貴州省冊亨縣和望謨縣大型真菌資源收集及鑒定分析

李 彪，尚念杰，楊通靜，趙德剛，朱國勝，周佳佳，蘇榮榮，武華文，桂 陽

（1.貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院·貴州省農(nóng)作物品種資源研究所 貴陽 550006； 2.貴州省食用菌育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 貴陽 550006；3.貴州省食用菌現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系資源育種功能實(shí)驗(yàn)室 貴陽 550006；4.貴州省食用菌工程技術(shù)研究中心資源育種實(shí)驗(yàn)室 貴陽 550006；5.貴州省黔西南州喀斯特區(qū)域發(fā)展研究院 貴州 興義 562499； 6.黔西南民族職業(yè)技術(shù)學(xué)院 貴州 興義 562499）

中國是北半球生物多樣性最豐富的國家之一，其中大型真菌（Macrofungi）更是豐富多彩，大型真菌也稱蕈菌，是能夠產(chǎn)生顯著子實(shí)體的一類真菌，包括大部分擔(dān)子菌和部分子囊菌，種類繁多，絕大多數(shù)生于森林、空曠山地和草原中。貴州省地理位置特殊，喀斯特地貌發(fā)育典型，生境異質(zhì)性程度高，氣候溫暖濕潤，為大型真菌生長發(fā)育提供了有利條件。前人研究發(fā)現(xiàn)貴州大型真菌中食用真菌、藥用真菌資源在貴州省各市州均很豐富，但是缺乏對(duì)黔西南州望謨縣和冊亨縣大型真菌較為系統(tǒng)的資源普查和研究。

貴州省黔西南州冊亨縣和望謨縣大型真菌資源豐富，但組成和分布尚未清楚，對(duì)該地區(qū)優(yōu)勢大型真菌的研究也不夠系統(tǒng)。系統(tǒng)調(diào)查貴州大型真菌資源，摸清資源種類、特點(diǎn)、分布及儲(chǔ)量情況，研究其遺傳多樣性、分析物種組成，開展分子系統(tǒng)學(xué)分析，鑒定出貴州菌類優(yōu)勢科、屬、種，對(duì)具有開發(fā)價(jià)值的特色菌類資源進(jìn)行創(chuàng)新利用，研究菌類資源保存關(guān)鍵技術(shù)，建立貴州菌類資源種質(zhì)庫，保存資源標(biāo)本、菌株和DNA，對(duì)貴州大型真菌的創(chuàng)新利用具有重要價(jià)值。為充分了解貴州省的大型真菌物種多樣性，對(duì)貴州省黔西南州冊亨縣和望謨縣進(jìn)行實(shí)地樣方調(diào)查、標(biāo)本采集和標(biāo)本鑒定，對(duì)黔西南州冊亨縣和望謨縣菌種資源種類、優(yōu)勢科屬、頻度成分等進(jìn)行初步研究，其結(jié)果可為貴州野生菌菌種資源保護(hù)和利用提供理論參考，并為貴州生態(tài)資源優(yōu)勢的野生菌產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展提供理論依據(jù)和資料支撐。

1 材料與方法

1.1 自然概況

貴州省冊亨縣和望謨縣的大型真菌資源豐富。冊亨縣地處貴州西南部云貴高原向廣西低山丘陵過渡的斜坡地帶，境內(nèi)氣候?qū)賮啛釒嘏瘽駶櫦撅L(fēng)氣候，夏秋多濕、冬春干旱，氣候溫暖，年均氣溫19.7 ℃，林木生長快。望謨縣境內(nèi)溝壑縱橫，山谷河溪相互交錯(cuò)，為典型的高原山地，熱量豐富、光照充足、雨熱同季，擁有豐富的森林資源，2018 年全縣的森林覆蓋率達(dá)68.28%，有“貴州天然溫室”之稱。兩縣具備適宜各類大型真菌生長和發(fā)育的生態(tài)環(huán)境。

1.2 調(diào)查及分析方法

成立大型真菌資源普查團(tuán)隊(duì)，采用隨機(jī)路線踏查法，結(jié)合當(dāng)?shù)卣{(diào)查，主要走訪當(dāng)?shù)毓睫r(nóng)和長期居住農(nóng)戶。調(diào)查內(nèi)容：大型真菌主要生長的時(shí)間、地點(diǎn)，當(dāng)?shù)鼐用袷秤煤退幱么笮驼婢N類的情況。在2019—2020 年3—12 月進(jìn)行大型真菌普查和標(biāo)本采集。標(biāo)本采集地為貴州省黔西南州冊亨縣和望謨縣，走訪調(diào)研的地點(diǎn)有秧壩鎮(zhèn)、福堯村、洛央村、小米地村、納朝村、打狼村、樂康村、納上林場、打易鎮(zhèn)、新屯街道、蔗香鎮(zhèn)等。大型真菌采集時(shí)進(jìn)行編號(hào)、生境記錄、伴生植物記錄等，利用生命觀察（Biotracks 4.0.2）軟件記錄海拔、經(jīng)緯度、采集地點(diǎn)、具體采集時(shí)間等基本信息。大型真菌標(biāo)本保存于貴州省食用菌育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本館。

大型真菌數(shù)量統(tǒng)計(jì)基于對(duì)冊亨縣和望謨縣區(qū)域地上、腐木上等的子實(shí)體采集數(shù)量，對(duì)優(yōu)勢科屬等的分布主要采用數(shù)量統(tǒng)計(jì)的方法，使用Excel（Microsoft Office 2019）進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。

1.3 標(biāo)本鑒定

在采集當(dāng)天記錄新鮮標(biāo)本的形態(tài)：菌蓋直徑、顏色、形狀、附屬物；菌褶或菌管顏色、著生方式、細(xì)密度；菌柄長度、形狀、質(zhì)地、附屬物；菌托，菌環(huán)等。

DNA 鑒定：用CTAB 法提取標(biāo)本（硅膠干燥保存）DNA，隨后進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）進(jìn)行特異性擴(kuò)增，擴(kuò)增引物選用ITS（ITS4/ITS5），對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳檢測，并將PCR 產(chǎn)物送往上海生工生物有限公司進(jìn)行測序。測序得到的DNA 序列通過BioEdit（About BioEdit version 7.0.9.0）軟件互補(bǔ)拼接獲得高質(zhì)量的完整序列。通過Genbank 數(shù)據(jù)庫對(duì)拼接好的DNA 序列進(jìn)行相似性比對(duì)。綜合形態(tài)分類和比對(duì)結(jié)果，進(jìn)行種類鑒定。

2 結(jié)果與分析

2.1 冊亨縣和望謨縣大型真菌物種組成成分

通過大型真菌普查和標(biāo)本采集，共采集到353 個(gè)標(biāo)本進(jìn)行形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)分析，成功鑒定了48 個(gè)科（311 個(gè)）、74 個(gè)屬（290 個(gè)）、134 個(gè)種（134 個(gè)）。采集的部分大型真菌子實(shí)體見圖1。結(jié)合分子生物學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)共有2 門、13 綱、23 目、48 科、74 屬、134 種真菌，其中子囊菌門有8 綱12 目12 科13 屬15 種，約占總數(shù)的11.19%；擔(dān)子菌門有5 綱11 目36 科61 屬119 種，約占總數(shù)的88.81%，數(shù)量統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1。

表1 冊亨縣和望謨縣大型真菌資源數(shù)量

圖1 冊亨縣和望謨縣大型真菌部分屬子實(shí)體不同角度圖

2.2 冊亨縣和望謨縣大型真菌目、科、屬統(tǒng)計(jì)

黔西南州冊亨縣和望謨縣大型真菌有傘菌目Agaricales、非 褶 菌 目Aphyllophorales、多 孔 菌 目Polyporales、馬勃菌目Lycoperdales、毛霉目Mucorales、硬皮馬勃目Sclerodermatales、銀耳目Tremellales、牛肝菌目Boletales、肉座菌目Hypocreales、鏈孢霉目Moniliales、雞油菌目Cantharellales、革菌目Thelephorales、內(nèi)孢霉目Endomycetales、柄灰包目Tulostomatales、球殼目Plectomycetes、銹革孔菌目Hymenochaetales、盤菌目Pezizales、蘑菇目Agaricales、隱球酵母目Cryptococcales、紅螺菌目Rhodospirillales、瘤座孢目Tuberculariales、炭角菌目Xylariales、叢梗孢目Moniliales 共23 目。這些目真菌分屬于多孔菌科Polyporaceae 等48 個(gè)科、黑管菌屬等74 個(gè)屬（表2）。

表2 冊亨縣和望謨縣大型真菌科、屬、種數(shù)量統(tǒng)計(jì)

將采集到的標(biāo)本進(jìn)行ITS 測序后，進(jìn)行分子生物學(xué)和形態(tài)學(xué)分析。由表3 可知，多孔菌科Polyporaceae 出現(xiàn)的頻度最高（17.36%），其次為紅菇科Russulaceae（12.54% ）、牛 肝 菌 科 Boletaceae（12.22%）、傘菌科Agaricaceae（6.75%）、網(wǎng)褶菌科Paxillaceae（6.11%）等，其中當(dāng)?shù)鼐r(nóng)采食紅菇科和牛肝菌科較多。

表3 冊亨縣和望謨縣大型真菌各科出現(xiàn)頻度

對(duì)各屬大型真菌出現(xiàn)的頻度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，由表4 可知，出現(xiàn)頻度最高的是乳菇屬（6.90%），其次為網(wǎng)褶菌屬（6.55%）、粉孢牛肝菌屬（5.52%）、紅菇屬（5.52%）蘑菇屬（5.17%）、靈芝屬（4.83%）、蠟?zāi)伲?.48%）等。

表4 冊亨縣和望謨縣大型真菌各屬出現(xiàn)頻度

2.3 冊亨縣和望謨縣大型真菌資源優(yōu)勢科和優(yōu)勢屬分析

將物種數(shù)大于等于10 的科定為相對(duì)豐富的科，即優(yōu)勢科。經(jīng)過統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)優(yōu)勢科一共有9個(gè)（圖2），分別為多孔菌科Polyporaceae（54 個(gè)，17.36%）、紅菇科Russulaceae（39 個(gè)，12.54%）、牛肝菌科Boletaceae（38 個(gè)，12.22%）、傘菌科Agaricaceae（21 個(gè)，6.75%）、網(wǎng)褶菌科Paxillaceae（19 個(gè)，6.11%）、白蘑科Tricholomataceae（14 個(gè)，4.50%）、類臍菇科Omphalotaceae（11 個(gè)，3.54%）、側(cè)耳科Pleurotaceae（10 個(gè)，3.22%）、鵝膏菌科Amanitaceae（10個(gè)，3.22%），占總數(shù)的69.46%，這些科種類相對(duì)豐富，是冊亨縣和望謨縣的關(guān)鍵類群。以種數(shù)大于等于5 的屬為優(yōu)勢屬，經(jīng)過統(tǒng)計(jì)優(yōu)勢屬有18 個(gè)（圖3），分別為乳菇屬（20 個(gè)，6.90%）、網(wǎng)褶菌屬（19 個(gè)，6.55%）、粉孢牛肝菌屬（16 個(gè)，5.52%）、紅菇屬（16 個(gè)，5.52%）、蘑菇屬（15 個(gè)，5.17%）、靈芝屬（14 個(gè)，4.83%）、蠟?zāi)伲?3 個(gè)，4.48%）、裸腳傘屬（13 個(gè)，4.48%）、小孔菌屬（11 個(gè)，3.79%）、鵝膏菌屬（10 個(gè)，3.45%）、多孔菌屬（7 個(gè)，2.41%）、綠菌屬（7 個(gè)，2.41%）、栓菌屬（6 個(gè)，2.07%）、絲蓋傘屬（6 個(gè)，2.07%）、馬勃菌屬（6 個(gè)，2.07%）、脆柄菇屬（5個(gè)，1.72%）、香菇屬（5 個(gè)，1.72%）、斜蓋傘屬（5 個(gè)，1.72%），占總數(shù)的66.88%，這些屬資源較為豐富，且開發(fā)和利用價(jià)值也較高。

圖2 冊亨縣和望謨大型真菌優(yōu)勢科（含10 種及以上的科）統(tǒng)計(jì)

圖3 冊亨縣和望謨縣大型真菌優(yōu)勢屬（含5 種以上的屬）統(tǒng)計(jì)

2.4 冊亨縣和望謨縣大型真菌與植被營養(yǎng)需求分析

由圖4 可知，在冊亨縣和望謨縣采集到的353個(gè)大型真菌中，大型真菌資源較為豐富的林型有茶樹林（31 個(gè)，占8.78%）、青岡林（67 個(gè)，占18.98%）、針闊混交林（156 個(gè)，占44.19%）、杉木林（68 個(gè)，占19.26%）、竹林（2 個(gè)，占0.57%）、板栗樹林（3 個(gè)，占0.85%）以及灌叢草地（26 個(gè)，占7.37%）。由圖5 可知，在此片區(qū)采集的353 個(gè)大型真菌資源中，主要野生菌為土生菌（206 個(gè)，占58.36%）、木生菌（98個(gè)，占27.76%）和外生菌根菌（49 個(gè)，占13.88%）。

圖4 冊亨縣和望謨縣不同植被林下大型真菌種數(shù)量

圖5 大型真菌生長類型統(tǒng)計(jì)

2.5 冊亨縣和望謨縣大型真菌可食用和藥用分析

采集到的大型真菌資源中，包含食用菌、毒菌、食藥用菌以及食藥不明的真菌。常見的食用菌有甜蘑菇（）、蘑菇（sp.）、圈托鵝膏菌（）、牛肝菌（）、網(wǎng)柄牛肝菌（）、栗色鎖瑚菌（）、灰鎖瑚菌（）、多疣波邊革菌（）、栗色褐孔菌（）、鉛色短孢牛肝菌（）、血紅園圃牛肝菌（）、卵孢長根菇（）、杏仁形長根菇（sp.）、煙草色纖孔菌（）、紅蠟?zāi)ⅲǎ⒛災(zāi)ⅲǎ?、條柄蠟?zāi)ⅲǎ⒗w細(xì)乳菇（）、溫泉乳菇（）、短囊體乳菇（）、楊樹乳菇（）、思茅乳菇（）、多汁乳菇（）、粉綠多汁乳菇（）、淡黃多汁乳菇（）、乳菇（sp.）、皺蓋疣柄牛肝（）、香菇（）、翹鱗韌傘（）、絨毛香菇（）、碘味地紅菇（sp.）、杯傘狀大金錢菌（）、卷邊網(wǎng)褶菌（）、刺孢暗鎖瑚菌（）、虎奶菇（）、橘紅光柄菇（）、矮光柄菇（）、黑邊光柄菇（）、漏斗柄杯菌（）、白黃小脆柄菇（）、微小脆柄菇（）、大紅蓋菇（）、藍(lán)黃紅菇/花蓋菇（）、可愛紅菇（）、紅菇屬乳菇（）、擬蓖形紅菇（）、大紅菇（）、擬菱紅菇（sp.）、多變藍(lán)黃紅菇（）、光亮紅菇（）、小紅白毛杯菌（）、松塔牛肝菌（）、琉珀乳牛肝菌（）等53 種，占總數(shù)的15.01%（圖6）。

圖6 冊亨縣和望謨縣野生大型真菌可利用資源的統(tǒng)計(jì)

藥（食）用菌主要集中在馬勃科、香蘑科、層孔菌科和鬼傘科。常見的藥用菌有紫蠟?zāi)ⅲǎ?、盞芝小孔菌（）、淺囊狀栓菌（）、血紅栓菌（）、變色栓菌（云芝）（）、橙黃鵝膏（）、假芝（）、黑管菌（）、頭狀禿馬勃（）、樹舌靈芝（）、赤靈芝（）、四川靈芝（）、長柄梨形馬勃（）、梨形馬勃（）、紫褐黑孔菌（）、豆馬勃（）、光硬皮馬勃（）、硬 皮 馬 勃（）、涂擦球蓋菇（）等19種，占總數(shù)的5.38%。

毒菌主要集中在絲蓋傘科、環(huán)柄菇科和杯傘科。有歐氏鵝膏（）、淡玫瑰紅鵝膏（）、角鱗灰鵝膏（）、濕果傘（）、熱帶紫褐裸傘（）、金黃裸柄傘（）、梅內(nèi)胡裸腳傘（）、多紋裸腳傘（）、藍(lán)亞齒菌（）、具紋絲蓋傘（）、大腳絲蓋傘（）、毛頭乳菇（）、假褐鱗環(huán)柄菇（）、劇毒環(huán)柄菇（）、桔蓋白環(huán)蘑（）、球囊小蘑菇（）、禾谷鐮刀菌（）、緊縮花褶傘/空柄絲蓋傘（）、白絨網(wǎng)褶菌（sp.）、近紫歪盤菌（）、榆射脈菌（）、黃環(huán)羅鱗傘（sp.）、印度碗狀紅菇（）、黃菇（）、扁韌革菌（）等25 種，占總數(shù)的7.08%。其余采集的256 種標(biāo)本食藥用不明，占總數(shù)的72.53%。

3 討論與結(jié)論

大型真菌是森林生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分，可分解和利用森林生態(tài)系統(tǒng)中枯枝落葉等重要資源，是維護(hù)森林生態(tài)系統(tǒng)和提高森林生產(chǎn)力的重要組成成分。筆者選取野生菌資源豐富的冊亨縣和望謨縣為調(diào)查區(qū)域，有針對(duì)性地對(duì)貴州省黔西南州冊亨縣和望謨縣進(jìn)行大型真菌普查，一共采集到標(biāo)本353 個(gè)。經(jīng)過大型真菌調(diào)查分析，借助形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)的方法，成功鑒定了311 個(gè)標(biāo)本，隸屬48科，74 屬，134 種。其中，多孔菌科、紅菇科、牛肝菌科等為優(yōu)勢科，這與陳阿敏等調(diào)查的貴州省遵義市綏陽縣優(yōu)勢科以及楊慧等調(diào)查的貴州省銅仁市梵凈山優(yōu)勢科的結(jié)果一致。乳菇屬、網(wǎng)褶菌屬、粉孢牛肝菌屬、紅菇屬等為優(yōu)勢屬。其中，乳菇屬、紅菇屬在冊亨縣和望謨縣是優(yōu)勢屬，與鄧春英等在銅仁市思南縣調(diào)查的優(yōu)勢屬結(jié)果一致；通過調(diào)研和查閱相關(guān)文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)食用菌有53 種，食藥用菌有19 種，當(dāng)?shù)爻Ｒ姷亩揪?5 種；食藥不明的有256 種。

前人研究發(fā)現(xiàn)，大型真菌在各種植被類型和海拔梯度都有分布，以冷杉為主的針葉林、海拔梯度在2000～2600 m 時(shí)大型真菌分布多；海拔在2600 m以上，則陸續(xù)出現(xiàn)灌叢群落和高山草甸，隨著海拔升高，強(qiáng)光照、降水量減少、土壤腐殖質(zhì)減少等原因，大型真菌物種數(shù)持續(xù)降低；在海拔3000 m 左右，灌叢群落密集，土壤含水量及腐殖質(zhì)含量有少量提升，大型真菌物種數(shù)有小幅度提高；海拔超過3300 m 時(shí)，多是高山草甸及雪原，該區(qū)間溫度過低、土壤貧瘠、積雪等不利因素較多，大型真菌物種稀少。此次資源調(diào)查針對(duì)海拔345～1634 m，海拔偏低、氣候適宜、植被豐富，適宜大型真菌的生長和發(fā)育，調(diào)查和鑒定分析結(jié)果對(duì)貴州省大型真菌的分布情況、資源數(shù)據(jù)等資料進(jìn)行了補(bǔ)充。

冊亨縣和望謨縣是亞熱帶溫暖季風(fēng)氣候區(qū)，雨熱同季，在夏季和秋季給大型真菌的生長發(fā)育提供了適宜的環(huán)境條件，使得該片區(qū)的大型真菌資源豐富，提高了大型真菌的物種多樣性。經(jīng)過調(diào)查發(fā)現(xiàn)，人為環(huán)境破壞少的地方大型真菌資源較為豐富，在公路邊的叢林和人為影響因素較大的地方，大型真菌資源和豐富度都比純天然森林要少。后天生態(tài)環(huán)境的破壞給大型真菌的生存、生長和發(fā)育帶來極大挑戰(zhàn)，環(huán)境和資源的保護(hù)日趨重要。冊亨縣和望謨縣因其適宜的環(huán)境和生態(tài)特點(diǎn)，擁有較高的生物多樣性，通過筆者的調(diào)查研究，在一定程度上揭示了這兩個(gè)縣的大型真菌優(yōu)勢科、屬以及大型真菌食藥用情況，為地方野生林下資源的挖掘和利用奠定了理論基礎(chǔ)。本次調(diào)查和分析盡管已較為系統(tǒng)，但仍可能沒有百分百的覆蓋、食藥用菌的種類認(rèn)定不夠完善和全面，是否可食藥用也還需進(jìn)一步的研究和驗(yàn)證。綜上所述，筆者對(duì)大型真菌的物種鑒定、頻度分析、優(yōu)勢科屬分析、物種組成鑒定等信息為當(dāng)?shù)卮笮驼婢Y源的評(píng)估和保護(hù)及有效地開發(fā)與利用奠定了理論基礎(chǔ)。