瑞香狼毒降低YAP1表達(dá)抑制肝癌細(xì)胞增殖的作用

周文漢 鄭康寧 李永民

（河北中醫(yī)學(xué)院，石家莊 050200）

原發(fā)性肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）死亡率高居癌癥第三位［1］。目前，除手術(shù)和肝移植外，放化療是主要治療手段，但放化療藥物的毒性及耐受性限制了其治療效果，導(dǎo)致患者5年生存率低于30%［2］，因此，HCC是嚴(yán)重危害人類健康的重大疾病。

Yes關(guān)聯(lián)蛋白1（yes-associated protein 1，YAP1）是Hippo通路下游的關(guān)鍵效應(yīng)分子。研究表明，YAP1的過度活化導(dǎo)致組織器官的增殖失調(diào)［3］。臨床研究表明，肝癌組織中，YAP1過表達(dá)且處于活化狀態(tài)；同時(shí)，激活YAP1促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移［4］。沉默YAP1的表達(dá)抑制了SMMC-7721的增殖［5］。因此，YAP1是潛在的肝癌治療靶點(diǎn)之一。

瑞香狼毒（Stellera chamaejasmeL.serum group,SCL）為瑞香科狼毒屬植物，一般藥用部位為干燥根，是我國西北、內(nèi)蒙古、黑龍江等地一種分布廣泛的植物。SCL最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，是藥用狼毒的正品。其味苦辛、性平，入肺、脾、肝經(jīng)，具有逐水祛痰、破積殺蟲之功效。近幾年研究發(fā)現(xiàn)，SCL在治療腫瘤及結(jié)核病等方面有很多值得探討與開發(fā)的價(jià)值［6］。然而關(guān)于SCL抑制肝癌細(xì)胞增殖的機(jī)制鮮見報(bào)道。

本研究以肝癌HepG2215 細(xì)胞及Yap1敲除（Yap1LKO）小鼠和Yap1flox/flox小鼠肝原位癌模型為材料，進(jìn)行了細(xì)胞活力檢測(cè)、蛋白水平表達(dá)驗(yàn)證、病理組織學(xué)觀察和分子對(duì)接等體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)，擬得出結(jié)論：SCL抑制肝癌增殖與降低YAP1表達(dá)有關(guān)，為原發(fā)性肝細(xì)胞癌的病理機(jī)制研究和臨床治療提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞和動(dòng)物 HepG2215（整合HBV基因的細(xì)胞株）和L02（正常肝細(xì)胞）細(xì)胞株均購自湖南亞大豐暉新材料有限公司，并由上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司進(jìn)行STR基因型檢測(cè)鑒定。SD雄性大鼠購于北京維通利華（許可證號(hào)SCXK（京）2016-0006）。肝細(xì)胞特異性Yap1敲除（Yap1LKO）小鼠購自賽業(yè)（廣州）生物科技有限公司。此研究已獲得河北中醫(yī)學(xué)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理編號(hào)：DWLL2019029）。

1.1.2 試劑與耗材 SCL干燥根取材于河北省張家口市尚義縣（經(jīng)河北北方學(xué)院劉貴河教授確認(rèn)是SCL正品）［7］；胎牛血清購自于美國Hyclone公司；RPMI 1640培養(yǎng)基、CCK-8細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒購自于北京索萊寶科技有限公司；蛋白提取試劑盒；柱式動(dòng)物組織/細(xì)胞總蛋白抽提試劑盒購自于上海雅酶生物醫(yī)藥科技有限公司； 12%聚丙烯酰胺預(yù)制膠購自于南京金斯瑞生物科技有限公司；兔抗YAP1（D8H1X）XP單克隆抗體購自于美國 Cell Signaling Technology 公司；兔抗GAPDH抗體購自于上海泊灣科技有限公司；HRP 標(biāo)記的山羊抗兔 IgG購自于上海生工生物工程股份有限公司；通用型 ECL 發(fā)光液購自于上海圣爾生物科技有限公司；N-亞硝基二乙胺（diethylnirtosamine，DEN）購自于美國 Sigma 公司； 組成型雄甾烷受體激動(dòng)劑（3,5-dichloro-2-［4-（3,5-dichloropyridin-2-yl）oxyphenoxy］pyridine，TCPOBOP）購自于北京博奧派克生物科技有限公司；蘇木素-伊紅染色液購自于安徽雷根生物技術(shù)有限公司；多功能成像系統(tǒng)購自于法國 VILBER BIO IMAGING公司；多功能微孔板讀數(shù)儀購自于賽默飛世爾科技（中國）有限公司；Image-J軟件購自于美國National Institutes of Health公司；MS250超聲換能器的成像系統(tǒng)購自于多倫多VisualSonics公司。

1.2 方法

1.2.1 制備SCL水煎液 稱取642 g SCL的干燥根，加水5 L浸泡1 h。將SCL干燥根在砂鍋中煎煮2 h，并濃縮至2 L，制成321 mg/mL的SCL水煎液，放于-20℃凍存?zhèn)溆?。使用時(shí)，用蒸餾水稀釋至160.5 mg/mL。

1.2.2 制備SCL含藥血清 12只雄性SD大鼠隨機(jī)分為2組。SCL組：灌胃SCL水煎液（3.21 g/kg）1 mL，每天2次；生理鹽水（NS）組：灌胃NS 1 mL，每天2次。連續(xù)灌胃4 d，末次灌胃2 h后，SD大鼠經(jīng)2%戊巴比妥鈉麻醉，股動(dòng)脈取血。全血常溫靜置2 h，2 500 r/min離心15 min，取上清液，56℃水浴30 min，分裝后，-80℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞生長活性 將HepG2215和L02細(xì)胞分別置于含10% 胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基中，37℃、5% CO2飽和濕度環(huán)境培養(yǎng)。收集處于對(duì)數(shù)生長期的HepG2215和L02細(xì)胞，制成1×105個(gè)/mL的細(xì)胞懸液，以每孔100 μL細(xì)胞懸液接種于96孔板中。細(xì)胞貼壁后，加入用培養(yǎng)基稀釋的含不同體積比的SCL含藥血清（0%、5%、10%、15%、20%和30%）培養(yǎng)24 h，每孔加入100 μL配置的CCK-8溶液（CCK-8溶液∶RPMI1640培養(yǎng)基=1∶9），混勻后，孵育2 h，多功能微孔板讀數(shù)儀檢測(cè)波長為450 nm處的OD值。細(xì)胞存活率（%）=（試驗(yàn)孔吸光度-空白孔吸光度）/（對(duì)照孔吸光度-空白孔吸光度）×100%。

1.2.4 Western blot法檢測(cè)HepG2215細(xì)胞中YAP1表達(dá)水平的變化 SCL含藥血清處理細(xì)胞24 h后，按照柱式動(dòng)物組織/細(xì)胞總蛋白抽提試劑盒步驟提取HepG2215細(xì)胞蛋白，100℃加熱變性，用12%聚丙烯酰胺預(yù)制膠進(jìn)行蛋白分離；轉(zhuǎn)膜后封閉，并用兔抗YAP1（D8H1X）XP單克隆抗體（1∶1 000稀釋）和兔抗GAPDH抗體（1∶2 000稀釋），4℃過夜；洗膜后加入山羊抗兔IgG-HRP（1∶10 000稀釋）室溫下?lián)u床孵育1.5 h。洗膜后，進(jìn)行ECL曝光，用多功能成像系統(tǒng)檢測(cè)條帶，并用Image-J軟件測(cè)量條帶灰度值，分析結(jié)果。

1.2.5 大鼠肝臟毒性檢驗(yàn) 為了選出有療效且不損傷正常肝細(xì)胞的SCL劑量，將大鼠隨機(jī)分為3組，分別為高濃度SCL水煎液組（3.21 g/kg）、低濃度SCL水煎液組（1.605 g/kg）和NS組。連續(xù)灌胃4 d，取出大鼠肝臟，拍照。

1.2.6 DEN/TCPOBOP化學(xué)誘導(dǎo)的肝原位腫瘤小鼠模型 肝細(xì)胞特異性Yap1敲除（Yap1LKO）小鼠由廣州賽業(yè)生物科技有限公司構(gòu)建并鑒定成功［8］。將2周齡雄性Yap1flox/flox小鼠和Yap1LKO小鼠，腹腔注射DEN 25 mg/kg； 從第4周齡開始，每2周注射1次TCPOBOP（3 mg/kg），共計(jì)10次。24周齡時(shí)，通過MS250超聲換能器的成像系統(tǒng)，通過超聲測(cè)定小鼠肝臟內(nèi)的腫瘤數(shù)量［9］。對(duì)造模成功的10只Yap1flox/flox小鼠和10只Yap1LKO小鼠隨機(jī)分為SCL組和NS組。根據(jù)動(dòng)物之間給藥劑量的計(jì)算參照公式：小鼠藥量×3=大鼠藥量×6。小鼠的給藥量是大鼠的2倍。SCL用量為2.293 g/（kg·d），共計(jì)7 d。

1.2.7 H&E染色觀察腫瘤組織的病理形態(tài) 小鼠肝臟組織經(jīng)4%多聚甲醛固定后，梯度酒精脫水、透明、浸蠟、組織包埋后，進(jìn)行組織切片（厚度5 μm）。組織切片脫蠟后，經(jīng)蘇木精染色、分化液酸化、返藍(lán)后，再用伊紅染色，酒精脫水，透明、中性樹膠封片，晾干后顯微鏡觀察拍照。

1.2.8 LC-MS技術(shù)對(duì)SCL全物質(zhì)鑒定 取SCL水煎液，SCL含藥血清和NS血清各100 μL，加入400 μL的萃取液（甲醇∶乙腈=1∶1）。渦流混勻30 s后，低溫超聲萃取30 min（5℃，40 kHz）。然后用4℃冷凍離心機(jī)13 000 r/min離心15 min，取出上清液，用氮?dú)獯蹈?。加?00 μL的重組液（乙腈∶水=1∶1），超聲提取，離心。最后轉(zhuǎn)入小瓶進(jìn)行LC-MS分析。將原始數(shù)據(jù)導(dǎo)入代謝組學(xué)處理軟件Progenesisqi進(jìn)行基礎(chǔ)分析。接著利用該軟件對(duì)特征峰搜索數(shù)據(jù)庫進(jìn)行識(shí)別，并對(duì)代謝數(shù)進(jìn)行分析。MS的質(zhì)量誤差設(shè)置為小于10 PPM，根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜匹配評(píng)分鑒定代謝物（主要數(shù)據(jù)庫為http://www.hmdb.ca/和https://metlin.scripps.edu/）。上述檢測(cè)和分析由上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司進(jìn)行。

1.2.9 SCL含藥血清活性成分與YAP1分子對(duì)接 應(yīng)用PubChem數(shù)據(jù)庫（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）下載活性成分的2D結(jié)構(gòu)，并進(jìn)行能量最優(yōu)化。在Uniprot數(shù)據(jù)庫（https://www.uniprot.org/）中尋找YAP1蛋白結(jié)構(gòu)，通過PDB數(shù)據(jù)庫（https://pdbj.org/）下載靶蛋白結(jié)構(gòu)。用PyMol軟件去除水分子和小分子配體，使用Auto Dock Tools 1.5.6軟件添加氫鍵，Vina進(jìn)行受體和配體分子對(duì)接，得到分子對(duì)接的分?jǐn)?shù)值。利用PyMol軟件展示配體分子與受體蛋白的結(jié)合位點(diǎn)。

1.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 26.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差（S）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SCL含藥血清不影響人正常肝細(xì)胞L02的增殖

選用高濃度（3.21 g/kg）與低濃度（1.605 g/kg）SCL水煎液及生理鹽水，分別灌胃大鼠7 d。肉眼觀察大鼠肝臟的形態(tài)變化，發(fā)現(xiàn)高濃度SCL組大鼠的肝臟形態(tài)有肉眼可見的改變，而低濃度SCL組和NS組的大鼠肝臟并未觀察到明顯的變化（圖1-A）。選用低濃度的SCL含藥血清進(jìn)一步處理L02細(xì)胞24 h，CCK-8法檢測(cè)結(jié)果顯示，不同體積比（0%、5%、10%、15%、20%和30%）的SCL含藥血清對(duì)L02細(xì)胞的增殖均無影響（圖1-B）。因此，在后續(xù)細(xì)胞試驗(yàn)中，均采用低濃度的SCL含藥血清干預(yù)細(xì)胞。

圖1 低濃度瑞香狼毒含藥血清對(duì)人正常肝細(xì)胞L02增殖的影響Fig.1 Effects of low concentration of SCL serum on the proliferation of normal liver cells L02

2.2 低濃度SCL含藥血清抑制肝癌HepG2215細(xì)胞的增殖

為了探究SCL含藥血清對(duì)HepG2215細(xì)胞的影響，不同體積比（0%、5%、10%、15%、20%和30%）的SCL含藥血清處理HepG2215細(xì)胞24 h。形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著SCL含藥血清比例的增加，HepG2215細(xì)胞形態(tài)皺縮、細(xì)胞數(shù)量減少、懸浮細(xì)胞增多；NS血清處理的細(xì)胞生長狀態(tài)良好，細(xì)胞呈多邊形生長，形態(tài)規(guī)則（圖2-A）。

圖2 不同濃度瑞香狼毒含藥血清抑制HepG2215細(xì)胞的增殖Fig.2 Proliferation of HepG2215 cells inhibited by different concentrations of SCL serum

不同體積比SCL含藥血清處理HepG2215細(xì)胞24 h，CCK-8法結(jié)果顯示，隨著SCL含藥血清濃度的增加，HepG2215細(xì)胞的存活率逐漸降低（圖2-B）。24 h時(shí)，SCL含藥血清干預(yù)HepG2215細(xì)胞的IC50值為（19.38±0.73）%（圖2-C）。結(jié)果表明，SCL含藥血清能抑制HepG2215細(xì)胞的增殖活力。

2.3 SCL含藥血清降低HepG2215細(xì)胞中YAP1蛋白的表達(dá)水平

臨床上，YAP1在肝腫瘤組織中高表達(dá)。為進(jìn)一步探究SCL能否影響YAP1的表達(dá)水平，Western blot分析結(jié)果顯示，SCL含藥血清降低了HepG2215細(xì)胞中YAP1的蛋白表達(dá)水平（P＜0.05）（圖3）。

圖3 瑞香狼毒含藥血清降低HepG2215細(xì)胞YAP1蛋白表達(dá)水平Fig.3 Expression of YAP1 decreased by SCL serum in HepG2215 cells

2.4 SCL水煎液抑制肝原位癌小鼠肝臟腫瘤的增長

為了驗(yàn)證SCL是否能通過YAP1抑制肝癌細(xì)胞的增長，DEN/TCPOBOP聯(lián)合誘導(dǎo)Yap1flox/flox和Yap1LKO小鼠構(gòu)建肝原位癌模型，SCL水煎液和NS灌胃7 d。在NS組中，與Yap1flox/flox小鼠相比，Yap1LKO小鼠的肝腫瘤體積明顯減小。結(jié)果表明，敲除Yap1能減小小鼠肝腫瘤的體積。在Yap1flox/flox組中，與NS組相比，SCL組小鼠肝臟的腫瘤體積縮小了。結(jié)果表明，SCL能抑制Yap1flox/flox小鼠腫瘤增長。在Yap1LKO組中，與NS對(duì)照組相比，SCL組小鼠肝臟的腫瘤體積縮小，但效果不如Yap1flox/flox組。結(jié)果表明SCL能抑制Yap1LKO小鼠腫瘤增長。有趣的是，YAP1敲除后，SCL抑制肝腫瘤體積增長的作用減弱（圖4-A）。H＆E染色結(jié)果顯示，在Yap1flox/flox和Yap1LKO組中，NS組的正常肝臟組織結(jié)構(gòu)被腫瘤組織浸潤破壞，肝癌細(xì)胞呈巢狀排列，松散程度更高，多數(shù)肝癌細(xì)胞體積大，有大小不一的空泡，胞漿豐富，細(xì)胞核多核分裂象多見；SCL組腫瘤組織邊界清楚，肝癌細(xì)胞排列呈多角形，細(xì)胞核雙核分裂象多見。在SCL組中，與Yap1flox/flox小鼠相比，Yap1LKO小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)更加完整（圖4-B）。這些結(jié)果說明SCL能抑制肝原位癌小鼠肝臟腫瘤的增長。

2.5 SCL降低肝原位癌小鼠肝癌細(xì)胞中YAP1的表達(dá)

為了進(jìn)一步探究SCL抑制小鼠肝原位癌增長的機(jī)制，肝原位癌Yap1flox/flox和Yap1LKO小鼠分別經(jīng)NS和SCL灌胃后，Western Blot檢測(cè)小鼠肝癌組織中YAP1蛋白的表達(dá)水平。Western Blot結(jié)果顯示了Yap1LKO小鼠的YAP1已被敲除。同時(shí)在Yap1flox/flox小鼠中，與NS組相比，SCL降低了小鼠肝癌組織中YAP1的表達(dá)水平（圖5）。綜合2.4和2.5的結(jié)果，SCL抑制小鼠肝臟腫瘤增長與降低肝腫瘤組織中YAP1表達(dá)水平有關(guān)。

圖5 瑞香狼毒降低肝原位癌小鼠肝癌細(xì)胞YAP1的表達(dá)Fig.5 Expression of YAP1 decreased by SCL in the mice with tumors in liver

2.6 SCL含藥血清中的4種主要活性成分

為進(jìn)一步驗(yàn)證SCL抑制肝癌細(xì)胞的主要成分，利用LC-MS對(duì)NS血清、SCL含藥血清和SCL水煎液所含成分進(jìn)行全物質(zhì)鑒定。分析結(jié)果顯示，NS血清、SCL含藥血清和SCL水煎液3組樣本LC-MS負(fù)極檢測(cè)到的化合物數(shù)量分別為314、309和1 468種，正極檢測(cè)到的化合物數(shù)量分別是527、527和1 068種，以上結(jié)果均為去除未命名化合物后的數(shù)量（圖6）。SCL含藥血清與SCL水煎液中共有的化合物，確定為SCL發(fā)揮作用的活性成分（附圖1）。這些活性成分是3-硫酸咖啡酸（caffeic acid 3-sulfate）、5-芐惡唑-2-酮（5-benzyloxolan-2-one）、3, 4, 5-三羥基-6-［（2-氧代-2H-鉻-5-基）氧］氧烷-2-羧酸（3,4,5-trihydroxy-6-［（2-oxo-2H-chromen-5-yl）oxy］oxane-2-carboxylic acid）和異東莨菪內(nèi)酯（Isoscopoletin），見表1。

表1 瑞香狼毒發(fā)揮作用的活性成分Table 1 Active ingredients of SCL

圖6 LC-MS檢測(cè)不同組別化合物數(shù)量Venn圖Fig.6 Venn diagram of the number of compounds of different groups detected by LC-MS

2.7 SCL中3種活性成分能直接結(jié)合YAP1蛋白

在PubChem數(shù)據(jù)庫中，未檢索到活性成分5-芐惡唑-2-酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)。因此，選取SCL的3種活性成分3-硫酸咖啡酸、3,4,5-三羥基-6-［（2-氧代-2H-鉻-5-基）氧］氧烷-2-羧酸和異東莨菪內(nèi)酯分別與YAP1進(jìn)行分子對(duì)接，進(jìn)一步驗(yàn)證SCL活性成分是否與YAP1蛋白存在直接結(jié)合作用。結(jié)果表明，3-硫酸咖啡酸與YAP1在Gln410位點(diǎn)處形成氫鍵，對(duì)接能為-6.0 kcal/mol；3,4,5-三羥基-6-［（2-氧代-2H-鉻-5-基）氧］氧烷-2-羧酸與YAP1在Glu381和Lys281位點(diǎn)處形成氫鍵，對(duì)接能為-7.8 kcal/mol；異東莨菪內(nèi)酯與YAP1在Gln410處形成氫鍵，對(duì)接能為-7.2 kcal/mol。陽性對(duì)照verteporfin（YAP1抑制劑）與YAP1在ARG-291和GLY-283處形成氫鍵，對(duì)接能為-7.5 kcal/mol（圖7）。結(jié)果表明，SCL的這3種活性成分能直接結(jié)合YAP1蛋白,與陽性對(duì)照相比，3種活性成分與YAP1的結(jié)合能力與Verteporfin類似。表明SCL的3種活性成分可能通過直接結(jié)合YAP1，從而發(fā)揮抑制肝癌細(xì)胞增殖的作用。

圖7 瑞香狼毒活性成分與YAP1分子對(duì)接示意圖Fig.7 Schematic diagram of molecular docking between the active ingredients of Stellera chamaejasme L.and YAP1

3 討論

約50%的HCC臨床標(biāo)本中存在YAP1過表達(dá)且核定位的活化形式［10］。而且，YAP1作為一種基因轉(zhuǎn)錄共激活因子在維持腫瘤細(xì)胞的自我更新及分化中起著重要的作用［11］。YAP1的活化是肝癌發(fā)展的早期事件，YAP1過表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞增殖和集落形成能力增加［12］。沉默YAP1抑制了肝癌細(xì)胞SMMC-7721的增殖［5］。因此，YAP1是肝癌的治療靶點(diǎn)。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，肝細(xì)胞特異性Yap1敲除的小鼠肝臟表面腫瘤的數(shù)量明顯減少［13］。

SCL作為一種傳統(tǒng)的中藥，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于我國北部和西南部的許多地區(qū)。主要應(yīng)用于癌癥、皮膚病、支氣管炎以及結(jié)核病的治療［14］。本研究發(fā)現(xiàn)，低濃度SCL含藥血清在體外能抑制肝癌細(xì)胞HepG2215生長活性，體內(nèi)能抑制小鼠肝腫瘤的增殖；同時(shí)，對(duì)正常肝細(xì)胞的生長活性無明顯抑制作用。相似的研究也顯示，SCL提取物能逆轉(zhuǎn)TGF-β誘導(dǎo)的HepG2間充質(zhì)形態(tài)，調(diào)節(jié)標(biāo)記蛋白的表達(dá)，顯著抑制TGF-β誘導(dǎo)的肝癌HepG2細(xì)胞遷移和侵襲［15］。而且，SCL提取物提高了H22細(xì)胞體外移植小鼠腫瘤抑制率，且沒有明顯的毒副作用［16］。

現(xiàn)有資料未闡明SCL抑制腫瘤增殖的活性成分。本研究利用LC-MS進(jìn)一步闡釋了SCL抑制肝癌細(xì)胞增殖的成分，明確了SCL水煎液和SCL含藥血清中均含有3-硫酸咖啡酸、5-芐惡唑-2-酮、3,4,5-三羥基-6-［（2-氧代-2H-鉻-5-基）氧］氧烷-2-羧酸和異東莨菪內(nèi)酯4種有效成分。同時(shí)，分子對(duì)接的結(jié)果也證實(shí)，3-硫酸咖啡酸、3,4,5-三羥基-6-［（2-氧代-2H-鉻-5-基）氧］氧烷-2-羧酸和異東莨菪內(nèi)酯這3種主要成份能與YAP1蛋白形成氫鍵，發(fā)揮直接結(jié)合YAP1的作用。因此，認(rèn)為這3種成分可能是SCL水煎液在體內(nèi)發(fā)揮降低YAP1表達(dá)關(guān)鍵成分。體外試驗(yàn)結(jié)果表明，異東莨菪內(nèi)酯能抑制肝癌細(xì)胞HepG2、肺癌細(xì)胞A549、乳腺癌細(xì)胞MCF7［17］和結(jié)腸癌［18］的生長。體內(nèi)研究也表明，SCL水提物能抑制肝臟腫瘤細(xì)胞的生長，延長肝癌原位移植瘤小鼠的生存時(shí)間［19］。

在機(jī)制方面，本研究利用肝細(xì)胞特異性Yap1敲除小鼠的肝原位荷瘤模型進(jìn)一步明確了SCL抑制肝癌增殖的效應(yīng)與降低YAP1表達(dá)水平有關(guān)。但是，關(guān)于SCL調(diào)控肝癌細(xì)胞YAP1表達(dá)的具體機(jī)制仍有待進(jìn)一步深入探討。

4 結(jié)論

肝臟YAP1基因異常是肝腫瘤形成的重要因素，瑞香狼毒可通過降低肝癌細(xì)胞中YAP1的表達(dá)抑制肝細(xì)胞癌增殖。其內(nèi)在的作用機(jī)制可能是瑞香狼毒中的3-硫酸咖啡酸、3,4,5-三羥基-6-［（2-氧代-2H-鉻-5-基）氧］氧烷-2-羧酸和異東莨菪內(nèi)酯等3種瑞香狼毒活性成分直接結(jié)合YAP1有關(guān)。

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