水飛薊素對神經(jīng)膠質(zhì)瘤的體內(nèi)外抑制作用及機(jī)制Δ

劉 明，劉熙鵬，李 淳，甄 誠，劉春江，王海洋，鞏建青（河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院神經(jīng)外科，河北 張家口 075000）

膠質(zhì)瘤是成人中樞神經(jīng)系統(tǒng)常見的惡性原發(fā)性腦腫瘤[1]。神經(jīng)膠質(zhì)瘤是膠質(zhì)瘤的常見類型之一，具有侵襲性，且患者預(yù)后不佳[2]。由于大腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)的特殊性（如存在血腦屏障），使得藥物研發(fā)面臨諸多挑戰(zhàn)[2]。盡管研究者在腫瘤診斷方式和治療策略方面取得了新的進(jìn)展，但神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者的病死率仍然很高[3]。因此，尋找更有效的神經(jīng)膠質(zhì)瘤治療手段十分必要。

水飛薊素（silymarin，SM）是一種多酚類黃酮，具有抗氧化、抗癌等多種生物活性[4]。據(jù)報(bào)道，SM 可抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖，促進(jìn)其凋亡[5]；同時(shí)，其可抑制膠質(zhì)瘤皮下移植模型裸鼠體內(nèi)腫瘤的生長[6]。以上研究均表明，SM具有一定的抗癌活性。相關(guān)研究顯示，抑制蛋白激酶B（protein kinase B，又稱Akt）/促分裂原活化的蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信號通路可抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲[7]；SM 可通過MAPK 信號通路來促進(jìn)人肺腺癌A549 細(xì)胞的凋亡[8]?？梢?，Akt/MAPK信號通路可能是SM調(diào)控神經(jīng)膠質(zhì)瘤等腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡的潛在途徑之一?；诖耍狙芯繑M探討SM對人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、凋亡及裸鼠體內(nèi)移植瘤生長的影響，并通過Akt/MAPK信號通路探究其潛在作用機(jī)制，為神經(jīng)膠質(zhì)瘤的臨床治療提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括BPN-50CH型CO2培養(yǎng)箱（上海五久自動化設(shè)備有限公司）、ST-360 型酶標(biāo)儀（上?？迫A實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有限公司）、FACS Calibur型流式細(xì)胞儀（美國Beckman Coulter 公司）、DYCZ-MINI 4 型四板垂直電泳儀（北京六一儀器有限公司）、CX33型顯微鏡（日本Olympus 公司）、EC3 型凝膠成像系統(tǒng)（美國UVP 公司）等。

1.2 主要試劑

SM 對照品（批號XKB0213，純度≥98%）購自上海晅科生物科技有限公司；SC79對照品（Akt激活劑，批號HY-18749，純度≥98%）購自美國MCE 公司；CCK-8 試劑盒（批號CK04）購自深圳市紐邦生物科技有限公司；Annexin Ⅴ-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（批號CA001）購自南京萊富賽生物科技有限公司；兔源增殖細(xì)胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）、B細(xì)胞淋巴瘤2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）、Bcl-2 相關(guān)X 蛋白（Bcl-2-associated X protein，Bax）、胱天蛋白酶3（caspase-3）、Akt、p38 MAPK、胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2（extracellular signal-regulated kinase 1/2，ERK1/2）、磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）、磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）、β-肌動蛋白（β-actin）一抗和辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的羊抗兔IgG 二抗（批號分別為ab29、ab32124、ab32503、ab32351、ab8805、ab170099、ab184699、ab38449、ab178867、ab278538、ab8245、ab6721）均購自英國Abcam公司；DMEM培養(yǎng)基（批號MED-1001）購自武漢賽奧斯生物科技有限公司。

1.3 細(xì)胞與動物

人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87（批號CL-0238）購自武漢益普生物科技有限公司。

SPF 級雄性BALB/c 裸鼠（30 只，5 周齡，體重約20 g）購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動物有限公司，生產(chǎn)許可證號為SCXK（湘）2019-0017。所有裸鼠均飼養(yǎng)于溫度（23±3）℃、相對濕度（40±10）%、12 h 光照/12 h 黑暗交替的動物房內(nèi)，自由攝食、飲水。本動物實(shí)驗(yàn)方案獲得河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核通過（批件號W2022013）。

2 方法

2.1 體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

2.1.1 細(xì)胞培養(yǎng)與分組

將U87細(xì)胞接種于含10%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素的DMEM 培養(yǎng)基中，于37 ℃、5%CO2條件下培養(yǎng)，每3 d更換1次培養(yǎng)基。取對數(shù)生長期細(xì)胞，隨機(jī)分為對照組（NC組）、低質(zhì)量濃度SM組（SM-L組）、中質(zhì)量濃度SM 組（SM-M 組）、高質(zhì)量濃度SM 組（SM-H 組）、Akt 激活劑組（SC79 組）、高質(zhì)量濃度SM 聯(lián)合Akt 激活劑組（SM-H+SC79 組）。參考相關(guān)文獻(xiàn)[9—10]及前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置各藥物組質(zhì)量濃度：SM-L 組、SM-M 組、SM-H組、SC79 組細(xì)胞分別用50、100、200 μg/mL 的SM 和20 μmol/L 的SC79 處理48 h；SM-H+SC79 組細(xì)胞用200 μg/mL的SM和20 μmol/L的SC79共同處理48 h；NC組細(xì)胞不經(jīng)任何藥物處理，正常培養(yǎng)48 h。

2.1.2 細(xì)胞增殖檢測

采用CCK-8 法進(jìn)行檢測。取對數(shù)生長期細(xì)胞，按1×104個(gè)/孔接種于96 孔板中，按照“2.1.1”項(xiàng)下方法分組（每組設(shè)置6 個(gè)復(fù)孔）、處理。隨后，每孔加入CCK-8試劑10 μL，于37 ℃下孵育1 h，采用酶標(biāo)儀于450 nm波長處檢測各孔的光密度（OD）值，用以反映細(xì)胞的增殖能力。

2.1.3 細(xì)胞克隆形成能力檢測

采用克隆形成實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測。取對數(shù)生長期細(xì)胞，按600 個(gè)/孔接種于6 孔板中，按照“2.1.1”項(xiàng)下方法分組（每組設(shè)置6 個(gè)復(fù)孔）、處理后，培養(yǎng)14 d。收集各組細(xì)胞，用甲醇固定，再以0.1%結(jié)晶紫染色，用磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌后，使用顯微鏡觀察其克隆形成情況并計(jì)算克隆形成率：細(xì)胞克隆形成率＝平均細(xì)胞克隆數(shù)/每孔接種細(xì)胞總數(shù)×100%。

2.1.4 細(xì)胞凋亡檢測

采用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢測。取對數(shù)生長期細(xì)胞，按1×105個(gè)/孔接種于6 孔板中，按照“2.1.1”項(xiàng)下方法分組（每組設(shè)置6個(gè)復(fù)孔）、處理。收集各組細(xì)胞，用PBS洗滌后，按Annexin Ⅴ-FITC/PI 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒說明書方法進(jìn)行染色，于37 ℃下避光孵育30 min后，采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率。

2.1.5 細(xì)胞中增殖/凋亡相關(guān)蛋白和Akt/MAPK 信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)檢測

采用Western blot 法進(jìn)行檢測。取對數(shù)生長期細(xì)胞，按1×104個(gè)/孔接種于96孔板中，按照“2.1.1”項(xiàng)下方法分組（每組設(shè)置6 個(gè)復(fù)孔）、處理。收集各組細(xì)胞，用RIPA裂解液裂解以提取總蛋白。蛋白經(jīng)定量、電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉后，加入增殖/凋亡相關(guān)蛋白（PCNA、Bax、Bcl-2、caspase-3）、Akt/MAPK 信號通路相關(guān)蛋白（Akt、p-Akt、p38 MAPK、p-p38 MAPK、ERK1/2、p-ERK1/2）、內(nèi)參蛋白（β-actin）的一抗（稀釋比例分別為1∶1 000、1∶2 000、1∶1 000、1∶2 000、1∶2 000、1∶2 000、1∶2 000、1∶2 000、1∶2 000、1∶1 000、1∶1 000），于4 ℃下孵育過夜；洗膜后，加入相應(yīng)二抗（稀釋比例為1∶2 000），于室溫下孵育1.5 h；再次洗膜后，加入ECL 試劑顯色并使用凝膠成像系統(tǒng)成像。使用Image J 軟件分析蛋白條帶灰度值，以PCNA、Bax、Bcl-2、caspase-3 與內(nèi)參蛋白的灰度值比值表示上述蛋白的表達(dá)水平，以p-Akt 與Akt、p-p38 MAPK 與p38 MAPK、p-ERK1/2 與ERK1/2 的灰度值比值分別表示Akt、p38 MAPK、ERK1/2 蛋白的磷酸化水平。

2.2 體內(nèi)異種移植瘤實(shí)驗(yàn)

取U87細(xì)胞懸液（200 μL含細(xì)胞1×105個(gè)），皮下注射至BALB/c裸鼠的右側(cè)腋窩內(nèi)，當(dāng)移植瘤體可觸及（約接種后7 d）時(shí)，將裸鼠隨機(jī)分為對照組（裸鼠NC組）、低劑量SM 組（裸鼠SM-L 組）、中劑量SM 組（裸鼠SM-M組）、高劑量SM 組（裸鼠SM-H 組）、Akt 激活劑組（裸鼠SC79 組）、高劑量SM 聯(lián)合Akt 激活劑組（裸鼠SM-H+SC79組），每組5只。參考相關(guān)文獻(xiàn)[9，11]及前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置各藥物組劑量：裸鼠SM-L 組、裸鼠SM-M 組、裸鼠SM-H 組裸鼠分別灌胃25、50、100 mg/kg 的SM，同時(shí)腹腔注射等體積生理鹽水；裸鼠SC79 組裸鼠腹腔注射40 mg/kg 的SC79，同時(shí)灌胃等體積生理鹽水；裸鼠SMH+SC79 組裸鼠灌胃100 mg/kg 的SM，同時(shí)腹腔注射40 mg/kg 的SC79；裸鼠NC 組裸鼠灌胃并腹腔注射等體積生理鹽水，每天1 次，連續(xù)28 d。末次給藥24 h 后，以頸椎脫臼處死各組裸鼠，切除瘤體并稱定質(zhì)量，以游標(biāo)卡尺測量并計(jì)算瘤體體積：瘤體體積＝[0.5×（a+b）]3（式中，a、b分別為腫瘤的長徑、短徑）。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 18.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。

3 結(jié)果

3.1 體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1.1 SM對細(xì)胞增殖和克隆形成能力的影響

與NC 組比較，SM-L 組、SM-M 組、SM-H 組細(xì)胞的OD 值、克隆形成率均顯著降低且有濃度依賴性（P＜0.05），SC79 組細(xì)胞的OD 值、克隆形成率均顯著升高（P＜0.05）；與SM-H 組比較，SM-H+SC79 組細(xì)胞的OD值、克隆形成率均顯著升高（P＜0.05）。結(jié)果見表1、圖1。

圖1 各組細(xì)胞克隆形成情況比較

表1 各組細(xì)胞OD 值、克隆形成率、凋亡率比較（±s，n＝6）

表1 各組細(xì)胞OD 值、克隆形成率、凋亡率比較（±s，n＝6）

a：與NC組比較，P＜0.05；b：與SM-L組比較，P＜0.05；c：與SM-M組比較，P＜0.05；d：與SM-H組比較，P＜0.05。

凋亡率/%25.56±1.28 32.28±1.61a 40.46±2.28ab 51.52±2.35abc 14.77±0.69a 33.65±1.78d組別NC組SM-L組SM-M組SM-H組SC79組SM-H+SC79組OD值0.83±0.06 0.71±0.05a 0.62±0.04ab 0.41±0.03abc 0.98±0.08a 0.66±0.07d克隆形成率/%57.78±2.36 50.33±2.17a 41.42±2.05ab 28.35±1.43abc 67.76±3.08a 42.43±2.26d

3.1.2 SM對細(xì)胞凋亡的影響

與NC 組比較，SM-L 組、SM-M 組、SM-H 組細(xì)胞的凋亡率均顯著升高且有濃度依賴性（P＜0.05），SC79 組細(xì)胞的凋亡率顯著降低（P＜0.05）；與SM-H 組比較，SM-H+SC79組細(xì)胞的凋亡率顯著降低（P＜0.05）。結(jié)果見表1、圖2。

圖2 各組細(xì)胞凋亡情況比較

3.1.3 SM對細(xì)胞中增殖/凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

與NC 組比較，SM-L 組、SM-M 組、SM-H 組細(xì)胞中PCNA、Bcl-2蛋白的表達(dá)水平均顯著降低，Bax、caspase-3 蛋白的表達(dá)水平均顯著升高，且均有濃度依賴性（P＜0.05）；SC79組細(xì)胞中PCNA、Bcl-2蛋白的表達(dá)水平均顯著升高，Bax、caspase-3 蛋白的表達(dá)水平均顯著降低（P＜0.05）。與SM-H 組比較，SM-H+SC79 組細(xì)胞中PCNA、Bcl-2 蛋白的表達(dá)水平均顯著升高，Bax、caspase-3 蛋白的表達(dá)水平均顯著降低（P＜0.05）。結(jié)果見圖3、表2。

圖3 各組細(xì)胞中增殖/凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的電泳圖

表2 各組細(xì)胞中增殖/凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平比較（±s，n＝6）

表2 各組細(xì)胞中增殖/凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平比較（±s，n＝6）

a：與NC組比較，P＜0.05；b：與SM-L組比較，P＜0.05；c：與SM-M組比較，P＜0.05；d：與SM-H組比較，P＜0.05。

caspase-3/β-actin 0.47±0.03 0.61±0.05a 0.88±0.07ab 1.16±0.09abc 0.24±0.02a 0.73±0.07d組別NC組SM-L組SM-M組SM-H組SC79組SM-H+SC79組PCNA/β-actin 0.96±0.08 0.83±0.07a 0.65±0.04ab 0.36±0.03abc 1.28±0.11a 0.73±0.07d Bax/β-actin 0.23±0.02 0.37±0.03a 0.59±0.05ab 0.89±0.08abc 0.11±0.01a 0.48±0.04d Bcl-2/β-actin 0.84±0.08 0.72±0.07a 0.61±0.05ab 0.23±0.02abc 1.45±0.16a 0.67±0.06d

3.1.4 SM對細(xì)胞中Akt/MAPK信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

與NC 組比較，SM-L 組、SM-M 組、SM-H 組細(xì)胞中Akt、p38 MAPK、ERK1/2蛋白的磷酸化水平均顯著降低且有濃度依賴性（P＜0.05），SC79 組細(xì)胞中Akt、p38 MAPK、ERK1/2 蛋白的磷酸化水平均顯著升高（P＜0.05）；與SM-H 組比較，SM-H+SC79 組細(xì)胞中Akt、p38 MAPK、ERK1/2 蛋白的磷酸化水平均顯著升高（P＜0.05）。結(jié)果見圖4、表3。

圖4 各組細(xì)胞中Akt/MAPK 信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)的電泳圖

表3 各組細(xì)胞中Akt/MAPK 信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平比較（±s，n＝6）

表3 各組細(xì)胞中Akt/MAPK 信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平比較（±s，n＝6）

a：與NC組比較，P＜0.05；b：與SM-L組比較，P＜0.05；c：與SM-M組比較，P＜0.05；d：與SM-H組比較，P＜0.05。

組別NC組SM-L組SM-M組SM-H組SC79組SM-H+SC79組p-Akt/Akt 0.91±0.07 0.82±0.08a 0.67±0.06ab 0.23±0.02abc 0.98±0.01a 0.69±0.06d p-p38 MAPK/p38 MAPK 0.81±0.08 0.65±0.06a 0.51±0.05ab 0.34±0.03abc 0.93±0.06a 0.57±0.05d（p-ERK1/2）/（ERK1/2）0.72±0.06 0.61±0.05a 0.53±0.04ab 0.11±0.01abc 0.86±0.06a 0.55±0.05d

3.2 體內(nèi)異種移植瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果

與裸鼠NC組比較，裸鼠SM-L組、裸鼠SM-M組、裸鼠SM-H 組裸鼠體內(nèi)瘤體的質(zhì)量及體積均顯著降低/減小且有劑量依賴性（P＜0.05），裸鼠SC79 組裸鼠體內(nèi)瘤體的質(zhì)量及體積均顯著升高/增大（P＜0.05）；與裸鼠SM-H組比較，裸鼠SM-H+SC79組裸鼠體內(nèi)腫瘤的質(zhì)量及體積均顯著升高/增大（P＜0.05）。結(jié)果見圖5、表4。

圖5 各組裸鼠體內(nèi)腫瘤生長情況比較

表4 各組裸鼠體內(nèi)瘤體質(zhì)量及體積比較（±s，n＝5）

表4 各組裸鼠體內(nèi)瘤體質(zhì)量及體積比較（±s，n＝5）

a：與裸鼠NC組比較，P＜0.05；b：與裸鼠SM-L組比較，P＜0.05；c：與裸鼠SM-M組比較，P＜0.05；d：與裸鼠SM-H組比較，P＜0.05。

瘤體體積/mm3 95.83±4.26 85.42±4.11a 66.67±3.26ab 43.75±2.01abc 108.33±4.83a 77.08±2.86d組別裸鼠NC組裸鼠SM-L組裸鼠SM-M組裸鼠SM-H組裸鼠SC79組裸鼠SM-H+SC79組瘤體質(zhì)量/g 0.46±0.03 0.41±0.04a 0.32±0.03ab 0.21±0.02abc 0.52±0.04a 0.37±0.03d

4 討論

膠質(zhì)瘤作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)最重要的原發(fā)性腫瘤，有多種亞型。臨床實(shí)踐顯示，即使采用了積極的治療策略（放療和術(shù)后化療），彌漫性膠質(zhì)瘤患者生存期短的問題仍未得到解決[12]?？梢?，為了有效控制惡性腫瘤的進(jìn)展、擴(kuò)散、轉(zhuǎn)移，改善患者的預(yù)后，開發(fā)新的膠質(zhì)瘤治療藥物具有重要意義。

SM 是一種黃酮木脂素類活性成分，可通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來抑制不同腫瘤細(xì)胞系的生長。據(jù)報(bào)道，SM 可誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞凋亡，并可抑制肝癌細(xì)胞系MHCC97 增殖[13—14]，提示該成分有一定的抗腫瘤作用。研究指出，PCNA 對腫瘤細(xì)胞DNA 的復(fù)制至關(guān)重要，其表達(dá)水平越高表明細(xì)胞的增殖能力越強(qiáng)[15]。Bax、Bcl-2、caspase-3 可用于評估細(xì)胞的凋亡能力：Bax 可單獨(dú)形成同源二聚體，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡；Bcl-2、Bax與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)，降低Bcl-2 蛋白表達(dá)、增強(qiáng)Bax 蛋白表達(dá)，可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡；此外，Bax能促使細(xì)胞色素C釋放并轉(zhuǎn)移至線粒體，激活caspase-3，而活化的caspase-3 可損傷核內(nèi)DNA，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[16]。本研究結(jié)果顯示，SM 可濃度依賴性地抑制U87 細(xì)胞的增殖和克隆形成，并促進(jìn)其凋亡；同時(shí)，該成分可濃度依賴性地上調(diào)細(xì)胞中Bax、caspase-3 蛋白的表達(dá)，下調(diào)PCNA、Bcl-2 蛋白的表達(dá)，表明SM對人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞有明顯的抑制作用，有望成為神經(jīng)膠質(zhì)瘤治療的候選藥物。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，SM 可劑量依賴性地抑制異種移植瘤裸鼠的腫瘤生長，初步證實(shí)了SM對神經(jīng)膠質(zhì)瘤的體內(nèi)抑制作用。

Akt/MAPK 信號通路是經(jīng)典的腫瘤相關(guān)信號通路，其異常激活與膠質(zhì)瘤細(xì)胞的惡性行為有關(guān)[17]。已有研究指出，激活MAPK 信號通路可增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞的增殖、遷移等能力[18]；抑制Akt信號通路活化可抑制胃癌細(xì)胞的體外增殖[19]。這表明Akt/MAPK信號通路參與了多種腫瘤的惡性進(jìn)展。本研究結(jié)果顯示，與NC 組比較，SC79 組U87 細(xì)胞中Akt、p38 MAPK、ERK1/2 蛋白的磷酸化水平均顯著升高，細(xì)胞增殖、克隆形成能力均顯著增強(qiáng)，凋亡能力有所減弱，裸鼠體內(nèi)瘤體質(zhì)量及體積均顯著升高/增大，表明Akt/MAPK信號通路參與了U87細(xì)胞的增殖、凋亡及裸鼠體內(nèi)的腫瘤生長過程，與文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果[18—19]基本一致。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，SM可抑制細(xì)胞中Akt/MAPK信號通路相關(guān)蛋白的表達(dá)，且呈劑量依賴性，推測該成分對U87 細(xì)胞增殖、凋亡及裸鼠體內(nèi)腫瘤生長的影響可能與抑制Akt/MAPK信號通路有關(guān)。

為了驗(yàn)證上述作用機(jī)制，本研究在高質(zhì)量濃度/高劑量SM 的基礎(chǔ)上聯(lián)合Akt 激活劑SC79 對U87 細(xì)胞及移植瘤裸鼠進(jìn)行干預(yù)，結(jié)果顯示，SC79 減弱了SM 對細(xì)胞增殖、克隆形成及裸鼠體內(nèi)移植瘤生長的抑制作用，同時(shí)也減弱了SM 對細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用，表明SM 可能通過抑制Akt/MAPK信號通路來發(fā)揮上述作用。

綜上，SM 可能通過抑制Akt/MAPK 信號通路來促進(jìn)U87 細(xì)胞的凋亡，抑制細(xì)胞的增殖、克隆形成及異種移植瘤裸鼠體內(nèi)腫瘤的生長。但SM對神經(jīng)膠質(zhì)瘤的抑制作用可能還涉及其他通路，有待后續(xù)進(jìn)一步研究。