一株乳突赤殼屬蕨麻致病菌的鑒定及生物學(xué)特性

王鑫慈， 李軍喬， 李晨芹， 田甜， 曲俊儒

（青海民族大學(xué)生態(tài)環(huán)境與資源學(xué)院，青藏高原蕨麻產(chǎn)業(yè)研究院，西寧 810007）

蕨麻（Potentilla anserinaL.）屬于薔薇科（Rosacrae）委陵菜屬（Potentilla）多年生匍匐草本植物，為鵝絨委陵菜（Potentilla anserinaL.）的變種。野生蕨麻主要分布于青藏高原地區(qū)，高品質(zhì)資源主要集中于青海省。蕨麻是典型的匍匐莖克隆植物，其匍匐莖和分株在生長(zhǎng)過(guò)程中能夠迅速覆蓋地面，具有優(yōu)秀的氣候適應(yīng)性，且耐寒、耐旱、抗鹽堿能力較強(qiáng)，因此可以蓄水保墑、防風(fēng)固沙，具有一定的生態(tài)價(jià)值[1-2]。此外，蕨麻全草可入藥，具有收斂止血、生津利痰、補(bǔ)血益氣的功效，是藏藥中的主要藥材，有重要的藥用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。近年來(lái)，眾多學(xué)者對(duì)蕨麻的種質(zhì)資源、繁殖栽培技術(shù)、藥用成分等展開(kāi)研究[2-6]；蕨麻的人工栽培規(guī)模也日漸擴(kuò)大，在青海、甘肅等地推廣的3個(gè)審定品種其種植面積已達(dá)10萬(wàn)余畝（0.67萬(wàn)hm2），作為當(dāng)?shù)氐男屡d產(chǎn)業(yè)，帶動(dòng)當(dāng)?shù)剞r(nóng)民脫貧致富。隨著蕨麻的推廣種植和連作年限的增加，近幾年人工種植的蕨麻出現(xiàn)了塊根腐敗及黑斑的癥狀，對(duì)蕨麻的產(chǎn)量及品質(zhì)產(chǎn)生了較大影響[7-8]。造成根腐病的病原有真菌、細(xì)菌及線(xiàn)蟲(chóng)，其中真菌是主要致病菌[9-10]。由真菌侵染感病的植株較健康植株生長(zhǎng)緩慢，莖葉最初會(huì)變黃，然后逐漸枯萎，最后根部腐敗[11-12]。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)蕨麻病害的相關(guān)研究較少，因此明確蕨麻根腐病病原菌的種類(lèi)及生物學(xué)特性，進(jìn)一步了解該病害的發(fā)病規(guī)律，可為制定蕨麻根腐病綜合防治策略提供有效手段。

本研究以采自中國(guó)青海省西寧市門(mén)源回族自治縣蕨麻人工種植基地的感染根腐病的塊根中分離的1株菌株為研究對(duì)象，對(duì)該菌株進(jìn)行生物學(xué)特性研究，主要包括病原菌的分離鑒定及在不同生長(zhǎng)環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)條件下研究該菌株的生長(zhǎng)速率及產(chǎn)孢量，以期為今后蕨麻根腐病的監(jiān)測(cè)和治理提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 材料方法

1.1 試驗(yàn)材料

根腐病病原菌株MY-BSX4-1從青海省門(mén)源回族自治縣蕨麻人工種植基地蕨麻根腐病發(fā)病部位分離純化獲得。回接植物材料為同一地點(diǎn)的健康蕨麻塊根。

1.1.1 供試培養(yǎng)基 供試培養(yǎng)基包括馬鈴薯培養(yǎng)基（potato dextrose agar, PDA）、查氏（Czapek）培養(yǎng)基、pH梯度培養(yǎng)基、蕨麻煎汁培養(yǎng)基和LB培養(yǎng)基，各培養(yǎng)基的配制如下。

PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，蒸餾水1000 mL，自然pH，121 ℃高壓滅菌20 min。

查氏培養(yǎng)基：KCl 0.5 g，F(xiàn)e2SO40.01 g，K2HPO41 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，蔗糖30 g，NaNO32 g，瓊脂粉20 g，蒸餾水1000 mL，在此基礎(chǔ)上，用不同碳源替代蔗糖、不同氮源替代硝酸鈉，作為不同營(yíng)養(yǎng)條件處理。其中碳源包括缺碳對(duì)照、葡萄糖、蔗糖、乳糖、淀粉、果糖、甘露醇；氮源包括缺氮對(duì)照、甘氨酸、磷酸氫銨、硝酸銨、硫酸銨、蛋白胨、牛肉浸膏。

pH梯度培養(yǎng)基：將配好的PDA液體培養(yǎng)基每50 mL分裝入100 mL錐形瓶，用0.1 mol·L-1的NaOH和HCl調(diào)節(jié)pH分別為3、4、5、6、7、8、9、10、11、12（用pH計(jì)進(jìn)行測(cè)定），然后加入瓊脂粉0.5 g·瓶-1。

蕨麻煎汁培養(yǎng)基：蕨麻塊根200 g，瓊脂20 g，蒸餾水1000 mL，自然pH，121℃高壓滅菌20 min。其中加葡萄糖的蕨麻煎汁培養(yǎng)基添加20 g葡萄糖作為碳源；加硝酸鈉的蕨麻煎汁培養(yǎng)基添加2 g硝酸鈉作為氮源。

LB（Luria-Bertani）培養(yǎng)基：酵母提取物5 g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，瓊脂粉20 g，蒸餾水1000 mL，pH 7.0。

1.1.2 供試試劑 Taq DNA Polymerase等擴(kuò)增所用試劑均購(gòu)自TaKaRa公司；PCR Purification Kit購(gòu)自Promega；引物由華大基因合成；DNA提取試劑盒購(gòu)自北京博友順生物技術(shù)有限公司。

1.1.3 供試儀器 PCR儀為Biometra公司生產(chǎn)的Tgradient；測(cè)序儀3730為ABI公司生產(chǎn)；凝膠成像儀由DNR BIO IMAGING SYSTEM以色列DNR成像系統(tǒng)有限公司生產(chǎn)；熒光顯微鏡Nikon EXCLIPSEND為日本Nikon公司生產(chǎn)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 分離與純化 采用組織分離法[13-14]進(jìn)行病原菌的分離純化。首先將患病塊根用自來(lái)水充分沖洗干凈，濾紙吸干；然后切取病健交界處組織塊，用75%乙醇進(jìn)行塊根的表面消毒5 s，無(wú)菌水充分沖洗3次后，置于PDA平板上，25 ℃培養(yǎng)4 d后挑取菌落邊緣菌絲到新PDA平板，重復(fù)純化操作2次；最后將純化后菌株接種于PDA培養(yǎng)基，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 分離物的形態(tài)學(xué)觀察 用直徑5 mm打孔器，從預(yù)培養(yǎng)4 d的菌落邊緣打取菌餅，并接種到PDA平板中央位置，在25 ℃恒溫條件下培養(yǎng)15 d，觀察病原菌特征，主要觀察菌落的形狀、顏色、菌絲致密度等。首先在載玻片上滴加少量無(wú)菌水，用接種針?lè)謩e在病原菌菌落邊緣和中央挑取少量菌絲，置于載玻片上的無(wú)菌水中，將蓋玻片蓋在無(wú)菌水的位置制成臨時(shí)玻片；然后在生物熒光相差顯微鏡（10×40）下觀察分離物的分子孢子梗、分生孢子形態(tài)，并拍照記錄[15]。

1.2.3 分離物的分子生物學(xué)鑒定 采用CTAB法提取病原菌DNA；然后以提取的DNA作為PCR模板，以真菌通用引物ITS1(5’-TCCGTAGGAACCTGCGG-3’)和ITS4(5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR程序?yàn)椋?4 ℃ 3 min；94 ℃1 min，55 ℃ 1 min，72 ℃ 2 min，30個(gè)循環(huán)；72 ℃5 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5 %瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后由北京博友順生物技術(shù)有限公司完成測(cè)序，測(cè)序結(jié)果在BLAST中進(jìn)行序列比對(duì)，用MEGA軟件中的neighbor joining（NJ）程序構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。

1.2.4 分離物的致病性測(cè)定與再分離 采用孢子液涂抹接種法[16]進(jìn)行致病性測(cè)定。首先用直徑5 mm 打孔器，從預(yù)培養(yǎng)4 d的菌落邊緣打取菌餅，并接種到PDA平板中央位置，在25 ℃恒溫條件下培養(yǎng)7 d后，每個(gè)培養(yǎng)皿添加5 mL無(wú)菌水，利用涂布器使無(wú)菌水充分接觸菌落，并刮取分生孢子，4層無(wú)菌紗布過(guò)濾后獲得孢子懸液；然后利用血球計(jì)數(shù)板測(cè)定其含量，并將孢子懸液稀釋至107個(gè)·mL-1；最后將孢子液均勻涂抹在蕨麻塊根上，重復(fù)3次，每個(gè)重復(fù)接種5個(gè)塊根，保濕并室溫培養(yǎng)，觀察發(fā)病情況。若接種塊根發(fā)病則再分離致病菌，完成柯赫法則驗(yàn)證。

1.2.5 病原菌生物學(xué)特性研究 溫度對(duì)病原菌生長(zhǎng)速率和產(chǎn)孢量的影響：用直徑5 mm 打孔器，從預(yù)培養(yǎng)4 d的菌落邊緣打取菌餅，并接種到PDA平板中央位置，分別置于 5、10、15、20、25、28、30、35 ℃溫度條件下，倒置培養(yǎng)，每個(gè)處理3次重復(fù)。分別在培養(yǎng)3、5 d時(shí)用直尺十字交叉法測(cè)量并記錄菌落生長(zhǎng)直徑。培養(yǎng)5 d后用直徑5 mm 打孔器在菌落上打取4個(gè)菌餅，將4個(gè)菌餅置于1.5 mL EP管中，加入1 mL ddH2O充分震蕩，洗下孢子，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法測(cè)定產(chǎn)孢量[17]。

光照對(duì)病原菌生長(zhǎng)速率和產(chǎn)孢量的影響：接種方法同上，培養(yǎng)條件分別為24 h光照、12 h光照+12 h黑暗、24 h黑暗，溫度設(shè)定為25 ℃，每個(gè)處理3次重復(fù)。菌落生長(zhǎng)直徑和產(chǎn)孢量的測(cè)定方法同上。

pH對(duì)病原菌生長(zhǎng)速率和產(chǎn)孢量的影響：將配制好pH分別為3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0的PDA培養(yǎng)基高壓滅菌。接種方法同上，溫度設(shè)定為25 ℃，每個(gè)處理3次重復(fù)。菌落生長(zhǎng)直徑和產(chǎn)孢量的測(cè)定方法同上。

碳源對(duì)病原菌生長(zhǎng)速率和產(chǎn)孢量的影響：以查氏培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，分別用等量葡萄糖、乳糖、淀粉、果糖、甘露醇替換基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的蔗糖。接種方法同上，溫度設(shè)定為25 ℃，每個(gè)處理3次重復(fù)。菌落生長(zhǎng)直徑和產(chǎn)孢量的測(cè)定方法同上。

氮源對(duì)病原菌生長(zhǎng)速率和產(chǎn)孢量的影響：以查氏培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，分別用等量甘氨酸、磷酸氫銨、硝酸銨、硫酸銨、蛋白胨、牛肉浸膏替換基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的硝酸鉀。接種方法同上，溫度設(shè)定為25 ℃，每個(gè)處理3次重復(fù)。菌落生長(zhǎng)直徑和產(chǎn)孢量的測(cè)定方法同上。

1.3 數(shù)據(jù)分析

利用Origin 2021對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行圖表制作，用SPSS 24對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 田間癥狀觀察與病原菌分離

菌株MY-BSX4-1引起的蕨麻根腐病的主要癥狀部位為蕨麻的根部和莖基部。在發(fā)病初期，植株地上莖葉部分枯萎變黃，個(gè)別枝葉萎蔫枯死，病部表面常聚生大量黑色凸起小顆粒，莖基部和根部逐漸變?yōu)楹稚?、腐爛；后期植株莖葉枯萎變黃加重，甚至全株枯死，根部腐爛壞死（圖1）。

2.2 形態(tài)學(xué)鑒定

在門(mén)源進(jìn)行田間蕨麻根腐病病害調(diào)查時(shí)，發(fā)現(xiàn)病部后期表面常聚生大量黑色小顆粒（圖2A）。將病原菌在PDA平板上培養(yǎng)，菌落初為白色，質(zhì)地致密，之后菌落中心顏色逐漸加深呈紅棕色，菌落背面外緣白色，中間為橙紅色至紅棕色（圖2B和C）。

圖2 菌株MY-BSX4-1的形態(tài)學(xué)鑒定Fig. 2 Morphological identification of MY-BSX4-1

經(jīng)顯微鏡觀察，可見(jiàn)子囊殼近球形，表面具粗糙疣狀物，直徑117～184 μm（圖2D）；菌絲為無(wú)隔菌絲，直徑4.0～6.0 μm（圖2E）。大型分生孢子呈鐮刀形，中部細(xì)胞寬，頂胞漸尖，兩端較鈍，具2～4 個(gè)分隔，大小為(13.9～28.5) μm×(5.2～8.3) μm（圖2F）。小型分生孢子多為單細(xì)胞，橢圓形，大小為(7.15～12.04) μm×(2.68～3.88) μm（圖2G）。產(chǎn)孢方式為單瓶梗產(chǎn)孢，分生孢子梗樹(shù)枝狀（圖2H）。根據(jù)病原菌的菌落形態(tài)特征、子囊殼及分生孢子的形態(tài)特征，初步鑒定該菌為T(mén)helonectria屬真菌。

2.3 分子生物學(xué)鑒定

采用真菌通用引物ITS1和ITS4進(jìn)行PCR擴(kuò)增，凝膠電泳后，在500 bp處得到1條清晰的條帶（圖3）。將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序其大小為517 bp，利用BLAST對(duì)序列進(jìn)行比對(duì)分析，選取相似性較高的序列，用MEGA構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)（圖4），結(jié)合其形態(tài)學(xué)特征，進(jìn)一步確定該病原菌為乳突赤殼屬（Thelonectria olida）。

圖3 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果Fig. 3 Results of PCR amplification products

圖4 菌株MY-BSX4-1的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig. 4 Phylogenetic tree of MY-BSX4-1

2.4 致病性與柯赫氏法則驗(yàn)證

將菌株分別接種于蕨麻離體塊根部和活體蕨麻植株塊根部，并將活體蕨麻植株土培，觀察并記錄發(fā)病情況。結(jié)果（圖5）表明，將菌株MY-BSX4-1接種到離體的蕨麻塊根上，與對(duì)照相比，有傷口和無(wú)傷口的蕨麻塊根均具有發(fā)病癥狀，產(chǎn)生黑色病斑，并長(zhǎng)出白色菌絲，塊根出現(xiàn)腐爛（圖5A～H）。將菌株MY-BSX4-1接種在盆栽蕨麻植株上，接種7～15 d后植株染病，逐漸萎蔫變黃，根部產(chǎn)生黑色斑點(diǎn)，發(fā)病癥狀與田間相似，對(duì)照不發(fā)?。▓D5I～N）。對(duì)離體和活體回接后發(fā)病病樣的病健交界處再次分離，獲得與原接種分離物一致的病原菌。根據(jù)柯赫氏法則可以確定菌株MY-BSX4-1為蕨麻根腐病的致病菌。

圖5 人工接種MY-BSX4-1后蕨麻植株的發(fā)病癥狀Fig. 5 Symptoms of diseased plant after artificial inoculation of MY-BSX4-1

2.5 MY-BSX4-1 的生物學(xué)特性

2.5.1 不同溫度、光照及pH對(duì)MY-BSX4-1生長(zhǎng)速率和產(chǎn)孢量的影響 將病原菌在5～35 ℃培養(yǎng)5 d，結(jié)果表明病原菌具有較寬的溫度適應(yīng)范圍。其中，在5～10 ℃溫度范圍內(nèi)菌絲生長(zhǎng)緩慢且未產(chǎn)孢；在10～35 ℃范圍內(nèi)菌絲均可較好生長(zhǎng)，但在35 ℃時(shí)未產(chǎn)孢。25 ℃時(shí)菌絲生長(zhǎng)速率最高，產(chǎn)孢量最大，因此最適生長(zhǎng)和產(chǎn)孢溫度均為25 ℃。5～25 ℃菌絲生長(zhǎng)速率和產(chǎn)孢量隨著培養(yǎng)溫度的升高而增大，在25 ℃條件下達(dá)到峰值；當(dāng)溫度高于30 ℃后菌株的生長(zhǎng)速率和產(chǎn)孢量呈下降趨勢(shì)。

光照對(duì)病原菌有一定影響（圖6B）。3種光照條件下病原菌均可生長(zhǎng)和產(chǎn)孢，其中，在24 h光照條件下病原菌的菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢量顯著高于24 h黑暗。

圖6 不同生物學(xué)特性下MY-BSX4-1菌絲的生長(zhǎng)和產(chǎn)孢Fig. 6 Mycelium growth and sporulation of MY-BSX4-1 under different biological characteristics

由圖6C可知，病原菌pH適應(yīng)范圍較寬，在pH為4～12時(shí)均可生長(zhǎng)，最適pH為6～9，表明病原菌在中性條件下生長(zhǎng)活躍。pH在5～12時(shí)，菌落直徑差異較小，但pH為3時(shí)，菌落生長(zhǎng)受到明顯抑制。菌株在pH 4～12時(shí)均可產(chǎn)孢，當(dāng)pH為8時(shí)，產(chǎn)孢量達(dá)到峰值。

2.5.2 不同碳源、氮源及培養(yǎng)基對(duì)MY-BSX4-1生長(zhǎng)速率和產(chǎn)孢量的影響 在不同碳源的培養(yǎng)基上，病原菌的生長(zhǎng)速率和產(chǎn)孢量存在顯著差異，其中最適生長(zhǎng)碳源為可溶性淀粉；最適產(chǎn)孢碳源為乳糖（表1）。對(duì)不同碳源培養(yǎng)基進(jìn)行比較，菌株的生長(zhǎng)速率表現(xiàn)為可溶性淀粉＞葡萄糖＞蔗糖＞乳糖＞甘露醇＞缺碳對(duì)照＞果糖；產(chǎn)孢量表現(xiàn)為乳糖＞葡萄糖＞果糖＞淀粉＞缺碳對(duì)照＞蔗糖＞甘露醇。

表1 不同碳源下MY-BSX4-1的菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢Table 1 Growth and sporulation of MY-BSX4-1 mycelium under different carbon source

在不同氮源的培養(yǎng)基上，病原菌的生長(zhǎng)速率和產(chǎn)孢量差異顯著，其中最適生長(zhǎng)氮源為牛肉浸膏；最適產(chǎn)孢氮源為蛋白胨，而缺氮或以甘氨酸為氮源時(shí)不產(chǎn)孢（表2）。對(duì)不同氮源培養(yǎng)基進(jìn)行比較，生長(zhǎng)速率表現(xiàn)為牛肉浸膏＞蛋白胨＞硫酸銨、缺氮對(duì)照＞甘氨酸＞磷酸氫銨＞硝酸銨；產(chǎn)孢量表現(xiàn)為蛋白胨＞硫酸銨＞牛肉浸膏＞磷酸氫銨＞硝酸銨。

表2 不同氮源下MY-BSX4-1的菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢Table 2 Mycelium growth and sporulation of MY-BSX4-1 under different nitrogen source

由表3可知，在不同供試培養(yǎng)基上，病原菌的生長(zhǎng)速率和產(chǎn)孢量顯著不同，其中在蕨麻煎汁培養(yǎng)基和含硝酸鈉的蕨麻煎汁培養(yǎng)基上，菌絲的生長(zhǎng)速率和產(chǎn)孢量均顯著優(yōu)于其他培養(yǎng)基，25 ℃下培養(yǎng)5 d，菌落直徑分別可達(dá)6.82和7.00 cm，產(chǎn)孢量分別為0.45×107和0.43×107個(gè)·mL-1。在含葡萄糖的蕨麻煎汁培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)情況較好，但產(chǎn)孢量低于另2種蕨麻煎汁培養(yǎng)基。在LB、PDA和查氏培養(yǎng)基中，菌絲的生長(zhǎng)情況表現(xiàn)為PDA培養(yǎng)基＞查氏培養(yǎng)基＞LB培養(yǎng)基，但這3種培養(yǎng)基對(duì)產(chǎn)孢量無(wú)顯著影響（表3）。

表3 不同培養(yǎng)基下MY-BSX4-1菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢Table 3 Mycelium growth and sporulation of MY-BSX4-1 under different mediums

2.5.3 菌絲致死溫度測(cè)定 MY-BSX4-1的菌絲經(jīng)過(guò)35～45 ℃恒溫水浴10 min處理后，菌絲尚有活性，能夠在PDA培養(yǎng)基上繼續(xù)生長(zhǎng)；當(dāng)恒溫水浴溫度高于50 ℃后，菌絲失活，不能在培養(yǎng)基上繼續(xù)生長(zhǎng)。由此能夠初步確定，MY-BSX4-1菌絲的致死溫度在45～50 ℃之間。在45～50 ℃范圍內(nèi)，以1 ℃為梯度，設(shè)置6個(gè)溫度梯度繼續(xù)恒溫水浴處理，結(jié)果（圖7）顯示，在45～47 ℃菌絲能夠繼續(xù)生長(zhǎng)，高于47 ℃菌絲不能繼續(xù)生長(zhǎng)，因此可以確定MY-BSX4-1菌絲致死溫度為47 ℃（10 min）。

圖7 MY-BSX4-1的菌絲致死溫度Fig. 7 Fatal temperature of MY-BSX4-1 mycelium

3 討論

蕨麻是青藏高原地區(qū)特有的植物，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值與生態(tài)價(jià)值，由于其地域局限性較大，所以栽培面積有限。前人對(duì)蕨麻病害的研究較少，種植者對(duì)其病害的防治也不夠重視。目前對(duì)真菌引起的植物根腐病研究較多，如紫花苜蓿、地黃、黃芪、三七、丹參等物種上已有較多相關(guān)報(bào)道[18-23]。明確病原是研究病害發(fā)生規(guī)律和制定有效防治措施的前提。李晨芹等[24]研究發(fā)現(xiàn)，鐮孢菌（Fusarium perseae）可引起蕨麻根腐病，該病原引起的病害典型癥狀是植株生長(zhǎng)緩慢，且莖葉枯萎變黃，根部腐爛壞死。本實(shí)驗(yàn)室從青海省門(mén)源回族自治縣蕨麻人工種植基地蕨麻根腐病發(fā)病部位分離純化獲得1株原菌株MY-BSX4-1，該菌株引發(fā)的病害特征為患病處外表皮會(huì)附著黑色斑點(diǎn)，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)黑斑多，根部逐漸腐爛壞死。結(jié)合形態(tài)學(xué)、分子生物學(xué)和致病性驗(yàn)證方法將其鑒定為乳突赤殼屬（Thelonectria olida）病原真菌。人工接種該菌株后，蕨麻發(fā)病癥狀與蕨麻根腐病田間癥狀一致，且該菌株在蕨麻損傷和非損傷情況下均能對(duì)蕨麻塊根致病。據(jù)報(bào)道，乳突赤殼屬真菌主要分布于熱帶、亞熱帶及溫帶地區(qū)，部分種類(lèi)是植物病原菌，能夠?qū)е轮参餄僛25]。乳突赤殼屬真菌還能夠引起葡萄黑根病、闊葉樹(shù)及灌木的一些病害[26-27]，該病害的高發(fā)期為6-7月。本研究表明，菌株MY-BSX4-1的適宜生長(zhǎng)溫度為25～30 ℃；合理光照更有利于菌絲體生長(zhǎng)，但對(duì)孢子萌發(fā)無(wú)顯著影響；pH 6～9時(shí)有利于菌絲體生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)；該菌株的可利用碳源和氮源也較為廣泛，其中最有利于該菌生長(zhǎng)的碳源為可溶性淀粉和葡萄糖，最適氮源為牛肉浸膏。病原菌生物學(xué)特性的研究為防治藥劑的篩選和田間管理提供了理論依據(jù)。