氧化苦參堿通過下調(diào)miR-155-5p 對(duì)胃癌細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移、侵襲作用

王斐斐，李煒，賀禮琴，白昌儒，董明清，王娟毅*

1.西安交通大學(xué)附屬三二〇一醫(yī)院 腫瘤內(nèi)科，陜西 漢中 723000

2.空軍軍醫(yī)大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，陜西 西安 710032

胃癌是我國(guó)發(fā)病率第5 位的腫瘤，也是導(dǎo)致腫瘤相關(guān)死亡的第3 大原因[1]。超過90%的胃癌患者在診斷時(shí)已出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[2]。放療、化療、靶向治療是出現(xiàn)轉(zhuǎn)移胃癌的主要治療方法，但化療藥物特異性較低，且不良反應(yīng)明顯[3-4]。因此，尋找更為安全高效的治療藥物具有重要意義。

氧化苦參堿是從苦參干燥根、果實(shí)中提取的一種醌類生物堿，是苦參堿的主要有效成分，具有抗炎、抗腫瘤等多種藥理作用[5-6]。研究表明，氧化苦參堿是一種天然抗癌藥物，能夠顯著抑制癌細(xì)胞增殖、影響多種惡性腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展[6]。已證實(shí)，氧化苦參堿可對(duì)胃癌BGC-823 細(xì)胞及胃癌HGC-27細(xì)胞裸鼠移植瘤模型發(fā)揮抑制生長(zhǎng)作用[7-8]。課題組組前期也報(bào)道了苦參堿可通過血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C（VEGF-C）/血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體3（VEGFR3）和核因子-κB（NF-κB）/Toll 樣受體4（TLR4）信號(hào)通路保護(hù)大鼠的胃黏膜損傷[9]。最近研究表明，氧化苦參堿可以通過調(diào)節(jié)microRNA（miRNA）的表達(dá)來發(fā)揮其抗腫瘤作用[10-11]。miRNA 是內(nèi)源性單鏈非編碼RNA，與靶miRNA 的3 個(gè)非翻譯區(qū)域結(jié)合，可以在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)基因表達(dá)。研究表明，miR-155-5p 在肝癌、食管癌等消化系統(tǒng)腫瘤中高度表達(dá)，并且與預(yù)后不良相關(guān)[12-13]。然而，目前尚不清楚miR-155-5p 是否在胃癌中過度表達(dá)，以及氧化苦參堿是否可通過調(diào)節(jié)miR-155-5p 在胃癌中的表達(dá)以抑制腫瘤進(jìn)展。基于此，本研究探討了氧化苦參堿對(duì)胃癌細(xì)胞中miR-155-5p 表達(dá)、胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為及miR-155-5p 靶基因?qū)Ψ忾]蛋白1（Claudin 1）、半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）和c-Myc 表達(dá)的影響，為胃癌治療的新藥物研發(fā)和新靶點(diǎn)的確立提供參考。

1 材料和方法

1.1 主要試劑和儀器

人胃癌細(xì)胞系SGC7901、MGC803 和正常胃黏膜GES-1、AGS 細(xì)胞系購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)。錯(cuò)義序列siRNA、miR-155-5p-模擬物和miR-155-5p-抑制劑由寶日醫(yī)生物技術(shù)（北京）有限公司合成。RNA 分子序列如下：miR-155-5p 模擬物，5’-UUAAUGCUAAUCGUGAUAGGGGU-3’，miR-155-5p 抑制劑，5’-ACCCCUAUCACAUUAGCAUU AA-3’,錯(cuò)義序列 siRNA，5’-CCCUAUCACAAUUA GCAUUAAUU-3’。氧化苦參堿購(gòu)自上海阿拉丁生化科技股份有限公司，貨號(hào)A111285，純度為分析標(biāo)準(zhǔn)品。

MTT 和0.1%結(jié)晶紫溶液染色購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司，胎牛血清購(gòu)自美國(guó)Gibco 公司。Claudin 1 抗體（貨號(hào)ab211737）、c-Myc 抗體（貨號(hào)ab32072）、Cyclin D1 抗體（貨號(hào)ab16663）、抗B 細(xì)胞淋巴瘤/白血病基因2（Bcl-2）抗體（貨號(hào)ab203516）、抗胱天蛋白酶3（Caspase-3）抗體（貨號(hào)ab184787）購(gòu)自Abcam 公司。ECL 試劑盒和Annexin V-FITC/碘化丙啶（PI）凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)Becton Dickinson 公司。4%多聚甲醛購(gòu)自廣州碩譜生物科技有限公司。LipofectAMINE 2000 轉(zhuǎn)染試劑、Trizol 試劑購(gòu)自美國(guó)Invitrogen 公司，Transwell 小室、Matrigel 基質(zhì)膠購(gòu)自美國(guó)Corning公司。

Image-Pro Plus 數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)購(gòu)自北京麥克奧迪儀器儀表公司，CKX53 光學(xué)顯微鏡購(gòu)自日本Olympus 公司，F(xiàn)ACSCanto 流式細(xì)胞儀購(gòu)自買美國(guó)BD 公司。

1.2 組織收集

收集2020 年1 月—2022 月12 月西安交通大學(xué)附屬三二O 一醫(yī)院進(jìn)行外科手術(shù)切除的50 例胃癌組織標(biāo)本和健康癌旁組織，包括36 例男性和14 例女性，所有患者術(shù)前均未接受放療、化療、靶向治療或其他抗癌治療。組織保存于液氮中備測(cè)。本研究經(jīng)西安交通大學(xué)附屬三二O 一醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批號(hào)IRB20200017），患者均知情同意。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染和分組

人胃癌細(xì)胞系SGC7901、MGC803 和正常胃黏膜上皮GES-1、AGS 細(xì)胞在含10%胎牛血清的RPMI 1640 完全養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，每3 天更換1 次培養(yǎng)液，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

將細(xì)胞分為空白組、轉(zhuǎn)染錯(cuò)義序列siRNA 組、miR-155-5p 模擬物組、miR-155-5p 抑制劑組、氧化苦參堿組、氧化苦參堿＋miR-155-5p 抑制物組。

1.4 qRT-PCR 法檢測(cè)細(xì)胞系和組織中miR-155-5p水平

根據(jù)操作說明，使用TRIzol 法提取組織標(biāo)本和細(xì)胞系的總RNA，使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒生成cDNA，并以此為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)靶基因的表達(dá)。使用靶基因Ct值法對(duì)基因相對(duì)表達(dá)進(jìn)行定量。使用U6 作為內(nèi)參分析miR-155-5p 的表達(dá)。miR-155-5p 引物序列為5’-TTAATGCTAATCGTGA TAGGGGT-3’，U6 引物序列為5’-CTCGCTTCGGC AGCACATATACT-3’。

分別用miR-155-5p 模擬物轉(zhuǎn)染SGC7901、MGC803、GES-1、AGS 細(xì)胞，然后使用qRT-PCR篩選miR-155-5p 相對(duì)表達(dá)水平最高的細(xì)胞系進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。并用不同濃度（25、50、100、200 μmol/L）氧化苦參堿干預(yù)轉(zhuǎn)染 miR-155-5p 模擬物的MGC803 細(xì)胞，在孵育24 h 后利用qRT-PCR 篩選出最佳氧化苦參堿干預(yù)濃度。

1.5 MTT 法測(cè)定檢測(cè)miR-155-5p 和氧化苦參堿對(duì)胃癌細(xì)胞增殖的影響

根據(jù)LipofectAMINE 2000 轉(zhuǎn)染試劑說明，分別將轉(zhuǎn)染錯(cuò)義序列siRNA、miR-155-5p 模擬物、miR-155-5p 抑制劑轉(zhuǎn)染MGC803 細(xì)胞。氧化苦參堿＋miR-155-5p 模擬物組細(xì)胞為轉(zhuǎn)染miR-155-5p 模擬物的MGC803 細(xì)胞與氧化苦參堿孵育24 h 后進(jìn)行測(cè)定。將空白組、轉(zhuǎn)染錯(cuò)義序列siRNA 組、miR-155-5p 模擬物組、miR-155-5p 抑制劑組、氧化苦參堿組、氧化苦參堿＋miR-155-5p 抑制物組生長(zhǎng)良好的細(xì)胞接種到96 孔板（3 000 個(gè)細(xì)胞/孔）中。將0.1 mg/mL MTT 試劑加入到培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)4 h。之后向細(xì)胞中加入DMSO（150 μL/孔），搖震10 min后，使用酶標(biāo)儀測(cè)量490 nm 處吸光度（A）值，并計(jì)算細(xì)胞抑制率。

1.6 細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)測(cè)定miR-155-5p 和氧化苦參堿對(duì)胃癌細(xì)胞增殖的影響

將空白組、錯(cuò)義序列組、miR-155-5p 模擬物組、miR-155-5p 抑制劑組、氧化苦參堿組、氧化苦參堿＋miR-155-5p 抑制物組的細(xì)胞接種在100 mm 培養(yǎng)皿（2 000 個(gè)細(xì)胞/皿）中，給藥同1.5 項(xiàng)下。每3天更換1 次培養(yǎng)基，并使細(xì)胞生長(zhǎng)12 d 以形成菌落。細(xì)胞集落通過4%多聚甲醛固定，后用0.1%結(jié)晶紫溶液染色，計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)＞50 的集落。

1.7 流式細(xì)胞法檢測(cè)miR-155-5p 和氧化苦參堿對(duì)胃癌細(xì)胞凋亡的影響

收集各組細(xì)胞并在4 ℃下使用PBS 漂洗2 遍。根據(jù)Annexin V-FITC/PI 凋亡試劑盒操作說明，將各組細(xì)胞懸浮在100 μL Annexin V 緩沖液中，并將加入5 μL Annexin V-FITC 和5 μL 碘化丙啶染色液到細(xì)胞懸液中。在室溫下于黑暗中孵育20 min，然后使用FACSCanto 流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡情況。

1.8 Transwell 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-155-5p 和氧化苦參堿對(duì)胃癌細(xì)胞遷移和侵襲作用的影響

在8 μm 濾膜孔的Transwell 小室中測(cè)量細(xì)胞侵襲作用。侵襲作用檢測(cè)：Transwell 過程按照操作說明進(jìn)行，在包含Matrigel 基質(zhì)膠的Transwell 上室添加200 μL 細(xì)胞，上室和下室中分別加入200 μL無血清培養(yǎng)基和600 μL 20% FBS 的培養(yǎng)基并在37 ℃下孵育24 h。用PBS 洗滌后，用4%多聚甲醛固定1 h，并用0.1%結(jié)晶紫溶液染色15 min。沖洗掉多余的染料，并在400倍的顯微鏡下隨機(jī)選擇5～10 個(gè)區(qū)域?qū)?xì)胞進(jìn)行拍照。遷移實(shí)驗(yàn)時(shí)不添加Matrigel 基質(zhì)膠。

1.9 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)Claudin 1、c-Myc、cyclin D1、Bcl-2、Caspase-3 蛋白的表達(dá)

收集各組細(xì)胞，分別提取總蛋白質(zhì)，并用BCA法測(cè)定蛋白水平。其中蛋白質(zhì)樣品（20 μg）通過8%SDS-PAGE 分離，后恒流轉(zhuǎn)至PVDF 膜上。再在室溫用5%脫脂牛奶封封閉條帶3 h，之后分別加入Claudin 1 抗體（1∶1 000）、Caspase-3 抗體（1∶1 000）、Bcl-2 抗體（1∶1 000）、c-Myc 抗體（1∶1 000）和GAPDH（1∶1000）在4 ℃下孵育過夜，然后與辣根過氧化物酶偶聯(lián)的二抗（1∶2 000）在室溫下孵育1 h。以GAPDH 灰度值為內(nèi)參，用Image J 軟件對(duì)不同蛋白的相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行定量分析。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

研究數(shù)據(jù)使用SPSS 22 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量數(shù)據(jù)采用進(jìn)行，多組間差異使用ANOVA方差分析進(jìn)行，兩兩比較使用SNK 法。

2 結(jié)果

2.1 miR-155-5p 在胃癌組織和細(xì)胞中的表達(dá)情況

qRT-PCR 結(jié)果顯示，與癌旁組織和胃黏膜細(xì)胞（GES-1 和AGS 細(xì)胞）相比，在胃癌組織和胃癌細(xì)胞系MGC803 中miR-155-5p 相對(duì)表達(dá)量顯著升高（P＜0.001），見圖1A、B。由于MGC803 細(xì)胞中miR-155-5p 相對(duì)表達(dá)量最高，因此后續(xù)研究使用此細(xì)胞進(jìn)行。不同濃度氧化苦參堿與轉(zhuǎn)染miR-155-5p模擬物的MGC803 細(xì)胞培養(yǎng)24 h 后，miR-155-5p的表達(dá)隨著氧化苦參堿劑量增加而降低（P＜0.05、0.01、0.001），見圖1C。經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)，氧化苦參堿干預(yù)MGC803 細(xì)胞的最佳濃度為100 μmol/L，此濃度下細(xì)胞抑制率為（47.34±2.44）%。

圖1 miR-155-5p 在胃癌組織、癌旁組織和不同細(xì)胞系中的表達(dá)差異（，n =3）Fig.1 miR-155-5p Expression differences in gastric cancer tissues,paracancer tissues,and different cell lines (,n =3)

2.2 氧化苦參堿對(duì)胃癌細(xì)胞增殖的影響

MTT 實(shí)驗(yàn)表明，與空白組、轉(zhuǎn)染錯(cuò)義序列siRNA 組相比，miR-155-5p 模擬物的轉(zhuǎn)染后MGC803 細(xì)胞活力顯著增加（P＜0.05）；而miR-155-5p 抑制劑組、氧化苦參堿組、氧化苦參堿＋miR-155-5p 抑制劑組均可顯著抑制胃癌細(xì)胞和轉(zhuǎn)染miR-155-5p 模擬物細(xì)胞活力（P＜0.01、0.001），見圖2A。

圖2 氧化苦參堿對(duì)胃癌細(xì)胞增殖的影響Fig.2 Effect of oxymatrine on proliferation of gastric cancer cells

細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，miR-155-5p 模擬物轉(zhuǎn)染后MGC803 細(xì)胞集落生成增加，而miR-155-5p抑制劑組、氧化苦參堿組、氧化苦參堿＋miR-155-5p 抑制劑組處理后的胃癌細(xì)胞與miR-155-5p 模擬物的轉(zhuǎn)染后MGC803 細(xì)胞相比，集落顯著被抑制，見圖2B。

2.3 氧化苦參堿對(duì)胃癌細(xì)胞凋亡的影響

流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示，與轉(zhuǎn)染錯(cuò)義序列siRNA 組相比，miR-155-5p 模擬組胃癌細(xì)胞凋亡率降低（P＜0.01），而miR-155-5p 抑制劑組、氧化苦參堿組、氧化苦參堿＋miR-155-5p 抑制劑組可顯著增加胃癌細(xì)胞凋亡比例，同樣可以增加轉(zhuǎn)染miR-155-5p-模擬物的胃癌細(xì)胞凋亡（P＜0.01、0.001），見圖3。

圖3 氧化苦參堿對(duì)胃癌細(xì)胞的凋亡作用Fig.3 Effect of oxymatrine on apoptosis of gastric cancer cells

2.4 氧化苦參堿對(duì)胃癌細(xì)胞遷移和侵襲的影響

Transwell 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白組、轉(zhuǎn)染錯(cuò)義序列siRNA 組相比，miR-155-5p-模擬物組的細(xì)胞遷移和侵襲細(xì)胞數(shù)顯著增加（P＜0.001），而miR-155-5p 抑制劑組、氧化苦參堿組、氧化苦參堿＋miR-155-5p 抑制劑組細(xì)胞遷移和侵襲細(xì)胞數(shù)量降低（P＜0.001），見圖4。

圖4 Transwell 法檢測(cè)氧化苦參堿對(duì)MGC803 細(xì)胞的遷移和侵襲的影響（×400）Fig.4 Effects of oxymatrine on migration and invasion of MGC803 cells by Transwell assay (×400)

2.5 氧化苦參堿對(duì)miR-155-5p 靶基因和細(xì)胞周期蛋白表達(dá)的影響

使用蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)分析顯示，與空白組、錯(cuò)義序列組相比，miR-155-5p 模擬組的Claudin 1、c-Myc、Cyclin D1、Bcl-2 相對(duì)表達(dá)量增加，而Caspase-3 相對(duì)表達(dá)量降低（P＜0.01、0.001）。miR-155-5p 抑制劑組、氧化苦參堿組和氧化苦參堿＋miR-155-5p 模擬組的Claudin 1、c-Myc、Cyclin D1和Bcl-2 表達(dá)較miR-155-5p 模擬組下降，Caspase-3 表達(dá)增加（P＜0.001），見圖5。

圖5 氧化苦參堿對(duì)MGC803 細(xì)胞中miR-155-5p 靶基因蛋白的表達(dá)Fig.5 Expression of miR-155-5p target gene protein in MGC803 cells induced by oxymatrine

3 討論

胃癌是一種發(fā)病機(jī)制相對(duì)復(fù)雜的惡性腫瘤，其中遺傳因素涉及原癌基因激活、抑癌基因失活，以及相關(guān)信號(hào)通路的異常調(diào)節(jié)等多個(gè)方面[3]。對(duì)胃癌進(jìn)展的機(jī)制研究有利于闡明其發(fā)病原因，并對(duì)開發(fā)更有效的新藥以提高療效具有重要意義。氧化苦參堿是一種多靶點(diǎn)抗腫瘤藥物，越來越多的研究已經(jīng)表明了其在不同腫瘤類型中的抗腫瘤作用[5,14-15]。目前已經(jīng)在體內(nèi)和體外研究中均證實(shí)了氧化苦參堿可抑制胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)、降低細(xì)胞的存活率、誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞的凋亡[7-8]。近年來研究表明，苦參堿衍生物可在肝細(xì)胞癌中通過磷脂酰肌醇-3-羥激酶（PI3K）-蛋白激酶B（Akt）通路抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，促進(jìn)細(xì)胞凋亡[16]。還可通過Wnt/β-連環(huán)蛋白（Wnt/βcatenin）信號(hào)通路增加肺癌細(xì)胞的放療敏感性[17]。然而，氧化苦參堿能否直接抑制胃癌中的miR-155-5p 的表達(dá)仍未知。

人類已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了近3 000 種miRNA，根據(jù)推測(cè)miRNA 可能調(diào)節(jié)人類一半以上的基因表達(dá)。在過去的幾十年里，miRNA 在癌癥生物學(xué)中的作用得到了廣泛的研究。一些miRNA 參與腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移，而一些miRNA 則與癌癥患者的預(yù)后密切相關(guān)，因此miRNA 已經(jīng)成為腫瘤診斷和干預(yù)靶點(diǎn)的研究熱點(diǎn)[18]。本研究中探討了氧化苦參堿通過調(diào)節(jié)胃癌中的miR-155-5p 表達(dá)水平，干預(yù)胃癌細(xì)胞的生物學(xué)行為作用。通過比較miR-155-5p 在胃癌組織和癌旁組織、胃癌細(xì)胞系和正常胃黏膜細(xì)胞系中表達(dá)可見，胃癌細(xì)胞中miR-155-5p 表達(dá)顯著升高，這與既往研究類似[19]。本研究選用了胃癌細(xì)胞系中miR-155-5p 表達(dá)最高的MGC803 細(xì)胞進(jìn)行了后續(xù)研究。

加速細(xì)胞周期進(jìn)程是大多數(shù)實(shí)體瘤的共同特征。為了證明miR-155-5p 過表達(dá)可以加速細(xì)胞周期，本研究分析過表達(dá)或抑制miR-155-5p 表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞影響可見，miR-155-5p 過表達(dá)可促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，并抑制細(xì)胞凋亡。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，miR-155-5p 可能在胃癌細(xì)胞中作為腫瘤啟動(dòng)子起作用[19]。而使用氧化苦參堿干預(yù)后發(fā)現(xiàn)，氧化苦參堿可降低胃癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。此外氧化苦參堿可以降低miR-155-5p 模擬物對(duì)胃癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。

參考相關(guān)文獻(xiàn)后，本研究選擇了miR-155-5p 3個(gè)候選靶基因，即Claudin 1、Caspase-3、c-Myc。Claudin 1 是細(xì)胞緊密連接的重要組成部分，在許多不同的腫瘤中異常表達(dá)。在肝細(xì)胞癌中，角蛋白8和角蛋白18 的缺失通過上調(diào)Claudin 2 表達(dá)促進(jìn)HepG1 細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移[20]。c-Myc 作為轉(zhuǎn)錄因子，在控制細(xì)胞生長(zhǎng)、活力、凋亡和細(xì)胞轉(zhuǎn)化中起著重要的作用[21]。此外，細(xì)胞周期蛋白D1 在癌癥發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮關(guān)鍵作用，其上調(diào)表達(dá)驅(qū)動(dòng)不受控制的細(xì)胞增殖[22]。在本研究結(jié)果中，與空白組相比，miR-155-5p 模擬物組中Claudin、cyclin D、c-Myc 的表達(dá)水平上調(diào)，表明miR-155-5p 在細(xì)胞周期的啟動(dòng)和進(jìn)展中起重要作用。當(dāng)c-Myc 表達(dá)受到抑制時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)受阻，細(xì)胞在細(xì)胞周期的G0/G1期積累，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡加速。細(xì)胞凋亡是一個(gè)平衡細(xì)胞存活和死亡的穩(wěn)態(tài)過程[23]。Caspase-3 的激活是細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵過程，Caspase-3 活性增加被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡的標(biāo)志物。Bcl-2 參與凋亡途徑，在控制細(xì)胞凋亡和增強(qiáng)細(xì)胞存活率方面具有一定意義[23]。本研究表明，氧化苦參堿可通過miR-155-5p 調(diào)節(jié)可抑制c-Myc、Caspase-3、Bcl-2 表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞凋亡。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)了胃癌細(xì)胞中miR-155-5p 中過度表達(dá)，氧化苦參堿可能通過miR-155-5p分子靶點(diǎn)發(fā)揮抗腫瘤作用。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突