不同品種毛茶水浸出物成分及抗氧化、降血糖活性研究

霍華珍　蔡愛華　郭春雨　謝運(yùn)昌　李典鵬

摘 要：? 為比較7個(gè)不同品種毛茶水浸出物活性成分及體外抗氧化與降血糖活性的差異，確定各成分與活性之間的相關(guān)性，該文選取制作六堡茶常用的7個(gè)茶樹品種制備的毛茶作為研究對(duì)象，測(cè)定毛茶水浸出物及其浸膏中總多酚、總黃酮、茶多糖的含量，以DPPH·清除能力、ORAC值和α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶抑制作用為指標(biāo)評(píng)價(jià)毛茶水浸出物的抗氧化和降血糖活性，并采用Pearson進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果表明：（1）7個(gè)茶樹品種毛茶水浸出物、總多酚、總黃酮、茶多糖含量均存在顯著差異，含量最高的分別為黃金茶（53.42%± 0.14%）、桂紅4號(hào)（40.87%±1.09%）、云南大葉種（27.17%±0.26%）、福云6號(hào)（2.70%±0.02%）。（2）對(duì)DPPH·清除能力、ORAC值存在顯著差異，在兩種評(píng)價(jià)方法中均顯示較好抗氧化效果的品種為六堡群體種、桂紅4號(hào)、宛田種。（3）對(duì)α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶的抑制作用均顯著強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照阿卡波糖，在兩種評(píng)價(jià)方法中均顯示較好降血糖效果的品種為六堡群體種、桂紅4號(hào)、桂青種。（4）抗氧化、降血糖活性均與總多酚、總黃酮含量有較強(qiáng)正相關(guān)。綜上認(rèn)為，六堡群體種、桂紅4號(hào)、宛田種、桂青種的毛茶品質(zhì)均較好，其中六堡群體種、桂紅4號(hào)同時(shí)具有開發(fā)成抗氧化、降血糖功能食品的前景，宛田種、桂青種分別具有開發(fā)成抗氧化、降血糖功能食品的潛力；總多酚、總黃酮對(duì)毛茶體外抗氧化、降血糖活性的貢獻(xiàn)較大，在毛茶進(jìn)一步的加工利用過(guò)程中應(yīng)著重注意對(duì)這類成分的保護(hù)。該研究結(jié)果為開發(fā)抗氧化、降血糖活性更好的六堡茶產(chǎn)品在毛茶原料篩選和加工方式選擇方面提供了科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞： 不同品種， 毛茶， 水浸出物成分， 抗氧化活性， 降血糖活性

中圖分類號(hào)：? Q946文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：? A文章編號(hào)：? 1000-3142（2023）06-1145-10

Components， antioxidant and hypoglycemic activities of water extracts from different varieties of raw tea

HUO Huazhen1， CAI Aihua1*， GUO Chunyu2， XIE Yunchang1， LI Dianpeng1

（ 1. Guangxi Key Laboratory of Plant Functional Phytochemicals and Sustainable Utilization， Guangxi Institute of Botany，

Guangxi Zhuang Autonomous Region and Chinese Academy of Sciences， Guilin 541006， Guangxi， China;

2. Guangxi Tea Research Institute， Guilin 541004， Guangxi， China ）

Abstract：? To compare the differences in the active components， the antioxidant and hypoglycemic activities in vitro between seven different varieties of raw tea water extracts， and to determine the correlation between each ingredient and activity， the contents of total polyphenols， total flavonoids and tea polysaccharides in the water extracts of raw tea and its infusion were determined. The antioxidant and hypoglycemic activities of raw tea water extracts were evaluated by DPPH· scavenging ability， ORAC value and α-glucosidase and α-amylase inhibition as indicators， and Pearson correlation analysis was performed. The results were as follows： （1） There were significant differences in the contents of water extract， total polyphenols， total flavonoids and tea polysaccharides among the seven varieties， while the highest contents were found in Golden tea （53.42%±0.14%）， Guihong No.4 （40.87%±1.09%）， Yunnan big leaf species （27.17%±0.26%） and Fuyun No.6 （2.70%±0.02%）， respectively. （2）There were also significant differences in DPPH· scavenging abilities and ORAC values among the seven varieties， while the varieties showing better antioxidant effects in both evaluation methods were the Liupao group species， Guihong No.4 and Wantian species. （3） The inhibitions of α-glucosidase and α-amylase by the water extracts of seven varieties were significantly stronger than those of acarbose positive control. The varieties showing better hypoglycemic effects in both evaluation methods were Liupao group species， Guihong No.4 and Guiqing species. （4）The antioxidant and hypoglycemic activities were all strongly and positively correlated with the contents of total polyphenols and flavonoids. In summary， raw tea quality of Liupao group species， Guihong No.4， Wantian species and Guiqing species are better， among which Liupao group species and Guihong No.4 have the prospect of developing antioxidant and hypoglycemic functional food; Wantian species and Guiqing species have the potential of developing antioxidant and hypoglycemic functional food respectively. Total polyphenols and total flavonoids have a great contribution to the in vitro antioxidant and hypoglycemic activities of raw tea， so that attention should be paid to the protection of such components during the further processing and utilization of raw tea. The results of this study provide a scientific basis for the development of Liupao tea products with better antioxidant and hypoglycemic activities in the selection of raw materials and processing methods of raw tea.

Key words： different varieties， raw tea， water extract components， antioxidant activity， hypoglycemic activity

六堡茶為廣西特有的傳統(tǒng)名茶，屬于黑茶類，不僅具有豐富的功能成分和良好的保健功效，還給人“紅、濃、陳、醇”的感官體驗(yàn)，越來(lái)越受到消費(fèi)者青睞（黃敏周等，2020；馬婉君等，2020），已成為廣西壯族自治區(qū)重點(diǎn)支持發(fā)展“千億元茶產(chǎn)業(yè)”中的重要組團(tuán)（李欣鞠，2019；孔妮，2020）。由于六堡茶是以鮮茶葉為原料，經(jīng)初制工藝制成毛茶，在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步精制陳化（渥堆發(fā)酵）而成，因此六堡茶生產(chǎn)過(guò)程中間原料毛茶的品質(zhì)優(yōu)劣對(duì)六堡茶品質(zhì)的形成至關(guān)重要（馬婉君等，2020）。然而，通過(guò)前期市場(chǎng)調(diào)研發(fā)現(xiàn)，制作六堡茶所采用的毛茶來(lái)源于較多的茶樹品種且原料質(zhì)量不一，從而導(dǎo)致生產(chǎn)的六堡茶成品茶質(zhì)量參差不齊，嚴(yán)重阻礙了六堡茶產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，迫切需要評(píng)價(jià)這些茶樹品種之間的毛茶品質(zhì)差異，有利于六堡茶生產(chǎn)企業(yè)準(zhǔn)確地選擇毛茶中間原料以進(jìn)一步穩(wěn)定成品六堡茶的品質(zhì)。

隨著人們生活水平的提高和飲食方式的改變，糖尿病的患病率日益增長(zhǎng)且有年輕化趨勢(shì)（楊玉潔等，2021）?？寡趸瘎┦悄懿东@并中和自由基，從而保護(hù)人體免受自由基損害的一類物質(zhì)（張澤生等，2017），能增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力，是預(yù)防和治療糖尿病及其并發(fā)癥的常用物質(zhì)。隨著生活中誘發(fā)自由基產(chǎn)生的輻射增多以及人類對(duì)健康越來(lái)越重視，抗氧化劑已成為食品以及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。然而，目前常用的抗氧化劑多為西藥，有較多毒副作用，并且不能有效地控制并發(fā)癥（龔艷振等，2012）。人們更青睞可長(zhǎng)期食用、毒副作用小的天然抗氧化劑，選擇茶產(chǎn)品時(shí)，除了注重口感外，人們也會(huì)更多關(guān)注它在抗氧化、降血糖方面的保健功效。因此，開發(fā)抗氧化、降血糖活性更好的六堡茶產(chǎn)品具有廣闊的市場(chǎng)前景。

茶多酚（黃烷醇類、黃酮類、花青素、酚酸）、茶多糖是茶葉中重要的活性成分，不僅具有抗氧化、降血糖、護(hù)肝等保健功效，還可以調(diào)節(jié)茶湯的口感，是決定茶葉品質(zhì)的關(guān)鍵性物質(zhì)基礎(chǔ)（劉小玲等，2012；宋林珍等，2018；馬婉君等，2020；劉淑文等，2022）。茶葉中的活性成分通常是通過(guò)煮茶或泡茶的方式被人體所吸收利用，其茶湯中浸出物含量的多少反映出茶湯的厚薄、滋味的強(qiáng)弱程度，在一定程度上還可以反映其品質(zhì)的優(yōu)劣（劉小玲等，2012）。因此，測(cè)定毛茶水浸出物含量及水浸出物中活性成分的含量對(duì)毛茶的品質(zhì)研究具有重要意義。

盡管已有較多有關(guān)六堡茶方面的研究報(bào)道，但主要集中于六堡茶成品茶活性成分（陳小強(qiáng)等，2008；林小珊等，2019；張均偉等，2019）、香氣成分（溫立香等，2021）、加工工藝（黎敏等，2021）和生物活性（葉穎等，2019；龔受基等，2020）等方面，而對(duì)六堡茶中間原料毛茶的相關(guān)研究較少報(bào)道。周偉勤等（2013）對(duì)不同季節(jié)的六堡茶原料茶樹品種（六堡群體種、桂青種、云南大葉種）鮮葉中的茶多酚、水浸出物、兒茶素含量進(jìn)行了測(cè)定，并對(duì)其毛茶進(jìn)行感官（外形、湯色、香氣、滋味、葉底）評(píng)價(jià)，結(jié)果表明六堡群體種更適制六堡茶，而該文獻(xiàn)卻未涉及毛茶中活性成分的比較分析，并且采用的茶樹品種較少。林國(guó)軒等（2012）報(bào)道了9個(gè)品種不同季節(jié)茶鮮葉的活性及營(yíng)養(yǎng)成分含量，結(jié)果表明茶多酚含量高的茶樹品種適制六堡茶，雖然該文獻(xiàn)采用的茶樹品種較多，但未涉及毛茶中活性成分的比較分析。劉小玲等（2012）對(duì)7種六堡茶及單一產(chǎn)地（柳州）六堡毛茶制備的水浸出物、總多酚、總黃酮、總游離氨基酸等含量進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果表明毛茶水浸出物含量、總多酚、總黃酮含量均比六堡茶成品茶高，但該文獻(xiàn)所用毛茶的茶樹品種不詳且未涉及不同茶樹品種之間活性成分的比較分析。黃敏周等（2020）對(duì)不同干燥工藝的毛茶品質(zhì)進(jìn)行感官評(píng)價(jià)，結(jié)果表明最佳的工藝為萎凋棚下晾曬4 h輔助鼓風(fēng)工藝。由此可見，已有的關(guān)于毛茶的研究?jī)H側(cè)重于感官品質(zhì)和生化成分的含量水平方面。然而，從其保健價(jià)值角度來(lái)看，由于缺少對(duì)不同品種毛茶的活性成分及其抗氧化、降血糖活性比較的研究，因此無(wú)法科學(xué)判斷不同品種毛茶的保健價(jià)值及成分和活性之間的相關(guān)性。“七分靠原料，三分靠工藝”，這說(shuō)明毛茶原料抗氧化、降血糖活性與六堡茶產(chǎn)品的保健價(jià)值具有密切關(guān)系。

本研究以制作六堡茶常用的主要茶樹品種（六堡群體種、桂青種、宛田種、云南大葉種）以及桂紅4號(hào)、黃金茶、福云6號(hào)茶樹品種制備的毛茶為對(duì)象，測(cè)定毛茶水浸出物及其浸膏中活性成分的含量和體外抗氧化、降血糖活性，并利用Pearson 進(jìn)行相關(guān)性分析，確定各成分與活性之間的相關(guān)性，從活性成分含量、體外抗氧化以及降血糖活性3個(gè)方面綜合考慮，優(yōu)選出品質(zhì)較好的毛茶原料品種，以期為開發(fā)抗氧化、降血糖活性更好的六堡茶產(chǎn)品在毛茶原料篩選和加工方式選擇方面提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料和試劑

鮮茶葉來(lái)自樹齡為6 a的7個(gè)茶樹品種，于2021年4月采自廣西壯族自治區(qū)茶葉科學(xué)研究所茶園，并統(tǒng)一按一芽三葉標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行采摘。7個(gè)茶樹品種分別為黃金茶（L1）、六堡群體種（L2）、桂紅4號(hào)（L3）、福云6號(hào)（L4）、宛田種（L5）、云南大葉種（L6）、桂青種（L7）。

蘆?。兌取?8%，合肥博美生物科技有限責(zé)任公司），沒(méi)食子酸、水溶性維生素E（Trolox）、維生素C（VC）（純度≥98%，上海士鋒生物科技有限公司），α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶（美國(guó)sigma公司），福林酚（FC）試劑、亞硝酸鈉、九水合硝酸鋁、氫氧化鈉、95%乙醇、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、2，2′-偶氮二異丁基脒二鹽酸（ABAP）、熒光素鈉、對(duì)硝基苯基-α-D-吡喃半乳糖苷（PNPG）均為分析純，試驗(yàn)用水為實(shí)驗(yàn)室自制超純水。

1.2 儀器和設(shè)備

電子天平（沈陽(yáng)龍騰電子有限公司），T6紫外-可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司），XS205分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司），RIOS 8超純水系統(tǒng)（美國(guó)Millipore公司），移液器（美國(guó)Thermo Fisher公司），TD5A-WS低速離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司），HH-S4恒溫水浴鍋（上海況勝實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司），N1100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海艾朗儀器有限公司），Tecan Spark多功能酶標(biāo)儀（上海帝肯貿(mào)易有限公司），BCD-213D11D雙門冰箱（廣東容聲電器股份有限公司），MJ-系列霉菌培養(yǎng)箱（上海一恒科技有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 六堡茶毛茶及其水浸出物的制備 參考黃敏周等（2020）的六堡茶毛茶制作工藝，將鮮葉先在萎凋棚下晾曬4 h，再經(jīng)滾筒殺青、揉捻后以提香機(jī)70 ℃烘至茶樣足夠干，即得六堡茶毛茶。將毛茶進(jìn)一步粉碎后密封置于-20 ℃保存，備用。

按GB/T 8305—2013（中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)，2013）的方法對(duì)毛茶水浸出物進(jìn)行提取，所得提取液分裝后置于-20 ℃保存，待用。

1.3.2 六堡茶毛茶水浸出物含量的測(cè)定 按GB/T 8305—2013（中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)，2013）的方法對(duì)六堡茶毛茶水浸出物含量進(jìn)行測(cè)定，茶葉中水浸出物含量以干態(tài)質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）表示。

1.3.3 六堡茶毛茶水浸出物浸膏中總多酚含量的測(cè)定

參考GB/T 8313—2018（中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)，2018）中的福林-酚法，并稍作改進(jìn)。取毛茶水浸出物提取液0.2 mL進(jìn)行測(cè)定，加水補(bǔ)足至6 mL，隨后分別加入FC試劑0.5 mL，混勻，10 min后加入1.5 mL 20% Na2CO3溶液，充分混合后加水定容至25 mL，30 ℃避光反應(yīng)30 min。以水為空白對(duì)照，在760 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度A。以沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，水浸出物浸膏中總多酚含量以干態(tài)質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）表示，按式（1）計(jì)算。

總多酚含量（%）=水浸出物提取液中總多酚（g）/水浸出物浸膏質(zhì)量（g）×100（1）

1.3.4 六堡茶毛茶水浸出物浸膏中總黃酮含量的測(cè)定 參考羅磊等（2016）的硝酸鋁比色法，并稍作改進(jìn)。取毛茶水浸出物提取液1.0 mL進(jìn)行測(cè)定，用50%乙醇補(bǔ)足至10.0 mL。加入5%的亞硝酸鈉溶液1.0 mL，混勻，10 min后再加入17.6%的九水硝酸鋁溶液1.0 mL，搖勻，放置10 min，加入4%的氫氧化鈉溶液10.0 mL，用50%乙醇定容至刻度，搖勻，放置30 min，同時(shí)做試劑空白，于510 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度A。以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，水浸出物浸膏中總黃酮含量以干態(tài)質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）表示，按式（2）計(jì)算。

總黃酮含量（%）=水浸出物提取液中總黃酮質(zhì)量（g）/水浸出物浸膏質(zhì)量（g）×100（2）

1.3.5 六堡茶毛茶水浸出物浸膏中茶多糖含量的測(cè)定

參照GB/T 40632—2021（中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)，2021）中的苯酚-濃硫酸比色法進(jìn)行茶多糖含量測(cè)定。

1.3.6 體外抗氧化、降血糖活性的測(cè)定

1.3.6.1 DPPH自由基清除能力 參考李明楊等（2022）的方法，并稍作改進(jìn)。將毛茶水浸出物稀釋成合適的系列濃度的待測(cè)樣品。分別精密量取1.0 mL待測(cè)樣品與2.0 mL 95%乙醇、1.0 mL 0.12 mg·mL-1 DPPH溶液混合搖勻，于室溫下避光靜置反應(yīng)20 min，作為樣品組。以4.0 mL 95%乙醇為調(diào)零組，以相同體積的95%乙醇代替DPPH溶液為樣品本底組，空白組為3.0 mL 95%乙醇和1.0 mL DPPH溶液，在517 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。以VC為陽(yáng)性對(duì)照物（濃度梯度為5、10、15、20、25 μg·mL-1），清除率按式（3）計(jì)算。

清除率（%）=［1-（T-T0）/C］×100（3）

式中：T表示樣品組的吸光度; T0表示樣品本底組的吸光度; C表示空白組的吸光度。

毛茶水浸出物對(duì) DPPH自由基的清除能力以半數(shù)清除濃度IC50 表示，IC50值越小說(shuō)明清除自由基的能力越強(qiáng)（呂平和潘思軼，2020）。

1.3.6.2 氧自由基吸收能力（oxygen radical absorbance capacity，ORAC） 參照Wen等（2016）的方法測(cè)定水浸出物樣品的ORAC值，并表示為每克水浸出物浸膏（干重）的Trolox當(dāng)量（μmol TE·g-1）。ORAC值越大說(shuō)明毛茶水浸出物的氧自由基吸收能力越強(qiáng)，其抗氧化活性越高。

1.3.6.3 α-葡萄糖苷酶抑制活性 按Pan等（2020）的方法，測(cè)定毛茶水浸出物對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制活性。抑制50%的酶活所需要的樣品質(zhì)量濃度用IC50值表示（μg·mL-1），IC50值越小說(shuō)明對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制能力越強(qiáng)。

1.3.6.4 α-淀粉酶抑制活性 參考柳梅等（2017）的DNS法，并稍作改進(jìn)。將不同濃度的樣品溶液（1.0 mL）和1 U·mL-1 α-淀粉酶（1.0 mL）混合，在37 ℃下孵育10 min，隨后加入1.0 mL 1%可溶性淀粉溶液（已煮沸糊化），在37 ℃下反應(yīng)15 min，取出，經(jīng)高溫滅酶后分別加入1.5 mL DNS，繼續(xù)煮沸8 min。將混合體系定容至25 mL，以水代替α-淀粉酶溶液、1%可溶性淀粉溶液為校零管，于540 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度A1，以無(wú)樣品的反應(yīng)體系為空白對(duì)照，測(cè)定其吸光度A0，阿卡波糖為陽(yáng)性對(duì)照；試劑背景以水校零，以等體積水取代DNS，測(cè)定其吸光度A2。按式（4）計(jì)算抑制率。

α-淀粉酶抑制率（%）=［1-（A1-A2）/（A0-A2）］×100（4）

抑制50%的酶活所需要的樣品質(zhì)量濃度用IC50值表示（μg·mL-1），IC50值越小說(shuō)明對(duì)α-淀粉酶的抑制能力越強(qiáng)。

1.3.7 數(shù)據(jù)處理和分析 每個(gè)試驗(yàn)設(shè)置3個(gè)平行，采用Excel 2019軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，結(jié)果用平均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差（x± s）表示。樣品間各指標(biāo)的差異采用 SPSS 19.0 軟件，利用單因素方差分析（one-way ANOVA）和 Duncan 多重范圍檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異顯著，P>0.05表示無(wú)顯著差異。體外活性試驗(yàn)中的IC50值采用 SPSS 19.0 軟件中的Probit進(jìn)行計(jì)算。采用 Pearson 對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)間的相關(guān)性進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同茶樹品種制備的六堡茶毛茶水浸出物及活性成分含量分析

由圖1可知，7個(gè)不同品種毛茶水浸出物含量變化范圍為（45.18%±0.11%）～（53.42%±0.14%），其中黃金茶的含量最高（53.42%±0.14%），其次是桂紅4號(hào)，福云6號(hào)的最低。水浸出物含量不僅都高于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（全國(guó)茶葉標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)，2016）對(duì)中小葉種綠茶水浸出物的規(guī)定（≥36.0%），而且大于45%，說(shuō)明這些茶樹品種內(nèi)容物豐富，具有較高的耐泡性（紀(jì)鵬彬等，2021），滿足六堡茶耐沖泡特性所需的物質(zhì)基礎(chǔ)。7個(gè)不同品種毛茶水浸出物的總多酚含量在（34.50%±0.22%）～（40.87%±1.09%）之間，其中桂紅4號(hào)的總多酚含量最高（40.87%±1.09%），比桂青種高出6.37%，兩者總多酚含量存在顯著性差異（P<0.05），福云6號(hào)、桂青種的總多酚含量均顯著低于其他品種（P<0.05），表明不同茶樹品種制備的毛茶水浸出物中總多酚含量存在差異，這與蘇秋芹等（2018）的研究結(jié)果基本一致。7個(gè)不同品種毛茶水浸出物的總黃酮含量變化范圍為（16.63%±0.32%）～（27.17%± 0.26%），含量最高的品種為云南大葉種（27.17%± 0.26%），其次為六堡群體種、桂紅4號(hào)，含量最低的品種為桂青種（P<0.05）。7個(gè)不同品種毛茶水浸出物的茶多糖含量分布范圍為（1.76%±0.04%）～（2.70%±0.02%），平均茶多糖含量為（2.23%±0.03%），其中福云6號(hào)的茶多糖含量最高，是云南大葉種的1.5倍，其余品種毛茶水浸出物的茶多糖含量差異也較大（P<0.05）。以上結(jié)果表明不同茶樹品種制備的毛茶水浸出物含量及浸膏中活性成分的含量存在顯著差異（P<0.05）。產(chǎn)生顯著性差異的原因可能與茶樹品種之間遺傳基因的差異有關(guān)（劉淑文等，2022）有關(guān)。

2.2 不同茶樹品種制備的六堡茶毛茶水浸出物抗氧化活性比較

由圖2可知，不同品種毛茶水浸出物對(duì)DPPH自由基的清除能力（IC50）存在顯著性差異（P<0.05），其中對(duì)DPPH自由基的清除能力最強(qiáng)的品種為六堡群體種［（16.73±0.02）μg·mL-1］，其次為桂紅4號(hào)［（17.20±0.25）μg·mL-1］、宛田種 ［（19.51±0.19）μg·mL-1］。由圖3可知，不同品種的ORAC值存在顯著差異（P<0.05）。7個(gè)品種毛茶水浸出物的ORAC值在（5 387.41±39.71）～（6 762.63±50.81）μmol TE·g-1之間，其中桂紅4號(hào)、宛田種、六堡群體種的ORAC值相對(duì)較高。

采用ORAC法與DPPH自由基清除法測(cè)定的7個(gè)品種毛茶水浸出物的抗氧化活性強(qiáng)弱順序不完全一致，這與周金偉等（2014）的研究結(jié)果相似，產(chǎn)生這一結(jié)果的原因可能與這兩種評(píng)價(jià)方法的自由基和作用機(jī)理不同有關(guān)。由于DPPH在溶液中以自由基形態(tài)和正離子態(tài)（DPPH+）存在，因此存在單電子轉(zhuǎn)移和氫轉(zhuǎn)移兩種作用機(jī)制（李鉉軍等，2011）。ORAC法是一種經(jīng)典的氫原子轉(zhuǎn)移反應(yīng)過(guò)程終止自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，具有較高的特異性（續(xù)潔琨等，2006）。不同品種毛茶水浸出物中含有的大分子抗氧化劑含量可能不同，而大分子抗氧化劑由于空間位阻不能與DPPH自由基反應(yīng)（續(xù)潔琨等，2006），因此導(dǎo)致抗氧化效果有偏差。雖然所測(cè)樣品采用ORAC法與DPPH自由基清除法測(cè)定的結(jié)果存在差異，但桂紅4號(hào)、宛田種、六堡群體種水浸出物的ORAC值和DPPH自由基清除能力均較高，說(shuō)明這3個(gè)品種的抗氧化活性優(yōu)于其余品種。

2.3 不同茶樹品種制備的六堡茶毛茶水浸出物體外降血糖活性比較

由圖4可知，7個(gè)品種毛茶水浸出物對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用均顯著強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照阿卡波糖IC50=（606.21±4.30）μg·mL-1， 說(shuō)明這些品種均可作為α-葡萄糖苷酶的天然抑制劑，其中六堡群體種、桂青種、桂紅4號(hào)水浸出物對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制效果更佳，IC50值分別為（9.66±0.11）、（10.87±0.07）、（11.06±0.11） μg·mL-1。福云6號(hào)、宛田種對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用均顯著低于六堡群體種（P<0.05），其余品種對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用差異不大。由圖5可知，部分品種對(duì)α-淀粉酶的抑制作用有顯著差異（P<0.05）。7個(gè)品種毛茶水浸出物對(duì)α-淀粉酶的半數(shù)抑制濃度（IC50）在（89.13±1.07）～（160.15±1.88） μg·mL-1之間，均具有顯著的α-淀粉酶抑制效果，其中六堡群體種、桂紅4號(hào)、桂青種比其他品種有更好的抑制α-淀粉酶活效果。兩種體外降血糖評(píng)價(jià)方法的結(jié)果均顯示六堡群體種、桂紅4號(hào)、桂青種的體外降血糖活性更好。

2.4 不同茶樹品種制備的六堡茶毛茶水浸出物活性成分與體外抗氧化、降血糖活性的相關(guān)性分析

由于樣品活性越強(qiáng)，其IC50值則越小，因此進(jìn)行活性成分與抗氧化、降血糖活性的相關(guān)性分析時(shí)用1/IC50表示樣品活性的強(qiáng)弱。由表1可知，總多酚含量分別與DPPH自由基清除作用和ORAC值呈顯著的正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.751和0.817，表明總多酚含量與體外抗氧化活性有顯著的相關(guān)性?？偠喾雍颗c總黃酮含量呈顯著正相關(guān)（P<0.05），這是因?yàn)辄S酮是多酚的組成成分之一?？偠喾雍颗cα-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶抑制作用有較好的正相關(guān)關(guān)系，總黃酮含量分別與α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶抑制作用有中等強(qiáng)度、顯著正相關(guān)，表明體外降血糖活性與總多酚、總黃酮相關(guān)。DPPH自由基清除作用與ORAC值具有顯著正相關(guān)，表明這兩種抗氧化活性的評(píng)價(jià)方法可以相互佐證。同理，α-葡萄糖苷酶抑制作用與α-淀粉酶抑制作用相關(guān)系數(shù)為0.929（P<0.01），表明這兩種體外降血糖的評(píng)價(jià)方法可以互為輔助參考。而茶多糖含量與體外抗氧化、降血糖活性均沒(méi)有正相關(guān)性，這與余啟明等（2021）和宋林珍等（2018）的研究結(jié)果不同，可能是不同品種之間的茶多糖的分子量、化學(xué)成分、結(jié)構(gòu)和立體構(gòu)象不同從而導(dǎo)致體外降血糖活性不同（宋林珍等，2018），具體影響因素有待進(jìn)一步研究。

3 討論與結(jié)論

7個(gè)品種毛茶水浸出物及其浸膏中總多酚、總黃酮、茶多糖的含量之間存在顯著差異（P<0.05），體外抗氧化、降血糖活性也存在差異。

兩種抗氧化評(píng)價(jià)方法結(jié)果均表明六堡群體種、桂紅4號(hào)、宛田種毛茶水浸出物的抗氧化活性較好，同時(shí)總多酚、總黃酮含量也較高。相關(guān)性分析表明總多酚含量與抗氧化活性有顯著的正相關(guān)，總黃酮含量與抗氧化活性也有較好的正相關(guān)，因此總多酚、總黃酮對(duì)毛茶抗氧化活性的貢獻(xiàn)較大?？偠喾雍颗cα-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶抑制作用有較好的正相關(guān)，總黃酮含量分別與α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶抑制作用有中等強(qiáng)度、顯著正相關(guān)，表明總多酚和總黃酮均具有降血糖活性，同時(shí)兩者可能還具有協(xié)同作用。兩種降血糖評(píng)價(jià)方法結(jié)果均表明六堡群體種、桂紅4號(hào)、桂青種的毛茶水浸出物比其余品種的降血糖活性更好，其中六堡群體種、桂紅4號(hào)毛茶水浸出物的總多酚、總黃酮含量均較高，而桂青種的卻低于其余品種?？赡芘c以下兩個(gè)因素有關(guān)： 潘福璐等 （2020）研究表明茶葉中多酚組分ECG分別與EGCG、GCG兩兩組合對(duì)抑制α-葡萄糖苷酶活性存在協(xié)同作用，且這兩種組合及組合內(nèi)不同含量配比對(duì)α-葡萄糖苷酶活性抑制作用存在差異，因此不同品種毛茶水浸出物中ECG、EGCG、GCG的含量組成差異對(duì)降血糖活性產(chǎn)生影響；茶多糖的單糖組成、分子量、支鏈結(jié)構(gòu)、立體構(gòu)象是影響其降血糖活性的重要因素（楊玉潔等，2021），如糖醛酸能明顯影響多糖的活性，而茶樹品種間的中性糖、糖醛酸含量存在極顯著差異（劉思思，2009），因此不同品種毛茶水浸出物的茶多糖的單糖組成、分子量、支鏈結(jié)構(gòu)和有效結(jié)構(gòu)含量等方面可能不同，從而影響其降血糖活性。桂青種的體外降血糖活性的物質(zhì)基礎(chǔ)及其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，六堡群體種、桂紅4號(hào)、宛田種、桂青種的毛茶品質(zhì)均較好，其中六堡群體種、桂紅4號(hào)同時(shí)具有開發(fā)抗氧化、降血糖功能食品的前景，宛田種、桂青種分別具有開發(fā)抗氧化、降血糖功能食品的潛力；總多酚、總黃酮對(duì)毛茶體外抗氧化、降血糖活性均有較大貢獻(xiàn)；總多酚具有一定的熱穩(wěn)定性，但在高濕高溫及強(qiáng)光條件下含量迅速下降（沈生榮，1993）。為得到抗氧化、降血糖活性更好的六堡茶產(chǎn)品，在毛茶進(jìn)一步的加工利用過(guò)程應(yīng)著重注意對(duì)這類成分的保護(hù)，不宜長(zhǎng)時(shí)間使用高溫、強(qiáng)光直射的加工方式。儲(chǔ)存時(shí)應(yīng)密封避光置于干燥陰涼通風(fēng)處或冷藏。總黃酮是總多酚的組成成分之一，因此其保護(hù)方法與總多酚的一致。另外，為保證同一品種茶樹品質(zhì)的穩(wěn)定性，在對(duì)茶樹進(jìn)行異地引種栽培時(shí)，宜選擇地域、土壤、氣候、海拔高度等條件與原產(chǎn)地相近的地理環(huán)境（劉淑文等，2022），同時(shí)還需采用統(tǒng)一的茶葉采摘標(biāo)準(zhǔn)。本研究為開發(fā)抗氧化、降血糖活性更好的六堡茶產(chǎn)品在毛茶原料篩選和加工方式選擇方面提供科學(xué)依據(jù)。

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（責(zé)任編輯 蔣巧媛 王登惠）

收稿日期：? 2022-12-18

基金項(xiàng)目：? 廣西科技重大專項(xiàng)（桂科AA20302018-10）; 廣西植物功能物質(zhì)與資源持續(xù)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室主任基金（ZRJJ2022-7，ZRJJ2020-3，ZRJJ2018-2）; 廣西植物研究所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目（桂植業(yè)21004，桂植業(yè)22001）; 廣西科學(xué)院基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目（CQZ-C-1901）; 桂林市創(chuàng)新平臺(tái)和人才計(jì)劃項(xiàng)目（20210102-3，20220124-13）。

第一作者： 霍華珍（1993-），碩士，助理研究員，研究方向?yàn)橹参镔Y源開發(fā)與利用，（E-mail）hhz5951@foxmail.com。

*通信作者：? 蔡愛華，副研究員，研究方向?yàn)橹参镔Y源開發(fā)與利用，（E-mail）356542930@qq.com。