中藥滬地龍的生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范及研究

章一菡，陶曉斌，王艷春，李 雷，張漢明，張 磊 （1.海軍軍醫(yī)大學(xué)：a.第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部；b.藥學(xué)系,上海 004；.上海瀛千生態(tài)農(nóng)業(yè)有限公司, 上海 015；.上?？禈蛩帢I(yè)有限公司, 上海 0105）

中藥滬地龍為上海市的唯一道地藥材，具有突出的定驚，通絡(luò)，平喘和利尿功效。用于高熱神昏，驚癇抽搐，關(guān)節(jié)痹痛，肢體麻木，半身不遂，肺熱喘咳，水腫尿少等證[1]。當(dāng)前，心腦血管疾病的發(fā)病率增高，該藥是治療這類疾病的中成藥組方中重要組成成分[2-3]。地龍藥用市場需求量從2010 年的400 t已上漲至2020 年的1 100 t，并仍呈上漲趨勢。滬地龍主產(chǎn)于上海，20 世紀(jì)60 年代供應(yīng)量占全國地龍銷售量的2/3，自1995 年起被歷版《中國藥典》收載[4]。然而，隨著上海城市化進(jìn)程的發(fā)展、農(nóng)業(yè)上化肥和農(nóng)藥的大量使用以及蔬菜大棚面積的擴(kuò)大，滬地龍的原動物蚯蚓的生存條件遭受嚴(yán)重破壞，以致可得蚯蚓的數(shù)量明顯減少，從而導(dǎo)致滬地龍藥材的產(chǎn)量也急劇下降。目前滬地龍藥材的產(chǎn)量已無法滿足市場需求，人工養(yǎng)殖技術(shù)尚未取得實(shí)質(zhì)性進(jìn)展[5]。而且地龍來源復(fù)雜，采收混亂，近年來偽品地龍大量混入市場[6]。為滿足市場對滬地龍藥材的需求，確保人民的用藥安全，解決滬地龍資源緊缺的問題，開展滬地龍的人工養(yǎng)殖研究迫在眉睫。本課題參照中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范的要求[7-8]，對滬地龍藥材原動物的品種來源和鑒定、養(yǎng)殖環(huán)境、養(yǎng)殖方法、采收加工和包裝運(yùn)輸進(jìn)行研究，提出了作物和蚯蚓套養(yǎng)的新方法，考察了養(yǎng)殖蚯蚓對土壤改善的作用，并制訂了相關(guān)的操作規(guī)程。

1 滬地龍?jiān)瓌游锘醇拌b定

1.1 滬地龍?jiān)瓌游锘?/h3>

滬地龍的品種按藥典規(guī)定原動物為3 個種，分別為環(huán)節(jié)動物門、寡毛綱、鉅蚓科動物威廉環(huán)毛蚓Pheretima guillelmi(Michaelsen) 、通俗環(huán)毛蚓Pheretima vulgarisChen、或櫛盲環(huán)毛蚓Pheretima pectiniferaMichaelsen[1]（圖1）。

圖1 藥典規(guī)定的滬地龍3 種原動物形態(tài)

1.2 滬地龍?jiān)瓌游镨b定

我國是蚯蚓種數(shù)的大國，現(xiàn)有蚯蚓記錄已達(dá)9 科28 屬640 種[9]，陸續(xù)還有新物種被發(fā)現(xiàn)[10]。蚯蚓的外部形態(tài)，如大小、顏色和環(huán)節(jié)數(shù)有較多的相似之處，所以鑒定蚯蚓除了一般的外部形態(tài)鑒定外，還必須進(jìn)行解剖，對其有重要鑒別特征的盲腸和受精囊的形態(tài)特征進(jìn)行觀察，從而獲得正確的鑒定結(jié)果。

1.2.1 威廉環(huán)毛蚓的形狀特征

體長96～150 mm，寬5～8 mm。體節(jié)數(shù)88～156，背面顏色青黃，或灰青色。背中線深青色。環(huán)帶于14～16 節(jié)，戒指狀，無剛毛。身體上剛毛較細(xì)，前段腹面并不粗而疏。13～22（Ⅷ）在受精囊孔間，13～21 在雄孔之間。雄生殖孔在18 節(jié)兩側(cè)一淺交配腔內(nèi)。陷入時(shí)呈縱裂縫（圖2A-1），內(nèi)壁有褶皺，褶皺間有剛毛2～3 條，在腔底突起上為雄孔，突起前面常有一乳突。受精囊3 對（圖2A-2），在6/7～8/9 節(jié)間，孔在一橫裂中小突上。無受精囊腔。隔膜8/9，9/10 缺失。盲腸簡單（圖2A-3）。受精囊的盲管內(nèi)端2/3 在平面上，左右彎曲，為納精囊，與管分明（圖2A-4）。

圖2 滬地龍解剖鑒別要點(diǎn)

1.2.2 通俗環(huán)毛蚓的形狀特征

本種身體大小、色澤及內(nèi)部構(gòu)造和前種相似。體長130～150 mm，寬5～7 mm。環(huán)帶位于14～16 節(jié)，戒指狀，無剛毛。體上剛毛環(huán)生，13～18（Ⅷ）在受精囊孔間，9～13 在雄孔間。雄生殖孔在18 節(jié)兩側(cè)一淺交配腔內(nèi)（圖2B-1）。唯受精囊腔較深廣，前后緣均隆腫（圖2B-2），外面可見腔內(nèi)大小乳突各一。雄交配腔亦深廣，內(nèi)壁多皺紋，有平頂乳突3 個。盲管內(nèi)端2/3 在同一平面上左右彎曲，與外端1/3 的管狀有明顯區(qū)別（圖2B-3）。受精囊在第9 節(jié)呈一定角度的彎曲（圖2B-4）。

1.2.3 櫛盲環(huán)毛蚓的形狀特征

體長100～150 mm，寬5～9 mm，背面及側(cè)面有深紫顏色或紫紅色，剛毛圈不白。環(huán)帶占3 節(jié)，無剛毛。身體前部剛毛雖粗，在2～9 節(jié)并不特殊粗。28～34（Ⅷ）在受精囊孔間，20～36 在雄孔之間。雄生殖孔在一“十”字形突的中央，常由一淺囊狀皮褶蓋?。▓D2C-1），內(nèi)側(cè)有一個或多個乳頭，其排列變化很大。受精囊孔3 對，位6/7 至8/9 節(jié)間，孔常常陷入（圖2C-2），孔的內(nèi)側(cè)腹面在剛毛圈前或后，有乳頭突，排列較規(guī)則。盲腸復(fù)式，其腹側(cè)有櫛狀小囊（圖2C-3）。副性腺有索狀短管。盲管較受精囊本體長，內(nèi)端3/4 稍粗，或直或稍彎曲（圖2C-4）。以上特征符合蚯蚓分類的描述[11]。

1.3 滬地龍藥材的特征

滬地龍長8～15 cm，寬0.5～1.5 cm。全體具環(huán)節(jié)，背部棕褐色至黃褐色，腹部淺黃棕色；受精囊孔3 對，在6/7 至8/9 環(huán)節(jié)間。第14～16 環(huán)節(jié)為生殖帶，較光亮。第18 環(huán)節(jié)有一對雄生殖孔。通俗環(huán)毛蚓的雄交配腔能全部翻出，呈花菜狀或陰莖狀；威廉環(huán)毛蚓的雄交配腔呈縱向裂縫狀；櫛盲環(huán)毛蚓的雄生殖孔內(nèi)側(cè)有1 或多個小乳突[1]。滬地龍藥材形態(tài)見圖3。

圖3 滬地龍藥材形態(tài)

2 滬地龍的養(yǎng)殖方法

2.1 飼養(yǎng)地的選擇

根據(jù)蚯蚓喜歡安靜的生活習(xí)性，養(yǎng)殖蚯蚓的地點(diǎn)須選擇在離公路50 m 以遠(yuǎn)的地方，周圍沒有化工廠，沒有噪聲源、震動源等工廠企業(yè)。有自然水源?？諝馇逍?。土壤要求腐殖土，pH 為6.5～7.5。

2.2 飼養(yǎng)地土地的分隔

飼養(yǎng)蚯蚓的土地四周需挖水溝，其中分成多個畦，每畦寬度根據(jù)需要可達(dá)1.5～2.0 m，兩畦間挖一寬30～50 cm，深30 cm 的溝。經(jīng)常保持周圍和中間溝內(nèi)的水量達(dá)2/3 高度（冬天需降至1/4 高度）。土壤的濕度保持在60%～70%。水溝中可種植芹菜或養(yǎng)殖黃鱔和泥鰍。水質(zhì)要求衛(wèi)生安全無污染，可利用附近的河水及雨水。

2.3 蚯蚓種苗的投放

蚯蚓的投放選擇在春秋二季，氣溫在15～20 ℃之間。在蚯蚓苗地里挖出蚯蚓，選取符合滬地龍3 個種基原要求的蚯蚓，并挑選活動能力強(qiáng)、無損傷的蚯蚓，按每畝地放30～50 kg 鮮蚯蚓，分撒在用水澆濕的土地里，蚯蚓將自動鉆入泥土中。

2.4 不同蚯蚓飼料的投放對蚯蚓生長的影響

選用發(fā)酵至少6 個月的牛糞、豬糞、雞糞或人工有機(jī)肥。按每畝田4～6 t 的量投放?？梢淮瓮斗牛部煞? 次投放。在畦上適時(shí)投放菜葉和粉碎或切斷的秸稈。

為摸索牛糞（上海光明奶牛場供）、豬糞（崇明新村鄉(xiāng)飼養(yǎng)場供）、雞糞（崇明西新村農(nóng)家供）或人工有機(jī)肥（上海聚源有機(jī)肥有限公司）對蚯蚓生長和繁殖的效果，比較在同一塊地（分隔3 塊）投放相同量的飼料，1 年后蚯蚓的生長情況（圖4），結(jié)果表明牛糞和豬糞作為養(yǎng)殖蚯蚓飼料的效果最好。

圖4 不同蚯蚓飼料對蚯蚓增長的影響

在上海4 月間的崇明區(qū)三星鎮(zhèn)西新村養(yǎng)殖地里按每畝地放入30 kg 鮮活蚯蚓（經(jīng)鑒定為威廉環(huán)毛蚓），隨后按每畝地放4 t 經(jīng)發(fā)酵后的牛糞，田里種芋艿。次年4 月分散選擇3 個1 m2的土地，挖取蚯蚓稱重，并計(jì)算每畝地里蚯蚓的產(chǎn)量。第3 年、第4 年仍舊按該方法操作，3 年后的蚯蚓生長情況見圖5。結(jié)果表明，在牛糞作為蚯蚓飼料的養(yǎng)殖下，蚯蚓3 年的繁殖量達(dá)到500 kg，可以進(jìn)行收獲。

圖5 蚯蚓養(yǎng)殖年度產(chǎn)量

3 不同蚯蚓飼料的投放對蚯蚓生長土地容重的影響

人工養(yǎng)殖蚯蚓必須與農(nóng)作物套養(yǎng)，否則養(yǎng)殖地不能獲得經(jīng)濟(jì)效益，農(nóng)民也就會失去養(yǎng)殖的積極性。而植物的生長好壞又與土質(zhì)的改善有密切的關(guān)系。不同蚯蚓飼料的投放對蚯蚓生長地土質(zhì)的改善有不同的結(jié)果。土壤的容重的改變是土地質(zhì)量變化的重要指標(biāo)。土壤的容重降低，表示土壤的團(tuán)粒結(jié)構(gòu)更好，更有利于作物的良好生長。按照測定土壤容重通常使用的環(huán)刀法[12]，對不同蚯蚓飼料投放的蚯蚓生長土地進(jìn)行容重的測定，土壤容重改變的測試結(jié)果如下（表1）。由此可見，雖然牛糞和豬糞做飼料使蚯蚓的生長達(dá)到近乎相同的效果，但對于土壤的改善作用牛糞較豬糞的效果更勝一籌。所以在豬糞和牛糞同時(shí)可得的情況下，使用牛糞效果更好。

表1 不同蚯蚓飼料投放后蚯蚓地容重變化

4 套種作物的選擇

使用農(nóng)作物套種養(yǎng)殖蚯蚓的方法是本課題的創(chuàng)新點(diǎn)。如在農(nóng)田里單獨(dú)養(yǎng)殖蚯蚓，不但浪費(fèi)土地資源，而且不可能達(dá)到理想的經(jīng)濟(jì)效益，蚯蚓的人工養(yǎng)殖方法就無法推廣。所以必須在蚯蚓地里套種農(nóng)作物，以期獲得蚯蚓和農(nóng)作物雙雙得利的效果。由于使蚯蚓生長良好的土壤其濕度要求在60%～70%的程度，所以必須選擇能在這一土壤濕度下也能生長良好的作物品種，以適應(yīng)蚯蚓喜潮濕土地的特性。此外，在夏天能有葉大能遮陽的植物，則更能降低土壤表面的溫度，有利于蚯蚓晚間外出覓食。經(jīng)試驗(yàn)，花菜、芋艿、玉米和卷心菜等能符合這一要求，而地瓜、馬鈴薯和山藥等作物因不宜在60%～70%的土地濕度中生長，故不宜作為和蚯蚓套種的作物。由于養(yǎng)殖蚯蚓能使土壤松軟，蚯蚓排出的糞便能增加土壤的肥力，套種作物的產(chǎn)量也獲得了提高，從而明顯地提高農(nóng)民獲得的經(jīng)濟(jì)效益，見表2。

表2 不同農(nóng)作物在蚯蚓養(yǎng)殖地產(chǎn)量的增減

5 田間管理和病蟲害防治

根據(jù)套種作物的生長習(xí)性，調(diào)節(jié)生長密度。經(jīng)常除草。盡量不用殺蟲藥和除草劑，如作物生長的要求必須使用，應(yīng)按國家的規(guī)定使用低毒和最小有效劑量。使用前一星期起降低水溝里的水量。蚯蚓養(yǎng)殖地內(nèi)要經(jīng)常灌水，其中水溝的水要經(jīng)常保持在2/3 的高度。盛夏土地的表面也要常噴水。在蚯蚓的養(yǎng)殖中要注意除去蚯蚓的天敵，如野鼠、家鼠、黃鼬、蜈蚣和螞蟻等，防止他們進(jìn)入養(yǎng)殖區(qū)造成對蚯蚓的損害。

6 地龍的規(guī)范化生產(chǎn)

6.1 蚯蚓的捕捉方法

①利用插秧前稻田灌水后，蚯蚓自動游到田埂上避水，此時(shí)進(jìn)行人工抓捕。②在養(yǎng)殖的蚯蚓田里，當(dāng)一季作物收割后，在水溝里放水。此時(shí)蚯蚓自動爬到土埂上避水，可進(jìn)行人工抓捕。③在一種作物收割后至另一種作物栽種前的間歇期內(nèi)挖土捕捉蚯蚓。④選擇在每年的4～5 月或10 月捕捉蚯蚓。⑤溫和濕潤的天氣，在蚯蚓養(yǎng)殖地人工挖掘。⑥嚴(yán)格禁止用電擊方法捕捉蚯蚓。

6.2 地龍的加工

6.2.1 地龍的加工方法

將捕捉的蚯蚓用清水沖去體表的泥沙，分批放入草木灰中2 min，蚯蚓即失去活動能力。取出后用清水沖去表面草木灰，逐條加入到蚯蚓剖切機(jī)內(nèi)。經(jīng)全剖切后的蚯蚓用清水淘洗2～3 次，除去泥沙。逐條掛在竹桿上至室外曬干。也可將洗凈的蚯蚓放在掛空的尼龍網(wǎng)或不銹鋼網(wǎng)上曬干。如遇下雨天，則可分?jǐn)偡湃刖呒?xì)孔的不銹鋼盤內(nèi)，置60 ℃烘房中烘8 h 至干。

6.2.2 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及檢測結(jié)果

地龍藥材的標(biāo)準(zhǔn)按《中華人民共和國藥典》一部地龍項(xiàng)記載的要求執(zhí)行[1]。內(nèi)容包括檢查雜質(zhì)不得過6%、水分不得過12.0%、總灰分不得過10.0%、酸不溶性灰分不得過5.0%、重金屬不得過30 mg/kg、每1 000 g 中含黃曲霉素B1不得過5 μg，黃曲霉素G2、黃曲霉素G1、黃曲霉素B2和黃曲霉素B1的總量不得過10 μg。水溶性浸出物不得少于16.0%。該基地地龍藥材經(jīng)上海市食品藥品檢驗(yàn)院檢測（報(bào)告書編號：YW202105450），雜質(zhì)為0.2%，水分為10.3%，總灰分為5.9%，酸不溶性灰分為1.0%，重金屬符合規(guī)定。黃曲霉素B1小于檢出限0.5 μg/kg，黃曲霉素B20.2 μg/kg、黃曲霉素G10.5 μg/kg、黃曲霉素G20.2 μg/kg，和黃曲霉素B1的總量小于10 μg/kg。水溶性浸出物為25.9%。

6.3 地龍的包裝、儲藏和運(yùn)輸

6.3.1 地龍的包裝

干燥后的地龍藥材在包裝前應(yīng)仔細(xì)檢查是否已充分干燥，并清除雜質(zhì)和異物。后置藥用級的塑料包裝中，包裝袋表面貼上藥材的溯源碼。溯源碼包括生產(chǎn)企業(yè)、地龍基源、栽培方式和環(huán)境、養(yǎng)殖管理、采收加工的時(shí)間和方法。

6.3.2 地龍的儲藏

地龍藥材應(yīng)儲存于陰涼干燥的倉庫里，倉庫的地面應(yīng)有木質(zhì)或塑料堆放架。庫房注意防蟲防鼠。

6.3.3 地龍的運(yùn)輸

地龍的運(yùn)輸應(yīng)遵循及時(shí)、準(zhǔn)確、安全、經(jīng)濟(jì)的原則。將固定的運(yùn)輸工具清洗干凈，每件地龍捆扎好，遮蓋嚴(yán)密，及時(shí)運(yùn)往貯藏地點(diǎn)。不得雨淋、日曬，長時(shí)間滯留在外，不得與其他有毒、有害物質(zhì)混裝，避免污染。

7 小結(jié)

中藥的規(guī)范化種植和管理是確保中藥質(zhì)量安全有效的重要環(huán)節(jié)。國家藥品監(jiān)督局等4 部委今年再次頒布了《中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GAP）》的要求[7]，說明中藥材規(guī)范化種植和管理的重要性。動物類藥材養(yǎng)殖往往較植物類藥材的種植更具復(fù)雜性。本課題組數(shù)年來對滬地龍的養(yǎng)殖不斷的進(jìn)行探索，在此基礎(chǔ)上提出了滬地龍規(guī)范養(yǎng)殖的新方法，為解決滬地龍規(guī)?；涂沙掷m(xù)的人工養(yǎng)殖、緩解滬地龍的資源緊缺提供了可行的途徑。