不同產(chǎn)地加工方法對茲丘木瓜中齊墩果酸和熊果酸含量的影響

焦坤　關(guān)穎　王洪強(qiáng)　呂小翠　向莉

【摘要】目的：考察6種不同產(chǎn)地加工方法對茲丘木瓜藥材中齊墩果酸和熊果酸含量的影響。方法：采用曬干、烘干法處理加工木瓜藥材，用高效液相色譜法，以Rigol-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）為色譜柱，以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（265∶35∶0.1∶0.05）為流動相，流速為1.0 mL/min，檢測波長為210 nm，柱溫為18 ℃，測定趁鮮切制曬干、縱剖兩半曬干、沸水煮后縱切兩半曬干、趁鮮切制烘干、縱剖兩半烘干、沸水煮后縱切兩半烘干處理的木瓜中齊墩果酸和熊果酸的含量。結(jié)果：不同產(chǎn)地加工方法的樣品中齊墩果酸和熊果酸的含量有顯著差異，總含量分別為0.81%、0.45%、0.55%、1.33%、0.84%、1.07%。其中以趁鮮切制烘干的樣品含量最高。結(jié)論：本研究為湖北茲丘木瓜藥材的產(chǎn)地加工方法研究提供了試驗(yàn)依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】木瓜；產(chǎn)地加工；齊墩果酸；熊果酸；高效液相色譜法

【中圖分類號】R284.1【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2023）12-0020-04

Effects of Different Original Processing Methods on the Contents of Oleanolic Acid and

Ursolic Acid in Chaenomeles from ZiqiuJIAO Kun GUAN Ying WANG Hongqiang LV Xiaocui XIANG Li

1.Fuyang Center for food and Drug Control， Fuyang? 236500，China;

2.Changyang? agricultural and rural bureau， Yichang 443500，ChinaAbstract：Objective? To investigate effects of six different original processing methods such as? on the contents of oleanolic acid and ursolic acid in chaenomeles from Ziqiu. Methods High-performance liquid chromatography（HPLC） was performed on a Rigol-C18column （250 mm×4.6 mm，5 μm） was adopted to determinate the contents of oleanolic acid and ursolic acid in chaenomeles from Ziqiu with fresh-cut， cut in half， boiled and cut in half by sun drying and hot air，using the mixture of methanol-water-acetic acid-Thehylamine （89∶11∶0.5∶0.1）as a mobile. The wavelength for detection was s et at 210 nm，while the temperature of column at 18 ℃ and the flow rate of 1.0 mL/min.Results there had a significiant effect on contents of oleanolic acid and ursolic acid in chaenomeles from Ziqiu prepared by different original processing methods，the total contents? of oleanolic acid and ursolic acid were 0.81%，0.45%，0.55%、1.33%，0.84%，1.07%，respectively，while the fresh processing had the most higher contents in six different samples.Conclusion This study provides a basis for original processing methods of chaenomeles from Ziqiu.

Keywords：Chaenomeles；Oleanolic Acid ；Ursolic Acid；Original Processing Methods； HPLC

木瓜為薔薇科植物貼梗海棠Chaenomeles speciosia （Sweet） Nakai的干燥近成熟果實(shí)［1］。木瓜具有舒筋活絡(luò)、化濕和胃之作用，臨床常用于濕痹、腰腿酸痛、筋脈拘攣以及腳氣腫痛。木瓜主產(chǎn)于湖北、四川、安徽、湖南、云南、山東、重慶、浙江等地，其中以湖北茲丘木瓜產(chǎn)量為最大。因生長環(huán)境不同，各地所產(chǎn)的木瓜的品質(zhì)及化學(xué)成分含量存在很大差異。木瓜的產(chǎn)地加工方法也直接影響著藥材的品質(zhì)和化學(xué)成分含量，現(xiàn)今各產(chǎn)地的木瓜主要加工方式有趁鮮切制曬干、縱剖兩半曬干、沸水煮后縱切兩半曬干［1］、趁鮮切制［2-3］烘干、縱剖兩半烘干、沸水煮后縱切兩半烘干。根據(jù)前期調(diào)研，目前木瓜產(chǎn)地加工無技術(shù)指南，存在一定的盲目性和隨意性等問題。有的產(chǎn)區(qū)用藥典方法，有的并未采用藥典方法來加工木瓜藥材，各個產(chǎn)區(qū)加工處理木瓜藥材存在著很大的差異性，亟需一種規(guī)范化的產(chǎn)地加工方法來控制木瓜藥材質(zhì)量。

中藥材產(chǎn)地加工是形成中藥材質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)，產(chǎn)地加工關(guān)乎中藥材質(zhì)量的優(yōu)劣。為了研究不同產(chǎn)地加工方法對木瓜藥材質(zhì)量的影響，更好地控制木瓜產(chǎn)地加工的質(zhì)量，本研究總結(jié)了目前6種常見的木瓜產(chǎn)地加工方法（見表1）。以齊墩果酸和熊果酸為指標(biāo)，考察6種不同產(chǎn)地加工方法對茲丘木瓜藥材中齊墩果酸和熊果酸含量的影響，以期為茲丘木瓜產(chǎn)地規(guī)范化加工研究提供一定試驗(yàn)參考。

1儀器與試藥

1.1儀器Thermo ULtiMate3000 高效液相色譜儀，DAD3000 檢測器，變色龍7.2 軟件工作站，梅特勒XPE205DR 電子天平（ 0.01 mg），E LMA-E100H 超聲清洗儀。

1.2試藥齊墩果酸對照品（批號111522-201310，含量91.1%），熊果酸對照品（批號：111523-201208，含量93.5%）均購自中國食品藥品檢定研究院，甲醇為色譜純（國藥集團(tuán)），水為娃哈哈純凈水，其余試劑為分析純。

試驗(yàn)用木瓜樣品均采自湖北省長陽縣同一木瓜植株（15年樹齡），經(jīng)本中心許世輝主任中藥師鑒定為薔薇科植物貼梗海棠Chaenomeless speciosa （Sweet） Nakai 的近成熟果實(shí)。

2方法與結(jié)果

2.1樣品的加工處理根據(jù)前期產(chǎn)區(qū)調(diào)研及文獻(xiàn)報道，對采集的木瓜通過以下6種方式進(jìn)行產(chǎn)地初加工，樣品編號及處理方法見表1。

2.2齊墩果酸和熊果酸含量的測定

2.2.1色譜條件色譜柱：Rigol-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）。流動相甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（265∶35∶0.1∶0.05）;流速：1.0 mL/min； 柱溫：18 ℃；檢測波長：210 nm；在此色譜條件下，樣品中齊墩果酸和熊果酸的分離度大于1.5。理論板數(shù)按齊墩果酸峰計算應(yīng)不低于4000。結(jié)果如圖1所示。A.對照品；B.供試品;1.齊墩果酸;2.熊果酸

2.2.2對照品溶液的制備取齊墩果酸對照品及熊果酸對照品，分別精密稱定18.25 mg和20.15 mg至100 mL量瓶中，加甲醇制成對照品溶液，作為儲備液。

2.2.3供試品溶液的制備取本品細(xì)粉約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率40 HZ）20 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4線性關(guān)系取齊墩果酸和熊果酸對照品儲備液各1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、10 mL分別至10 mL量瓶中，制成每1 mL含齊墩果酸16.598 μg、33.195 μg、49.793 μg、66.391 μg、82.989 μg、165.977 μg的溶液和每1 mL含熊果酸18.901 μg、37.801 μg、56.702 μg、75.603 μg、94.504 μg、189.007 μg的溶液。各進(jìn)樣2次，每次10 μL，測其峰面積，以峰面積平均值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得齊墩果酸回歸方程：Y=80.111X-0.0019，R2=0.9995。結(jié)果表明齊墩果酸進(jìn)樣量在0.16598～1.65977 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。得熊果酸回歸方程：Y=68.844X+0.0468，R2=0.9995。結(jié)果表明熊果酸進(jìn)樣量在0.18901～1.89007 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.2.5精密度試驗(yàn)吸取齊墩果酸對照品和熊果酸對照品混合溶液10 μL，按2.2.1色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果齊墩果酸峰面積RSD為0.71%（n=6）；結(jié)果熊果酸面積RSD為0.70%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.2.6重復(fù)性試驗(yàn)取編號1樣品6份，分別按供試品溶液制備方法處理，同法測定，樣品中齊墩果酸含量的RSD為2.23%；樣品中熊果酸含量的RSD為2.60%。表明方法的重復(fù)性良好。

2.2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取2.2.3項(xiàng)下的同一供試品溶液，按照2.2.1項(xiàng)下的色譜條件，分別在0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h進(jìn)行分析，結(jié)果齊墩果酸峰和熊果酸的峰面積的RSD分別為2.51%和2.42%。結(jié)果表明，供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8加樣回收率試驗(yàn)取已知含量的編號1的樣品6份，每份取約0.25 g精密稱定，分別按1∶1質(zhì)量水平加入齊墩果酸、熊果酸對照品，按2.2.3項(xiàng)下方法制備并進(jìn)行測定，計算回收率，齊墩果酸平均回收率為98.15%，RSD為2.0%（n=6），熊果酸平均回收率為96.02%，RSD為1.9%（n=6）。結(jié)果表明，本法具有較好的回收率。結(jié)果見表2。

2.2.9樣品測定每個序號的樣品取三份，按2.2.3項(xiàng)下方法制備并進(jìn)行測定，取平均值，樣品以干燥品計算，結(jié)果見表3 。

3討論

目前的木瓜質(zhì)控研究，多以有機(jī)酸［4-7］為主，2020版《中國藥典》一部木瓜項(xiàng)下，以齊墩果酸和熊果酸為定量指標(biāo)來控制木瓜的質(zhì)量。藥理學(xué)研究［8］表明，齊墩果酸具有護(hù)肝、抗癌、抗突變、抗胃潰瘍、抗過氧化和抗血小板聚集等作用；熊果酸具有鎮(zhèn)靜、抗炎、抗菌、降血糖、抗氧化等作用［9］。本研究以熊果酸和齊墩果酸為考察指標(biāo)，對茲丘木瓜的6種不同產(chǎn)地加工方法進(jìn)行了考察，結(jié)果顯示，6種不同產(chǎn)地加工法制備的樣品中齊墩果酸和熊果酸的含量有顯著差異，總含量分別為0.81%、0.45%、0.55%、1.33%、0.84%、1.07%。以趁鮮切制處理的樣品（烘干）中齊墩果酸和熊果酸含量之和最高，縱剖兩半直接曬干的樣品含量之和最低。鮮切飲片［10-13］克服了傳統(tǒng)加工方法的不足，更好地保存了齊墩果酸、熊果酸等藥用成分［2］，有利于保證藥材質(zhì)量。其中沸水中煮后縱剖兩半曬干的樣品（藥典加工方法）含量也顯著高于縱剖兩半直接曬干的樣品，與前期學(xué)者［14］研究得出的結(jié)論較為一致。在濕熱環(huán)境下，木瓜中齊墩果酸和熊果酸含量的提高［15-16］是否與高溫讓活性酶失活或促進(jìn)其它成分轉(zhuǎn)化為齊墩果酸、熊果酸有關(guān)，還有待進(jìn)一步研究。

產(chǎn)地加工是藥材品質(zhì)形成的重要環(huán)節(jié)，其中干燥過程尤為關(guān)鍵［17］。同一操作步驟處理的樣品，干燥方式不同，所得的含量也不同。以木瓜鮮切處理為例，烘干所得的樣品含量為1.33%，曬干所得的樣品含量僅為0.81%，差異較為明顯。從試驗(yàn)結(jié)果來看，自然條件下處理的樣品，受外界影響因素較多，對有效成分可能有一定的影響。在前期的研究過程中，筆者考查了不同烘干溫度對茲丘木瓜質(zhì)量的影響，發(fā)現(xiàn)60 ℃低溫烘干效果較好。低溫烘干則不受天氣條件影響，可迅速干燥藥材，避免藥材有效成分受自然環(huán)境的影響。在有條件的產(chǎn)地，可選擇烘干法，一方面可以提高生產(chǎn)效率，另一方面也能保障藥材加工過程中的質(zhì)量。參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2022-10-08編輯：劉斌）