海南省某高校學(xué)生使用中的滴眼液微生物污染情況調(diào)查分析

宋心怡，徐淑慧，張楠，王彥雙，孫曉玥，夏乾峰

海南醫(yī)學(xué)院，海南 ?？?571199

隨著現(xiàn)代社會(huì)電子產(chǎn)品的普及以及人們用眼習(xí)慣的改變，各類眼部疾病的發(fā)病率顯著增加，滴眼液成為人們?nèi)粘Ｉ钪蓄l繁使用的藥物。據(jù)報(bào)道，滴眼液開啟后的最高污染率可達(dá)96.46%[1]，與手術(shù)室及病房使用的滴眼液相比，患者在家使用的滴眼液污染率更高[2]。這與滴眼液的開封時(shí)間、日常使用頻率、使用過程中是否與眼瞼及周圍環(huán)境的接觸與污染等相關(guān)的危險(xiǎn)因素密切相關(guān)[3-5]。滴眼液開封后常見的污染菌為金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球菌、銅綠假單胞菌、大腸桿菌、變形桿菌等細(xì)菌，以及部分真菌[6-13]。

海南省氣候溫暖濕潤，為微生物的繁殖生長提供了有利的氣候條件。本研究首次收集海南省在校大學(xué)生使用中的滴眼液進(jìn)行微生物培養(yǎng)，后使用全自動(dòng)微生物質(zhì)譜儀對分離出的微生物進(jìn)行菌種鑒定，以全面評估我省高校在校學(xué)生滴眼液使用中的污染情況，為生活中滴眼液的安全使用和正確保存提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 于2022 年3～5 月在海南醫(yī)學(xué)院學(xué)生公寓進(jìn)行上門調(diào)查，隨機(jī)抽取6棟學(xué)生公寓樓，共101 名在校大學(xué)生，共收集到學(xué)生正在使用的滴眼液101瓶。每瓶滴眼液選取3個(gè)部位進(jìn)行采樣，分別為瓶身、瓶口和殘余液體，共計(jì)303份檢測樣本。這批志愿者中，男性35人，女性66人；年齡＜25歲者91人，年齡≥25歲者10人；本科74人，研究生27人。所采集的滴眼液包括抗視疲勞類、抗生素類、其他類(人工淚液、潤滑液類、糖皮質(zhì)激素類、抗組胺類、非甾體類)等類型。

1.2 培養(yǎng)基與試劑 營養(yǎng)瓊脂(NA，海博生物技術(shù)有限公司)；牛肉浸膏(BEEF EXTRACT，廣東環(huán)凱微生物科技有限公司)；氯化鈉(NaCl，西隴科學(xué))；蛋白胨(Tryptone，英國OXOID)；質(zhì)譜系統(tǒng)樣本處理基質(zhì)溶液(中元匯吉)。

1.3 儀器與設(shè)備 EXS 2600 全自動(dòng)微生物質(zhì)譜儀及配套軟件(中元匯吉公司)。

1.4 樣本采集與培養(yǎng) 用無菌生理鹽水潤濕無菌采樣棉拭子，在滴眼液的瓶身(距離瓶口0.5 cm處)、瓶口(滴眼液口)、剩余滴眼液(95%酒精消毒瓶口后，收集第二滴液體)三個(gè)部位進(jìn)行采樣。根據(jù)目前微生物實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)操作步驟及流程,無菌采樣棉拭子采樣后放入營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，37℃搖床培養(yǎng)24 h。取一次性無菌接種環(huán)，蘸取液體在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行三區(qū)劃線，于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。24 h后觀察培養(yǎng)基菌落生長情況，如有微生物生長，則使用全自動(dòng)微生物質(zhì)譜儀進(jìn)行菌種鑒定。無菌落生長的培養(yǎng)基繼續(xù)放至7 d，后無菌落生長則視為無微生物污染。

1.5 菌種鑒定 使用EXS 2600全自動(dòng)微生物質(zhì)譜儀，取待檢單菌落均勻涂抹靶板，取1 μL 甲酸溶液覆蓋靶點(diǎn)，加1 μL基質(zhì)溶液，干燥后上機(jī)檢測。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS22.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，采用二元Logistic回歸分析滴眼液污染的獨(dú)立影響因素。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 滴眼液不同部位的污染情況比較 根據(jù)所采集的滴眼液部位的不同，污染構(gòu)成比分別為瓶口26.73%(27/101)、瓶身26.73%(27/101)、液體7.92%(8/101)，瓶口、瓶身的污染率明顯高于液體，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=14.641，P＜0.05)。

2.2 滴眼液使用者的特征、滴眼液類型和購買渠道比較 在101 瓶滴眼液(303 份檢測樣本)中有62 份存在不同程度的微生物污染。不同性別、年齡和教育水平使用者的滴眼液污染率比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。其中其他類型滴眼液污染的陽性率為27.2% (22/81)、抗視疲勞類型滴眼液陽性率為21.3%(39/183)、抗生素類型滴眼液陽性為2.6%(1/39)，抗生素類陽性率明顯低于抗視疲勞類及其他類，差異據(jù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；開封時(shí)間≤28 d的滴眼液陽性率為12.1%(16/132)，＞28 d的滴眼液陽性率為26.9%(46/171)，開封時(shí)間＞28 d的滴眼液污染率明顯高于開封時(shí)間≤28 d 的滴眼液，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；電商平臺(tái)組陽性率為25.2% (31/123)、藥店組陽性率為21.9% (23/105)、醫(yī)院組陽性率為10.7% (8/75)，電商平臺(tái)購買的滴眼液污染率明顯高于藥店、醫(yī)院購買，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；規(guī)范使用者的陽性率為13.9% (23/165)、未規(guī)范使用者的陽性率為28.3%(39/138)，規(guī)范使用者的滴眼液污染率明顯低于未規(guī)范使用組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 滴眼液使用者的特征、滴眼液類型和購買渠道比較Table 1 Comparison on characteristics of eye drop users,type of eye drop,and purchase channel

2.3 滴眼液微生物污染的種類和構(gòu)成比 在62份被污染的滴眼液樣本中檢測出22種微生物污染，包括21 種細(xì)菌(96.8%)和1 種真菌(3.2%)。表皮葡萄球菌和黏質(zhì)沙雷氏菌是最常見的細(xì)菌性污染，占污染總數(shù)的29.0%(18/62)。瓶身共分離出14種細(xì)菌的污染，其中污染率最高的為表皮葡萄球菌，共分離出7株，占瓶身部位污染菌總數(shù)的25.9%(7/27)。瓶口共分離出14種細(xì)菌和1種真菌的污染，以表皮葡萄球菌、黏質(zhì)沙雷氏菌、愛媛類芽孢桿菌和土壤芽胞桿菌為主。殘余液體的污染較少，分離出6種細(xì)菌和1種真菌的污染，見表2。

表2 滴眼液微生物污染的種類和構(gòu)成比Table 2 The species and composition ratio of infecting microorgan isms

2.4 滴眼液污染的相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素 將開封時(shí)間(≤28 d=1，＞28 d=2)、購買渠道(醫(yī)院=1，藥店=2，電商平臺(tái)=3)、是否規(guī)范使用(是=1，否=2)、滴眼液類型(抗生素=1，其他=2，抗視疲勞=3)作為自變量，將是否污染(是=1，無=0)作為因變量進(jìn)行二元Logistic 回歸分析。結(jié)果顯示，購買渠道、是否規(guī)范使用以及滴眼液的類型是滴眼液污染的獨(dú)立影響因素(P＜0.05)，見表3。

表3 滴眼液污染相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素的二元Logistic回歸分析Table 3 Binary logistic regression analysis of the risk factors asso ciated with contamination of eye drops

3 討論

本研究收集海南醫(yī)學(xué)院在校大學(xué)生正在使用的滴眼液101瓶，通過對瓶口、瓶身和殘余液體三個(gè)部位進(jìn)行采樣，共檢測了303 份樣本，其中62 份樣本存在不同程度的微生物污染，總體污染率為20.5%。與其他研究相比，本研究滴眼液污染率更高[14-17]，可能因?yàn)楹Ｄ厢t(yī)學(xué)院處于熱帶地區(qū)，氣候炎熱、氣溫高和環(huán)境潮濕,比較適合微生物生長[18]。從細(xì)菌分離部位來看，滴眼液的瓶口、瓶身和殘余液體的微生物污染率分別為26.73%、26.73%和7.92%，瓶口和瓶身的污染率明顯高于殘余液體，該結(jié)果與其他研究數(shù)據(jù)保持一致[18-19]。

英國的一項(xiàng)研究結(jié)果表明，重復(fù)使用同一瓶滴眼液的交叉污染風(fēng)險(xiǎn)約為0.25%，如果重復(fù)使用超過6次，交叉污染風(fēng)險(xiǎn)高達(dá)1.25%[20]，隨著使用次數(shù)的增多滴眼液的污染風(fēng)險(xiǎn)將顯著上升。在眼部感染的病例報(bào)道中，從患者角膜分離培養(yǎng)的微生物與滴眼液常見污染菌高度一致，如銅綠假單胞菌、黏質(zhì)沙雷菌和變性桿菌等，提示滴眼液中的微生物污染是導(dǎo)致感染性眼病的重要因素[21-22]。因此，多次不規(guī)范的使用滴眼液將增加微生物污染風(fēng)險(xiǎn)，最終導(dǎo)致嚴(yán)重的眼部疾病。

本研究結(jié)果顯示，滴眼液的污染率在不同性別、年齡和教育水平的使用者之間無顯著差異，可能因?yàn)樵撗芯咳巳簽獒t(yī)學(xué)生，相比普通群眾有較高的文化水平和無菌意識(shí)。滴眼液的不同部位共分離出22 種條件致病菌，多數(shù)為人體皮膚和結(jié)膜寄生菌，最常見的污染菌為表皮葡萄球菌，提示滴眼液中培養(yǎng)出的微生物主要來源于皮膚和環(huán)境的正常菌群。滴眼液開封時(shí)間＞28 d、非抗生素類型、從網(wǎng)購和藥店渠道購買以及未規(guī)范使用都極大提高了滴眼液污染風(fēng)險(xiǎn)，在滴眼液生產(chǎn)、儲(chǔ)存或正常使用過程中，微生物可能被帶入眼藥水，隨著使用時(shí)間增加，滴眼液本身的抑菌效果下降，引起微生物大量繁殖最終導(dǎo)致眼部疾病的發(fā)生[22-24]。

將滴眼液污染相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行二元Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，滴眼液的使用時(shí)間非獨(dú)立影響因素，可能與樣本量局限性有關(guān)。既往研究并未對滴眼液污染進(jìn)行購買渠道的分析，本研究根據(jù)購買渠道將滴眼分為電商平臺(tái)、藥店、醫(yī)院三個(gè)不同組別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果表明從藥店、電商平臺(tái)渠道購買的滴眼液污染率是從醫(yī)院購買的2.759倍和3.937倍，該結(jié)果可能與滴眼液的運(yùn)輸途中的保存、成分的理化性質(zhì)以及儲(chǔ)存條件相關(guān)，需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)加以證實(shí)。在滴眼液的使用方面，不規(guī)范使用滴眼液的污染率是規(guī)范使用的3.154 倍。在滴眼液的類型方面，抗視疲勞和其他類型滴眼液的污染風(fēng)險(xiǎn)分別為抗生素類型滴眼液的12.452倍和16.908倍，可能和滴眼液中抗生素和防腐劑的潛在殺滅作用有關(guān)[25-26]。

本實(shí)驗(yàn)的滴眼液微生物污染率相對其他文獻(xiàn)報(bào)道處于較高水平，考慮到在校大學(xué)生的滴眼液保存及使用受客觀條件限制，建議使用者在滴眼液開啟1 個(gè)月之內(nèi)使用，使用前清潔手部，使用中遵循無菌原則，避免滴眼液瓶口與眼部和手部皮膚的直接接觸，使用后密封放置于干凈、陰涼處，過保質(zhì)期后及時(shí)丟棄。同時(shí)，學(xué)校和社區(qū)應(yīng)該在日常生活中積極開展正確使用和保存滴眼液的健康知識(shí)宣講，提高學(xué)生的衛(wèi)生健康意識(shí)。