青蒿琥酯調(diào)控NLRP3/ASC/Caspase-1 信號通路減輕腦出血小鼠炎癥及保護(hù)神經(jīng)功能的作用研究

李媛，木艷玲，薛孟周*

腦出血（ICH）是一種高危的腦血管疾病，占腦卒中的15%，其特點(diǎn)是高發(fā)病率、致殘率和死亡率。ICH的全球發(fā)病率逐年上升，目前每年有500 萬人被診斷為ICH，其中約300 萬人死亡，只有12%～39%的患者預(yù)后具有完善的神經(jīng)功能［1］。ICH 的發(fā)病率增加與高血壓有關(guān)，ICH 的本質(zhì)是血管破裂，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)和腦損傷，其病理生理學(xué)涉及原發(fā)性損傷和多個(gè)繼發(fā)性炎癥級聯(lián)反應(yīng)，如氧化應(yīng)激［2］、各種細(xì)胞凋亡［3］和神經(jīng)炎癥［4］。一般認(rèn)為，ICH 的主要損傷是由血源性成分如血紅素、血清鐵和凝血酶引起的局部炎癥［5］，而ICH 后3～7 d繼發(fā)性腦損傷逐漸占主導(dǎo)地位，ICH 后的炎癥級聯(lián)反應(yīng)最終導(dǎo)致大量神經(jīng)元凋亡，并成為影響患者預(yù)后的主要因素［6］。然而，ICH 患者藥物治療的臨床轉(zhuǎn)化仍然不足。在臨床治療中，大多數(shù)ICH 患者的原發(fā)性損傷是不可逆的。因此，ICH 的治療主要集中在避免神經(jīng)功能的繼發(fā)性損傷。NOD 樣受體蛋白3（NLRP3）炎性小體的激活在ICH 期間巨噬細(xì)胞的激活中起著重要作用［7］。抑制NLRP3 炎癥體相關(guān)蛋白可減輕肺損傷［8］、肝損傷［9］、心肌損傷［10］、腎損傷［11］等。青蒿素有抗寄生蟲、抗病毒、抗癌、抗炎、抗氧化等廣泛的藥理活性，青蒿琥酯（ART）是青蒿素衍生物，具有水溶性特點(diǎn)，由于其可透過血-腦脊液屏障，在腦組織中維持較高濃度，已被證明在炎癥相關(guān)疾病中發(fā)揮保護(hù)作用，特別是在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷中，包括創(chuàng)傷性腦損傷［12］、蛛網(wǎng)膜下腔出血［13］、缺血再灌注損傷［14］等。本研究通過小鼠膠原酶注射模擬ICH 發(fā)病過程，研究ART 與NLRP3/含CARD 結(jié)構(gòu)域的凋亡相關(guān)顆粒樣蛋白（ASC）/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（Caspase-1）信號通路在ICH 后的表達(dá)關(guān)系及小鼠最終神經(jīng)功能恢復(fù)情況的關(guān)系，并探討其中機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 研究時(shí)間 2022 年3 月—2023 年2 月。

1.1.2 實(shí) 驗(yàn) 動 物 選 取108 只8～10 周 雄 性SPF 級C57BL/6 小鼠，購于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物有限公司，許可證號〔（京）2021-0006〕，體質(zhì)量為19～22 g。所有小鼠飼養(yǎng)于SPF 級動物實(shí)驗(yàn)中心（河南省醫(yī)藥科學(xué)研究院），保持25 ℃室溫和適宜的濕度，且在標(biāo)準(zhǔn)的12 h明/暗周期的清潔開放環(huán)境中飼養(yǎng)，飼養(yǎng)期間小鼠自由攝取水和食物。本研究通過鄭州大學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)（2023042）。

1.1.3 主要試劑與儀器 4%多聚甲醛固定液（北京索萊寶生命科技有限公司，貨號：P1110）、Ⅶ型膠原酶（美國Sigma 公司，貨號：C0773）、ART（上海麥克林生化科技有限公司，貨號：182824-33-5）、兔抗腫瘤壞死因子α（TNF-α）多克隆抗體（美國Abcam，貨號：ab183218）、兔抗白介素（IL）1β 多克隆抗體（美國Abcam，貨號：an283818）、兔抗髓過氧化物酶（MPO）多克隆抗體（美國Abcam，貨號：ab208670）、兔抗IL-6 多克隆抗體（美國Abcam，貨號：ab208113）、兔ASC 多克隆抗體（美國Abcam，貨號：ab283684）、兔抗NLRP3 多克隆抗體（美國Abcam，貨號：ab263899）、兔抗Caspase-1 多克隆抗體（美國Abcam，貨號：ab207802）、兔抗肌動蛋白（Actin）多克隆抗體（美國Abcam，貨號：ab8226）；兔抗小膠質(zhì)標(biāo)記物（IBA1）抗體（日本W(wǎng)ako，貨號：019-19741）；山羊抗兔IgG（Cy3）預(yù)吸附二抗（美國Abcam，貨號：ab6939）；山羊抗小鼠IgG（碧云天生物技術(shù)，貨號：A0568）；辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的山羊抗兔IgG（上海生工生物工程有限公司，貨號D110058）；小鼠數(shù)顯式腦立體定位儀（安徽正華生物儀器設(shè)備有限公司，型號：ZH-藍(lán)星B/S 型）；1 μL微量進(jìn)樣器（德國Hamilton 公司，型號：7001KH）；正直光學(xué)顯微鏡（德國Zeiss 公司，型號：LSM880）；激光共聚焦顯微鏡（日本奧林巴斯公司，型號：Olympus FV1000）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組和用藥 將小鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組（Sham 組，n=36）、ICH 對 照 組（ICH+Vehicle 組，n=36）、ART 治療組（ICH+ART 組，n=36）。為防止模型制備及實(shí)驗(yàn)失敗，每組保留13 只小鼠備用，選取23 只小鼠進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2.2 小鼠ICH 模型制備 選擇8～10 周齡雄性SPF 級C57BL/6 小鼠，使用10%水合氯醛4 mL/kg 麻醉，將其置于立體定向框架中，顱骨頂部前囟后0.2 mm，中線右旁開2 mm 鉆直徑為0.6 mm 的小孔，ICH+Vehicle 和ICH+ART 組以0.1 μL/min 的速率將0.1 U/μL Ⅶ 型膠原酶0.75 μL 注射至基底節(jié)區(qū)，注射器固定10 min 以防止回流。Sham 組注射0.75 μL 0.9%氯化鈉溶液。手術(shù)后小鼠保持溫暖，直到完全康復(fù)。將60 mg ART 溶于6 mL 5%碳酸氫鈉溶液中，ICH+ART 組在造模后2 h 腹腔注射ART 溶液150 mg·kg-1·d-1，ICH+Vehicle 組腹腔注射5%碳酸氫鈉溶液，連續(xù)注射3 d。

1.2.3 小鼠行為學(xué)觀察與測定 術(shù)后3 d 每組隨機(jī)選取6 只小鼠使用改良神經(jīng)系統(tǒng)嚴(yán)重程度評分（mNSS）評估運(yùn)動、感覺、反射和平衡功能，總分18 分，得分越高，神經(jīng)損傷越嚴(yán)重。術(shù)后3 d 每組隨機(jī)選取6 只小鼠做轉(zhuǎn)角測試評估感覺運(yùn)動與姿勢不對稱性，正常小鼠向右側(cè)或左側(cè)轉(zhuǎn)身的次數(shù)基本相等，ICH 小鼠傾向于向病灶同側(cè)側(cè)轉(zhuǎn)。將兩塊20 cm 長的玻璃板組成大約30°的角落，當(dāng)小鼠進(jìn)入角落深處時(shí)，兩邊觸須同時(shí)受到刺激，會出現(xiàn)向上向后轉(zhuǎn)回去的行為，記錄左轉(zhuǎn)彎或右轉(zhuǎn)彎，每只小鼠重復(fù)20 次，兩次測試至少間隔30 s，計(jì)算右轉(zhuǎn)彎的百分比=右轉(zhuǎn)次數(shù)/所有轉(zhuǎn)次數(shù)×100%。

1.2.4 小鼠腦組織標(biāo)本制備 術(shù)后3 d，每組選取6 只小鼠，水合氯醛麻醉后經(jīng)心注射20～40 mL 磷酸緩沖鹽溶液和4%多聚甲醛，灌注完畢后迅速斷頭取腦組織，浸泡在4%多聚甲醛中，常規(guī)石蠟包埋固定，切成5 μm 厚度切片，用于HE 染色、IBA1 免疫熒光染色、IL-6、IL-1β 和MPO 免疫組化染色、NeuN/Tunel 染色。1.2.5 HE 染色 將石蠟切片進(jìn)行脫脂，并在室溫下進(jìn)行HE 染色，光學(xué)顯微鏡觀察各組小鼠腦組織損傷情況并攝片記錄。

1.2.6 免疫組織化學(xué)染色 石蠟切片封閉前使用氧化物酶溶液（3% H2O2，10%甲醇，PBS 稀釋）孵育切片15 min，用兔抗IL-6 抗體（1∶300）、兔抗IL-1β 抗體（1∶500）、兔抗MPO 抗體（1∶700）在4 ℃孵育過夜，切片在PBS 中洗滌3 次，然后加入HRP 聯(lián)合二抗山羊抗兔Cy3（1∶3 000）孵育1 h。所有切片用二氨基聯(lián)苯胺（DAB）試劑、蘇木素浸泡，晾干后顯微鏡觀察。在每個(gè)腦切片中檢查4 個(gè)顯微鏡視野，每只小鼠檢查3 個(gè)切片，計(jì)算IL-6、IL-1β、MPO 單位面積陽性細(xì)胞數(shù)。

1.2.7 免疫熒光染色 將石蠟切片脫蠟、抗原提取、封閉后，用兔抗IBA1 單克隆抗體（1∶2 000）在4 ℃孵育過夜。用PBS 沖洗3 次后，在室溫下加入山羊抗兔Cy3 二抗（1∶3 000）1 h。在熒光顯微鏡下觀察小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞的激活情況，用Image J/Fiji 軟件計(jì)數(shù)IBA1 陽性細(xì)胞數(shù)。

1.2.8 TUNEL/NeuN 免疫熒光雙染色 石蠟切片脫蠟處理，將切片與抗NeuN 抗體（11∶600）在4 ℃下孵育過夜，根據(jù)TUNEL 細(xì)胞凋亡試劑盒配置溶液，在室溫下用山羊抗小鼠IgG（1∶3 000）孵育2 h，漂洗封片。在熒光顯微鏡上觀察，對每個(gè)切片隨機(jī)選擇的4 個(gè)高倍視野進(jìn)行分析，TUNEL 和NeuN 陽性細(xì)胞被計(jì)數(shù)為死亡神經(jīng)元。

1.2.9 蛋白質(zhì)印跡法（Western blotting）蛋白定量分析 每組選取5 只小鼠，術(shù)后3 d 斷頭處死取腦，在冰上選取ICH 血腫周圍1 mm 區(qū)域的腦組織，稱重，用RIPA 裂解液對組織在冰上進(jìn)行勻漿，離心，取上清液，經(jīng)Nanodrop 定量后按照30 μg 制作樣品并煮沸備用。電泳分離目的蛋白，轉(zhuǎn)模封閉后，置于以下一抗在搖床上4 ℃孵育過夜：兔抗IL-1β 抗體（1∶1 000）、兔抗MPO 抗體（1∶1 000）、兔抗TNF-α 抗體（1∶2 000）、兔抗NLRP3 抗體（1∶1 000）、兔抗ASC 抗體（1∶1 000）、兔抗Caspase-1 抗體（1∶1 000）、兔抗Actin 抗體（1∶3 000）。漂洗后加入山羊抗兔HRP（1∶1 000）室溫孵育2 h。孵育完成后使用Bio-Rad 化學(xué)發(fā)光儀顯影成像，利用Image J/Fiji 分析信號的光密度（OD）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用Prism 8 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，采用Tukey 多重檢驗(yàn)進(jìn)行組間兩兩比較；非正態(tài)分布的計(jì)量資料以M（P25，P75）表示，多組間比較采用Kruskal-Wallis H 檢驗(yàn)，組內(nèi)兩兩比較采用MannWhitney U 檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3 組小鼠行為學(xué)結(jié)果比較 3 組小鼠mNSS 評分結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中ICH+Vehicle 組 高 于Sham 組，ICH+ART 組 低 于ICH+Vehicle 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。3 組小鼠右轉(zhuǎn)彎的百分比比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其 中ICH+Vehicle 組 高 于Sham 組，ICH+ART 組 低 于ICH+Vehicle 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 3 組小鼠行為學(xué)結(jié)果比較Table 1 Comparison of behavioral results among three groups of mice

2.2 3 組小鼠腦組織HE 染色結(jié)果 Sham 組紋狀體周圍有少量血液，水腫可忽略不計(jì)，ICH+Vehicle 組腦組織嚴(yán)重?fù)p傷，細(xì)胞間隙增加、血管周圍血腫、炎性細(xì)胞浸潤增加；ICH+ART 組腦組織損傷明顯改善，見圖1。

圖1 3 組小鼠腦組織HE 染色結(jié)果（×40，×200）Figure 1 HE staining results of brain tissue among the 3 groups of mice

2.3 3 組小鼠免疫組織化學(xué)染色結(jié)果 陽性反應(yīng)呈棕黃色顆粒，IL-6、IL-1β、MPO 陽性表達(dá)代表紋狀體中局部炎癥細(xì)胞浸潤，MPO 陽性代表中性粒細(xì)胞激活。結(jié)果顯示，3 組小鼠IL-6、IL-1β、MPO 單位面積陽性細(xì)胞數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中ICH+Vehicle 組IL-6、IL-1β、MPO 陽性細(xì)胞數(shù)均高于Sham 組，ICH+ART 組IL-6、IL-1β、MPO 陽性細(xì)胞均低于ICH+Vehicle 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見圖2、表2。

圖2 3 組小鼠免疫組織化學(xué)染色結(jié)果（×100）Figure 2 Immunohistochemical staining results among the 3 groups of mice

表2 3 組小鼠IL-6、IL-1β、MPO 單位面積陽性細(xì)胞數(shù)比較（個(gè)/mm2）Table 2 Comparison of the number of positive cells of IL-6，IL-1β and MPO per unit area among the three groups

2.4 3 組小鼠IBA1 免疫熒光染色結(jié)果 3 組小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞激活數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）， 其 中ICH+Vehicle 組 高 于Sham 組，ICH+ART 組低于ICH+Vehicle 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見圖3、表3。

圖3 3 組小鼠IBA1 免疫熒光染色結(jié)果（×200）Figure 3 IBA1 immunofluorescence staining results among the 3 groups of mice

表3 3 組小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞激活數(shù)比較（個(gè)/mm2）Table 3 Comparison of the numbers of activated microglia/macrophages among the 3 groups of mice

2.5 3 組小鼠TUNEL/NeuN 免疫熒光雙染色結(jié)果 死亡細(xì)胞TUNEL 染色呈綠色，神經(jīng)元被染成紅色，死亡神經(jīng)元為紅藍(lán)疊加，3 組小鼠神經(jīng)元死亡數(shù)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中ICH+Vehicle 組高于Sham 組，ICH+ART 組低于ICH+Vehicle 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見圖4、表4。

圖4 3 組小鼠TUNEL/NeuN 免疫熒光雙染色結(jié)果（×200）Figure 4 TUNEL/NeuN immunofluorescence double staining results among the 3 groups of mice

表4 3 組小鼠神經(jīng)元死亡數(shù)量比較（個(gè)/mm2）Table 4 Comparison of neuronal death among the 3 groups of mice

2.6 3 組 小 鼠MPO、IL-1β、TNF-α、NLRP3、ASC和Caspase-1 水 平 比 較 3 組 小 鼠MPO、IL-1β、TNF-α、NLRP3、ASC 和Caspase-1 水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中ICH+Vehicle 組MPO、IL-1β、TNF-α、NLRP3、ASC 和Caspase-1 水 平 均高 于Sham 組，ICH+ART 組MPO、IL-1β、TNF-α、NLRP3、ASC 和Caspase-1 水平均低于ICH+Vehicle 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見圖5、表5。

圖5 3 組小鼠MPO、IL-1β、TNF-α、NLRP3、ASC 和Caspase-1 蛋白表達(dá)情況Figure 5 Expressions of MPO，IL-1β，TNF-α，NLRP3，ASC and Caspase-1 among the 3 groups of mice

表5 3 組小鼠MPO、IL-1β、TNF-α、NLRP3、ASC 和Caspase-1 水平比較Table 5 Comparison of the levels of MPO，IL-1β，TNF-α，NLRP3，ASC and Caspase-1 among the 3 groups of mice

3 討論

ART 是青蒿素的水溶性衍生物，具有高效、低毒、耐受性好等特點(diǎn)。除了抗寄生蟲作用，ART 還具有抗炎、抗腫瘤和抗微生物作用［15］。其具有多種機(jī)制，如抑制炎性因子的產(chǎn)生、誘導(dǎo)鐵依賴性細(xì)胞凋亡和抑制血管生成［16］。ART 是一種多潛能藥物，可以在中樞神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病治療中發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用［12-14］，研究表明，ART 可以通過直接保護(hù)瘧疾感染小鼠的神經(jīng)元，減少其凋亡［17］。此外，已有研究證明ART 可以在大鼠創(chuàng)傷性腦損傷后保護(hù)神經(jīng)元，并促進(jìn)神經(jīng)營養(yǎng)因子的釋放，最終導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)大鼠神經(jīng)功能評分的提高［12］。上述研究表明，ART 可能在ICH 后神經(jīng)功能的保護(hù)中發(fā)揮重要作用。

ICH 是一種發(fā)病率和死亡率很高的疾病，經(jīng)常會導(dǎo)致患者嚴(yán)重的神經(jīng)功能缺陷，甚至死亡，給個(gè)人、家庭和社會帶來沉重的負(fù)擔(dān)。ICH 后的炎癥反應(yīng)是導(dǎo)致疾病進(jìn)展的主要因素。在這個(gè)過程中，小膠質(zhì)細(xì)胞的募集和促炎細(xì)胞因子的釋放發(fā)揮關(guān)鍵作用。此外，外周炎性細(xì)胞，如白細(xì)胞，可以通過受損的血-腦脊液屏障進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，進(jìn)一步放大炎性損傷并使病情惡化［18］。因此，減少ICH 后的炎癥浸潤和抑制炎癥級聯(lián)反應(yīng)將可能是治療ICH 的新策略，具有重要的臨床價(jià)值和社會意義。

先前的研究表明，ART 通過激活鞘氨醇1 磷酸受體1/磷脂酰肌醇3 激酶（S1pR1/PI3K）信號通路保護(hù)蛛網(wǎng)膜下腔出血小鼠的血-腦脊液屏障［19］，體外研究表明ART 通過PI3K/蛋白激酶B（Akt）信號通路促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖［20］。還有研究報(bào)道了ART 在ICH 后的保護(hù)作用，如活化核因子紅細(xì)胞2 相關(guān)因子2（Nrf2）和活性氧（ROS）依賴性p38 絲裂原活化蛋白激酶，以抑制氧化和炎癥過程，防止ICH 再灌注損傷［14］。據(jù)報(bào)道，ART 通過Toll 樣受體4（TLR4）/核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）途徑對大鼠腦缺血再灌注損傷具有神經(jīng)保護(hù)作用［21］。然而，尚未提及ART 參與NLRP3 炎性囊泡的研究。

NLRP3 炎性囊泡包括NLRP3 受體蛋白、ASC 連接蛋白和Caspase-1 效應(yīng)蛋白，是天然免疫系統(tǒng)的重要組成部分。宿主來源的病原體相關(guān)分子模式（PAMP）或損傷相關(guān)分子模式，與模式識別受體（PRR）結(jié)合，激活NLRP3，NLRP3 通過結(jié)合ASC 來激活Caspase-1前體并水解，同時(shí)剪切IL-1β 和IL-18 前體，最終釋放IL-1β 或IL-18，加劇炎性反應(yīng)［22］。此外，激活的Caspase-1 還可以通過激活焦孔素-D（GSDMD）介導(dǎo)細(xì)胞焦亡［23］。研究表明，Caspase-1 敲除后，ICH 小鼠的存活率明顯增加［24］。一項(xiàng)研究還指出，ART 在減少脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥后可有效保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)免受損傷，但該研究未檢測NLRP3/ASC/Caspase-1 的表達(dá)［25］。因此本研究假設(shè)ART 參與NLRP3 信號通路，以保護(hù)ICH 后的神經(jīng)功能。

鑒于ICH 后發(fā)生血腫周圍局部炎癥級聯(lián)反應(yīng)對神經(jīng)功能造成不可逆的原發(fā)性損害，本研究旨在研究ART對腦出血炎癥級聯(lián)反應(yīng)，即繼發(fā)性損害的減少。結(jié)果表明ART 顯著改善了實(shí)驗(yàn)動物ICH 后的腦水腫，改善了動物轉(zhuǎn)角實(shí)驗(yàn)和mNSS 評分。本研究檢測了ART 治療后小鼠體內(nèi)TNF-α、IL-1β 和MPO 的表達(dá)，同時(shí)使用免疫熒光檢測各組小鼠腦組織小膠質(zhì)細(xì)胞的浸潤，發(fā)現(xiàn)ART 顯著改善了ICH 后3 d 動物的神經(jīng)炎癥。為了研究上述現(xiàn)象發(fā)生的機(jī)制，本研究檢測了各組動物中NLRP3/ASC/Caspase-1 信號軸的表達(dá)水平，并發(fā)現(xiàn)ICH后使用150 mg/kg 劑量的ART 顯著降低了NLRP3/ASC/Caspase1 的表達(dá)水平，這也解釋了ICH+ART 組小鼠的腦組織局部炎癥浸潤的減少。

ICH 后炎癥介導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡的意義是深遠(yuǎn)的。首先，神經(jīng)元通過調(diào)節(jié)血-腦脊液屏障緊密連接的營養(yǎng)支持效應(yīng)影響神經(jīng)血管單位［26］。ICH 后神經(jīng)血管單元的損傷導(dǎo)致局部蛋白質(zhì)泄漏，形成纖維瘢痕，然后激活星形膠質(zhì)細(xì)胞，形成局部膠質(zhì)瘢痕，最終損害患者的神經(jīng)功能［27］。有研究表明，ICH 早期神經(jīng)元凋亡與患者皮質(zhì)厚度減少、白質(zhì)完整性喪失和海馬萎縮的預(yù)后具有相關(guān)性［28］。因此，ICH 后早期抑制炎癥浸潤的作用是長期而深遠(yuǎn)的?？傊狙芯勘砻?，ART 通過阻斷NLRP3/ASC/Caspase-1 信號通路，在ICH 后早期減輕局部炎癥細(xì)胞激活，并最終減少神經(jīng)元凋亡和腦水腫，以保護(hù)實(shí)驗(yàn)動物的神經(jīng)功能。

作者貢獻(xiàn)：李媛提出研究目標(biāo)，負(fù)責(zé)研究的構(gòu)思、設(shè)計(jì)與實(shí)施，撰寫論文；李媛、木艷玲進(jìn)行數(shù)據(jù)的收集與整理、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，圖表的繪制與展示，論文的修訂；薛孟周負(fù)責(zé)文章的質(zhì)量控制與審查，監(jiān)督管理，對文章整體負(fù)責(zé)。

本文無利益沖突。