 表達(dá)情況 子宮內(nèi)膜癌癌組織中ITGα5、MTA2 表達(dá)均較癌旁組織高（P＜0.05）。見表1。

表1 子宮內(nèi)膜癌中ITGα5、MTA2 表達(dá)情況對(duì)比（±s）

表1 子宮內(nèi)膜癌中ITGα5、MTA2 表達(dá)情況對(duì)比（±s）

組別nITGα5MTA2癌組織癌旁組織9898 t P 0.84±0.100.35±0.0754.3370.0001.81±0.171.15±0.1234.2530.000

2.3 生存組與死亡組ITGα5、MTA2 表達(dá)情況 死亡組的ITGα5、MTA2 表達(dá)均較生存組高（P＜0.05）。見表2。

表2 生存組與死亡組ITGα5、MTA2 表達(dá)情況對(duì)比（±s）

表2 生存組與死亡組ITGα5、MTA2 表達(dá)情況對(duì)比（±s）

組別nITGα5MTA2死亡組生存組2375 t P 1.26±0.210.71±0.2354.3370.0002.42±0.151.63±0.1734.2530.000

2.4 ITGα5、MTA2 表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的相關(guān)性分析 線性回歸分析顯示，ITGα5、MTA2 均與子宮內(nèi)膜癌預(yù)后死亡的發(fā)生相關(guān)（P＜0.05）。見表3。

表3 ITGα5、MTA2 表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的相關(guān)性分析

2.5 ITGα5、MTA2 及聯(lián)合對(duì)子宮內(nèi)膜預(yù)后的預(yù)測(cè)值分析 將ITGα5、MTA2 及聯(lián)合作為檢驗(yàn)變量，將預(yù)后作為狀態(tài)變量（1=死亡，0=生存），繪制ROC曲線（見圖1），結(jié)果顯示，ITGα5、MTA2 及聯(lián)合預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜預(yù)后的曲線下面積（AUC）分別為0.852（0.790～0.913）、0.851（0.790～0.912）、0.948（0.917～0.980），具有一定預(yù)測(cè)價(jià)值。見表4、圖1。

圖1 ITGα5、MTA2 及聯(lián)合對(duì)子宮內(nèi)膜預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值

表4 ITGα5、MTA2 及聯(lián)合對(duì)子宮內(nèi)膜預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值分析

3 討論

子宮內(nèi)膜癌屬于生殖內(nèi)分泌失調(diào)性疾病，臨床多認(rèn)為是由于雌激素對(duì)子宮內(nèi)膜造成過度刺激而引發(fā)該病，另外高血壓、糖尿病、肥胖、遺傳等因素均被認(rèn)為是誘發(fā)該病的高危因素。近年來，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率有逐漸升高的趨勢(shì)，且呈年輕化發(fā)展，但由于疾病早期往往無明顯的相關(guān)陽性體征表現(xiàn)，故提高早期子宮內(nèi)膜癌的診斷率具有重要意義。目前，臨床針對(duì)子宮內(nèi)膜癌的診斷以影像學(xué)、血清腫瘤標(biāo)志物、組織病理學(xué)檢查等為主要方式，雖組織病理學(xué)檢查是目前診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但因?qū)儆谟袆?chuàng)檢查無法成為臨床首選。子宮內(nèi)膜癌尚無特異敏感的腫瘤標(biāo)志物，而影像學(xué)診斷僅可作為輔助診斷方式。因此，尋找一種新的標(biāo)志物對(duì)評(píng)估患者預(yù)后具有重要意義。有研究表明[8]，腫瘤在發(fā)生與發(fā)展過程中會(huì)伴隨多個(gè)癌基因、抑癌基因異常表達(dá)，在不同因素的共同影響下相互作用，從而促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展與預(yù)后。

ITGα5 作為整合素家族的重要成員之一，在染色體上位于12q11～q13 編碼纖維連接受體體蛋白ITGα5，具有細(xì)胞黏附于信號(hào)通路受體功能，在癌細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲等生物學(xué)功能中扮演重要角色[9]。相關(guān)研究表明[10～11]，ITGα5 可通過與細(xì)胞外結(jié)構(gòu)與基質(zhì)蛋白相結(jié)合，在膠質(zhì)瘤、乳腺癌等腫瘤疾病的侵襲預(yù)后中存在一定關(guān)系。腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移過程相對(duì)復(fù)雜，多涉及相關(guān)基因與多個(gè)通路的調(diào)節(jié)，但子宮內(nèi)膜癌的相關(guān)基因機(jī)制尚未完全明確。Liu G 等[12]研究發(fā)現(xiàn)，通過對(duì)ITGα5 調(diào)節(jié)FAK/ERK 通路的抑制，可有效阻滯胃癌的轉(zhuǎn)移，并誘導(dǎo)自噬細(xì)胞的死亡，可提示ITGα5 參與癌癥的轉(zhuǎn)移過程，下調(diào)ITGα5 表達(dá)可抑制癌癥的轉(zhuǎn)移。

子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的擴(kuò)散可能與多種途徑共同作用密切相關(guān)，其中轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白為轉(zhuǎn)移調(diào)節(jié)因子，在臨床卵巢癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌中均有異常表達(dá)。MTA2 屬于MTA 蛋白家族的成員，在核小體重構(gòu)與組蛋白脫乙酰基的作用密切相關(guān)，通過上述途徑可進(jìn)行調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄。Zhang H 等[13]研究發(fā)現(xiàn)，MTA2 出發(fā)的R 環(huán)反式調(diào)節(jié)BDH1 介導(dǎo)的β-羥丁?；稍鰪?qiáng)肝細(xì)胞癌的增殖，均證實(shí)MTA2 可參與癌細(xì)胞的發(fā)生與發(fā)展。本研究結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜癌癌組織中ITGα5、MTA2 的表達(dá)均較癌旁組織高，提示ITGα5、MTA2 在子宮內(nèi)膜癌中呈高水平表達(dá)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，死亡組的ITGα5、MTA2 表達(dá)均較生存組高，經(jīng)線性回歸分析結(jié)果顯示，ITGα5、MTA2 均與子宮內(nèi)膜癌預(yù)后死亡的發(fā)生相關(guān)。分析原因可能如下：（1）MTA2 可通過整體基因表達(dá)的調(diào)控與Rho信號(hào)途徑激活細(xì)胞骨架的重組；MTA2 在BAH 與ELM 結(jié)構(gòu)域中的突變相對(duì)集中，可能會(huì)引起突變體與蛋白質(zhì)的結(jié)合能力；MTA2 通過上調(diào)參與癌癥的發(fā)生與轉(zhuǎn)移等途徑。（2）ITGα5：ITGα5 可介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的黏附，從而增強(qiáng)腫瘤的侵襲能力；ITGα5 在結(jié)合相關(guān)配體后可介導(dǎo)諸多（FAK/Ras/MAPK、FAK/STAT 等）信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移、生長(zhǎng)等能力[14]。Zou B 等[15]相關(guān)研究表明，ITGα5 可作為頭頸部臨床細(xì)胞癌的潛在生物標(biāo)志物，且ITGα5 被鑒定為中樞基因并被證實(shí)與患者的總生存率存在顯著的相關(guān)性。本研究進(jìn)一步繪制ROC 曲線發(fā)現(xiàn)，ITGα5、MTA2 及聯(lián)合預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜預(yù)后的AUC 分別為0.852（0.790～0.913）、0.851（0.790～0.912）、0.948（0.917～0.980），具有一定預(yù)測(cè)價(jià)值。這提示ITGα5、MTA2 可提高子宮內(nèi)膜癌的預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值，臨床可加強(qiáng)兩者指標(biāo)的監(jiān)測(cè)，以評(píng)價(jià)患者的預(yù)后情況。綜上所述，ITGα5、MTA2 在子宮內(nèi)膜癌組織中呈高表達(dá)，且與患者不良預(yù)后具有一定關(guān)系，臨床可加強(qiáng)對(duì)上述指標(biāo)的監(jiān)測(cè)，以評(píng)估患者預(yù)后。