依加利塞（Eganelisib）的抗炎及其PI3Kγ選擇性抑制機制研究*

熊文典 賈 磊 蔡燕飛 陳 蘊 金 堅*** 朱景宇***

（1）江南大學(xué)生命科學(xué)與健康工程學(xué)院，無錫 214122；2）江南大學(xué)化學(xué)與材料工程學(xué)院，無錫 214122）

炎癥（inflammation），是機體對外界感染、組織損傷等刺激所產(chǎn)生的，以維持機體自身內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定和正常生命活動為根本的一種保護性反應(yīng)［1］。炎癥疾病發(fā)病機制復(fù)雜，而且常常表現(xiàn)為慢性炎癥，治療困難，從而容易引發(fā)其他疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病、肺纖維化，甚至腫瘤［2］。大量研究已發(fā)現(xiàn)炎癥反應(yīng)與胞內(nèi)多條信號通路的激活相關(guān)， 其中磷脂酰肌醇 3 激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）信號通路備受關(guān)注［3-4］。PI3K是一種胞內(nèi)脂質(zhì)磷酸激酶，根據(jù)其結(jié)構(gòu)和底物的特異性可分為I、II、III型，其中I型PI3K 研究最為廣泛［5］。受多種細胞表面受體激活后，I 型PI3K 可磷酸化靶底物磷酸肌醇（PIP2）肌醇環(huán)的第3 位，產(chǎn)生脂質(zhì)第二信使磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3），進而啟動廣泛的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián)反應(yīng)［6］。其介導(dǎo)的PI3K/Akt 信號通路調(diào)控著一系列細胞生理活動，如細胞存活、遷移、分化和增殖等［7］。I 型PI3K 是由調(diào)節(jié)亞基（p85）和催化亞基（p110）組成的異源二聚體，根據(jù)結(jié)構(gòu)特異性和調(diào)控亞基的差異，進一步分為IA類和IB類。IA類包括PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kδ，而IB 類僅含有PI3Kγ［8］。作為唯一的亞型結(jié)構(gòu)，PI3Kγ 擁有如下幾個顯著特征：a. IA 型PI3K 主要由酪氨酸激酶受體（recptor tyrosine kinases，RTKs） 激活，而PI3Kγ 主要受G 蛋白偶聯(lián)受體（G protein-coupled receptors，GPCRs）激活［9-10］；b. PI3Kα 和PI3Kβ在人體組織中普遍表達，而PI3Kγ和PI3Kδ主要分布于造血系統(tǒng)，其中PI3Kγ 主要存在于白細胞中，如中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、巨噬細胞、T 細胞、肥大細胞中［11］；c. 在受到如GPCR 這些細胞表面受體刺激后，PI3Kγ被大量激活從而可以調(diào)控多種免疫細胞功能［12］；d. PI3Kγ 缺陷小鼠模型表明，敲除PI3Kγ不會造成胚胎致死，但會嚴(yán)重影響小鼠的免疫功能［11，13］。大量研究表明，PI3Kγ 的激活有助于中性粒細胞在感染和炎癥部位聚集，從而釋放大量的趨化因子、炎癥因子及活性氧（ROS）等［14］。PI3Kγ 在其他免疫細胞及其功能中也發(fā)揮著重要作用，例如，趨化單核細胞或巨噬細胞在炎癥部位的遷移、激活及發(fā)育T 淋巴細胞等［11］。此外，在多種小鼠模型中，抑制PI3Kγ 可以有效地治療多種炎癥疾病，包括關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡、哮喘、肺部炎癥和纖維化等［15-17］。因此，PI3Kγ因其在免疫系統(tǒng)中的重要作用而成為一個極具潛力的抗炎藥物靶點。

目前已有一些選擇性PI3Kγ報道，其中依加利塞（Eganelisib，IPI-549） 已進入臨床實驗（圖1a）［18］。IPI-549 作為一個腫瘤免疫治療候選化合物，主要用于治療尿路上皮癌、乳腺癌、卵巢癌等腫瘤疾病，迄今沒有IPI-549 用于炎癥治療的報道［19］。目前已有多篇論文綜述了PI3Kγ 抑制劑的開發(fā)情況，其中用于抗炎作用的PI3Kγ抑制劑報道較少［16，20-21］。因此，開發(fā)新型的PI3Kγ抑制劑用于炎癥治療具有廣闊的應(yīng)用前景及臨床意義。然而，目前幾乎所有的PI3Kγ抑制劑都是圍繞其ATP結(jié)合口袋進行藥物設(shè)計［22］，即ATP 競爭性抑制劑，由于I型PI3K的高度同源及ATP口袋的保守性，使得開發(fā)選擇性PI3Kγ 抑制劑具有極大的挑戰(zhàn)［23］，因此，研究現(xiàn)有抑制劑的選擇性機制將有助于選擇性PI3Kγ 的開發(fā)。本文擬采用IPI-549 作為工具藥物，使用體外炎癥模型評價其抗炎作用，同時利用整合的計算模擬技術(shù)來研究其PI3Kγ的選擇性機制，為抗炎PI3Kγ抑制劑的開發(fā)提供一定的理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 IPI-549對RAW264.7細胞活性的影響

取對數(shù)生長期的小鼠巨噬細胞RAW246.7（購自中科院細胞庫），每孔5 000 個細胞接種至96 孔板，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（37℃，5% CO2）。待細胞貼壁后，加入不同濃度的IPI-549，設(shè)置3 個復(fù)孔，同時設(shè)置空白組和對照組，作用24 h后使用CCK-8檢測細胞活力。

1.2 IPI-549對PI3K信號通路作用評價

將處于對數(shù)生長期的RAW264.7 細胞鋪于6 孔板，每孔1.5×106個細胞，加入1 ml 無血清的DMEM 培養(yǎng)基后置于培養(yǎng)箱中饑餓過夜處理（37℃，5% CO2）。提前加入不同濃度（0.1、0.5、1.0 μmol/L） 的IPI-549 （0.5% DMSO） 處理30 min后，加入500 μg/L脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）作用30 min。隨后根據(jù)RIPA 裂解液說明書提取蛋白質(zhì)，使用BCA 試劑盒測定蛋白質(zhì)濃度并調(diào)節(jié)至同一濃度水平，加入上樣緩沖液（loading buffer）后在水中煮沸5 min使蛋白質(zhì)充分變性，完成上樣液的制備。上樣等量的樣品，并按照預(yù)制膠的說明書進行電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉、孵育抗體，其中封閉使用5%脫脂奶粉，一抗為磷酸化Akt（p-Akt-S473，1∶1 000稀釋）、總Akt（total-Akt，1∶1 000稀釋）抗體，均購置于Cell Signaling Technology公司。最后采用ECL方法顯色。

1.3 IPI-549抗炎作用的評價

使用LPS誘導(dǎo)RAW264.7構(gòu)建炎癥模型。將對數(shù)生長期的RAW246.7 鋪于12 孔板，每孔40 萬個細胞，貼壁后，提前30 min 加入不同濃度的IPI-549 （0.1、 0.5、 1.0 μmol/L）， 后加入LPS 500 μg/L，共同作用24 h。按照TRIzol （購自Thermo Scientific）的官方操作提取RNA，之后按照PrimeScriptTMRT Master Mix（Takara）官方操作得到相應(yīng)的cDNA，最后加入已合成的目的基因引物（上海生工），使用SYBRTMSelect Master Mix（Thermo Scientific）按照說明書進行PCR定量，引物序列見表S1。GAPDH作為內(nèi)參，使用2-ΔΔCt法進行相對定量分析。

1.4 PI3Kγ蛋白及小分子數(shù)據(jù)集準(zhǔn)備

小分子結(jié)構(gòu)均來自Drew 課題組的文獻報道［24］。IPI-549/PI3Kγ 復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu)采自RCSB Protein Data Bank 數(shù)據(jù)庫，PDB ID：6XRL［24］。IPI-549的三維結(jié)構(gòu)直接取自6XRL，其余小分子結(jié)構(gòu)使用Discovery studio 3.5 （DS3.5） 軟件中Sketching 工具繪制，共含有41 個小分子結(jié)構(gòu)，其活性數(shù)據(jù)采用文獻報道的IC50值（表S2）。所有小分子使用DS3.5 的Minimize Ligands 工具進行結(jié)構(gòu)優(yōu)化：賦予CHARMm 力場，采用Smart Minimizer算法進行能量優(yōu)化。優(yōu)化后的40 個小分子（除去IPI-549）組成抑制劑數(shù)據(jù)集（Inhibitors dataset），同時根據(jù)抑制劑數(shù)據(jù)集結(jié)構(gòu)，使用DUD-E在線工具（http://dude.docking.org/）生成含有850個小分子的數(shù)據(jù)庫，作為非抑制劑數(shù)據(jù)集（Decoys dataset）。

1.5 構(gòu)建基于分子共同特征的藥效團模型

采用 DS3.5 軟件中的 Common Feature Pharmacophore Generation 模塊構(gòu)建基于分子共同特征的藥效團模型（HipHop）。首先，從上述的41個抑制劑集中挑選活性最高的6個小分子來構(gòu)建模型（表S2中*標(biāo)識），設(shè)置其Principal值為2，意為有活性的參考分子。根據(jù)DS3.5默認推薦藥效團特征（Features），選定氫鍵供體（D）、氫鍵受體（A）、疏水中心（H）、正電離子中心（PI）、芳香環(huán)中心（R）。其他參數(shù)設(shè)置如下：Conformation Generation 設(shè)置為Best；MaxOmitFeat 值設(shè)置為0，表示構(gòu)建的藥效團模型所有特征元素都要匹配這6個小分子；其余參數(shù)設(shè)置為默認。

1.6 構(gòu)建基于受體-配體復(fù)合物的藥效團模型

使 用 DS3.5 軟 件 中 的 Receptor-ligand Pharmacophore Generation 模塊基于IPI-549/PI3Kγ復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu)6XRL 構(gòu)建受體-配體復(fù)合物藥效團模型。首先，采用Prepare Protein 工具進行蛋白質(zhì)優(yōu)化：去除水分子；添加氫鍵及缺失的原子；自動質(zhì)子化；賦予CHARMm立場。隨后，采用優(yōu)化的復(fù)合物結(jié)構(gòu)來構(gòu)建藥效團，復(fù)合物蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)作為Input Receptor，復(fù)合物配體小分子作為Input Ligand， 其余參數(shù)設(shè)置如下： Maximum Pharmacophores 為10； Minimum Features 為3；Maximum Features 為6；模型采用GFA（Genetic Function Approximation）算法進行打分［25］。此外，采用已知活性化合物與非活性化合物對產(chǎn)生的藥效團模型進行驗證：Validation 設(shè)置為True，其中抑制劑數(shù)據(jù)集（Inhibitors dataset） 設(shè)置為Active Ligands，非抑制劑數(shù)據(jù)集（Decoys dataset）設(shè)置為Inactive Ligands。模型采用留一法（Leave-oneout）進行驗證，并使用以下指標(biāo)來進行模型評估：包括敏感性（SE）、特異性（SP）、受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC）及對應(yīng)ROC曲線下面積（AUC）值。

其中TP （true positive） 指真陽性，F(xiàn)N （false negative）指假陰性，TN（true negative）指真陰性，F(xiàn)P（false positive）指假陽性。

1.7 分子動力學(xué)模擬

采用6XRL為分子動力學(xué)初始構(gòu)象，首先使用Maestro 中Protein Preparation 模塊進行蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的準(zhǔn)備和優(yōu)化：去除水分子，加入氫原子；使用OPLS-2005力場進行結(jié)構(gòu)優(yōu)化至最小化均方根偏差（RMSD）達到最大值0.3 ?。隨后，使用Desmond軟件進行分子動力學(xué)模擬［26］，首先使用System Builder 工具構(gòu)建模擬體系：水盒子設(shè)置為orthorhombic，每個方向截斷值為10 ?；使用TIP3P 水模型；添加Na+中和體系電荷；添加0.15 mol/L 濃度的NaCl 溶液；賦予OPLS-2005 力場［27］。隨后，使用Desmond 軟件默認的Relax model 方法對體系進行優(yōu)化。最后，使用Molecular Dynamics 工具運行動力學(xué)模擬：模擬時間設(shè)置為200 ns；模擬體系設(shè)置為NPT，體系溫度為300 K，壓力為1 bar。分子動力學(xué)模擬完成后，使用Simulation interaction diagram 工具進行結(jié)果分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 IPI-549具有顯著的抗炎作用

首先檢測 IPI-549 對RAW264.7 細胞活性的影響，從而篩選出活性實驗的安全濃度。使用不同濃度的IPI-549處理RAW264.7細胞，24 h后檢測細胞活力。圖1b顯示即使在藥物高濃度10 μmol/L作用下，細胞存活率仍達80%以上，表明細胞存活受到較小的影響，而在小于1.25 μmol/L藥物作用下，細胞的存活幾乎沒有影響，表明了IPI-549 較小的細胞毒性作用。使用LPS作用RAW264.7構(gòu)建炎癥細胞模型，圖1c 表明，LPS 可以顯著提升RAW264.7中PI3K通路中Akt的磷酸化水平，而使用不同濃度IPI-549 處理后，Akt473 的磷酸化水平（p-Akt-S473）受到顯著抑制，并呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系。對比空白組發(fā)現(xiàn)，0.1 μmol/L的IPI-549即可顯著抑制Akt473 的磷酸化，說明IPI-549 可以有效地抑制炎癥細胞中的PI3K信號通路。

LPS 刺激RAW264.7 細胞為經(jīng)典的炎癥細胞模型，其特征是LPS的誘導(dǎo)會使得細胞大量釋放炎癥介質(zhì)，其中TNF-α、IL-1β 和IL-6 較為典型［28-29］。如圖1d~f 所示，隨著LPS 的誘導(dǎo)刺激，細胞中TNF-α、IL-1β 和IL-6 的轉(zhuǎn)錄水平顯著升高。使用不同濃度IPI-549（0.1、0.5、1.0 μmol/L）作用細胞，可以看到IPI-549 顯著抑制炎癥因子的釋放，并且這種抑制呈現(xiàn)濃度依賴關(guān)系。上述結(jié)果表明，IPI-549 可以通過抑制炎癥細胞中的PI3K 通路來有效地抑制炎癥細胞中炎癥因子的釋放，初步驗證了IPI-549的抗炎作用。

2.2 基于分子共同特征（HipHop）藥效團的分析

HipHop 可以提取系列化合物中具有相似活性但結(jié)構(gòu)不同或結(jié)構(gòu)柔性較大分子的共同化學(xué)特征，并探索其中的構(gòu)效關(guān)系［30］。由表1 可知，HipHop共生成10 個藥效團模型。其中HipHop_01 藥效團得分（Rank score）最高，為84.783。“Direct Hit”及“Partial Hit”表示生成的藥效特征與訓(xùn)練集分子匹配情況，1 表示完全匹配，0 表示部分匹配。由表1 可知，HipHop_01 的特征與6 個小分子完全匹配。HipHop_01 擁有6 個藥效團特征，包括了4個疏水特征（H）和2 個氫鍵受體特征（A）（圖2a）。其中，氨基吡唑嘧啶基團對應(yīng)的氫鍵特征尤其關(guān)鍵，其產(chǎn)生的氫鍵作用保證了抑制劑與PI3Kγ蛋白的緊密結(jié)合（圖2b）［31］。

Table 1 Results of HipHop pharmacophore models

Fig. 2 Assessment of pharmacophore models

2.3 受體-配體復(fù)合物藥效團模型分析

利用IPI-549/PI3Kγ 復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu)產(chǎn)生了10個藥效團模型，其結(jié)果匯總于表2。其中，1號及2號藥效團具有較高的選擇性分?jǐn)?shù)（selective score），為9.777。兩者分別產(chǎn)生了5個藥效團特征：1號含有2 個氫鍵供體特征（D），2 個疏水特征（H）及1 個芳香環(huán)中心特征（R）；2號含有2 個氫鍵供體特征（D）及3個疏水特征（H）。其余藥效團均含有4 個藥效團特征，且基本都包含氫鍵供體特征（D）及疏水特征（H），表明疏水及氫鍵為PI3Kγ與小分子結(jié)合的重要相互作用。

Table 2 Results of receptor-ligand pharmacophore models

選擇性分?jǐn)?shù)通過模型命中DS3.5軟件內(nèi)置化合物庫中的drug-like分子數(shù)來進行評分，因而無法準(zhǔn)確驗證藥效團模型對PI3Kγ抑制劑的篩選能力。因此，為了進一步考察模型區(qū)分抑制劑與非抑制劑的真實能力，使用活性化合物及非活性化合物數(shù)據(jù)集對模型進行驗證（表3）。其中，Sensitivity（SE）代表敏感度，表明模型預(yù)測活性化合物的準(zhǔn)確性；Specificity（SP）代表特異性，表明模型預(yù)測非活性化合物的準(zhǔn)確性，兩者數(shù)值越接近于1表示模型具有較準(zhǔn)確的預(yù)測能力。從表3可以看出，生成的10 個模型SE和SP值具有顯著差距：1號及2號藥效團盡管擁有較高的SP值，但是其SE值偏低，原因是這兩個模型的TP值較低，表明模型不能有效預(yù)測出真實的PI3Kγ活性抑制劑；8~10號藥效團均含有較高的SE值，但其SP值較低，原因是其TN值較低，表明這些模型無法區(qū)分出非活性化合物；3號及4號藥效團具有相對較高的SE及SP值，表明這兩個模型可以較為準(zhǔn)確的區(qū)分PI3Kγ抑制劑及非抑制劑。為了對各模型的區(qū)分能力進行全面的評估，計算了各模型的AUC值（表3），一般認為AUC>0.7，代表模型具有較好的預(yù)測能力。其中，3號模型的AUC值得分最高，為0.875（圖2c），顯示較高的預(yù)測能力，因此選擇3號模型進行進一步分析。根據(jù)表2看出該模型共含有4個藥效團特征：2 個氫鍵供體（D），1 個疏水中心（H），1 個芳香環(huán)中心（R）。將該模型與IPI-549 結(jié)構(gòu)進行疊合分析（圖2d），發(fā)現(xiàn)共軛結(jié)構(gòu)連接的碳原子處具有疏水作用（藍色），表明PI3Kγ 蛋白在此處具有顯著的疏水性。IPI-549 的母核喹唑酮結(jié)構(gòu)處對應(yīng)了芳香環(huán)中心特征（黃色），這個母核結(jié)構(gòu)類似于ATP的嘌呤結(jié)構(gòu)，對抑制劑與PI3Kγ的結(jié)合發(fā)揮重要作用［32］。第三個特征對應(yīng)于氨基吡唑嘧啶基團，為氫鍵供體特征（紫色），表明PI3Kγ 在此處易與抑制劑產(chǎn)生氫鍵相互作用，這個結(jié)果與上述HipHop結(jié)果吻合。上述結(jié)果表明，氫鍵及疏水是PI3Kγ蛋白與小分子結(jié)合的關(guān)鍵藥效特征。

Table 3 Predicted results of receptor-ligand pharmacophore models

2.4 分子動力學(xué)模擬結(jié)果分析

為了深入分析IPI-549 與PI3Kγ 的動態(tài)結(jié)合過程并進一步揭示兩者的相互作用機制，將IPI-549/PI3Kγ 復(fù)合物進行了200 ns 動力學(xué)模擬。首先，計算了整個模擬過程中PI3Kγ 蛋白主鏈C 原子及IPI-549結(jié)構(gòu)的均方根偏差值（RMSD）及主鏈C原子的均方根漲落（RMSF）。圖S1a顯示，在體系經(jīng)過100 ns后，RMSD基本沒有顯著波動，表明體系經(jīng)100 ns模擬后已達到平衡。圖S1b顯示，在ATP結(jié)合口袋位置處（氨基酸編號560~720），C原子波動較小，表示IPI-549 與PI3Kγ 蛋白ATP 結(jié)合口袋的氨基酸發(fā)生緊密的結(jié)合。圖3a 顯示了IPI-549 與PI3Kγ活性口袋結(jié)合情況，可以發(fā)現(xiàn)IPI-549中吡唑環(huán)中的氮原子和氨基上的氮原子與Val882 形成關(guān)鍵的氫鍵相互作用，這個結(jié)果與上述藥效團結(jié)果對應(yīng)，說明這個氫鍵作用在PI3Kγ與抑制劑結(jié)合的過程中發(fā)揮重要作用。此外，圖3b 顯示IPI-549 的甲基吡唑基團與母核結(jié)構(gòu)喹唑酮基本呈垂直狀態(tài)，這個構(gòu)象進一步穩(wěn)定了氫鍵作用。同時甲基吡唑基團由于較長的炔基結(jié)構(gòu)，使其深入PI3Kγ蛋白的“選擇性口袋”（圖3b），從而進一步增加抑制劑的PI3Kγ選擇性。除了這些作用，IPI-549中的兩個苯環(huán)與TRP812 和THR887 形成顯著的π-π 相互作用，進一步增加了抑制劑與蛋白的結(jié)合（圖3a）。為了進一步定量分析這些相互作用，本文計算了復(fù)合物結(jié)合過程中重要氨基酸與IPI-549 的結(jié)合作用力。如圖3c 所示，縱坐標(biāo)使用“Interaction Fraction”表示，即配體與氨基酸殘基非鍵相互作用力持續(xù)時間占總作用時間的比例。若分?jǐn)?shù)大于1，表示配體與該氨基酸殘基可能同時具備多個復(fù)合作用力。可以看出，Val882 的氫鍵作用發(fā)揮了最大的能量貢獻。此外，疏水相互作用也發(fā)揮了重要作用，如Met804、Trp812、Ile963等，這個結(jié)果與上述藥效團結(jié)果吻合，也進一步證明了疏水及氫鍵作用在PI3Kγ選擇性結(jié)合中發(fā)揮了重要作用。

Fig. 3 Molecular dynamics simulation of IPI-549/PI3Kγ complex

3 結(jié)論

哮喘、神經(jīng)退行性疾病、心血管慢性疾病等通常伴隨著不同程度的炎癥反應(yīng)，大量研究已經(jīng)表明PI3K 相關(guān)信號通路與免疫細胞的生存和功能實現(xiàn)具有密切關(guān)系。隨著PI3K 各亞型生物功能研究的深入，發(fā)現(xiàn)PI3Kγ在免疫系統(tǒng)中起著重要且獨特的作用，從而揭示了PI3Kγ 潛在的炎癥治療成靶性。但是，目前鮮有PI3Kγ 抑制劑用于炎癥治療的研究，從而缺乏PI3Kγ 炎癥治療研究的工具藥物。IPI-549是現(xiàn)已進入臨床研究的PI3Kγ抑制劑，其具有活性強、選擇性高的特點。但是其研究主要集中于腫瘤治療，目前尚沒有抗炎作用的評價。因此，本文采用IPI-549 進行其抗炎作用的初步評價。炎癥細胞模型體外實驗表明，IPI-549 沒有明顯的細胞毒性，IPI-549 可以濃度依賴性地抑制炎癥細胞中PI3K 信號通路，從而有效地抑制LPS 誘導(dǎo)的巨噬細胞中炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6 的釋放。上述實驗表明，IPI-549 可以通過抑制炎癥細胞中PI3K 信號通路來抑制炎癥因子的釋放，從而初步驗證了PI3Kγ 抑制劑在炎癥治療方面的潛在作用，也證明了IPI-549 可以作為PI3Kγ 抑制劑炎癥治療的有效工具藥物。

隨后使用計算機模擬技術(shù)對IPI-549 的PI3Kγ選擇性機制進行進一步研究。通過分別構(gòu)建基于PI3Kγ小分子抑制劑及PI3Kγ蛋白大分子的藥效團，發(fā)現(xiàn)疏水及氫鍵作用在抑制劑與PI3Kγ結(jié)合過程中發(fā)揮主要作用。動力學(xué)模擬的結(jié)果進一步驗證了藥效團特征：Val882產(chǎn)生的氫鍵作用保證了抑制劑與PI3Kγ 的高效結(jié)合；Met804、Trp812、Ile963 等關(guān)鍵氨基酸提供了顯著的疏水作用；IPI-549 的甲基吡唑基團可以進一步深入PI3Kγ 的“選擇性口袋”位置，從而進一步提高IPI-549 的PI3Kγ 選擇性。上述構(gòu)效關(guān)系研究可以為新型PI3Kγ抑制劑的開發(fā)提供一定的指導(dǎo)作用。

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