貝類副溶血性弧菌污染情況分析及其預(yù)防措施

◎ 肖 穎，方成俊，陳 暉

（東山海關(guān)綜合技術(shù)服務(wù)中心，福建 東山 363401）

根據(jù)世界衛(wèi)生組織的統(tǒng)計，在發(fā)達國家中約有80%的疾病與33%的死亡原因與當?shù)厮础⑺a(chǎn)、食品遭到致病性微生物污染有著密切的關(guān)系。近年來，海水中的病原菌與人類感染的關(guān)系密切，人們因為接觸或攝入污染水源和海產(chǎn)品而出現(xiàn)細菌性感染的事件在新聞中時有報道。水產(chǎn)品中致病性微生物污染已經(jīng)成為影響我國水產(chǎn)品出口的主要因素之一。

副溶血性弧菌已經(jīng)成為我國這幾年由細菌引起的食源性疾病暴發(fā)的主要原因之一，人們常因食用了被副溶血性弧菌污染的水產(chǎn)品而出現(xiàn)食物中毒[1-2]。國家食源性病原菌監(jiān)測網(wǎng)統(tǒng)計結(jié)果顯示，近年來我國由副溶血弧菌引起的食物中毒呈顯著上升趨勢，發(fā)生規(guī)模已經(jīng)躍居細菌性食物中毒首位，特別是在沿海城市的細菌性食物中毒總數(shù)中，由副溶血性弧菌所引起的食物中毒占60%以上[3]。貝類作為我國沿海地區(qū)主要的海產(chǎn)品食物來源之一，已經(jīng)成為漳州市海水養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的重要組成部分，該地區(qū)居民對食用貝類的需求較高，其食品安全問題不容忽視[4]。

牡蠣等貝類為濾食性軟體動物，活動性低，在濾食的同時也可將水體中的有害物質(zhì)吸入體內(nèi)并蓄積，具有很強的生物富集能力。近岸海域擁有豐富的微生物資源、富含大量的有機物質(zhì)，是海產(chǎn)品尤其是貝類重要的天然養(yǎng)殖區(qū)域。海域水體環(huán)境是影響這些海產(chǎn)品生長和分布的主要因素。水體中病原菌會直接或間接地影響海產(chǎn)品的衛(wèi)生質(zhì)量，或者以食物鏈的方式傳遞給人類，給人類的身體健康造成危害[5]。本文以東山海灣養(yǎng)殖貝類為研究對象，以在該區(qū)域海水養(yǎng)殖貝類中檢出了副溶血性弧菌為例，旨在了解該地區(qū)海水養(yǎng)殖貝類產(chǎn)品的污染水平，并為副溶血性弧菌的預(yù)防提供一定的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

樣品采集：在東山島海灣不同海域分別選取3個采樣點（采樣點1、采樣點2、采樣點3），在各采樣點采集扇貝、牡蠣、翡翠貽貝和鮑魚等4種海水養(yǎng)殖貝類樣品，共采集樣品36份。

試劑：3% APW、TCBS瓊脂、3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂、3% NaCl TSA瓊脂、氧化酶試劑、干制生化鑒定試劑盒（以上試劑為北京陸橋生物科技有限公司）；弧菌顯色培養(yǎng)基（法國科瑪嘉公司）；Thermo GNID革蘭氏陰性菌鑒定板。

1.2 儀器與設(shè)備

恒溫恒濕培養(yǎng)箱；Thermo Aris 2X全自動微生物鑒定儀。

1.3 方法

1.3.1 樣品的前處理

貝類樣本中病原菌檢測取樣前，應(yīng)先在干凈的清水中洗凈貝類的外殼并將水分甩干，用75%的乙醇消毒，然后以無菌操作切斷閉殼肌，打開貝殼，將含有內(nèi)臟的貝肉和貝液全部取出，每個檢測樣品至少應(yīng)包含6個貝類個體。

1.3.2 試驗過程

以無菌操作稱取貝類樣品25 g，加入盛有3%APW（225 mL）的無菌均質(zhì)袋中，將其放置于拍擊式均質(zhì)器中拍打2 min，后置于（36±1）℃培養(yǎng)8～18 h；對所有變渾濁的增菌液，用接種環(huán)挑取一環(huán)前增菌液，劃線分離在TCBS平板和弧菌顯色培養(yǎng)基上，置于（36±1）℃培養(yǎng)18～24 h；若有可疑菌落生長，每個平板上挑取至少5個可疑菌落，劃線接種3% NaCl胰蛋白胨大豆瓊脂平板，置于（36±1）℃培養(yǎng)18～24 h；培養(yǎng)后進行氧化酶試驗（用無菌玻璃棒挑取純培養(yǎng)的單個菌落，涂布在氧化酶試劑浸潤的濾紙上，10 s內(nèi)觀察顏色變化）、涂片鏡檢（將可疑菌落進行革蘭氏染色、鏡檢，觀察其染色情況及形態(tài)特性）、3% NaCl三糖鐵試驗[挑取純培養(yǎng)的單個可疑菌落，接種3% NaCl三糖鐵瓊脂斜面，接種時先斜面劃線后穿刺底層，（36±1）℃培養(yǎng)24 h觀察結(jié)果]及動力試驗；同時接種干制生化鑒定試劑盒和Thermo Aris 2X全自動微生物鑒定儀進行生化鑒定確認實驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 副溶血性弧菌的鑒定結(jié)果

2.1.1 菌落形態(tài)

培養(yǎng)后在TCBS平板上，菌落形態(tài)呈圓形、表面突起且光滑的半透明綠色菌落，用接種環(huán)挑取可疑菌落時有類似口香糖質(zhì)感；在弧菌顯色培養(yǎng)基上出現(xiàn)紫紅色的可疑菌落，如圖1所示。

圖1 副溶血性弧菌的鑒定結(jié)果圖

2.1.2 氧化酶試驗結(jié)果

可疑菌落經(jīng)氧化酶試驗，濾紙在10 s之內(nèi)呈現(xiàn)紫紅色，為氧化酶陽性結(jié)果。

2.1.3 涂片染色鏡檢結(jié)果

可疑菌落經(jīng)革蘭氏染色鏡檢后為革蘭氏陰性菌，菌體呈棒狀、弧狀等形態(tài)，未發(fā)現(xiàn)有芽孢。

2.1.4 3% NaCl三糖鐵試驗結(jié)果

可疑菌落在3% NaCl三糖鐵瓊脂中，斜面培養(yǎng)基的顏色不變，底層培養(yǎng)基的顏色變黃且不變黑，同時沒有產(chǎn)生氣泡。

2.1.5 副溶血性弧菌生化反應(yīng)結(jié)果

副溶血性弧菌生化反應(yīng)結(jié)果見表1。根據(jù)菌落形態(tài)、氧化酶試驗、涂片染色鏡檢、三糖鐵試驗以及可疑菌落的嗜鹽性試驗、糖發(fā)酵等生化反應(yīng)的結(jié)果可以看出，其符合副溶血性弧菌的反應(yīng)特征，為陽性鑒定結(jié)果。

表1 副溶血性弧菌生化反應(yīng)結(jié)果表

2.1.6 全自動微生物鑒定儀結(jié)果

全自動微生物鑒定儀結(jié)果見表2、表3。由鑒定結(jié)果可看出，副溶血性弧菌的概率為95.29%，結(jié)合可疑菌落形態(tài)特征、鏡檢、氧化酶、三糖鐵以及常規(guī)生化鑒定結(jié)果可以推斷其為副溶血性弧菌。

表2 鑒定結(jié)果詳細報告表

表3 微生物鑒定結(jié)果表

2.2 副溶血性弧菌的污染情況

經(jīng)過檢測，在36份貝類樣品中，共檢出副溶血性弧菌7批次，檢出率為19.4%（7/36）。

2.3 不同采樣點副溶血性弧菌的污染情況

不同采樣地點副溶血性弧菌的污染情況如表4所示。副溶血性弧菌在3個采樣點均有一定的檢出率，其中采樣點1的檢出率高于其他采樣點，為28.6%（4/14）。采樣點2的檢出率最低，為10.0%（1/10），分析原因，與各采樣點養(yǎng)殖海域水體的污染程度、樣品類別和采樣時間等均密切相關(guān)。

表4 采樣點（1、2、3）副溶血性弧菌的污染情況表

3 副溶血性弧菌預(yù)防措施

副溶血性弧菌作為一種常見的病原微生物，多存在于海產(chǎn)品及貝類食品中。副溶血性弧菌目前已經(jīng)成為引起我國食源性疾病的最主要的微生物致病因子，若食用了被其污染的相關(guān)海產(chǎn)品，可能會引起急性腸胃炎并引發(fā)食物中毒，如果治療不及時，甚至可能導(dǎo)致死亡。因此，充分了解副溶血性弧菌的預(yù)防措施，不僅有利于海水貝類的養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，而且對人們的生命安全也具有極其重要的意義。

3.1 海水貝類養(yǎng)殖及加工產(chǎn)業(yè)的預(yù)防措施

海水貝類養(yǎng)殖是貝類產(chǎn)品副溶血性弧菌污染的源頭。①監(jiān)管部門應(yīng)加強對貝類養(yǎng)殖海域及貝類產(chǎn)品中副溶血性弧菌污染情況的監(jiān)控，對不同污染程度的海域進行有效管理。②可利用貝類自身濾食性的特點，通過凈化處理，將貝類放入清潔干凈的海水域中，使其體內(nèi)的微生物等污染物排出體外。③貝類產(chǎn)品在進行生產(chǎn)加工的過程中應(yīng)加強對副溶血性弧菌的檢測，及時監(jiān)測產(chǎn)品的質(zhì)量，同時對原料及產(chǎn)品進行低溫保存，能有效地控制副溶血性弧菌生長。

3.2 日常生活中的預(yù)防措施

相關(guān)部門應(yīng)當加強對餐飲等行業(yè)的食品安全監(jiān)督，以保證餐飲行業(yè)食品的質(zhì)量。在日常生活中食用海產(chǎn)品時，要采購新鮮的食材，及時置于低溫環(huán)境下保存，由于食物中的副溶血性弧菌可通過操作臺、菜板等工具污染其他食品，因此在處理食物時應(yīng)生熟分開并隨時保持清潔，避免交叉污染。生食海產(chǎn)品是副溶血性弧菌最主要的傳播途徑，應(yīng)避免生食水產(chǎn)品，食物要完全煮熟，食用前應(yīng)徹底加熱，以達到滅菌目的，

4 結(jié)論

此次東山海灣養(yǎng)殖貝類中副溶性血弧菌檢出率處于較低的水平，分析原因，與東山灣養(yǎng)殖海域水體的污染程度較低、環(huán)境較好有關(guān)，同時與采樣時間非有利于副溶血性弧菌生長的高溫天氣等均有影響。副溶血性弧菌的檢出提醒本地區(qū)貝類產(chǎn)品在一定程度上可能也存有食品安全隱患。管理部門、養(yǎng)殖場、加工廠與消費者均應(yīng)加以重視，采取必要的措施，以降低副溶血性弧菌感染的危害，預(yù)防由副溶血性弧菌引起的食物中毒，同時，也能夠有效地提高漳州市貝類產(chǎn)品的出口質(zhì)量和國際競爭力。