• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    黑核桃組培中消毒及防止褐化最適濃度分析

    2023-07-13 03:56:02徐彩芹??←?/span>牛建新王建友
    新疆農(nóng)業(yè)科學(xué) 2023年6期
    關(guān)鍵詞:褐化化劑莖段

    付 強(qiáng),王 琴,徐彩芹,牛俊麗,牛建新,王建友

    (1.石河子大學(xué)農(nóng)學(xué)院,新疆石河子 832003;2.新疆林業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)林研究所,烏魯木齊 830063;3.新疆林業(yè)科學(xué)院,烏魯木齊 830063)

    0 引 言

    【研究意義】美國黑核桃(Juglansnigra)屬核桃科(Juglandaceae)核桃屬(JuglansL.)黑核桃種,原產(chǎn)北美洲。目前已栽培的樹種包括北加州黑核桃、魁核桃、小果黑核桃及奇異核桃等,在我國新疆、河南、山東、吉林、陜西等地均有種植[1],黑核桃果實(shí)營養(yǎng)豐富、風(fēng)味濃厚,木材結(jié)構(gòu)細(xì)膩、加工性能優(yōu)良,抗逆能力強(qiáng)[2]。核桃的繁殖方式主要為實(shí)生、嫁接以及扦插,黑核桃主要采用實(shí)生繁殖,秋播萌發(fā)率可達(dá)90%,但常規(guī)方法繁殖黑核桃,繁殖速度慢,種苗昂貴,用種量大,且易發(fā)生遺傳變異,不能保持品種優(yōu)良性狀,影響黑核桃的推廣進(jìn)程[3]?!厩叭搜芯窟M(jìn)展】Ricardo等[4]為改進(jìn)核桃微繁殖現(xiàn)有方法,基因型是影響核桃微繁殖整體成功的主要因素,FeEDDHA和PG組合使用可顯著提高馴化過程中試管苗生根率和植株存活率;Stevens[5]記錄了meta-topolin (MT)對所有核桃品種(尤其是黑核桃)的培養(yǎng)和苗伸長的益處;Tuan等[6]從胚軸開始誘導(dǎo),成功進(jìn)行離體生根,固體培養(yǎng)基的芽增值效果優(yōu)于液體培養(yǎng)基;Kourosh等[7]以山核桃莖段為外植體,經(jīng)過低溫處理,成功誘導(dǎo)生根并獲得完整植株。劉淑蘭等[8]最早開始核桃組培的研究,以葉柄、莖尖等作為外植體誘導(dǎo)出了愈傷組織;袁巧平等[9]以成年樹的嫩梢為外植體,誘導(dǎo)形成不定芽,經(jīng)過生根處理獲得了完整植株;湯浩茹等[10]以幼胚和子葉成功誘導(dǎo)了體細(xì)胞胚并萌發(fā)成苗;王清民等[11]以成年樹幼嫩莖段為外植體,用兩步誘導(dǎo)生根法分析核桃試管苗扦插生根。Tarinejad等[12]以黑核桃為材料,在培養(yǎng)基中添加抗生素,混合添加12.5 mg/L慶大霉素和100 mg/L萬古霉素可以有效控制污染。宋鋒惠等[13]以黑核桃的莖段為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)莖段內(nèi)含菌較多,污染率高、易發(fā)生氧化褐變,縮短轉(zhuǎn)瓶周期可減輕褐變現(xiàn)象,獲得無菌外植體是黑核桃組培成敗的關(guān)鍵?!颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前,對于黑核桃種的組織培養(yǎng)研究較少,需研究黑核桃組培中,不同消毒時長和抗褐化劑配比對污染和褐化的影響?!緮M解決的關(guān)鍵問題】篩選出消毒的最佳時長和最適抗褐化劑濃度,研究外植體褐化過程中細(xì)胞結(jié)構(gòu)的變化,為建立穩(wěn)定高效的黑核桃植株再生體系和核桃快速繁殖及工廠化育苗提供理論基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 材 料

    材料于2021年4~5月采集自新疆林業(yè)科學(xué)院珍稀樹木園,以10~15 a黑核桃當(dāng)年萌發(fā)的葉片和帶腋芽或頂芽的幼嫩莖段為外植體。

    基本培養(yǎng)基為DKW培養(yǎng)基,培養(yǎng)室內(nèi)溫度為(25±2)℃,光照強(qiáng)度1 800 lx,光照時間∶暗時間=14 h∶10 h,pH值5.8~6.2。

    1.2 方 法

    1.2.1 外植體消毒

    葉片在流水中反復(fù)沖洗,在超凈工作臺上用70%酒精消毒10s后,無菌蒸餾水沖洗2次。用0.1%HgCl2分別消毒4、5、6、7 min(A1、A2、A3、A4),將葉片切成1 cm×1 cm的大小,葉面向上接種在DKW+30 g/L蔗糖+8 g/L瓊脂培養(yǎng)基中。

    莖段在流水中沖洗4~6 h,軟毛刷輕刷整個枝條,刷洗掉表面灰塵。將其剪成1.5~2 cm的帶1~2個腋芽的莖段,在超凈工作臺上用70%酒精消毒30 s后,無菌蒸餾水沖洗2次,以0.1%HgCl2加少量吐溫80為消毒劑,共設(shè)置6個處理,其中單次消毒時間分別8、10、12 min(B1、B2、B3),二次消毒時間分別4、5、6 min(B4、B5、B6)。接種在DKW+30 g/L蔗糖+8 g/L瓊脂培養(yǎng)基中。每個處理設(shè)3個重復(fù),3周后統(tǒng)計(jì)污染率、褐化率。

    污染率(%)=(污染的外植體數(shù)/接種的外植體數(shù))×100%;

    褐化率(%)=(褐化的外植體數(shù)/接種的外植體數(shù))×100%;

    萌發(fā)率(%)=( 萌發(fā)的外植體數(shù)/接種的外植體數(shù)) ×100 %。

    1.2.2 抗褐化劑不同濃度配比對褐化率影響

    以AC、PVP、VC 3種抗褐化劑,按照L9(34)正交表進(jìn)行3因素3水平試驗(yàn)處理(C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9)。每個處理設(shè)3個重復(fù),3周后統(tǒng)計(jì)褐化率、萌發(fā)率。表1

    1.2.3 褐化外植體細(xì)胞切片觀察

    分別取新鮮外植體和接種后5、10、15、25、30、40 d的外植體,制作徒手切片,顯微鏡下觀察其在組織培養(yǎng)過程中細(xì)胞結(jié)構(gòu)的變化。

    1.3 數(shù)據(jù)處理

    采用Excel 統(tǒng)計(jì)處理數(shù)據(jù),利用SPSS 21.0 對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和差異顯著性檢驗(yàn)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同消毒時間對污染的影響

    研究表明,隨著消毒時間的增加,污染率下降,褐化率上升。0.1%HgCl2消毒4 min時,污染率最高,與7 min時相較污染率高14.11%;消毒7 min褐化率最高,比4 min時高23.95%。消毒5 min和6 min的污染率無顯著差異,由于在HgCl2中消毒時間較長,6 min時的褐化率比5 min高11%。葉片表面消毒處理2效果最好,即0.1%HgCl2中消毒5 min。表2

    表2 不同消毒時間下葉片污染率和褐化率變化

    不同消毒時長對莖段的污染率及褐化率影響顯著。隨著消毒時間的增加,污染率下降,褐化率急劇上升,消毒12 min時污染率最低為14.29%,褐化率最高可達(dá)57.14%。HgCl2對植物有一定的毒害作用,長時間浸泡在HgCl2中消毒會引起外植體褐化死亡,不同的消毒方式對消毒結(jié)果差異顯著,處理3和處理6相比,二次消毒可使褐化率下降30.47%。莖段表面消毒以處理5效果最好,即用二次消毒法0.1%HgCl2+吐溫80消毒5 min。圖1,表3

    注:A.接種5 d后的外植體;B.腋芽萌動的外植體;C.腋芽萌發(fā)的外植體;D.褐化死亡的外植體

    表3 不同消毒時間下莖段污染率和褐化率變化

    2.2 不同抗褐化劑對褐化率和萌發(fā)率的影響

    研究表明,不同抗褐化劑配比對外植體的褐化率和萌發(fā)率影響顯著。9個處理中褐化率最高的為處理4,56.67%的外植體發(fā)生了褐化。萌發(fā)率最高的抗褐化劑為AC 1 g/L、PVP 70 mg/L、VC 50 mg/L。添加AC 2 g/L、PVP 110 mg/L、VC 100 mg/L的褐化率和萌發(fā)率都最低,褐化率比處理4降低了35%,萌發(fā)率比處理1降低了18.33%。添加了高濃度AC的處理,腋芽的萌發(fā)率較低,最低僅有26.67%,且萌發(fā)時間較晚,生長較慢。表4

    表4 抗褐化劑不同濃度配比下褐化率和萌發(fā)率變化

    褐化率KAC1RVC>RPVP,3種抗褐化劑對褐化率的影響主次順序是AC>VC>PVP,即AC對褐化率影響最大,其次VC,PVP影響較小,AC 1 g/L、PVP 110 mg/L、VC 100 mg/L為抑制褐化的最優(yōu)水平組合,黑核桃莖段抑制褐化的最佳抗褐化劑濃度為AC 1 g/L、PVP 110 mg/L、VC 100 mg/L。

    萌發(fā)率KAC1RPVP>RVC,3種抗褐化劑對萌發(fā)率的影響主次順序是AC>PVP>VC,即AC對萌發(fā)率的影響最大,其次是PVP,VC影響較小,AC 1 g/L、PVP90 mg/L、VC 50 mg/L為萌發(fā)的最優(yōu)水平組合,黑核桃莖段萌發(fā)率最佳的抗褐化劑配比為AC 1 g/L、PVP 90 mg/L、VC 50 mg/L。

    抗褐化劑最優(yōu)的水平組合為AC 1 g/L、PVP 110 mg/L、VC 100 mg/L。表5

    表5 極差分析

    2.3 外植體細(xì)胞切片的觀察

    研究表明,不同褐化時期的帶芽莖段細(xì)胞結(jié)構(gòu)差異較大。0 d為未出現(xiàn)褐化的健康外植體,細(xì)胞顏色淡綠,質(zhì)地通透,邊緣較為圓潤。5 d時的外植體開始出現(xiàn)褐化,變?yōu)辄S綠色,細(xì)胞比健康外植體較小,細(xì)胞中開始有褐色物質(zhì)出現(xiàn)。10 d時的外植體切片與5 d時的切片無明顯差異,細(xì)胞變?yōu)榈S色,細(xì)胞中的褐色物質(zhì)出現(xiàn)更多。15 d時褐化現(xiàn)象明顯,細(xì)胞切片中的褐色物質(zhì)出現(xiàn)更多,褐色物質(zhì)集中地方的細(xì)胞破裂,胞液外流,細(xì)胞邊界模糊。25 d時褐化現(xiàn)象嚴(yán)重,細(xì)胞中的褐色物質(zhì)增多,開始向其他細(xì)胞間隙擴(kuò)散,細(xì)胞逐漸失去活性。30 d時切片完全變?yōu)楹稚?褐色物質(zhì)已經(jīng)充滿細(xì)胞間。40 d時切片顏色變?yōu)楹谏?外植體已完全褐化死亡。圖2

    圖2 褐化外植體細(xì)胞切片

    3 討 論

    組織培養(yǎng)中通常會以幼嫩組織作為外植體[14],獲得無菌外植體是建立離體快繁體系的基礎(chǔ)。李穎等[15]在培養(yǎng)基中添加多菌靈和青霉素來控制污染,發(fā)現(xiàn)多菌靈能夠有效消滅真菌,青霉素在初代培養(yǎng)時能抑制細(xì)菌作用。鄭小琴等[16]研究發(fā)現(xiàn)隨著滅菌時間延長,污染率遞減,但褐化率上升。試驗(yàn)中以0.1%HgCl2為消毒劑,設(shè)計(jì)了不同時間梯度,葉片0.1%HgCl2消毒5 min效果最好,莖段采用二步消毒法,0.1%HgCl2加吐溫80消毒5 min效果最好。當(dāng)葉片消毒6 min時,污染率無顯著變化,褐化率卻顯著增加,隨著消毒時間的增加,污染率下降,與鄭小琴等[16]研究結(jié)果相同。外植體傷口處長時間接觸HgCl2,細(xì)胞被破壞,酚類物質(zhì)增多,褐化率增加。不同外植體采用的消毒劑種類及消毒時長受外植體的類型、大小等因素影響[17]。消毒時間過短會,消毒不徹底;消毒時間過長,又損傷外植體,增加褐化率,造成植體死亡。

    褐化是核桃屬的植物較難進(jìn)行組織培養(yǎng)的重要原因,核桃屬植物的酚類物質(zhì)含量較多,外植體易發(fā)生褐化[18-19]。組織培養(yǎng)中褐化主要受外植體的類型、生理狀況、植物種類、基因型等因素的影響[20]。多酚氧化酶與酚類物質(zhì)作用產(chǎn)生褐化現(xiàn)象[21],在梨[22]、葡萄[23]等多種植物中都已得到證明。王娟等[24]發(fā)現(xiàn)酚類物質(zhì)氧化過程中,許多酶的活性是受光誘導(dǎo)的,前期暗培養(yǎng)對防止褐化有較好的效果;章鐵等[25]發(fā)現(xiàn)縮短轉(zhuǎn)瓶周期可減少莖段傷口附近的酚類物質(zhì)。J.I.Mir等[26]研究多個核桃品種,發(fā)現(xiàn)VC濃度為350 mg/L時的抗褐化效果最好,CA為350 mg/L的條件下不定芽數(shù)量最多。生產(chǎn)中多在培養(yǎng)基添加吸附劑和抗氧化劑來減少褐化,常用的抗褐化劑包括AC、PVP、VC、Na2S2O3、AgNO3等[27]。試驗(yàn)結(jié)果顯示,抗褐化劑的最適濃度為AC 1 g/L、PVP 110 mg/L、VC 100 mg/L,由于試驗(yàn)樹種不同,VC的最適濃度比J.I. Mir等[26]的試驗(yàn)結(jié)果較低。觀察褐化外植體的切片,發(fā)現(xiàn)隨著褐化程度的加深,細(xì)胞中出現(xiàn)大量褐色物質(zhì)。關(guān)于控制污染及褐化,獲得無菌外植體的試驗(yàn),有待進(jìn)一步研究。

    4 結(jié) 論

    以黑核桃葉片為外植體時,70%酒精消毒10s后,0.1%HgCl2消毒5 min效果最好。以莖段為外植體時,70%酒精消毒30s后,以二次消毒法,0.1%HgCl2加吐溫80消毒5 min,效果最好。當(dāng)AC、PVP、VC組合使用時,AC 1 g/L、PVP 110 mg/L、VC 100 mg/L的抑制褐化效果最好。隨著褐化程度加深,細(xì)胞中有大量褐色物質(zhì)積累并逐漸破裂、失活、死亡。

    猜你喜歡
    褐化化劑莖段
    湖泊褐化敏感性及其生態(tài)狀況評估問題研究
    火龍果愈傷組織誘導(dǎo)及再生體系研究
    梨矮化砧木‘中矮1號’離體培養(yǎng)中褐化現(xiàn)象的抑制研究
    鈉鹽微膠囊制備及其阻化性能研究
    煤礦安全(2022年9期)2022-09-16 07:25:44
    多功能環(huán)保型土壤膜化劑對紅松移栽苗生長的影響
    ‘洛陽紅’牡丹腋芽培養(yǎng)過程中褐化的防止技術(shù)研究
    園藝與種苗(2021年8期)2021-09-23 03:55:30
    不同激素對甘草帶芽莖段誘導(dǎo)叢生芽的影響
    不同處理對牡丹葉柄離體培養(yǎng)時褐化的影響
    綠色科技(2021年11期)2021-07-01 13:59:48
    Attitudes, knowledge levels and behaviors of lslamic religious officials about organ donation in Turkey:National survey study
    石灰水浸泡不同部位莖段對木薯苗生長的影響
    種子(2019年4期)2019-05-28 02:04:10
    欧美zozozo另类| 日韩国内少妇激情av| 日韩大尺度精品在线看网址| 国产在视频线在精品| 色av中文字幕| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 中文字幕久久专区| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 九色国产91popny在线| 国产精品一区二区免费欧美| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 少妇的逼水好多| 老司机深夜福利视频在线观看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 免费av不卡在线播放| 欧美日本视频| 精品福利观看| 欧美三级亚洲精品| 国产精品一区二区性色av| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 午夜福利在线在线| 亚洲美女黄片视频| 人人妻人人澡欧美一区二区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 深夜精品福利| 亚洲av美国av| 精品乱码久久久久久99久播| 国国产精品蜜臀av免费| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲精品久久国产高清桃花| 久久九九热精品免费| 日韩 亚洲 欧美在线| 久久99热6这里只有精品| 亚洲精品456在线播放app | 久久久久久九九精品二区国产| 日韩欧美国产一区二区入口| 国产一区二区三区av在线 | 美女被艹到高潮喷水动态| 在线播放无遮挡| 亚洲最大成人中文| 婷婷亚洲欧美| 免费av不卡在线播放| 国产精品一区二区性色av| 国产高清视频在线播放一区| 久久人人精品亚洲av| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 88av欧美| 亚洲性夜色夜夜综合| 欧美成人a在线观看| 麻豆成人午夜福利视频| 男人狂女人下面高潮的视频| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲在线观看片| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 看免费成人av毛片| 九九在线视频观看精品| ponron亚洲| 成人三级黄色视频| 男女下面进入的视频免费午夜| 99久久中文字幕三级久久日本| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产精品女同一区二区软件 | 可以在线观看毛片的网站| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 午夜免费成人在线视频| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 99热只有精品国产| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 观看美女的网站| 嫁个100分男人电影在线观看| xxxwww97欧美| 高清在线国产一区| 少妇的逼水好多| 国产毛片a区久久久久| av天堂中文字幕网| 一进一出抽搐gif免费好疼| 日韩欧美精品v在线| 美女黄网站色视频| 久久久久久国产a免费观看| 我要搜黄色片| 免费搜索国产男女视频| 男插女下体视频免费在线播放| 久久精品国产亚洲网站| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 99热精品在线国产| 婷婷亚洲欧美| 成人毛片a级毛片在线播放| 欧美日韩精品成人综合77777| 欧美黑人欧美精品刺激| 露出奶头的视频| 国内精品宾馆在线| 欧美丝袜亚洲另类 | 欧美bdsm另类| 少妇的逼好多水| 国产伦在线观看视频一区| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 麻豆av噜噜一区二区三区| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 免费av不卡在线播放| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 日本 av在线| 亚洲精品粉嫩美女一区| 日韩av在线大香蕉| 国产精华一区二区三区| 国产视频内射| 观看免费一级毛片| 亚洲,欧美,日韩| 三级国产精品欧美在线观看| 婷婷色综合大香蕉| 国产亚洲91精品色在线| 天美传媒精品一区二区| 最后的刺客免费高清国语| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产综合懂色| 欧美人与善性xxx| 三级国产精品欧美在线观看| 国产av在哪里看| 99热网站在线观看| 国产成人福利小说| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 亚洲专区国产一区二区| 国产免费av片在线观看野外av| 最近视频中文字幕2019在线8| 久久久成人免费电影| 性欧美人与动物交配| 真人做人爱边吃奶动态| 午夜视频国产福利| 亚洲成人久久性| 欧美黑人欧美精品刺激| 欧美在线一区亚洲| 午夜激情福利司机影院| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲午夜理论影院| 亚洲成人久久性| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 国产精品久久久久久久久免| 看黄色毛片网站| 日本黄大片高清| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 国产精品,欧美在线| 18禁在线播放成人免费| 国产成人aa在线观看| 一本精品99久久精品77| 亚洲最大成人中文| 久久欧美精品欧美久久欧美| 99热网站在线观看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 国内精品久久久久久久电影| 日韩欧美国产在线观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 国产成人福利小说| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产精品久久电影中文字幕| 成人国产综合亚洲| 欧美日本亚洲视频在线播放| 国产一区二区在线av高清观看| www.www免费av| 国产精品伦人一区二区| 少妇的逼水好多| 日韩人妻高清精品专区| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 亚洲欧美日韩高清专用| 精品久久久久久久久久久久久| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 午夜福利18| 国产一区二区在线av高清观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产高清三级在线| 日本成人三级电影网站| eeuss影院久久| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 一本一本综合久久| 老司机午夜福利在线观看视频| 18+在线观看网站| 国产免费一级a男人的天堂| 我的女老师完整版在线观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 很黄的视频免费| 美女被艹到高潮喷水动态| av天堂中文字幕网| 亚洲美女视频黄频| av视频在线观看入口| 久久草成人影院| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产乱人视频| 亚洲内射少妇av| 亚洲欧美日韩高清专用| 乱码一卡2卡4卡精品| 又紧又爽又黄一区二区| 久久亚洲精品不卡| 午夜老司机福利剧场| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 日本成人三级电影网站| 久久99热这里只有精品18| www.www免费av| 日韩欧美国产在线观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 亚洲av免费高清在线观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲欧美清纯卡通| 免费看av在线观看网站| 亚洲无线观看免费| 国产真实伦视频高清在线观看 | 麻豆一二三区av精品| 国产高清视频在线播放一区| АⅤ资源中文在线天堂| 少妇人妻精品综合一区二区 | 国产私拍福利视频在线观看| 久久久久久久精品吃奶| 成人鲁丝片一二三区免费| 亚洲午夜理论影院| 老熟妇仑乱视频hdxx| 有码 亚洲区| 久久午夜亚洲精品久久| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产熟女欧美一区二区| 国产主播在线观看一区二区| 男女之事视频高清在线观看| 99热6这里只有精品| 精品国内亚洲2022精品成人| 全区人妻精品视频| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 中亚洲国语对白在线视频| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 网址你懂的国产日韩在线| 国产不卡一卡二| 色播亚洲综合网| 亚洲国产精品久久男人天堂| 欧美激情国产日韩精品一区| 久久人人精品亚洲av| 两个人视频免费观看高清| 特大巨黑吊av在线直播| 看免费成人av毛片| 精品久久久久久久久亚洲 | 欧美不卡视频在线免费观看| avwww免费| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产美女午夜福利| 国产伦精品一区二区三区四那| av在线观看视频网站免费| 免费看美女性在线毛片视频| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲美女视频黄频| 欧美黑人巨大hd| 国产av一区在线观看免费| 永久网站在线| 男女边吃奶边做爰视频| 久久久国产成人免费| 黄色欧美视频在线观看| 动漫黄色视频在线观看| 麻豆国产97在线/欧美| 欧美色视频一区免费| 亚洲三级黄色毛片| 成年女人看的毛片在线观看| 亚洲熟妇熟女久久| 久久久久九九精品影院| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 日本免费一区二区三区高清不卡| 精品久久国产蜜桃| 免费在线观看成人毛片| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 久久精品国产亚洲av天美| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 免费av毛片视频| 亚洲va在线va天堂va国产| 国产 一区 欧美 日韩| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 男人的好看免费观看在线视频| 国产在线精品亚洲第一网站| 欧美日韩黄片免| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 能在线免费观看的黄片| 欧美激情国产日韩精品一区| 亚洲自拍偷在线| 91久久精品国产一区二区成人| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产一区二区三区视频了| 国产高清视频在线观看网站| 午夜激情欧美在线| 日韩欧美在线乱码| 午夜福利18| 国产黄色小视频在线观看| 亚洲欧美精品综合久久99| 黄色日韩在线| 国产精品一区二区三区四区久久| 欧美色视频一区免费| 91在线观看av| 精品国产三级普通话版| 欧美成人一区二区免费高清观看| 99热这里只有是精品50| 国产高清视频在线播放一区| 最近中文字幕高清免费大全6 | 国产毛片a区久久久久| 国产主播在线观看一区二区| www.www免费av| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 又粗又爽又猛毛片免费看| 一夜夜www| 日本在线视频免费播放| 精品人妻偷拍中文字幕| 最近视频中文字幕2019在线8| 亚洲男人的天堂狠狠| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲最大成人av| 人妻久久中文字幕网| 在线天堂最新版资源| 色综合站精品国产| 男人狂女人下面高潮的视频| 国产精品98久久久久久宅男小说| 亚洲av免费在线观看| 热99re8久久精品国产| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 村上凉子中文字幕在线| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 全区人妻精品视频| 丰满乱子伦码专区| 成人亚洲精品av一区二区| 动漫黄色视频在线观看| 丰满乱子伦码专区| 老司机福利观看| 成年女人看的毛片在线观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 极品教师在线视频| 一区二区三区激情视频| a级毛片a级免费在线| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 欧美日韩黄片免| 在线观看美女被高潮喷水网站| 婷婷六月久久综合丁香| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲美女搞黄在线观看 | 欧美日本亚洲视频在线播放| 嫩草影院入口| 18+在线观看网站| 久久久成人免费电影| 久久久久性生活片| 全区人妻精品视频| or卡值多少钱| 九色国产91popny在线| 国产真实伦视频高清在线观看 | 国产三级中文精品| 亚洲精品久久国产高清桃花| 午夜日韩欧美国产| 日韩精品有码人妻一区| 一进一出抽搐动态| 网址你懂的国产日韩在线| 国产精品日韩av在线免费观看| 精品久久久久久成人av| av在线蜜桃| 免费观看人在逋| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产精品久久视频播放| 国产高清三级在线| 国产精品福利在线免费观看| videossex国产| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产高清激情床上av| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 99久久九九国产精品国产免费| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 别揉我奶头 嗯啊视频| 日本五十路高清| 亚洲精品影视一区二区三区av| av专区在线播放| 成人国产麻豆网| 欧美色欧美亚洲另类二区| 亚洲色图av天堂| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 99久久成人亚洲精品观看| 国产三级在线视频| 69av精品久久久久久| 九九爱精品视频在线观看| 日韩精品中文字幕看吧| 深夜精品福利| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 日韩国内少妇激情av| 亚洲av免费在线观看| 亚洲人成网站在线播| 亚洲av中文av极速乱 | 国产精品久久久久久久电影| 精品免费久久久久久久清纯| 久久久精品大字幕| 色噜噜av男人的天堂激情| 熟女人妻精品中文字幕| 看十八女毛片水多多多| 久久精品影院6| 女的被弄到高潮叫床怎么办 | 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| av福利片在线观看| 欧美性猛交黑人性爽| 国产成人a区在线观看| 少妇被粗大猛烈的视频| bbb黄色大片| 亚洲成人久久性| 天天躁日日操中文字幕| 成人一区二区视频在线观看| 久久精品国产自在天天线| 国产视频内射| 一区二区三区高清视频在线| 色播亚洲综合网| 亚洲性久久影院| 国产成人福利小说| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产av在哪里看| 精品一区二区三区视频在线| 亚洲国产高清在线一区二区三| 69人妻影院| 中国美白少妇内射xxxbb| 变态另类丝袜制服| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 国产精品98久久久久久宅男小说| 免费观看人在逋| 午夜日韩欧美国产| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 欧美黑人巨大hd| 国产精品99久久久久久久久| 99在线人妻在线中文字幕| 国产精品永久免费网站| 婷婷色综合大香蕉| 精品无人区乱码1区二区| 在线观看免费视频日本深夜| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲人成网站高清观看| 久久国产乱子免费精品| 成人av在线播放网站| 小说图片视频综合网站| 欧美日韩乱码在线| 可以在线观看毛片的网站| 深夜精品福利| 亚洲国产精品久久男人天堂| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 热99re8久久精品国产| 身体一侧抽搐| 97热精品久久久久久| 赤兔流量卡办理| 国产av不卡久久| 日韩欧美国产在线观看| 久久精品国产自在天天线| 女人被狂操c到高潮| 日韩人妻高清精品专区| 好男人在线观看高清免费视频| 亚洲自偷自拍三级| 亚洲欧美激情综合另类| 欧美日韩黄片免| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 婷婷亚洲欧美| 欧美成人性av电影在线观看| 欧美日韩国产亚洲二区| 我要看日韩黄色一级片| 日日夜夜操网爽| 久久久成人免费电影| 亚洲av电影不卡..在线观看| 精品久久久久久久久亚洲 | 午夜福利在线在线| 午夜激情福利司机影院| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 久久九九热精品免费| 免费无遮挡裸体视频| 搡老妇女老女人老熟妇| 91在线观看av| 五月玫瑰六月丁香| 老女人水多毛片| 亚洲综合色惰| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 日本色播在线视频| 国产69精品久久久久777片| 国产三级在线视频| 很黄的视频免费| 婷婷精品国产亚洲av在线| 成年人黄色毛片网站| 国产精品久久久久久久电影| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 淫秽高清视频在线观看| 成人欧美大片| 国产av不卡久久| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲成人精品中文字幕电影| 久久精品国产亚洲网站| 老熟妇仑乱视频hdxx| 乱系列少妇在线播放| 22中文网久久字幕| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产精品1区2区在线观看.| 免费人成视频x8x8入口观看| 欧美精品啪啪一区二区三区| 最近中文字幕高清免费大全6 | 最好的美女福利视频网| 男人的好看免费观看在线视频| 网址你懂的国产日韩在线| 欧美zozozo另类| 看免费成人av毛片| 一个人免费在线观看电影| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 岛国在线免费视频观看| 黄色配什么色好看| 久久久久久久精品吃奶| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 99久久无色码亚洲精品果冻| 99久久九九国产精品国产免费| 欧美zozozo另类| 日本熟妇午夜| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲性久久影院| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 日日撸夜夜添| 亚洲男人的天堂狠狠| 最新中文字幕久久久久| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国产伦精品一区二区三区视频9| 国产精品永久免费网站| 成人国产麻豆网| 色尼玛亚洲综合影院| 99久久中文字幕三级久久日本| 真实男女啪啪啪动态图| 91麻豆精品激情在线观看国产| 99久久成人亚洲精品观看| 一进一出好大好爽视频| 久久精品国产鲁丝片午夜精品 | 美女cb高潮喷水在线观看| 欧美区成人在线视频| 国产亚洲精品久久久com| 麻豆久久精品国产亚洲av| 人妻少妇偷人精品九色| 日韩一本色道免费dvd| 久久精品国产亚洲网站| 无遮挡黄片免费观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 欧美高清性xxxxhd video| 黄色女人牲交| 国产在线精品亚洲第一网站| 天堂动漫精品| 波多野结衣巨乳人妻| 欧美性感艳星| 日本熟妇午夜| 天天躁日日操中文字幕| 成人特级黄色片久久久久久久| 久久国内精品自在自线图片| 一进一出抽搐gif免费好疼| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 村上凉子中文字幕在线| 国产v大片淫在线免费观看| 精品国产三级普通话版| 国产在视频线在精品| 国产精品人妻久久久影院| 国产av麻豆久久久久久久| or卡值多少钱| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 亚洲av中文av极速乱 | 亚洲美女黄片视频| 成年免费大片在线观看| 婷婷精品国产亚洲av在线| 成人二区视频| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 国产精品永久免费网站| 88av欧美| 免费一级毛片在线播放高清视频| 色综合站精品国产| 国产成人一区二区在线| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产av不卡久久| 日韩欧美在线乱码| 日本免费a在线| 欧美激情久久久久久爽电影| 免费搜索国产男女视频| 国产精品久久久久久久电影| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲乱码一区二区免费版| 人妻久久中文字幕网| 99热网站在线观看| 国产欧美日韩精品一区二区| 黄色视频,在线免费观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 两人在一起打扑克的视频| 欧美bdsm另类| 国产色爽女视频免费观看| 变态另类丝袜制服| 欧美日本视频| 欧美日韩乱码在线| 欧美最新免费一区二区三区| 最近在线观看免费完整版| 久久欧美精品欧美久久欧美| 色av中文字幕| 亚州av有码| 久久久久久久久中文| av视频在线观看入口| 亚洲中文字幕日韩| 成人av在线播放网站| 亚洲国产精品sss在线观看| 亚洲av不卡在线观看| 亚州av有码| 在线播放无遮挡| 日本 欧美在线| 一区二区三区激情视频| 欧美xxxx性猛交bbbb| 最好的美女福利视频网| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产欧美日韩精品一区二区| 搡老妇女老女人老熟妇|