基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接探討苗藥土大黃防治功能性子宮出血的作用機(jī)制

盧旭，李玲，張寧, *

1.貴州中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，貴州 貴陽 550025

2.貴州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，貴州 貴陽 550001

功能失調(diào)性子宮出血（DUB）又稱功能性子宮出血或功血，是由于下丘腦–垂體–卵巢軸異常引起神經(jīng)內(nèi)分泌功能失調(diào)，影響體內(nèi)雌孕激素水平，導(dǎo)致的非正常子宮出血[1]。DUB 是一種臨床常見婦科疾病，占10%～15%，50%發(fā)生在更年期，30%發(fā)生在生育期，20%發(fā)生在青春期。目前臨床治療DUB 以止血為主要目標(biāo)，常用的辦法是刮宮加激素治療，通過刮宮達(dá)到快速止血的目的[2]，輔以對患者內(nèi)分泌的調(diào)理，在療效和康復(fù)方面不能令人滿意，只能暫時性地壓制臨床癥狀的發(fā)展或者惡化，常因防治不徹底導(dǎo)致復(fù)發(fā)，因此亟需療效確切的治療藥物。

苗藥土大黃為蓼科植物尼泊爾酸模Rumex nepalensisSpreng.、齒果酸模Rumex dentatusL.或羊蹄Rumex japonicusHoutt.的新鮮或干燥根及根莖，苗藥名“銳馬欲”。藥用始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》：“味苦，寒；主頭禿疥瘙，除熱女子陰蝕”。貴州少數(shù)民族及民間應(yīng)用較多，2022 年7 月被收載于貴州苗族等少數(shù)民族藥材目錄（第一批）。苗藥土大黃味苦，性寒，具有清熱解毒、止血收斂、殺菌止癢的功效，臨床用于防治熱型痰、黃疸、便秘、疥瘡、疥癬和多種出血癥等疾病[3-4]，對DUB 有獨(dú)特的防治作用[5]。土大黃主要化合物包括蒽醌類、黃酮類、二苯乙烯類、萘及萘醌類成分[4]。目前，對于土大黃防治DUB研究及作用機(jī)制研究比較欠缺。本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)合分子對接技術(shù)初步探索土大黃對DUB 的防治作用和可能的作用機(jī)制，篩選并獲得土大黃防治DUB 的有效活性成分及作用靶點(diǎn)，為其后續(xù)研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 土大黃活性成分及靶點(diǎn)篩選

由于中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺（TCMSP）數(shù)據(jù)庫未收錄“土大黃”，查閱相關(guān)文獻(xiàn)收集土大黃化學(xué)成分，將化學(xué)成分通過PubChem 數(shù)據(jù)庫（https:// pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）檢索土大黃化學(xué)成分的Canonical SMILES 號，導(dǎo)入Swiss Target Prediction 平臺（http://www.swisstargetprediction.ch/）進(jìn)行“Predict targets”，點(diǎn)擊“send to Swiss ADME”鏈接通過 Swiss ADME（http://www.swissadme.ch）了解成分的胃腸道吸收性、類藥性以及能否穿透血腦屏障；其他Pubchem 數(shù)據(jù)庫未收錄的化學(xué)成分，將其化學(xué)結(jié)構(gòu)式錄入Swiss Target Prediction 平臺下的Swiss ADME 功能項(xiàng)，得到其SMILES 號，再進(jìn)行“run”胃腸道吸收性和類藥性等分析。Pharmacokinetics 項(xiàng)下GI absorption 滿足High，同時Druglikeness 項(xiàng)下Lipinski、Ghose、Veber、Egan、Muegge 5 項(xiàng)特性中3 項(xiàng)為Yes[6]，篩選出成分作為候選活性成分，將候選活性成分的Canonical SMILES 結(jié)構(gòu)導(dǎo)入 Swiss Target Prediction 平臺（http://www.swisstargetprediction.ch/），選擇物種為“Homo sapiens”，查找活性成分所對應(yīng)的藥物靶點(diǎn)。對所得到的全部靶點(diǎn)進(jìn)行篩選，去除P＝0 的靶點(diǎn)和重復(fù)靶點(diǎn)。利用UniProt 數(shù)據(jù)庫對所有靶基因名稱進(jìn)行校正，獲得靶點(diǎn)信息。

1.2 疾病DUB 靶點(diǎn)檢索及共有靶點(diǎn)篩選

以“dysfunctional uterine bleeding”為檢索詞，利用GeneCards 數(shù)據(jù)庫（https://www.genecards.org）獲取DUB 相關(guān)靶點(diǎn)，依據(jù)“Relevance score≥10”進(jìn)行篩選，在OMIM 數(shù)據(jù)庫（https://www.omim.org/）、DisGeNet 數(shù)據(jù)庫（http://www.disgenet.org/）、DrugBank 數(shù)據(jù)庫（https://go.drugbank.com）中再次搜索DUB 獲得與其相關(guān)的靶點(diǎn)；將挖掘得到的DUB 相關(guān)靶點(diǎn)與土大黃靶點(diǎn)導(dǎo)入 Venny 2.1.0（https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/）中進(jìn)行匹配映射，獲得兩者交集靶點(diǎn)即土大黃防治DUB 的關(guān)鍵作用靶點(diǎn)。將交集靶點(diǎn)導(dǎo)入String 數(shù)據(jù)庫（https://string-db.org/ cgi/input.pl）中，構(gòu)建蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)（PPI），蛋白物種設(shè)置為“Homo sapiens”，最低相互作用閾值設(shè)置為“high confidence ＞0.900”，并隱藏游離的靶標(biāo)，其余參數(shù)保持默認(rèn)設(shè)置，進(jìn)而得到土大黃防治DUB 的PPI 網(wǎng)絡(luò)。

1.3 核心靶點(diǎn)的篩選

將 PPI 網(wǎng)絡(luò)圖下載 TSV 格式并上傳至Cytoscape 3.8.2 軟件，利用“Analyze Network”功能拓?fù)浞治觯褂枚戎?、介值中心度、緊密中心度3 個拓?fù)鋮?shù)同時滿足排名前10 作為篩選條件，篩選出核心靶點(diǎn)。

1.4 “土大黃–活性成分–共有靶點(diǎn)”的網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將預(yù)測的土大黃靶點(diǎn)、藥物活性成分、土大黃–DUB 交集靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape3.8.2 軟件中，繪制“土大黃–活性成分–共有靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)。利用“Analyze Network”功能進(jìn)行拓?fù)浞治?，使用度值、介值中心度、緊密中心度3 個拓?fù)鋮?shù)同時滿足排名前10 作為篩選條件，篩選出核心活性成分。

1.5 基因本體（GO）和京都基因與基因組百科全書（KEGG）富集分析

使用DAVID 數(shù)據(jù)庫（https://david.ncifcrf.gov/home.jsp）對共有靶點(diǎn)核心靶點(diǎn)進(jìn)行GO 和KEGG富集分析，GO 生物功能分析主要包括生物過程（BP）、細(xì)胞組分（CC）以及分子功能（MF），將這3組數(shù)據(jù)以P＜0.01 的條件分別進(jìn)行篩選，并各取前10 個條目，即組成30 個條目在“微生信”在線繪圖工具中制成柱狀圖進(jìn)行可視化；KEGG 富集分析篩選出P＜0.01 的條目，將前20 條通路制成氣泡圖進(jìn)行可視化。

1.6 核心成分與核心靶點(diǎn)的分子對接

在PubChem（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）數(shù)據(jù)庫中下載關(guān)鍵活性成分3D 結(jié)構(gòu)的SDF 格式，然后使用openbabel 軟件將化合物的SDF 格式轉(zhuǎn)化為PDB 格式，導(dǎo)入Autodock Tools 1.5.7 軟件中加氫后導(dǎo)出為pdbqt 文件。在PBD（https://www.rcsb.org/）數(shù)據(jù)庫中下載核心靶點(diǎn)蛋白文件，使用Pymol 軟件去除水分子與配體，使用AutoDock TOOLs 1.5.7 軟件進(jìn)行加氫后導(dǎo)出pdbqt 文件。最后，將所得到的配體小分子和受體大分子一起導(dǎo)入Autodock Tools 1.5.7 軟件中，計算得到相應(yīng)的結(jié)合能數(shù)據(jù)。使用Pymol 軟件繪制土大黃關(guān)鍵活性成分與核心靶點(diǎn)蛋白之間的模式圖，將關(guān)鍵活性成分與各自對應(yīng)打分最高的核心靶點(diǎn)分子對接進(jìn)行可視化。

2 結(jié)果

2.1 土大黃有效成分與靶點(diǎn)的篩選

查閱文獻(xiàn)獲得土大黃相關(guān)活性成分45 個，通過Swiss ADME 和Swiss Target Prediction 平臺預(yù)測后得到符合條件的活性成分26 個，見表1。共1 173個靶點(diǎn)，去除重復(fù)值得到392 個潛在靶點(diǎn)。

表1 土大黃活性成分Table 1 Active ingredients of Rumei Radix et Rhizoma

2.2 疾病靶點(diǎn)及共有靶點(diǎn)的篩選

通過DisGeNet 數(shù)據(jù)庫、DrugBank 數(shù)據(jù)庫、GeneCard 數(shù)據(jù)庫和OMIM 數(shù)據(jù)庫搜索DUB 相關(guān)的疾病基因，最后得出DisGeNet 數(shù)據(jù)庫17 個基因，DrugBank 數(shù)據(jù)庫52 個基因，GeneCard 數(shù)據(jù)庫348基因、OMIM 數(shù)據(jù)庫50 個基因，共得到467 個基因疾病靶點(diǎn)，刪除重復(fù)值，獲得DUB 相關(guān)基因疾病靶點(diǎn)436 個。使用Venny 2.1.0 平臺對392 個土大黃藥物靶點(diǎn)與436 個疾病靶點(diǎn)進(jìn)行互相映射，共獲得交集靶點(diǎn)74 個。

2.3 PPI 網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建及核心靶點(diǎn)的篩選

將得到的土大黃與DUB 74 個共有基因?qū)隨TRING 數(shù)據(jù)庫進(jìn)行蛋白相互作用分析，結(jié)果顯示，網(wǎng)絡(luò)共包含74 個節(jié)點(diǎn)，206 條邊，平均節(jié)點(diǎn)度值為5.57。保存其TSV 格式導(dǎo)入到Cystoscape

3.8.2 中進(jìn)行拓?fù)浞治?，見圖1。共獲得62 個節(jié)點(diǎn)和218 條節(jié)點(diǎn)之間的連線（剔除4 個游離靶點(diǎn)）。圖中節(jié)點(diǎn)的大小和顏色根據(jù)度值來顯示，度值越大，節(jié)點(diǎn)越大顏色越深，即靶點(diǎn)的作用越重要。根據(jù)度值、介值中心度、緊密中心度同時排名前10位，篩選出7 個核心靶點(diǎn)，分別為STAT3、SRC、PIK3R1、PIK3CA、ESR1、AKT1、RELA，其拓?fù)浞治鼋Y(jié)果見表2。

圖1 交集靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)圖Fig.1 PPI network diagram of intersection targets

表2 土大黃防治DUB 核心靶點(diǎn)基因的拓?fù)鋵W(xué)分析結(jié)果Table 2 Topological analysis results of core target genes of Rumei Radix et Rhizoma prevention and control of DUB

2.4 “土大黃–活性成分–共有靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

將土大黃及26 個活性成分，74 個關(guān)鍵靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 3.8.2 軟件中構(gòu)建“土大黃–活性成分–共有靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖，見圖2。圖中共包括101 個節(jié)點(diǎn)（74 個圓形節(jié)點(diǎn)為核心靶點(diǎn)，26 個菱形節(jié)點(diǎn)活性成分，1 個六邊形節(jié)點(diǎn)為苗藥土大黃），278 條邊。利用“Analyze Network”功能進(jìn)行拓?fù)浞治?，度值、介值中心度、緊密中心度同時排名前10 位的核心活性成分有9 個，分別為槲皮素、阿魏酸、豆蔻酸、羥基大黃素、決明柯酮、大黃素甲醚、委陵菜酸、大黃酚、3,4-二羥基苯甲酸乙酯，其拓?fù)浞治鼋Y(jié)果見表3。

圖2 “土大黃–活性成分–共有靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖Fig.2 Network diagram of “Rumei Radix et Rhizoma-active ingredients-common targets”

表3 土大黃防治DUB 核心成分的拓?fù)鋵W(xué)分析結(jié)果Table 3 Topology analysis results of core components of Rumei Radix et Rhizoma prevention and control of DUB

2.5 GO 功能富集分析

通過David 數(shù)據(jù)平臺進(jìn)行GO 功能富集分析，得顯著性GO 條目303 個（P＜0.01），其中BP 217個條目，CC 30 個條目，MF 56 個條目，各選取前10 個條目，共組成30 個條目在“微生信”在線繪圖工具中繪制GO 功能注釋分析柱狀圖，見圖3。結(jié)果顯示，在土大黃有效成分防治DUB 的潛在靶點(diǎn)中，BP 主要集中在信號傳導(dǎo)（signal transduction）、RNA 聚合酶II 啟動子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控（positive regulation of transcription from RNA polymerase II promoter）和對外源性刺激的反應(yīng)（response to xenobiotic stimulus）等；CC 主要集中在質(zhì)膜（plasma membrane）、胞漿（cytosol）和細(xì)胞質(zhì)（cytoplasm）等；MF 主要集中在蛋白結(jié)合（protein binding）、相同蛋白結(jié)合（identical protein binding）和ATP 結(jié)合（ATP binding）等。

圖3 土大黃防治DUB 的潛在靶點(diǎn)GO 功能富集分析（前10）Fig.3 GO Function enrichment analysis of potential targets of Rumei Radix et Rhizoma prevention and control of DUB(top 10)

2.6 KEGG 通路富集分析

通過David 數(shù)據(jù)平臺進(jìn)行KEGG 富集分析，得到122 條信號通路（P＜0.01），選取排名前20 的通路進(jìn)行可視化處理，繪制KEGG 信號通路氣泡圖，見圖4。結(jié)果顯示，土大黃有效成分防治DUB 的潛在靶點(diǎn)主要涉及HIF-1、PI3K-Akt 等信號通路。

圖4 土大黃防治DUB 的核心靶點(diǎn)KEGG 富集分析（前20）Fig.4 KEGG enrichment analysis of core targets of Rumei Radix et Rhizoma prevention and control of DUB(top 20)

2.7 活性成分–核心靶點(diǎn)分子對接

將土大黃防治DUB 的9 個關(guān)鍵核心活性成分槲皮素、阿魏酸、豆蔻酸、羥基大黃素、決明柯酮、大黃素甲醚、委陵菜酸、大黃酚、3,4-二羥基苯甲酸乙酯分別與7 個核心靶點(diǎn)STAT3、SRC、PIK3R1、PIK3CA、ESR1、AKT1、RELA 進(jìn)行分子對接，其結(jié)合能均小于0，說明這9 種活性成分均能與7 種核心靶點(diǎn)自發(fā)相互結(jié)合，見表4，其中大黃酚與SRC結(jié)合能最低，結(jié)合能為?31.13 kJ/mol。委陵菜酸與PIK3CA 結(jié)合能為?30.33 kJ/mol；羥基大黃素與RELA 結(jié)合能為?28.24 kJ/mol；大黃素甲醚與AKT1結(jié)合能為?28.16 kJ/mol；決明柯酮與AKT1 結(jié)合能為?27.57 kJ/mol；豆蔻酸與SRC 結(jié)合能為?26.15 kJ/mol；阿魏酸與STAT3 結(jié)合能為?20.50 kJ/mol；槲皮素與SRC 結(jié)合能為?20.13 kJ/mol；3,4-二羥基苯甲酸乙酯與AKT1 結(jié)合能為?18.37 kJ/mol。選取9 個關(guān)鍵活性成分與各自對應(yīng)打分最高的核心蛋白可視化，其結(jié)合模式見圖5。

圖5 關(guān)鍵活性成分與各自對應(yīng)打分最高的核心靶點(diǎn)分子對接Fig.5 Docking of key active ingredients with their respective core target molecules with the highest scores

表4 苗藥土大黃防治DUB 的關(guān)鍵活性成分與核心蛋白結(jié)合能Table 4 Binding energy of key active ingredients and core protein of Rumei Radix et Rhizoma prevention and control of DUB

3 討論

近年來，DUB 患者逐漸增多，不僅會影響患者的生活與工作，重者還會由于出血過多導(dǎo)致休克危及生命安全，引起了社會和臨床的廣泛關(guān)注，且目前DUB 的病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全明確。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為DUB 主要與患者精神過度緊張、勞累、營養(yǎng)不良或代謝紊亂、環(huán)境及氣候改變有關(guān)，或與卵巢或黃體等因素所導(dǎo)致的內(nèi)分泌紊亂有關(guān)，進(jìn)而引起子宮出血的癥狀[7]?，F(xiàn)在常用手術(shù)加激素治療，存在子宮內(nèi)膜會變薄和藥物不良反應(yīng)多等缺點(diǎn)，不能從根本上消除導(dǎo)致子宮異常出血的病因[8]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，DUB 屬于“崩漏”的范疇，《諸病源候論》指出“沖任之脈虛損，不能約制其經(jīng)血，故血非時而下”，其主要病機(jī)是沖任不固，不能制約經(jīng)血，使子宮藏瀉失常[9]，特點(diǎn)多為虛實(shí)夾雜，血熱、血虛、血瘀并存，故治法當(dāng)涼血、補(bǔ)血、活血并用，才能沖任得固，血海得充，達(dá)到血?dú)w其經(jīng)的目的[10]。土大黃屬于清熱藥，其主要用于因血分中有熱而致的多種出血癥，經(jīng)過民間多年應(yīng)用及臨床研究證明苗藥土大黃防治DUB 有特效[11]，但其作用機(jī)制尚無系統(tǒng)性研究。

經(jīng)文獻(xiàn)查閱并進(jìn)行篩選后得到土大黃防治DUB 主要活性成分26 種，最后篩選出大黃酚和槲皮素等9 種土大黃防治DUB 關(guān)鍵活性成分。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，大黃酚口服或皮下注射，可縮短血液凝固時間，具有止血作用，降低毛細(xì)血管的通透性，改善血管脆性，縮短凝血時間等[12]；大黃酚及大黃素通過干擾三磷酸肌醇（IP3）誘導(dǎo)的鈣釋放機(jī)制，對激動劑誘導(dǎo)的血管收縮均有明顯的抑制作用[13]。槲皮素是一種具有多種生物活性的黃酮類化合物，具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗癌等藥理活性[14]，可以通過改變細(xì)胞周期進(jìn)程、抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡、抑制血管擴(kuò)張，發(fā)揮抗腫瘤作用[15]。研究表明，槲皮素止血作用的增強(qiáng)與含量的增加有關(guān)[16]，還能靶向抑制核因子-κB 信號通路轉(zhuǎn)導(dǎo)作用于SRC，發(fā)揮抗炎活性[17]。此外，槲皮素還能通過激活蛋白激酶B（Akt）磷酸化，作用于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt 信號通路，減少氧化應(yīng)激，實(shí)現(xiàn)對血管內(nèi)皮細(xì)胞的修復(fù)和保護(hù)作用[18]。由此進(jìn)一步探討土大黃主要活性成分防治DUB 的作用機(jī)制，PPI 分析顯示，土大黃可能與 STAT3、SRC、PIK3R1、PIK3CA、ESR1、AKT1、RELA 等多個靶點(diǎn)產(chǎn)生協(xié)同作用，這些靶點(diǎn)分別通過調(diào)控炎癥反應(yīng)、激素合成、增殖與凋亡來有效控制子宮出血[19]。其中，AKT1 是PI3K-Akt 信號通路的下游蛋白，在血小板的活化中起關(guān)鍵作用，其作為Akt 的亞型，可參與代謝、增殖、細(xì)胞存活、生長和血管生成等多種生物學(xué)過程。實(shí)驗(yàn)研究表明，AKT1 基因缺陷小鼠與正常鼠相比，其出血時間增加，凝血時間延長，且血小板聚集、分泌和擴(kuò)散受損[20]。STAT3 屬于STAT家族成員之一，在細(xì)胞增殖、分化、凋亡等過程中起著關(guān)鍵作用，可促進(jìn)促血管生成的關(guān)鍵調(diào)節(jié)信號的生成，介導(dǎo)細(xì)胞的生長、凋亡等過程[21]，是一種參與腫瘤發(fā)生和組織損傷的常見信號傳導(dǎo)機(jī)制，能夠參與調(diào)節(jié)傷口愈合和癌癥，包括細(xì)胞侵襲和遷移、血管生成、凝血調(diào)節(jié)和干擾素誘導(dǎo)基因的抑制[22]。研究表明，STAT3 表達(dá)與外周血中的下肢深層靜脈血栓形成有關(guān)[23]。SRC 基因是SRC 家族的的成員之一，它是一種非受體酪氨酸激酶，SRC 異?；罨梢酝ㄟ^多種途徑刺激腫瘤細(xì)胞的生長、浸潤、轉(zhuǎn)移，從而誘導(dǎo)體內(nèi)新的血管生成。SRC 家族激酶在介導(dǎo)血小板對血管損傷的快速反應(yīng)中起核心作用[24]，磷酸化的SRC 參與血小板黏附和聚集過程，并通過激活下游黏著斑信號通路等，參與黏著斑和血栓的形成，進(jìn)而調(diào)節(jié)止血過程[25]。以上研究表明，土大黃可能通過大黃酚和槲皮素等作用于AKT1、STAT3、SRC 等靶點(diǎn)發(fā)揮止血的作用。

GO 功能富集結(jié)果顯示苗藥土大黃作用于DUB的核心靶點(diǎn)影響生物過程主要包括信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、RNA聚合酶II 啟動子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控、基因表達(dá)的正向調(diào)節(jié)等，表明這些生物過程可能在DUB 的發(fā)生和發(fā)展中體現(xiàn)了重要作用。KEGG 通路富集分析表明土大黃主要是通過調(diào)控HIF-1、PI3K-Akt 信號通路治療出血。低氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）是HIF-1 的活性亞基，又是調(diào)節(jié)亞基，與雌激素產(chǎn)生、血管生成、細(xì)胞增殖和炎癥等相關(guān)基因表關(guān)系密切。在低氧狀態(tài)下，機(jī)體可通過調(diào)節(jié)HIF-1 信號通路來維持內(nèi)環(huán)境的氧穩(wěn)態(tài)，抑制血管生成[19]。研究發(fā)現(xiàn)，HIF-1α可調(diào)控多種血管生成因子的表達(dá)，達(dá)到修復(fù)血管和止血作用[26]。通過降低HIF-1α 的表達(dá)，降低模型大鼠炎癥水平，并減緩血管的擴(kuò)張及新生，能改變?nèi)毖鯛顟B(tài)從而抑制血管新生[27]。PI3K 為細(xì)胞內(nèi)磷脂酰肌醇激酶，Akt 是PI3K 信號傳導(dǎo)中重要的下游效應(yīng)器，通過調(diào)控PI3K-Akt 通路可以阻止血小板對纖維蛋白原的激活和黏附，抗血小板聚集，增強(qiáng)親環(huán)素A 的黏附，促進(jìn)凝血因子的形成，從而發(fā)揮止血作用[28-31]。徐薇等[32]研究發(fā)現(xiàn)，通過調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜組織PI3K 信號通路的磷酸化水平促進(jìn)組織細(xì)胞的抗炎作用和增殖作用，恢復(fù)血管功能，從而治療子宮異常出血癥。Zhang 等[33]研究發(fā)現(xiàn)，小劑量脂多糖能夠激活 PI3K-AKT 信號通路，增加糖胺聚糖顆粒分泌到子宮腔，以增加黏液層的厚度，從而保護(hù)子宮。以上結(jié)果表明土大黃可能通過槲皮素和大黃酚等活性成分作用于AKT1、STAT3、SRC 等靶點(diǎn)，調(diào)控HIF-1、PI3K-Akt 信號通路的信號表達(dá)從而介導(dǎo)血小板聚集、血栓形成，達(dá)到止血的目的。

綜上所述，本研究通過應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對接技術(shù)的方法對土大黃活性成分、靶點(diǎn)和作用通路進(jìn)行分析，表明土大黃防治DUB 的是多成分、多靶點(diǎn)、多通路協(xié)同的結(jié)果。土大黃可能通過AKT1、STAT3、SRC 等靶點(diǎn)主要作用于HIF-1、PI3K-Akt 信號通路發(fā)揮防治DUB 作用，為其后續(xù)進(jìn)一步深入研究提供了基礎(chǔ)和參考。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突