復(fù)方曲肽注射液對細胞色素P450酶活性的體內(nèi)外影響Δ

劉凡琪 ，王婧媛 ，李 楠 ，李自強 ，黃宇虹 ，王保和 （.天津中醫(yī)藥大學研究生院，天津 067；.天津中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院臨床藥理中心，天津 0050；.天津中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院國醫(yī)堂，天津 009）

隨著中西醫(yī)結(jié)合研究的不斷深入，中西藥聯(lián)用日益普遍，而二者相互作用引起的不良事件風險日益受到學者關(guān)注。細胞色素P450（cytochrome P450，CYP450）酶是體內(nèi)參與藥物及其他外源性物質(zhì)代謝的主要肝藥酶系，其多個重要亞型參與了約90%的藥物代謝，如CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4 分別承擔8.9%、7.2%、4.7%、12.8%、6.8%、20.0%、30.2%的藥物代謝[1]。CYP450 酶表達和功能的改變常會引起藥物藥動學參數(shù)的變化，故抑制或誘導該酶活性是影響藥物代謝性相互作用的主要靶點。

復(fù)方曲肽注射液由曲克蘆丁和豬腦提取物組成，可用于急慢性腦血管疾病及其所致相關(guān)功能障礙的臨床治療。研究指出，該藥可抑制血小板聚集，增加腦血流量，調(diào)整和改善神經(jīng)細胞代謝，對缺氧腦組織具有保護作用[2—3]。臨床實踐表明，復(fù)方曲肽注射液和常規(guī)西藥（如依達拉奉）聯(lián)用可明顯改善急性腦梗死患者的臨床療效，提高其生活質(zhì)量[4—5]。但目前復(fù)方曲肽注射液與腦血管疾病常用藥物（如經(jīng)CYP2C19代謝的氯吡格雷、CYP2C9底物華法林、CYP3A4底物阿托伐他汀等）聯(lián)用的代謝性相互作用研究有限，可能存在用藥安全隱患。

美國FDA 發(fā)布的《藥物相互作用研究指導原則（2020）》[6]、我國國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心發(fā)布的《藥物相互作用研究技術(shù)指導原則（試行）》[7]和國際人用藥品技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)理事會（International Council for Harmonisation of Technical Requirements for Pharmaceutical for Human Use，ICH）出臺的《M12：藥物相互作用研究（草案）》[8]均指出，研究者需評估由CYP450 酶介導的藥物潛在相互作用。根據(jù)上述指導原則，本研究擬采用Cocktail探針藥物法和實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）法評估復(fù)方曲肽注射液對人肝微粒體、人原代肝細胞中主要CYP450酶的體外抑制、誘導作用，以及對大鼠體內(nèi)CYP450 酶活性的影響，旨在為復(fù)方曲肽注射液與其他藥物的安全、有效聯(lián)用提供依據(jù)。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括Waters AQUITY UPLC型超高效液相色譜儀（美國Waters公司）、AB QTRAP 5500型質(zhì)譜儀（美國AB 公司）、Rotor-Gene Q 型熒光定量PCR 儀（德國QIAGEN 公司）、Centrifuge 5430R 型高速離心機（德國Eppendorf公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

復(fù)方曲肽注射液[批號210409，規(guī)格2 mL∶80 mg 曲克蘆丁、1.0 mg總氮、0.6 mg單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂（GM1）]購自吉林天成制藥有限公司；還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH；批號SLCK5429，純度≥97%）購自美國Sigma 公司；磷酸二氫鉀（批號Q18D028，純度98%）、磷酸氫二鉀（批號W05E036，純度99%）均購自阿法埃莎（中國）化學有限公司；總RNA 提取試劑盒（貨號DP430）、cDNA 第一鏈合成試劑盒（貨號KR116-02）、熒光定量PCR 試劑盒（貨號FP206-02）均購自天根生化科技（北京）有限公司；甲醇、乙腈、甲酸均為色譜純，水為蒸餾水。所用主要CYP450 酶底物、抑制劑、誘導劑、陰性對照、代謝產(chǎn)物及內(nèi)標對照品的相關(guān)信息見表1。

表1 主要CYP450酶底物、抑制劑、誘導劑、陰性對照、代謝產(chǎn)物及內(nèi)標的相關(guān)信息

1.3 微粒體、細胞與動物

人肝微粒體（批號SDL，質(zhì)量濃度24 mg/mL）、人原代肝細胞（批號HVN、QBU、MHK）及配套肝細胞培養(yǎng)液、貼壁培養(yǎng)液均購自美國BioIVT公司。健康SPF級雄性SD大鼠，體重200～250 g，由北京華阜康生物科技股份有限公司提供[動物生產(chǎn)許可證號SCXK（京）2019-0008]。實驗方案經(jīng)所在單位實驗動物倫理委員會批準（編號為IRM-DWLL-2022209）。

2 方法

2.1 復(fù)方曲肽注射液定量分析方法的建立

采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)進行定量分析。方法均以ACQUITY UPLC BEH C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）為色譜柱，水（含0.1%甲酸，A）-乙腈（含0.1%甲酸，B）為流動相進行梯度洗脫（體外實驗：0～3 min，90%A→10%A；3～4 min，10%A；4～4.2 min，10%A→90%A；4.2～8.0 min，90%A。體內(nèi)實驗：0～0.5 min，90%A；0.5～2.5 min，90%A→10%A；2.5～4.1 min，10%A→90%A；4.1～6.0 min，90%A）；運行時間分別為8 min（體外實驗）、6 min（體內(nèi)實驗）；柱溫均為30 ℃；進樣盤溫度均為10 ℃；進樣量均為2.0 μL。質(zhì)譜均采用電噴霧離子源，以多反應(yīng)監(jiān)測模式進行正離子掃描；氣簾氣壓力均為40.0 psi；碰撞器壓力均為7.0 psi；噴霧電壓均為5 500.0 V；加熱器溫度均為450.0 ℃；離子源霧化壓力均為50.0 psi；離子源加熱輔助氣壓力均為50.0 psi。各待測成分的質(zhì)譜監(jiān)測參數(shù)見表2。

表2 各待測成分的質(zhì)譜監(jiān)測參數(shù)

方法學考察結(jié)果顯示，對乙酰氨基酚、羥基安非他酮、N-去乙基阿莫地喹、4-羥基雙氯芬酸、4-羥基美芬妥英、去甲右美沙芬、6β-羥基睪酮定量分析的線性范圍分別為0.04～8、0.01～2、0.05～10、0.10～20、0.008～1.6、0.006～1.2、0.06～12 μmol/L（r均大于0.99），茶堿、安非他酮、瑞格列奈、甲苯磺丁脲、奧美拉唑、美托洛爾、咪達唑侖定量分析的線性范圍分別為10～10 000、1～500、1～1 000、10～10 000、1～1 000、1～500、1～500 ng/mL（r均大于0.99）；精密度、準確度、基質(zhì)效應(yīng)、稀釋效應(yīng)、穩(wěn)定性均符合2020年《中國藥典》（四部）的相關(guān)要求[9]。

2.2 復(fù)方曲肽注射液對人肝微粒體CYP450 酶的體外抑制實驗

根據(jù)藥品說明書，復(fù)方曲肽注射液的用法用量為靜脈滴注，10 mL/次。以標準成人體重（60～70 kg）計算，其循環(huán)血量為4～5 L，故以臨床常用劑量應(yīng)用時，該藥理論最大血藥濃度為0.25%（體積分數(shù)，下同），考慮到肝臟內(nèi)藥物濃度可能會高于血藥濃度[10]，因此將體外實驗濃度上限提高至10%（“2.3”項同）。

肝微粒體孵育體系（有機溶劑占比＜1%）的最終體積為200 μL，包括人肝微粒體（最終質(zhì)量濃度為0.5 mg/mL）、NADPH（最終濃度為1 mmol/L）、各亞酶的探針體外底物混合液（非那西丁30 μmol/L、安非他酮50 μmol/L、阿莫地喹5 μmol/L、雙氯芬酸25 μmol/L、美芬妥英50 μmol/L、右美沙芬8 μmol/L、睪酮25 μmol/L）[10—11]、復(fù)方曲肽注射液（該藥占肝微粒體孵育體系總體積的0.05%、0.1%、0.25%、0.5%、1%、2.5%、5%、10%）[10]或各亞酶的陽性抑制劑（α-萘黃酮2 μmol/L、舍曲林10 μmol/L、槲皮素20 μmol/L、磺胺苯吡唑10 μmol/L、噻氯匹定10 μmol/L、奎尼丁10 μmol/L、酮康唑10 μmol/L）[12]或空白對照（0.1 mmol/L 磷酸鹽緩沖液）；其余為0.1 mol/L 磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含氯化鎂5 mmol/L）。待復(fù)方曲肽注射液或陽性抑制劑在人肝微粒體中預(yù)孵育15 min 后，加入各亞酶的探針底物和NADPH，于37 ℃下孵育30 min。每組配制3個平行樣。各組加入含20 ng/mL 氧氟沙星（內(nèi)標）的冰甲醇終止反應(yīng)，渦旋3 min 后，以13 500 r/min 離心10 min，取上清液，按“2.1”項下條件以內(nèi)標法測定各探針底物代謝產(chǎn)物（對乙酰氨基酚、羥基安非他酮、N-去乙基阿莫地喹、4-羥基雙氯芬酸、4-羥基美芬妥英、去甲右美沙芬、6β-羥基睪酮）的生成量，并計算各CYP450酶亞型的剩余酶活性（剩余酶活性＝復(fù)方曲肽注射液組或陽性對照組代謝產(chǎn)物生成量/空白對照組代謝產(chǎn)物生成量×100%）；同時，采用GraphPad 8軟件進行非線性擬合，并計算半數(shù)抑制濃度（IC50）。

2.3 復(fù)方曲肽注射液對人原代肝細胞CYP450 酶的體外誘導實驗

待人原代肝細胞復(fù)蘇后，用貼壁培養(yǎng)液稀釋得0.7×106個/mL 的活細胞懸液，再以每孔100 μL 接種至預(yù)鋪Ⅰ型膠原的96孔板中，于37 ℃、5%CO2條件下預(yù)孵育過夜，待貼壁單層細胞形成后，以肝細胞培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。第2天，每孔加入含不同濃度復(fù)方曲肽注射液（該藥占細胞孵育體系總體積的0.05%、0.25%、0.5%、1%、5%、10%）[10]或陽性誘導劑（奧美拉唑50 μmol/L、苯巴比妥1 000 μmol/L、利福平25 μmol/L）或陰性對照藥（羅紅霉素10 μmol/L）[13]的培養(yǎng)液，并設(shè)置不含受試藥物、陽性誘導劑、陰性對照藥的空白培養(yǎng)液作為空白對照。每組配制3 個平行樣。連續(xù)培養(yǎng)2 d 后，棄去培養(yǎng)液，收集細胞并提取其總RNA，經(jīng)消化后反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，并以此為模板進行擴增。反應(yīng)體系包括cDNA 模板（最終含量為200 ng）、正/反向引物（最終濃度均為300 nmol/L）、熒光探針（最終濃度為200 nmol/L）、2×Super-Real PreMix（Probe）、50×ROX 參比染料。反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性15 min；95 ℃變性3 s，60 ℃退火延伸30 s，循環(huán)40次。采集熒光信號，以β-actin為內(nèi)參，以空白對照組為參照，采用2—ΔΔCt法計算CYP1A2、CYP2B6、CYP3A4 mRNA 的相對表達量（即誘導倍數(shù)）。PCR 引物/探針序列和產(chǎn)物長度見表3。

表3 PCR引物/探針序列和產(chǎn)物長度

2.4 復(fù)方曲肽注射液對大鼠CYP450 酶影響的體內(nèi)實驗

取SD大鼠12只，隨機分為對照組和實驗組，每組6只。對照組大鼠尾靜脈注射生理鹽水0.9 mL/kg，實驗組大鼠尾靜脈注射復(fù)方曲肽注射液0.9 mL/kg（以臨床常用劑量換算得大鼠等效劑量），每天1 次，連續(xù)10 d；第10天尾靜脈注射30 min后，兩組大鼠均灌胃含7個探針底物的混合溶液（茶堿8 mg/kg、安非他酮2 mg/kg、瑞格列奈1 mg/kg、甲苯磺丁脲1 mg/kg、奧美拉唑10 mg/kg、美托洛爾10 mg/kg、咪達唑侖8 mg/kg，各探針底物的濃度由預(yù)實驗確定）。

分別在灌胃探針藥液前（0 min）以及給藥后5、10、20、30、45 min 和1、2、4、6、9、12、24 h 于眼內(nèi)眥取血0.5 mL，置于含肝素鈉的抗凝離心管中，以3 000 r/min離心10 min，分離血漿；血漿樣品經(jīng)3倍體積的甲醇沉淀蛋白后取上清液（部分樣品進樣前需稀釋），按“2.1”項下條件以內(nèi)標法測定各時間點探針底物的含量，并應(yīng)用Phoenix WinNonlin 8.1藥動學軟件計算各探針底物的藥動學參數(shù)并繪制藥-時曲線。

2.5 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 20.0 軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，采用GraphPad Prism 8.4.3軟件作圖。計量資料以±s表示，藥動學參數(shù)比較采用獨立樣本t檢驗（方差齊）或t’檢驗（方差不齊）。檢驗水準α＝0.05。

3 結(jié)果

3.1 復(fù)方曲肽注射液對CYP450酶的體外抑制作用

陽性抑制劑處理后的各CYP450酶亞型的剩余酶活性均低于50%，各探針底物代謝受到明顯抑制，說明孵育體系合格（具體結(jié)果略）。復(fù)方曲肽注射液對人肝微粒體中CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4 酶的抑制曲線見圖1。由圖1 可見，經(jīng)不同濃度的復(fù)方曲肽注射液（0.05%～10%）處理后，CYP2B6、CYP2C8、CYP2C19 酶的活性無明顯變化，未能擬合出 IC50；而 CYP1A2、CYP2C9、CYP2D6、CYP3A4 的活性均有所下降，且有一定的濃度依賴趨勢，但剩余酶活性均在50% 以上，其IC50分別為419.90%、97.78%、176.00%、19.42%，提示0.05%～10%的復(fù)方曲肽注射液對人肝微粒體CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4 均無明顯的抑制作用。

3.2 復(fù)方曲肽注射液對CYP450酶的體外誘導作用

復(fù)方曲肽注射液對人原代肝細胞中CYP1A2、CYP2B6、CYP3A4 mRNA 的誘導倍數(shù)見表4。由表4 可見，陽性誘導劑對3 個批次人原代肝細胞中CYP1A2、CYP2B6、CYP3A4 mRNA 的誘導倍數(shù)均超過2，而陰性對照組的誘導倍數(shù)均普遍低于空白對照組，表明孵育體系合格。0.05%～10%的復(fù)方曲肽注射液最多可使MHK細胞中CYP3A4 mRNA的表達增至空白對照組的4.88倍（有2個濃度點的平均誘導倍數(shù)＞2），且具有濃度依賴性升高趨勢；最多可使CYP1A2、CYP2B6 mRNA的表達分別增至空白對照組的3.23、4.19倍（均僅有1個濃度點的平均誘導倍數(shù)＞2）；0.05%～10%的復(fù)方曲肽注射液對HVN 和QBU 細胞中上述酶mRNA 的誘導倍數(shù)均低于2，說明該藥對CYP3A4 mRNA 的表達具有潛在的濃度依賴性誘導作用，對CYP1A2 和CYP2B6 無明顯的誘導作用[6—7]。

表4 復(fù)方曲肽注射液對人原代肝細胞中CYP1A2、CYP2B6、CYP3A4 mRNA的誘導倍數(shù)（±s，n＝3）

表4 復(fù)方曲肽注射液對人原代肝細胞中CYP1A2、CYP2B6、CYP3A4 mRNA的誘導倍數(shù)（±s，n＝3）

CYP1A2 CYP2B6 CYP3A4組別HVN 1 37.12±3.39 0.88±0.23 0.88±0.14 1.29±0.10 1.49±0.15 1.58±0.17 1.67±0.36 1.69±0.48空白對照組陽性誘導劑組陰性對照組復(fù)方曲肽注射液0.05%組復(fù)方曲肽注射液0.25%組復(fù)方曲肽注射液0.5%組復(fù)方曲肽注射液1%組復(fù)方曲肽注射液5%組復(fù)方曲肽注射液10%組QBU 1 45.71±6.91 0.98±0.14 0.96±0.12 0.91±0.17 0.75±0.06 0.99±0.05 1.13±0.27 1.13±0.11 MHK 1 23.73±1.57 0.94±0.09 0.87±0.22 1.02±0.14 1.06±0.16 1.52±0.29 1.86±0.30 3.23±0.13 HVN 1 21.11±2.43 1.01±0.22 0.66±0.06 0.94±0.19 0.62±0.03 0.86±0.07 1.15±0.10 1.65±0.34 QBU 1 25.26±2.72 1.40±0.02 0.77±0.05 0.74±0.05 0.73±0.07 0.77±0.03 1.06±0.04 1.24±0.08 MHK 1 20.00±3.90 0.92±0.03 0.67±0.05 0.95±0.07 0.94±0.05 1.21±0.05 1.87±0.15 4.19±0.11 HVN 1 55.29±7.36 1.15±0.09 1.20±0.12 0.73±0.08 0.64±0.13 1.00±0.06 0.96±0.13 1.25±0.03 QBU 1 33.21±2.77 0.97±0.14 0.91±0.03 0.75±0.01 0.68±0.05 0.86±0.07 0.91±0.07 1.43±0.10 MHK 1 28.46±5.87 0.85±0.33 1.30±0.03 1.26±0.07 1.31±0.13 1.61±0.15 2.41±0.32 4.88±0.89

3.3 復(fù)方曲肽注射液對大鼠體內(nèi)CYP450酶的影響

茶堿、安非他酮、瑞格列奈、甲苯磺丁脲、奧美拉唑、美托洛爾、咪達唑侖的主要藥動學參數(shù)見表5，藥-時曲線見圖2。由表5、圖2 可見，與對照組比較，大鼠連續(xù)10 d 尾靜脈注射復(fù)方曲肽注射液后，瑞格列奈的AUC0—t、AUC0—∞分別增加了157.10%、152.43%，清除率（CL）減少了62.76%；甲苯磺丁脲的AUC0—t、AUC0—∞分別增加了43.35%、48.76%，t1/2延長了16.28%；奧美拉唑的AUC0—t、AUC0—∞分別增加了41.54%、42.54%，CL減少了29.75%，組間比較差異均有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）；而茶堿、安非他酮、美托洛爾、咪達唑侖各藥動學參數(shù)組間比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。這說明瑞格列奈、甲苯磺丁脲和奧美拉唑在大鼠體內(nèi)的代謝明顯減慢；復(fù)方曲肽注射液可明顯抑制CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19 的活性，而對CYP1A2、CYP2B6、CYP2D6、CYP3A4的活性無明顯影響。

圖2 茶堿等探針底物的藥-時曲線（±s，n＝6）

表5 茶堿等探針底物的主要藥動學參數(shù)（±s，n＝6）

表5 茶堿等探針底物的主要藥動學參數(shù)（±s，n＝6）

a：與對照組比較，P＜0.05。

探針底物茶堿安非他酮瑞格列奈甲苯磺丁脲奧美拉唑美托洛爾咪達唑侖組別對照組實驗組對照組實驗組對照組實驗組對照組實驗組對照組實驗組對照組實驗組對照組實驗組t1/2/h 2.55±0.67 2.43±0.29 0.64±0.17 0.75±0.19 5.30±2.05 4.32±0.84 7.25±0.81 8.43±0.73a 2.53±2.52 1.76±2.36 0.75±0.18 2.71±0.35 1.42±0.72 0.66±0.12 cmax/（ng/mL）9 111.67±957.00 9 918.33±1 223.03 28.58±5.79 29.25±9.73 483.83±78.74 604.33±108.40 4 158.33±792.24 5 663.33±1 578.41 1 256.67±171.63 1 406.67±407.50 705.17±176.97 539.83±150.63 296.17±105.77 241.68±129.78 AUC0—t/（ng·h/mL）50 023.60±7 667.61 51 071.19±7 101.07 21.66±4.68 25.90±7.50 977.91±259.28 2 514.17±267.51a 44 986.32±8 513.40 64 489.15±16 352.47a 748.66±170.46 1 059.63±245.23a 716.04±323.13 589.34±129.15 290.96±147.05 254.63±87.16 AUC0—∞/（ng·h/mL）50 845.81±7 459.56 51 147.68±7 100.81 23.54±5.00 28.45±7.23 1 012.66±252.49 2 556.27±268.25a 50 614.62±10 466.30 75 293.43±19 503.52a 754.32±168.68 1 075.24±249.21a 720.01±322.95 594.44±129.70 296.26±147.28 267.79±84.78 CL/（L·h/kg）48.13±6.39 47.67±5.38 26 891.12±6 654.04 22 341.83±5 012.39 318.71±93.04 118.69±12.76a 6.27±1.68 4.26±1.12 4 192.13±968.24 2 944.96±680.87a 4 875.58±1 711.02 5 248.29±938.85 11 313.96±7 064.30 10 715.67±5 841.55

4 討論

體外抑制實驗是以陰性抑制劑為參照，通過在人肝微粒體中共孵育探針底物和不同體積分數(shù)的復(fù)方曲肽注射液，再通過抑制曲線的非線性擬合得到IC50值。結(jié)果顯示，復(fù)方曲肽注射液對人肝微粒體中CYP1A2、CYP2C9、CYP2D6、CYP3A4 的IC50分別為419.90%、97.78%、176.00%、19.42%。復(fù)方曲肽注射液的臨床用法用量為靜脈滴注10 mL/d，而標準成人的循環(huán)血量為4～5 L，故在此劑量下的最大血藥濃度為0.25%。該藥對上述酶的IC50均顯著超過0.25%，表明復(fù)方曲肽注射液在臨床常用劑量范圍內(nèi)，與上述酶底物聯(lián)用時發(fā)生相互作用的可能性較小。由于中藥成分復(fù)雜，故不能像分子量明確的單體化合物以摩爾單位來表示IC50；考慮到中藥注射劑直接注射入血，可準確計算出其在血液中的體積分數(shù)[10，14]，故本研究以體積分數(shù)來表示IC50值。

原代肝細胞已被廣泛用于預(yù)測藥物對CYP450酶的潛在誘導作用，并被美國FDA批準為該領(lǐng)域研究的有效載體[6]。因此，本研究依據(jù)藥物相互作用指導原則[6—7]，采用實時熒光定量PCR 法測定復(fù)方曲肽注射液對人原代肝細胞中CYP1A2、CYP2B6、CYP3A4的誘導作用，結(jié)果顯示，10% 的復(fù)方曲肽注射液對人原代肝細胞CYP3A4 mRNA表達的誘導作用為空白對照的4.88倍，且有濃度依賴趨勢，表明該藥對人原代肝細胞CYP3A4有潛在的誘導作用，當與CYP3A4 底物聯(lián)用時，可能會影響后者的體內(nèi)過程，臨床應(yīng)予以關(guān)注。本實驗選擇代謝酶mRNA的表達水平作為代謝酶誘導的評價終點，是考慮與評價酶活性相比，測定代謝酶mRNA的相對表達量更加敏感，可有助于降低CYP450 酶誘導實驗假陰性的概率。

在體外實驗基礎(chǔ)上，本研究采用Cocktail 探針藥物法在大鼠體內(nèi)進一步驗證藥物對酶的影響。Cocktail探針藥物法已成熟應(yīng)用于藥物對不同CYP450酶活性影響的研究，具有準確、經(jīng)濟、高通量的特點[15—16]。體內(nèi)實驗結(jié)果表明，復(fù)方曲肽注射液以臨床等效劑量連續(xù)給藥后，大鼠體內(nèi)CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19 活性被明顯抑制，而CYP1A2、CYP2B6、CYP2D6、CYP3A4 活性未受明顯影響。然而，體外實驗并未發(fā)現(xiàn)復(fù)方曲肽注射液對CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19 的抑制作用，這可能與CYP450酶的種屬差異和體內(nèi)外研究體系不同有關(guān)。有研究表明，在人和大鼠之間，除CYP1A具有較高的同源性外，CYP2C、CYP2D、CYP3A在分布、表達和催化活性方面均存在顯著差異[17]。

綜上所述，復(fù)方曲肽注射液在體外可誘導CYP3A4 mRNA 的表達，對其他酶活性及表達無明顯影響；其在大鼠體內(nèi)可明顯抑制CYP2C8、CYP2C9 和CYP2C19 的活性，結(jié)果存在一定的種屬差異。鑒于此，上述研究結(jié)果尚需臨床試驗進一步證實。