哈密市非洲豬瘟疫情監(jiān)測(cè)與傳播風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

張國(guó)新，楊 帆，張志新，張婉琪，張曉曉，玉努斯·阿不都，馬春江，*

（ 1． 哈密市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，新疆 哈密 839000 ； 2． 伊州區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，新疆 哈密 839000 ）

非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）引起家豬、野豬感染的一種急性、熱性和高度致死性傳染病[1]，也是全球當(dāng)前威脅養(yǎng)豬業(yè)最重要的動(dòng)物疫病之一。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其規(guī)定為必須報(bào)告的一種傳染性動(dòng)物疾病[2]，我國(guó)將其列為一類動(dòng)物傳染病。截至目前，非洲豬瘟仍缺乏商業(yè)疫苗和有效藥物，嚴(yán)重威脅養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展[3]。ASFV 傳播途徑主要有接觸傳播、軟蜱叮咬或經(jīng)食物傳播等[4]，家豬、野豬、疣豬等宿主動(dòng)物對(duì)ASFV 易感，但癥狀只在家豬和野豬中顯現(xiàn)，病程較短，病死率接近90%～100%[5]。ASFV 為非洲豬瘟病毒科非洲豬瘟病毒屬的雙鏈DNA 病毒，是迄今為止蜱傳病毒中唯一已知的DNA 蟲(chóng)媒病毒[6]。自1921 年非洲豬瘟疫情首次在肯尼亞發(fā)現(xiàn)以來(lái)，ASFV 已從非洲蔓延到歐洲、亞洲、北美洲、南美洲等60 多個(gè)國(guó)家和地區(qū)[5]，且仍呈流行擴(kuò)大趨勢(shì)[7-8]。截至2020 年12 月底，中國(guó)已有31 個(gè)?。ㄊ?、自治區(qū)）發(fā)生了173 起非洲豬瘟疫情，累計(jì)死亡和撲殺生豬約101.1萬(wàn)頭，不僅給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)巨大損失，還嚴(yán)重威脅我國(guó)豬肉生產(chǎn)和糧食安全[9]。

近年來(lái)，非洲豬瘟在新疆烏魯木齊、哈密等地陸續(xù)發(fā)生，嚴(yán)重威脅當(dāng)?shù)厣i養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。為進(jìn)一步了解哈密市非洲豬瘟疫情發(fā)生后，疫點(diǎn)、疫區(qū)、流行病學(xué)關(guān)聯(lián)區(qū)域、受威脅區(qū)及其他區(qū)域ASFV 的污染程度，本研究對(duì)哈密市非洲豬瘟疫情發(fā)生后的不同風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域的風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行病原學(xué)監(jiān)測(cè)和分析，為今后非洲豬瘟疫情防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品采集和區(qū)域監(jiān)測(cè)

2022 年2 月哈密市伊州區(qū)發(fā)生非洲豬瘟疫情期間在全市范圍內(nèi)開(kāi)展全覆蓋監(jiān)測(cè)，參照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部印發(fā)《非洲豬瘟疫情應(yīng)急實(shí)施方案（第五版）》的通知?jiǎng)澐指鲄^(qū)域，監(jiān)測(cè)范圍覆蓋疫點(diǎn)、疫區(qū)、受威脅區(qū)、流行病學(xué)關(guān)聯(lián)區(qū)域及其他區(qū)域的生豬養(yǎng)殖場(chǎng)戶、屠宰場(chǎng)、商超肉鋪、運(yùn)輸車(chē)輛等各風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域，在哈密市31個(gè)生豬養(yǎng)殖場(chǎng)戶和2個(gè)生豬屠宰場(chǎng)共采集樣品3 398份。

1.2 儀器與試劑

實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀購(gòu)自美國(guó)ABI公司；組織研磨儀購(gòu)自法國(guó)BertinTechnologies公司；核酸提取儀及核酸提取試劑盒購(gòu)自西安天隆公司；非洲豬瘟熒光PCR試劑盒購(gòu)自洛陽(yáng)萊普生信息科技有限公司。

1.3 檢測(cè)方法

本試驗(yàn)依據(jù)《非洲豬瘟診斷技術(shù)》（GB/T 18648—2020），采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）法進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Graph Pad Prism軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。P＜0.05 表示差異顯著，P＜0.01 表示差異極顯著，P＞0.05 表示差異不顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域非洲豬瘟病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果（見(jiàn)表1）

表1 不同風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域非洲豬瘟病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果Tab.1 Results of aetiological detection of African swine fever in different risk areas

由表1 可知，在哈密市不同風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域的3 398 份樣品中，ASFV核酸陽(yáng)性樣品65份，陽(yáng)性率為1.91%。其中疫點(diǎn)檢測(cè)樣品167份，50份為病毒核酸陽(yáng)性，陽(yáng)性率為29.94%；流行病學(xué)關(guān)聯(lián)區(qū)域檢測(cè)175份，10份為ASFV核酸陽(yáng)性，陽(yáng)性率為5.71%；疫區(qū)檢測(cè)樣品289份，5份為病毒核酸陽(yáng)性，陽(yáng)性率為1.73%；受威脅區(qū)檢測(cè)樣品415份均為陰性；其他區(qū)域2 352份樣品均為陰性。

2.2 不同風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域非洲豬瘟病原學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性率（見(jiàn)表2）

表2 不同風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域非洲豬瘟病原學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性率Tab.2 Positive rate of aetiological detection of African swine feverin different risk regions

由表2可知，疫點(diǎn)ASFV陽(yáng)性率最高為29.94%，極顯著高于疫區(qū)、受威脅區(qū)、流行病學(xué)關(guān)聯(lián)區(qū)域以及其他區(qū)域的陽(yáng)性率（P＜0.01）；疫區(qū)ASFV 陽(yáng)性率為1.73%，極顯著高于受威脅區(qū)、其他區(qū)域的陽(yáng)性率（P＜0.01），顯著低于流行病學(xué)關(guān)聯(lián)區(qū)域的陽(yáng)性率（P＜0.05）；受威脅區(qū)ASFV 陽(yáng)性率為0，極顯著低于流行病學(xué)關(guān)聯(lián)區(qū)域的陽(yáng)性率（5.71%）（P＜0.01）；流行病學(xué)關(guān)聯(lián)區(qū)域ASFV 陽(yáng)性率極顯著高于其他區(qū)域的陽(yáng)性率（P＜0.01）。

從疫點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，ASFV感染豬的抗凝血、分泌物和組織中均檢出ASFV核酸陽(yáng)性，陽(yáng)性率分別為100.00%、100.00%和87.50%。從疫區(qū)和流行病學(xué)關(guān)聯(lián)區(qū)域的檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，在飼料和環(huán)境樣品中檢出ASFV 核酸陽(yáng)性。結(jié)果顯示，人員、車(chē)輛、工具、環(huán)境或飼料等風(fēng)險(xiǎn)因素可能是引發(fā)非洲豬瘟疫情的主要原因之一。

3 討論

ASFV結(jié)構(gòu)復(fù)雜，基因組龐大，迄今為止全球共報(bào)告了24 種ASFV 基因型，其中20 種分離自家豬，但只有5 種豬適應(yīng)基因型（Ⅰ、Ⅱ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ）的病毒在各地廣泛傳播[10]。基因Ⅰ型是傳播最廣泛的ASFV，也是唯一在非洲邊界以外不同時(shí)期傳播和確立的毒株[11]?；颌汀ⅱ秃廷筒《驹诜侵蘧哂泻荛L(zhǎng)的歷史，而基因型Ⅸ型和Ⅹ型在東非占主導(dǎo)地位，在中非有一定的傳播，但迄今為止沒(méi)有進(jìn)一步傳播[12]。基因Ⅱ型病毒最初在莫桑比克發(fā)現(xiàn)，隨后在歐洲和亞洲廣泛傳播，現(xiàn)在已傳播到全球[13]。目前，中國(guó)以基因Ⅱ型病毒流行為主，與東歐和俄羅斯流行的病毒密切相關(guān)[14]。2021 年，中國(guó)報(bào)告了基因Ⅱ型和基因I 型ASFV的出現(xiàn)[15]。有研究指出，缺乏早期監(jiān)測(cè)系統(tǒng)、蜱蟲(chóng)媒介監(jiān)測(cè)、生豬異地調(diào)運(yùn)環(huán)節(jié)檢測(cè)、屠宰環(huán)節(jié)檢測(cè)以及使用不安全的豬血飼料和泔水等因素可能是該病毒在中國(guó)31個(gè)省份的迅速傳播的主要原因[16]。盡管最初ASFV表現(xiàn)出了極高的遺傳穩(wěn)定性，然而2020年有研究報(bào)告了多個(gè)ASFV變異株的出現(xiàn)，變異病毒的產(chǎn)生有可能導(dǎo)致具有新特征的ASFV毒株出現(xiàn)，可能會(huì)在未來(lái)顯著影響ASFV的流行[17]。

與其他病毒相同，ASFV的傳播也需要傳染源、傳播途徑、易感動(dòng)物等3 個(gè)基本條件。軟蜱和野豬是ASFV 的主要儲(chǔ)存宿主和傳播媒介，家豬、野豬、疣豬等被感染病毒的蜱叮咬而感染[18]，使該病毒在蜱-野豬中長(zhǎng)期存在且難以根除，并在一定條件下感染家豬，引起疫情暴發(fā)。通常，發(fā)病豬和帶毒豬是ASFV 的主要傳染源，病豬組織和體液中含有高滴度的病毒，可經(jīng)唾液、尿液、糞便和分泌物等排出體外。接觸傳播、經(jīng)食傳播和軟蜱叮咬傳播是ASFV 的主要傳播途徑[19]，易感豬可通過(guò)與發(fā)病豬經(jīng)口鼻直接接觸，或接觸病豬的排泄物、血液以及被污染的圈舍、器具、車(chē)輛等發(fā)生感染，也可因被攜帶ASFV 的軟蜱叮咬或食入污染的飼料、飲水、泔水等感染。此外，由于ASFV對(duì)外界環(huán)境具有極強(qiáng)的抵抗力，可在血液、糞便、未熟的豬肉制品、腌肉和泔水中長(zhǎng)期存活，在凍肉中可存活數(shù)年甚至數(shù)十年[20]，導(dǎo)致該病毒在自然界的長(zhǎng)期存在，嚴(yán)重威脅野豬和家豬等易感動(dòng)物。因此，要控制病毒傳播，必須做到盡早檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)病毒源頭和傳播風(fēng)險(xiǎn)因素，及時(shí)切斷非洲豬瘟的傳播鏈。

盡管安全有效的疫苗是應(yīng)對(duì)當(dāng)前非洲豬瘟疫情防控的關(guān)鍵手段，但是由于ASFV基因組龐大、結(jié)構(gòu)復(fù)雜、基因型多樣，導(dǎo)致尚無(wú)有效的藥物或商品疫苗可用[21]。目前，該病的防控主要依賴嚴(yán)格的動(dòng)物檢疫、“拔牙”、凈化、撲殺和無(wú)害化處理等程序。此外，由于ASFV高度穩(wěn)定，對(duì)外界環(huán)境抵抗力較強(qiáng)，傳播途徑和風(fēng)險(xiǎn)因素復(fù)雜多樣，給非洲豬瘟的有效防控帶來(lái)了巨大挑戰(zhàn)。因此，全面了解ASFV傳播風(fēng)險(xiǎn)因素對(duì)于有效控制該病傳播至關(guān)重要[22]。然而不同地區(qū)豬感染ASFV 的類型和風(fēng)險(xiǎn)因素尚不清楚，不同傳播途徑的傳播風(fēng)險(xiǎn)如何也缺乏研究資料。在整個(gè)ASFV傳播過(guò)程中，主要的潛在風(fēng)險(xiǎn)因素決定了ASFV 在野豬或家豬中的區(qū)域傳播[23]。

有研究發(fā)現(xiàn)，ASFV可通過(guò)不同途徑引入并傳播，如生豬和豬肉產(chǎn)品貿(mào)易，跨區(qū)、跨境調(diào)運(yùn)，野豬及蜱蟲(chóng)媒介，使用被污染的飼料及泔水喂豬，未經(jīng)有效消毒的受污染運(yùn)輸車(chē)輛或從業(yè)者等均是ASFV 的傳播途徑[16,24]。ASFV 能夠在飼料中保持傳染性，豬可通過(guò)食用受污染的飼料傳播。Niederwerder 等[25]研究發(fā)現(xiàn)，ASFV DNA 在幾乎所有的飼料中均有很高的穩(wěn)定性，其傳染性在豆粕中最穩(wěn)定，在4.44 ℃下至少能夠保持112 d，提示飼料中ASFV傳播的風(fēng)險(xiǎn)不容忽視。豬血作為一種重要的蛋白質(zhì)來(lái)源，常作為豬和其他動(dòng)物的添加飼料。有研究通過(guò)qPCR 檢測(cè)及ASFV的全基因組測(cè)序發(fā)現(xiàn)遼寧省、河北省部分公司生產(chǎn)的豬血飼料被ASFV污染，且ASFV基因組與我國(guó)豬攜帶的ASFV樣本的基因組相同[26]，提示豬血飼料可能是ASFV 傳播的一個(gè)重要來(lái)源。本研究對(duì)不同風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，除感染豬的血液及組織傳播風(fēng)險(xiǎn)最高外，攜帶病毒的人員和車(chē)輛的傳播風(fēng)險(xiǎn)較高，其次是受污染的飼料。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，通過(guò)對(duì)不同風(fēng)險(xiǎn)區(qū)風(fēng)險(xiǎn)因素的定時(shí)監(jiān)測(cè)與分析，可為預(yù)防和控制非洲豬瘟疫情流行提供切實(shí)有效的建議。生豬、飼料、豬肉產(chǎn)品以及運(yùn)輸環(huán)節(jié)均可能是導(dǎo)致ASFV 傳播的重要因素。因此，有必要加強(qiáng)對(duì)傳染源和風(fēng)險(xiǎn)因素的定時(shí)監(jiān)測(cè)，包括對(duì)野豬和蜱蟲(chóng)媒介的監(jiān)測(cè)，對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)、轉(zhuǎn)運(yùn)車(chē)輛、易感動(dòng)物的監(jiān)測(cè)，對(duì)水源、飼料等風(fēng)險(xiǎn)因素的監(jiān)測(cè)。應(yīng)嚴(yán)禁疫點(diǎn)、疫區(qū)及流行病學(xué)關(guān)聯(lián)區(qū)域生豬及生豬產(chǎn)品的調(diào)運(yùn)，加強(qiáng)其他區(qū)域的市場(chǎng)調(diào)運(yùn)環(huán)節(jié)和屠宰環(huán)節(jié)的檢疫監(jiān)管力度，嚴(yán)禁養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）使用有污染風(fēng)險(xiǎn)的飼料（豬源性蛋白飼料、泔水等）喂豬，以有效降低非洲豬瘟疫情的傳播風(fēng)險(xiǎn)。