上皮性卵巢癌組織鋅指蛋白反義鏈1和Notch1表達(dá)對(duì)患者預(yù)后的評(píng)估價(jià)值

［摘要］目的探討上皮性卵巢癌（EOC）組織長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNA）鋅指蛋白反義鏈1（ZFAS1）、Notch1的表達(dá)水平對(duì)患者預(yù)后的評(píng)估價(jià)值。方法選取本院2018年1月～2020年1月收治的96例EOC患者為EOC組，將同期卵巢良性腫瘤患者96例作為對(duì)照組。使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測(cè)定所有研究者卵巢組織中ZFAS1、Notch1的表達(dá)水平；ROC曲線評(píng)估ZFAS1、Notch1診斷EOC的價(jià)值，并分析ZFAS1、Notch1表達(dá)與EOC患者臨床病理特征的關(guān)系；使用Kaplan-Meier法繪制EOC患者生存曲線；使用多因素Cox回歸分析EOC患者預(yù)后的影響因素。結(jié)果EOC組組織中ZFAS1、Notch1表達(dá)水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；ZFAS1單獨(dú)診斷EOC曲線下面積為0.861（95%CI：0.803～0.919），截?cái)嘀禐?.59，靈敏度為77.1%，特異度為69.8%；Notch1單獨(dú)診斷EOC的曲線下面積為0.913（95%CI：0.870～0.955），截?cái)嘀禐?.54，靈敏度為79.2%，特異度為76.1%；ZFAS1表達(dá)與EOC患者的FIGO分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分級(jí)有關(guān)（P＜0.05）；Notch1表達(dá)與EOC患者的FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分級(jí)有關(guān)（P＜0.05）；ZFAS1高表達(dá)患者（ZFAS1≥1.59）的3年累積生存率低于低表達(dá)患者（ZFAS1＜1.59），Notch1高表達(dá)患者（Notch1≥1.54）的3年累積生存率低于低表達(dá)患者（Notch1＜1.54），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；多因素Cox回歸模型分析表明，F(xiàn)IGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ZFAS1、Notch1是影響EOC患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。結(jié)論EOC患者癌組織中ZFAS1、Notch1表達(dá)水平升高，且ZFAS1、Notch1高表達(dá)的EOC患者生存期短，兩者有望成為預(yù)測(cè)EOC預(yù)后的有效生物學(xué)標(biāo)志物。

［關(guān)鍵詞］上皮性卵巢癌；長(zhǎng)鏈非編碼RNA；鋅指蛋白反義鏈1；Notch1；預(yù)后

doi：10.3969/j.issn.1674-7593.2023.04.013

ThePrognosticValueofZFAS1andNotch1ExpressioninEpithelialOvarianCancer

LiXiaokun1，ZhangXingxing1，F(xiàn)engJie1，DengZhenquan2，JiWenhua3，ShangSushuang1，XieXiuming4

1theFirstGynecologyDepartment，HandanFirstHospital，Handan056002;2theSecondOncologyDepartment，HandanFirstHospital，Handan056002;3theObstetricsDepartment，HandanFirstHospital，Handan056002;4theOperationDepartment，HandanFirstHospital，Handan056002

［Abstract］ObjectiveToassesstheprognosticsignificanceoftheexpressionlevelsoftwospecificlongnon-codingRNA（lncRNA），namelyzincfingerproteinantisensechain1（ZFAS1）andNotch1，inepithelialovariancarcinoma（EOC）tissue.MethodsAtotalof96patientsdiagnosedwithEOCandadmittedtoHandanFirstHospitalbetweenJanuary2018andJanuary2020wereincludedintheEOCgroup.Inparallel，another96patientswithbenignovariantumorsduringthesameperiodwereselectedasthecontrolgroup.TheexpressionlevelsofZFAS1andNotch1，werequantifiedusingreal-timefluorescencequantitativepolymerasechainreaction（qRT-PCR）.Receiveroperatingcharacteristic（ROC）curveanalysiswasperformedtoassessthediagnosticvalueofZFAS1andNotch1inEOC.Furthermore，therelationshipbetweentheexpressionofZFAS1andNotch1andvariousclinicopathologicfeatureswasexamined.SurvivalanalysiswasconductedusingtheKaplan-Meiermethod，andmultivariateCoxregressionwasemployedtoanalyzeprognosticfactors.ResultsTheexpressionlevelsofZFAS1andNotch1werefoundtobesignificantlyhigherintheEOCgroupcomparedtothecontrolgroup（Plt;0.05）.ZFAS1alonedemonstratedanareaunderthecurve（AUC）of0.861（95%CI：0.803-0.919）fordiagnosingEOC，withacut-offvalueof1.59，sensitivityof77.1%，andspecificityof69.8%.Similarly，Notch1aloneshowedanAUCof0.913（95%CI：0.870-0.955）fordiagnosingEOC，withacut-offvalueof1.54，sensitivityof79.2%，andspecificityof76.1%.TheexpressionofZFAS1wassignificantlycorrelatedwithFIGOstage，invasiondepth，lymphnodemetastasis，andpathologicalgrade（Plt;0.05），whileNotch1expressionwassignificantlyassociatedwithFIGOstage，lymphnodemetastasis，andpathologicalgrade（Plt;0.05）.PatientswithhighexpressionofZFAS1（ZFAS1≥1.59）andNotch1（Notch1≥1.54）hadsignificantlylower3-yearcumulativesurvivalratescomparedtothosewithlowexpression（Plt;0.05）.Furthermore，multivariateCoxregressionanalysisrevealedthatFIGOstage，lymphnodemetastasis，ZFAS1，andNotch1wereindependentriskfactorsfortheprognosisofEOCpatients（Plt;0.05）.ConclusionTheexpressionlevelsofZFAS1andNotch1werefoundtobesignificantlyupregulatedinthecanceroustissueofEOCpatients，andtheirincreasedexpressionwasassociatedwithashortersurvivalperiodinEOCpatients.ThesefindingssuggestthatZFAS1andNotch1havepotentialasbiomarkersforpredictingtheprognosisofEOC.

［Keywords］Epithelialovariancancer;Longnon-codingRNA;Zincfingerproteinantisensechain1;Notch1;Prognosis

長(zhǎng)鏈非編碼RNA（Longnon-codingRNA，lncRNA）是一類長(zhǎng)度大于200個(gè)核苷酸的非編碼RNA，雖然它沒(méi)有潛在的蛋白質(zhì)翻譯能力，但在多種生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮作用，如細(xì)胞分化、表觀遺傳調(diào)節(jié)、細(xì)胞周期控制、選擇性剪接等［1-2］。鋅指蛋白反義鏈1（Zincfingerproteinantisensechain1，ZFAS1）作為lncRNA家族成員之一，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。Notch1是一種跨膜受體，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、生長(zhǎng)、胚胎發(fā)生、血管生成和轉(zhuǎn)移等過(guò)程［3］。本研究旨在探討EOC癌組織中ZFAS1及Notch1的表達(dá)情況，分析兩者預(yù)測(cè)EOC患者預(yù)后的價(jià)值，為EOC預(yù)后及治療提供依據(jù)。

1對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象

選取2018年1月～2020年1月在我院接受手術(shù)治療的96例EOC患者為研究對(duì)象（EOC組），年齡50～82歲，平均年齡（56.62±4.27）歲。收集整理EOC患者年齡、絕經(jīng)、病理類型、國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（Internationalfederationofgynecologyandobstetrics，F(xiàn)IGO）分期、浸潤(rùn)深度、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分級(jí)等臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合EOC診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］，且術(shù)后病理證實(shí)為EOC；②首發(fā)病患者；③未進(jìn)行過(guò)子宮手術(shù)或放化療者；④臨床及隨訪病理資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤者；②免疫功能嚴(yán)重缺陷者；③肝、腎功能失代償者；④患有嚴(yán)重的心血管疾病者。將同期卵巢良性腫瘤患者96例作為對(duì)照組，年齡50～81歲，平均（55.78±4.33）歲。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)及患者或其家屬同意。

1.2方法

1.2.1ZFAS1、Notch1表達(dá)水平的測(cè)定使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測(cè)定組織中ZFAS1、Notch1表達(dá)水平。采用TRIzol法提取術(shù)中收集的癌組織中的總RNA（Trizol試劑購(gòu)于美國(guó)Invitrogen公司），使用PrimeScriptRTMasterMix合成模板cDNA，然后采用熒光定量PCR儀（美國(guó)ABI公司）進(jìn)行測(cè)定，ZFAS1上游引物5′-CAACTACTAGAGCGCCTCGG-3′，下游引物5′-CTTCCCACGGTCAGAAACGA-3′；Notch1上游引物5′-GATGTTGGCAAGGTAGTCGAT-3′，下游引物5′-GCTCCCTGTGTTCTCATTGAT-3′；U6上游引物5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′，下游引物5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。測(cè)定完成后使用2-ΔΔCt法計(jì)算ZFAS1、Notch1相對(duì)表達(dá)水平，此步驟重復(fù)3次，盡量減少實(shí)驗(yàn)誤差。

1.2.2隨訪通過(guò)電話或門診等方式對(duì)96例EOC患者進(jìn)行3年隨訪，術(shù)后1年，每月1次；術(shù)后2年，每2個(gè)月1次；術(shù)后第3年，每3個(gè)月1次。隨訪截止日期為2023年1月或EOC患者死亡時(shí)間，記錄患者生存時(shí)間和臨床病理特征。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，正態(tài)分布計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用例表示，行χ2檢驗(yàn)；ROC曲線評(píng)價(jià)ZFAS1、Notch1表達(dá)對(duì)EOC的診斷價(jià)值；繪制Kaplan-Meier生存曲線，組間比較采用log-rank檢驗(yàn)；影響EOC患者預(yù)后影響因素采用Cox回歸模型；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組ZFAS1、Notch1表達(dá)水平比較

EOC組組織中ZFAS1、Notch1表達(dá)水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

2.2ZFAS1、Notch1表達(dá)水平對(duì)EOC的診斷效能

ROC曲線顯示，ZFAS1單獨(dú)診斷EOC的曲線下面積為0.861（95%CI：0.803～0.919），截?cái)嘀禐?.59，靈敏度為77.1%，特異度為69.8%；Notch1單獨(dú)診斷EOC的曲線下面積為0.913（95%CI：0.870～0.955），截?cái)嘀禐?.54，靈敏度為79.2%，特異度為76.1%，見(jiàn)圖1。

2.3ZFAS1、Notch1表達(dá)與EOC患者臨床病理特征關(guān)系

以ZFAS1=1.59及Notch1=1.54為臨界值進(jìn)行分組，ZFAS1≥1.59者為高表達(dá)組（74例），＜1.59者為低表達(dá)組（22例）；Notch1≥1.54者為高表達(dá)組（76例），＜1.54者為低表達(dá)組（20例）。ZFAS1表達(dá)與EOC患者FIGO分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分級(jí)有關(guān)（P＜0.05）；Notch1表達(dá)與EOC患者FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分級(jí)有關(guān)（P＜0.05），見(jiàn)表2。

2.4不同ZFAS1、Notch1表達(dá)水平與EOC患者預(yù)后的關(guān)系

在隨訪結(jié)束后，96例EOC患者中，存活64例，死亡32例，生存率為66.67%（64/96）。ZFAS1高表達(dá)組中EOC患者的3年累積生存率（59.46%）低于低表達(dá)組（90.91%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.997，P＜0.05）；Notch1高表達(dá)組患者的3年累積生存率（60.53%）低于低表達(dá)組（90.90%）差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.906，P＜0.05），見(jiàn)圖2、圖3。

2.5EOC患者預(yù)后影響因素的Cox回歸分析

將EOC患者預(yù)后作為因變量（生存=0，死亡=1），以EOC患者FIGO分期（Ⅰ、Ⅱ期=0，Ⅲ、Ⅳ期=1）、浸潤(rùn)深度（淺層=0，深層=1）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（無(wú)=0，有=1）、病理分級(jí)（高、中分化=0，低分化=1）、ZFAS1（實(shí)測(cè)值）、Notch1（實(shí)測(cè)值）為自變量進(jìn)行多因素Cox回歸分析。結(jié)果表明，F(xiàn)IGO分期Ⅲ、Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ZFAS1、Notch1是影響EOC患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05），見(jiàn)表3。

3討論

EOC是我國(guó)婦科死亡率較高的惡性腫瘤之一，EOC侵襲性強(qiáng)，易發(fā)生遠(yuǎn)處擴(kuò)散和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，是導(dǎo)致EOC預(yù)后差的主要原因［5］。近年來(lái)，雖然手術(shù)、放化療和綜合治療改善了EOC患者的長(zhǎng)期生存時(shí)間，但大部分患者在被確診時(shí)已為晚期［6］。因此，探索新的腫瘤預(yù)后相關(guān)基因，有利于為EOC的分子治療提供新的靶點(diǎn)，提高診治的特異度，避免不良預(yù)后的發(fā)生。

lncRNA作為人類疾病的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，主要以基因印跡、染色體重塑、翻譯和降解mRNA等途徑發(fā)揮作用［7］。ZFAS1位于20q13.13區(qū)域，是由鋅指NFX1反義端轉(zhuǎn)錄的新型lncRNA［8］。近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)，ZFAS1在肝癌組織中呈高表達(dá)，敲減ZFAS1將通過(guò)促進(jìn)miR-588表達(dá)來(lái)下調(diào)HMGA2表達(dá)，從而抑制肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移［9］。ZFAS1在胃癌細(xì)胞系中高表達(dá)，可作為胃癌診斷的生物標(biāo)志物［10］。本研究結(jié)果顯示，與卵巢癌良性腫瘤組織相比，ZFAS1在EOC組織中表達(dá)上調(diào)，且ZFAS1表達(dá)與EOC患者FIGO分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分級(jí)有關(guān)，與楊曄等研究結(jié)果相似，提示ZFAS1在EOC發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮一定作用［11］。可能是由于上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-mesenchymaltransition，EMT）在多種腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過(guò)程中存在，ZFAS1通過(guò)促進(jìn)EMT過(guò)程，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移，但ZFAS1促進(jìn)EMT過(guò)程尚不明確。

Notch1是一種眾所周知的調(diào)節(jié)因子，在大多數(shù)惡性腫瘤中起致癌基因作用［12］。Notch1主要在淋巴細(xì)胞、造血干細(xì)胞等細(xì)胞表面分布，并在造血干細(xì)胞的自我更新過(guò)程中發(fā)揮作用。Notch1突變或過(guò)度激活可能引起T淋巴細(xì)胞異常［13］。研究發(fā)現(xiàn)，Notch1在胃癌組織中高表達(dá)，并與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，在胃癌組織中，敲減Notch1可阻滯細(xì)胞周期、減少癌細(xì)胞的增殖、遷移［14］。本研究結(jié)果顯示，與卵巢良性腫瘤組織相比，Notch1在EOC癌組織中表達(dá)上調(diào)，且Notch1表達(dá)與EOC患者FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分級(jí)有關(guān)，提示Notch1高表達(dá)可促進(jìn)EOC的進(jìn)展，本研究結(jié)果與吳曉蕊等研究結(jié)果相似［15］。提示Notch1在EOC中發(fā)揮致癌基因作用，其作用機(jī)制可能是由于Notch1通過(guò)激活多條腫瘤相關(guān)信號(hào)通路，促進(jìn)癌細(xì)胞EMT，從而促進(jìn)EOC的惡性進(jìn)展。

ROC結(jié)果提示，ZFAS1和Notch1在預(yù)測(cè)EOC的發(fā)生上存在一定價(jià)值。進(jìn)一步分析顯示，ZFAS1和Notch1高表達(dá)組患者的3年累積生存率均顯著低于低表達(dá)組，表明ZFAS1和Notch1表達(dá)水平對(duì)EOC患者生存時(shí)間有影響。多因素Cox回歸模型分析結(jié)果提示，ZFAS1、Notch1是影響EOC患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，由此可見(jiàn)，ZFAS1和Notch1可作為預(yù)測(cè)EOC患者生存狀況的潛在生物標(biāo)志物。

由于本研究為單中心研究，且ZFAS1、Notch1的臨界值尚無(wú)確切范圍，后續(xù)仍需大量樣本及多中心研究來(lái)進(jìn)一步驗(yàn)證ZFAS1、Notch1對(duì)EOC患者預(yù)后評(píng)估的臨床價(jià)值。

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（2023-04-15收稿）