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    褪黑素通過(guò)誘導(dǎo)鐵死亡抑制食管鱗癌生長(zhǎng)的機(jī)制研究

    2023-08-17 17:57:02李敏楊素清王偉李洪峰張慧欣
    現(xiàn)代藥物與臨床 2023年7期
    關(guān)鍵詞:貨號(hào)鱗癌線粒體

    李敏,楊素清,王偉*,李洪峰,張慧欣

    1.冀中能源峰峰集團(tuán)有限公司總醫(yī)院 骨科,河北 邯鄲 056201

    2.邯鄲市第一醫(yī)院 胸外科,河北 邯鄲 056000

    3.冀中能源峰峰集團(tuán)有限公司總醫(yī)院 消化科,河北 邯鄲 056201

    食管癌是常見(jiàn)消化系統(tǒng)惡性腫瘤,其主要組織病理學(xué)以食管鱗癌為主,發(fā)病率與死亡率較高,目前食管鱗癌的治療方式以手術(shù)聯(lián)合放化療為主,由于腫瘤耐藥性,患者5 年生存率很低,尋找新的治療藥物是提高患者生存率的重要途徑[1-2]。鐵死亡是細(xì)胞內(nèi)鐵依賴的脂質(zhì)過(guò)氧化損傷導(dǎo)致的非凋亡性死亡,研究顯示,鐵死亡與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[3]。褪黑素是由松果體分泌的吲哚類(lèi)物質(zhì),具有抗炎、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)的作用,研究顯示,褪黑素可抑制胃癌[4]、卵巢癌[5]等腫瘤細(xì)胞的增殖與遷移,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡,且在食管癌中,褪黑素可協(xié)同5-氟尿嘧啶(5-FU)抑制食管癌細(xì)胞遷移與侵襲,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,提高5-FU 對(duì)食管癌細(xì)胞的敏感性[6]。溶質(zhì)運(yùn)載蛋白7 家族成員11(SLC7A11)是調(diào)節(jié)鐵死亡的蛋白酶,在維持細(xì)胞內(nèi)外的谷胱甘肽氧化還原平衡中發(fā)揮重要作用,SLC7A11 過(guò)表達(dá)可抑制鐵死亡,與胃癌、乳腺癌等腫瘤的發(fā)展密切相關(guān)[7-8]。研究顯示,SLC7A11 在食管鱗癌組織中表達(dá)水平升高,與食管鱗癌的臨床分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、及分化程度、患者預(yù)后及新輔助化療耐藥有關(guān)[9]。因此,本研究通過(guò)探究褪黑素對(duì)食管鱗癌細(xì)胞鐵死亡及對(duì)SLC7A11 表達(dá)的影響,旨在揭示褪黑素調(diào)控食管鱗癌細(xì)胞鐵死亡的作用機(jī)制,為食管鱗癌的分子靶向治療提供理論基礎(chǔ)。

    1 材料

    1.1 細(xì)胞與動(dòng)物

    人食管鱗癌KYSE150 細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)。5~6 周齡SPF 級(jí)BALB/c 雄性裸鼠,體質(zhì)量16~20 g,購(gòu)自武漢大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心[生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(鄂)2019-0004]。所有實(shí)驗(yàn)按照《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物護(hù)理和使用指南》執(zhí)行,均經(jīng)過(guò)冀中能源峰峰集團(tuán)有限公司總醫(yī)院批準(zhǔn)(動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理批號(hào)2022019)。

    1.2 主要試劑與儀器

    褪黑素(質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%,貨號(hào)M5250)、碘化丙啶(PI,規(guī)格10 mg,貨號(hào)P4170)、鐵死亡抑制劑Ferrostatin-1(Fer-1,規(guī)格5 mg,貨號(hào)SML0583)、鐵含量檢測(cè)試劑盒(貨號(hào)MAK025)購(gòu)自Sigma 公司;DMEM 培養(yǎng)基(貨號(hào)10566016)購(gòu)自美國(guó)Gibco公司;SLC7A11 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒及空載質(zhì)粒(pcDNA)購(gòu)自廣州銳博生物科技有限公司;MTT 細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒(貨號(hào)E-CK-A341)、BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒(貨號(hào)E-BC-K318-M)購(gòu)自Elabscience 公司;RIPA 裂解液(貨號(hào)R0010)購(gòu)自北京索萊寶生物科技有限公司;兔抗人SLC7A11(貨號(hào)ab175186)、β-actin(貨號(hào)ab8227)及辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的羊抗兔IgG 二抗(貨號(hào)ab205718)購(gòu)自Abcam 公司;總谷胱甘肽(GSH)檢測(cè)試劑盒(貨號(hào)S0052)、活性氧(ROS)檢測(cè)試劑盒(貨號(hào)S0033S)購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司。

    JEM-1230 透射電子顯微鏡購(gòu)自日本電子公司;FACS Calibur 流式細(xì)胞儀購(gòu)自美國(guó)BD 公司;Flexstation-3 多功能酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó) Molecular Devices 公司。

    2 方法

    2.1 鐵死亡細(xì)胞模型的建立

    KYSE150 細(xì)胞接種至DMEM 培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng),培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期時(shí),以每孔4×103個(gè)細(xì)胞接種至96 孔板中,分別使用濃度為0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 mmol/L 的褪黑素處理KYSE150 細(xì)胞24 h,并單獨(dú)設(shè)置空白組,MTT 檢測(cè)細(xì)胞存活率。

    另選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的KYSE150 細(xì)胞,使用1.0 mmol/L 褪黑素處理KYSE150 細(xì)胞為褪黑素組;另設(shè)置褪黑素+Fer-1 組,使用5 μmol/L Fer-1[10]與1.0 mmol/L 褪黑素共同處理KYSE150 細(xì)胞。褪黑素組、褪黑素+Fer-1 組處理24 h,MTT 檢測(cè)細(xì)胞活性[490 nm 處吸光度(A490)值]。

    2.2 細(xì)胞分組

    將KYSE150 細(xì)胞分成4 組,分別為對(duì)照組、褪黑素組、褪黑素+pcDNA 組、褪黑素+SLC7A11組。褪黑素組使用1.0 mmol/L 褪黑素處理24 h,褪黑素+pcDNA(轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒)組、褪黑素+SLC7A11(轉(zhuǎn)染SLC7A11 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒)組先進(jìn)行質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染24 h 后,使用1.0 mmol/L 褪黑素處理24 h,每組設(shè)置6 個(gè)復(fù)孔。

    2.3 細(xì)胞線粒體形態(tài)觀察

    離心收集各組處理的細(xì)胞,PBS 洗滌后,使用2.5%戊二醛4 ℃固定過(guò)夜,加入1%鋨酸放置1 h,PBS 洗滌3 次,分別使用50%、70%、90%乙醇及丙酮脫水,包埋固化后,切成50~60 nm 的切片,3%醋酸鈾–枸櫞酸鉛雙染色,透射電子顯微鏡觀察并拍照。

    2.4 PI 染色檢測(cè)細(xì)胞死亡

    將各組處理后的細(xì)胞1 500 r/min 離心5 min,收集細(xì)胞,PBS 洗滌,加入70%乙醇4 ℃固定30 min,PBS 洗滌,加入500 μL PI(50 μg/mL)避光孵育30 min,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞死亡。

    2.5 細(xì)胞內(nèi)Fe2+及GSH 水平檢測(cè)

    離心收集各組處理的細(xì)胞,PBS 洗滌后加入RIPA 裂解液裂解2 h 后,分別使用鐵含量檢測(cè)試劑盒及總GSH 檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞中Fe2+及GSH 的水平。

    2.6 細(xì)胞中ROS 的檢測(cè)

    離心收集各組處理的細(xì)胞,PBS 洗滌后加入10 μmol/L DCFH-DA,37 ℃孵育20 min,去除多余的液體,熒光酶標(biāo)儀(488 nm 激發(fā)波長(zhǎng),525 nm 發(fā)射波長(zhǎng))檢測(cè)熒光強(qiáng)度,熒光越強(qiáng)則表示ROS 的含量越高。

    2.7 Western blotting 法檢測(cè)SLC7A11 蛋白表達(dá)

    離心收集細(xì)胞PBS 洗滌2 遍,加入RIPA 裂解液裂解,超聲破碎3 min,12 000 r/min 離心20 min取上清,采用BCA 法進(jìn)行蛋白定量,每組取25 μg蛋白煮沸變性后進(jìn)行SDS-PAGE 電泳,轉(zhuǎn)至PVDF膜后5%的脫脂牛奶封閉,加入兔抗人SLC7A11 和β-actin 抗體,4 ℃孵育過(guò)夜,再加入HRP 標(biāo)記的羊抗兔IgG 二抗,室溫孵育1 h,ECL 顯色液顯色,以β-actin 為內(nèi)參,Image J 軟件分析目的蛋白相對(duì)表達(dá)量。

    2.8 裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)

    將BALB/c 裸鼠分為模型組、褪黑素組、褪黑素+pcDNA 組、褪黑素+SLC7A11 組,每組各10只。KYSE150 細(xì)胞使用PBS 調(diào)整細(xì)胞濃度為1×107個(gè)/mL,模型組與褪黑素組在無(wú)菌條件下,在裸鼠右側(cè)腋下注射100 μL 細(xì)胞液,褪黑素+pcDNA組、褪黑素+SLC7A11 組按照同樣方法在在裸鼠右側(cè)腋下注射100 μL 分別轉(zhuǎn)染過(guò)空載質(zhì)粒(pcDNA)和SLC7A11 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒(SLC7A11)的KYSE150細(xì)胞,接種第8 天,褪黑素組、褪黑素+pcDNA 組、褪黑素+SLC7A11 組小鼠ip 給藥25 mg/kg,2 d 給藥1 次,給藥劑量參考文獻(xiàn)報(bào)道[6],第23 天脫頸處死小鼠,取腫瘤組織,測(cè)量體積并稱質(zhì)量,免疫組化法檢測(cè)腫瘤組織SLC7A11 蛋白表達(dá)。

    2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    3 結(jié)果

    3.1 褪黑素誘導(dǎo)KYSE150 細(xì)胞鐵死亡模型的建立

    結(jié)果顯示,不同濃度的褪黑素均可顯著降低KYSE150 細(xì)胞增殖活性,當(dāng)褪黑素濃度為 1.0 mmol/L 時(shí),細(xì)胞存活率約70%,因此選用1.0 mmol/L 的褪黑素用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),見(jiàn)圖1A。

    圖1 不同濃度褪黑素對(duì)KYSE150 細(xì)胞存活率(A)和褪黑素對(duì)鐵死亡細(xì)胞模型(B)的影響Fig.1 Effects of different concentrations of melatonin on KYSE150 cell survival (A) and on iron-dead cell models (B)

    為驗(yàn)證褪黑素通過(guò)鐵死亡誘導(dǎo)KYSE150 細(xì)胞死亡,使用1.0 mmol/L 褪黑素與Fer-1 共同處理KYSE150 細(xì)胞。結(jié)果顯示,與褪黑素組比較,褪黑素+Fer-1 組KYSE150 細(xì)胞增殖活性顯著升高,表明Fer-1 可逆轉(zhuǎn)褪黑素對(duì)KYSE150 細(xì)胞的增殖抑制作用,見(jiàn)圖1B。

    3.2 褪黑素對(duì)KYSE150 細(xì)胞形態(tài)的影響

    如圖2 所示,透射電子顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),褪黑素組細(xì)胞內(nèi)的線粒體較對(duì)照組變小,線粒體膜密度增加;褪黑素+SLC7A11 組細(xì)胞線粒體較褪黑素+pcDNA 組正常,線粒體膜密度減少。

    圖2 透射電子顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)(×50 000)Fig.2 Cell morphology observed by transmission electron microscope (×50 000)

    3.3 褪黑素對(duì)KYSE150 細(xì)胞死亡的影響

    如圖3 所示,死亡細(xì)胞的細(xì)胞核被PI 染成紅色,褪黑素組KYSE150 死亡細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組增多,褪黑素+SLC7A11 組死亡細(xì)胞數(shù)較褪黑素+pcDNA 組減少。

    圖3 褪黑素對(duì)KYSE150 細(xì)胞死亡的影響Fig.3 Effect of melatonin on KYSE1500 cell death

    3.4 褪黑素對(duì)KYSE150 細(xì)胞內(nèi)Fe2+水平的影響

    與對(duì)照組比較,褪黑素組KYSE150 細(xì)胞內(nèi)Fe2+水平顯著升高(P<0.05);與褪黑素+pcDNA 組比較,褪黑素+SLC7A11 組細(xì)胞內(nèi)Fe2+水平顯著降低(P<0.05),見(jiàn)表1。

    表1 褪黑素對(duì)KYSE150 細(xì)胞內(nèi)Fe2+水平的影響(,n =6)Table 1 Effect of melatonin on Fe2+ level in KYSE150 cells(,n =6)

    表1 褪黑素對(duì)KYSE150 細(xì)胞內(nèi)Fe2+水平的影響(,n =6)Table 1 Effect of melatonin on Fe2+ level in KYSE150 cells(,n =6)

    與對(duì)照組比較:*P<0.05;與褪黑素+pcDNA 組比較:#P<0.05*P <0.05 vs control group;#P <0.05 vs melatonin+pcDNA group

    3.5 褪黑素對(duì)KYSE150 細(xì)胞內(nèi)ROS、GSH 水平的影響

    與對(duì)照組比較,褪黑素組KYSE150 細(xì)胞內(nèi)GSH 水平顯著降低,ROS 水平顯著升高(P<0.05),DCF 熒光強(qiáng)度增加;與褪黑素+pcDNA 組比較,褪黑素+SLC7A11 組細(xì)胞內(nèi)GSH 水平顯著升高,ROS水平顯著降低(P<0.05),DCF 熒光強(qiáng)度降低,見(jiàn)圖4、表2。

    表2 褪黑素對(duì)KYSE150 細(xì)胞內(nèi)ROS、GSH 水平的影響(,n =6)Table 2 Effects of melatonin on ROS and GSH levels in KYSE150 cells (,n =6)

    表2 褪黑素對(duì)KYSE150 細(xì)胞內(nèi)ROS、GSH 水平的影響(,n =6)Table 2 Effects of melatonin on ROS and GSH levels in KYSE150 cells (,n =6)

    與對(duì)照組比較:*P<0.05;與褪黑素+pcDNA 組比較:#P<0.05*P <0.05 vs control group;#P <0.05 vs melatonin+pcDNA group

    圖4 DCFH-DA 熒光探針檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS 的變化Fig.4 Changes of intracellular ROS detected by DCFH-DA fluorescent probe

    3.6 褪黑素對(duì)KYSE150 細(xì)胞SLC7A11 表達(dá)的影響

    Western Blotting 結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,褪黑素組KYSE150 細(xì)胞SLC7A11 蛋白表達(dá)水平顯著降低(P<0.05);與褪黑素+pcDNA 組比較,褪黑素+SLC7A11 組細(xì)胞SLC7A11 蛋白表達(dá)水平顯著升高(P<0.05),見(jiàn)圖5、表3。

    表3 褪黑素對(duì)KYSE150 細(xì)胞SLC7A11 表達(dá)的影響 (,n =6)Table 3 Effect of melatonin on SLC7A11 expression in KYSE150 cells (,n =6)

    表3 褪黑素對(duì)KYSE150 細(xì)胞SLC7A11 表達(dá)的影響 (,n =6)Table 3 Effect of melatonin on SLC7A11 expression in KYSE150 cells (,n =6)

    與對(duì)照組比較:*P<0.05;與褪黑素+pcDNA 組比較:#P<0.05*P <0.05 vs control group;#P <0.05 vs melatonin+pcDNA group

    圖5 各組KYSE150 細(xì)胞SLC7A11 蛋白表達(dá)情況Fig.5 SLC7A11 protein expression of KYSE150 cells in each group

    3.7 褪黑素對(duì)荷瘤小鼠腫瘤體積與質(zhì)量的影響

    與對(duì)照組比較,褪黑素組腫瘤質(zhì)量與體積顯著降低(P<0.05);與褪黑素+pcDNA 組比較,褪黑素+SLC7A11 組腫瘤質(zhì)量與體積顯著降低顯著升高(P<0.05),見(jiàn)表4。

    表4 褪黑素對(duì)荷瘤小鼠腫瘤體積與質(zhì)量的影響(,n =10)Table 4 Effects of melatonin on tumor volume and mass in tumor-bearing mice (,n =10)

    表4 褪黑素對(duì)荷瘤小鼠腫瘤體積與質(zhì)量的影響(,n =10)Table 4 Effects of melatonin on tumor volume and mass in tumor-bearing mice (,n =10)

    與對(duì)照組比較:*P<0.05;與褪黑素+pcDNA 組比較:#P<0.05*P <0.05 vs control group;#P <0.05 vs melatonin+pcDNA group

    3.8 褪黑素對(duì)荷瘤小鼠腫瘤組織SLC7A11 表達(dá)的影響

    免疫組化結(jié)果顯示,對(duì)照組腫瘤組織褐色或中褐色細(xì)胞較多,SLC7A11 呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),褪黑素組與褪黑素+pcDNA 組細(xì)胞SLC7A11 陽(yáng)性顆粒表達(dá)較對(duì)照組減少,褪黑素+SLC7A11 組細(xì)胞SLC7A11陽(yáng)性顆粒表達(dá)較褪黑素+pcDNA 組增多,見(jiàn)圖6。

    圖6 免疫組化檢測(cè)腫瘤組織SLC7A11 蛋白表達(dá)(SP,×200)Fig.6 Immunohistochemical detection of SLC7A11 protein expression in tumor tissue (SP,×200)

    4 討論

    褪黑素是一種吲哚類(lèi)神經(jīng)內(nèi)分泌激素,在多種人類(lèi)腫瘤中具有抗腫瘤的作用,通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯,抑制腫瘤細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)免疫等多種途徑發(fā)揮抗癌作用[11]。為驗(yàn)證褪黑素對(duì)食管鱗癌的抑制作用,本研究建立食管鱗癌細(xì)胞裸鼠移植瘤模,ip 一定的褪黑素治療后,結(jié)果顯示,褪黑素可顯著抑制食管鱗癌細(xì)胞裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)。除抗腫瘤作用,褪黑素還可增加腫瘤細(xì)胞對(duì)紫杉醇、多柔比星等化療藥物敏感性[12]。另有研究顯示,褪黑素通過(guò)激活核因子E2 相關(guān)因子2(Nrf2)/血紅素加氧酶-1(HO-1)信號(hào)通路抑制高葡萄糖誘導(dǎo)2 型糖尿病骨質(zhì)疏松癥的鐵死亡[13]。鐵死亡是一種依賴性的脂質(zhì)過(guò)氧化物介導(dǎo)的細(xì)胞死亡方式,與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[14]。褪黑素對(duì)食管鱗癌細(xì)胞鐵死亡的影響尚不清楚,本研究結(jié)果顯示,使用 0.25~4.0 mmol/L 褪黑素均可顯著降低KYSE150 細(xì)胞增殖活性,且使用1.0 mmol/L 褪黑素與鐵死亡抑制劑Fer-1 共同處理KYSE150 細(xì)胞顯示,F(xiàn)er-1 可逆轉(zhuǎn)褪黑素對(duì)KYSE150 細(xì)胞的增殖抑制作用,表明褪黑素可通過(guò)鐵死亡誘導(dǎo)KYSE150細(xì)胞死亡。

    鐵死亡是一種鐵依賴性氧化細(xì)胞死亡,GSH 是維持細(xì)胞內(nèi)氧化還原平衡的重要成分,ROS 水平反映細(xì)胞抗氧化能力,細(xì)胞鐵死亡發(fā)生時(shí),表現(xiàn)為線粒體變小、線粒體膜密度增高、線粒體嵴減少或消失,細(xì)胞內(nèi)抗氧化能力降低,細(xì)胞內(nèi)ROS 大量生成,F(xiàn)e2+升高,GSH 水平降低[15]。本研究使用1.0 mmol/L 褪黑素處理KYSE150 細(xì)胞24 h 后,細(xì)胞死亡數(shù)目增加,細(xì)胞線粒體變小,線粒體膜密度增加,細(xì)胞內(nèi)Fe2+水平與ROS 水平升高,GSH 水平顯著降低,符合鐵死亡特征,表明褪黑素可誘導(dǎo)KYSE150 細(xì)胞鐵死亡。

    SLC7A11 為一種氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,屬于溶質(zhì)載體家族成員,可與溶質(zhì)載體家族3 成員2(SLC3A2)組成胱氨酸/谷氨酸反轉(zhuǎn)運(yùn)體,抑制胱氨酸/谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體可促進(jìn)細(xì)胞鐵死亡,導(dǎo)致SLC7A11 表達(dá)代償性的增加,研究顯示,SLC7A11 在肝癌、食管鱗癌等腫瘤中上調(diào)表達(dá),SLC7A11 可通過(guò)攝取胱氨酸與合成還原性GSH 保護(hù)細(xì)胞損傷及鐵中毒[16-17]。研究顯示,SLC7A11 在食管鱗癌組織中上調(diào)表達(dá),與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和患者預(yù)后差有關(guān),且體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)顯示,Nrf2 的過(guò)度激活可誘導(dǎo)SLC7A11 表達(dá),降低放射治療誘導(dǎo)的脂質(zhì)過(guò)氧化水平,促進(jìn)食管鱗癌放射抗性[10]。本研究結(jié)果顯示,使用1.0 mmol/L 褪黑素處理KYSE150 細(xì)胞24 h 后,SLC7A11 表達(dá)水平降低;在乳腺癌中,二甲雙胍可通過(guò)抑制SLC7A11 表達(dá)誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞鐵死亡[18]。為進(jìn)一步探究褪黑素調(diào)控SLC7A11 對(duì)KYSE150 細(xì)胞的影響,將KYSE150 細(xì)胞轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)SLC7A11 質(zhì)粒后,使用褪黑素處理,結(jié)果顯示,與褪黑素+pcDNA組比較,褪黑素+SLC7A11 組細(xì)胞死亡數(shù)目減少,細(xì)胞線粒體變大,線粒體膜密度減少,細(xì)胞內(nèi)GSH水平顯著升高,F(xiàn)e2+水平與ROS 水平降低,提示過(guò)表達(dá)SLC7A11 可逆轉(zhuǎn)褪黑素誘導(dǎo)的鐵死亡,表明褪黑素可通過(guò)抑制SLC7A11 表達(dá)誘導(dǎo)食管鱗癌細(xì)胞鐵死亡。另外,本研究荷瘤小鼠實(shí)驗(yàn)顯示,使用褪黑素給予小鼠腹腔給藥治療后,腫瘤組織SLC7A11 蛋白表達(dá)水平升高,而裸鼠右側(cè)腋下注射SLC7A11 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒(SLC7A11)的KYSE150 細(xì)胞后載給予褪黑素,小鼠腫瘤質(zhì)量與體積顯著升高,證實(shí)褪黑素可通過(guò)抑制SLC7A11 表達(dá)抑制腫瘤升高。

    綜上所述,褪黑素通過(guò)抑制SLC7A11 表達(dá),升高細(xì)胞內(nèi)Fe2+水平與ROS 水平,降低GSH 水平,誘導(dǎo)食管鱗癌細(xì)胞鐵死亡。

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