氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定當歸中35種禁用農(nóng)藥殘留量

吳福祥 李堅 朱仁愿 閆君 陳婷 丁輝 張文

摘要 ?［目的］利用氣相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜（GC-MS/MS）建立同時測定當歸中35種禁用農(nóng)藥殘留量的分析方法。［方法］色譜柱為HP-5MSUI（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；載氣流量1.2 mL/min；進樣量1 μL，不分流進樣；進樣口溫度280 ℃；程序升溫。樣品以乙腈直接提取，采用GC-MS/MS的多反應(yīng)監(jiān)測分析模式，通過基質(zhì)匹配標準溶液降低基質(zhì)干擾，內(nèi)標法定量。［結(jié)果］35種禁用農(nóng)藥在各自濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)均不低于0.985 2，檢出限為0.155 5～7.173 9 μg/kg，定量限為0.513 2～23.673 9 μg/kg，精密度RSD均小于14%（n=6）。平均加樣回收率為83.86%～122.80%，RSD為3.8%～24.6%（n=5）。［結(jié)論］該方法快捷、準確，可用于當歸中禁用農(nóng)藥殘留的定性和定量分析。

關(guān)鍵詞 ?當歸；禁用農(nóng)藥殘留量；氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

中圖分類號 ?S 481+.8 ??文獻標識碼 ?A ??文章編號 ?0517-6611（2023）05-0198-05

doi： 10.3969/j.issn.0517-6611.2023.05.045

開放科學（資源服務(wù)）標識碼（OSID）：

Simultaneous Determination of 35 Banned Pesticide Residues in Angelica sinensis by GC-MS/MS

WU Fu-xiang， LI Jian， ZHU Ren-yuan et al

（Lanzhou Institute for Food and Drug Control/Key Laboratory of Pesticide and Veterinary Drug Monitoring for State Market Regulation /Gansu Engineering Research Center for Monitoring Exogenous Harmful Residues in Traditional Chinese Medicines， Lanzhou，Gansu 730050）

Abstract ?［Objective］ A method for simultaneous determination of 35 banned pesticide residues in Angelica sinensis was established by gas chromatography-tandem mass spectrometry （GC-MS/MS）. ［Method］ Chromatographic column was HP-5MSUI（30 m×0.25 mm，0.25 μm）;gas traffic was 1.2 mL/min;injection volume was 1 μL， no split injection;injection temperature was 280 ℃;the program heats up.The samples were extracted directly with acetonitrile， and the multi-reaction monitoring and analysis mode of GC-MS/MS was used. Matrix interference was reduced by matrix matching standard solution， and the internal standard method was used for quantification. ［Result］ The 35 banned pesticides had good linearity within their respective concentration range， the correlation coefficient was not less than 0.985 2，the limit of detection was 0.155 5-7.173 9 μg/kg， the limit of quantification was 0.513 2-23.673 9 μg/kg， the RSD of precisions were all less than 14%（n=6）， the average recovery rate was 83.86%-122.80%， and the RSDs were 3.8%-24.6%（n=5）. ［Conclusion］ The method is rapid and accurate， and can be used for qualitative and quantitative analysis of banned pesticide residues in Angelica sinensis.

Key words ?Angelica sinensis;Banned pesticide residues;Gas chromatography tandem mass spectrometry （GC-MS/MS）

中醫(yī)藥是我國文明的寶貴遺產(chǎn)，在幾千年的歷史中不斷進步，為人類的健康作出了重大的貢獻。中藥作為中醫(yī)藥體系的核心組成部分，一直以來都受到人們的充分重視。甘肅省是我國中藥材的主產(chǎn)區(qū)之一，素有“千年藥鄉(xiāng)”和“天然藥庫”的美譽，中藥資源十分豐富。據(jù)2019年統(tǒng)計，甘肅省中藥材種植面積31.33萬hm2，產(chǎn)量52萬t，產(chǎn)值超32億元；其中，當歸、板藍根、黨參等道地藥材產(chǎn)量分別占全國市場的95%、65%、60%，種植面積及產(chǎn)量居全國前列［1］。近年來，中藥的質(zhì)量安全問題阻礙了我國中藥產(chǎn)品進入國際市場，主要原因就是農(nóng)藥殘留、重金屬及真菌毒素等外源性污染問題。其中，農(nóng)藥殘留污染主要有3個方面：一是種植過程中，施用農(nóng)藥防治病蟲害，造成農(nóng)藥濫用的直接污染；二是土壤和空氣中殘留的農(nóng)藥造成的間接污染；三是采收加工、儲存運輸過程中造成的污染［2-6］。隨著農(nóng)藥使用范圍和使用量的不斷擴大，農(nóng)藥造成的環(huán)境污染和食品藥品安全問題逐漸暴露，如六六六、殺蟲脒、除草醚、艾氏劑、狄氏劑、苯線磷等農(nóng)藥殘留超標現(xiàn)象時有發(fā)生［7］?；诖?，該試驗采用GC-MS/MS建立同時測定當歸中35種禁用農(nóng)藥的殘留檢測方法，以期為控制當歸質(zhì)量提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 ???儀器。7890B-7000D氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國安捷倫公司）；ME204/02萬分之一電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；AH40全自動均質(zhì)器（廈門睿科集團）；UPU-1-20T超純水機（四川優(yōu)普超純科技公司）；5810R離心機（德國Eppendorf公司）；EVA50A氮吹儀（北京普立泰科儀器有限公司）。

1.1.2 ???試劑。35種農(nóng)藥對照品：甲基對硫磷（G163528，0.1 g，98.2%）、對硫磷（G130512，0.1 g，98.0%）、久效磷（G833027，0.1 g，98.0%）、α-六六六（G130554，0.1 g，98.1%）、β-六六六（G138918，0.1 g，98.6%）、γ-六六六（G129950，0.25 g，98.8%）、δ-六六六（G132134，0.05 g，99.2%）、4，4′-滴滴涕（G12082000，0.1 g，99.5%）、2，4′-滴滴涕（G12081000，0.1 g，99.6%）、4，4′-滴滴伊（G130552，0.1 g，99.7%）、4，4′-滴滴滴（G123407，0.25 g，98.7%）、殺蟲脒（G150101，0.1 g，99.5%）、除草醚（G149884，0.1 g，98.1%）、艾氏劑（G16913910，100 ng/μL）、狄氏劑（H171083CY，100 ng/μL）、苯線磷（C13421000，0.25 g，99.5%）、蠅毒磷（G92054，0.1 g，98.0%）、治螟磷（G108121，0.1 g，98.9%）、特丁硫磷（G158932，0.1 g，97.8%）、甲拌磷（BCBZ5040，0.1 g，95.4%）、甲基異柳磷（G122317，0.05 g，97.5%）、O-內(nèi)吸磷（993046CY，10 ng/μL）、S-內(nèi)吸磷（G1045602，0.1 g，98.3%）、滅線磷（G150818，0.1 g，98.2%）、水胺硫磷（G126442，0.1 g，99.7%）、α-硫丹（G150002，0.1 g，98.1%）、β-硫丹（G139276，0.1 g，99.6%）、硫丹硫酸酯（G1042736，0.1 g，100%）、氟蟲腈（G156586，0.1 g，96.5%）、氟甲腈（13-JQW68-5，0.01 g，98.0%）、氟蟲腈砜（G153662，0.05 g，98.2%）、氟蟲腈亞砜（G141212，0.025 g，99.3%）、o，p′-三氯殺螨醇（219071318，100 ng/μL）、p，p′-三氯殺螨醇（G139873，0.1 g，99.7%），均購自DrEhrenstorfer公司；甲基硫環(huán)磷（S033319，100.5 ng/μL），購自Achemtek公司。內(nèi)標對照品：磷酸三苯酯（G1042718，0.1 g，100%）購自DrEhrenstorfer公司。乙腈為色譜純（德國Merck公司）；氯化鈉、冰醋酸為分析純（國藥集團化學試劑有限公司）；水為超純水（Milli-Q）。

1.1.3 ???試材。23批當歸（Angelica sinensis Radix）均采自甘肅省定西市岷縣種植地，經(jīng)蘭州市食品藥品檢驗檢測研究院吳福祥主任藥師鑒定。

1.2 試驗方法

1.2.1 ???混合對照品溶液的配制。分別稱取35種對照品各10 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，用乙腈稀釋配制成1 mg/mL的對照儲備液，密封儲存于-18 ℃冰箱中。根據(jù)各農(nóng)藥在儀器上的響應(yīng)靈敏度，準確移取一定體積的對照儲備液，置25 mL容量瓶中，用乙腈稀釋配制成質(zhì)量濃度為100～250 μg/L的混合對照品溶液，于4 ℃避光保存。精密量取空白基質(zhì)溶液1.0 mL，平行6份，置氮吹儀上于39 ℃水浴濃縮至約0.4 mL，分別加入混合對照品溶液20、40、100、200、300、400 μL，以乙腈稀釋至1 mL，搖勻即得2～100 μg/L 的6個級別濃度梯度的基質(zhì)匹配混合對照品溶液［8］。

1.2.2 ???內(nèi)標溶液的配制。精密稱取磷酸三苯酯內(nèi)標對照品0.010 44 g，置10 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液9.58 μL，置100 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，即得內(nèi)標溶液。

1.2.3 ???供試品溶液的配制。取供試品粉末（過3號篩）5 g，精密稱定，置50 mL離心管中，加1%冰醋酸水溶液15 mL，陶瓷均質(zhì)子1顆，渦旋2 min，靜置30 min后，加入乙腈50 mL和氯化鈉1 g，立即搖散，12 000 r/min均質(zhì)1 min，3 900 r/min離心10 min后取上清液，沉淀重復上述步驟，合并2次上清液，置氮吹儀上于39 ℃水浴氮吹至盡干，用乙腈復溶并稀釋至5 mL，搖勻，過0.22 μm濾膜。

1.2.4 ???色譜條件。安捷倫HP-5MS UI氣相色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；載氣為氦氣，流量1.2 mL/min；程序升溫：初始溫度80 ℃，保持1 min，以40 ℃/min升至200 ℃，再以2 ℃/min升至230 ℃，最后以25 ℃/min升至320 ℃，保持3 min；進樣量1 μL，進樣口溫度280 ℃，不分流進樣。

1.2.5 ???質(zhì)譜條件。EI離子源，多反應(yīng)監(jiān)測（multiple reaction monitoring，MRM）模式，離子源溫度230 ℃，電子能量70 eV，溶劑延遲3.5 min，碰撞氣（氮氣）流速1.5 mL/min。

1.2.6 ???基質(zhì)效應(yīng)。對比10、25、50、75 μg/L的當歸空白基質(zhì)匹配標液與乙腈配制的標液的儀器響應(yīng)值，以基質(zhì)標樣的響應(yīng)值與溶劑標樣響應(yīng)值的比值計算基質(zhì)效應(yīng)。

1.2.7 ???方法學考察。

1.2.7.1 ???線性關(guān)系考察。取“ 1.2.1 ”項下當歸空白基質(zhì)配制的6個級別梯度的混合對照品溶液進行分析，以質(zhì)量濃度為橫坐標（x）、定量離子對峰面積為縱坐標（y）進行線性回歸計算，繪制標準曲線。

1.2.7.2 ???檢出限和定量限。選取基質(zhì)匹配標準曲線最低濃度的混合對照品溶液進行稀釋后進樣，以3倍信噪比（S/N≥3）和10倍信噪比（S/N≥10）確定檢出限（LOD）和定量限（LOQ）。

1.2.7.3 ???精密度試驗。選取基質(zhì)匹配標準曲線最高濃度的混合對照品溶液連續(xù)進樣6次，以定量離子對峰面積RSD計算精密度。

1.2.7.4 ???加樣回收率試驗。采用加樣回收法，取經(jīng)測定未檢出35種農(nóng)藥的當歸陰性樣品，分3組，精密加入混合對照品溶液適量，考察10、20、100 μg/kg 3個添加水平的加標回收率，每個水平均測定5次，計算RSD。

1.2.8 ???樣品測定。按照“ 1.2.3 ”方法制備23批當歸藥材的供試品溶液，分別精密吸取“ 1.2.1 ”基質(zhì)匹配混合對照溶液和“ 1.2.3 ”供試品溶液各1 mL，精密加入“ 1.2.2 ”內(nèi)標溶液0.3 mL，混勻，濾過，取續(xù)濾液，注入氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，按照“ 1.2.4 ”色譜條件和“ 1.2.5 ”質(zhì)譜條件進行測定，每個樣品測定3次，以內(nèi)標法計算樣品中35種禁用農(nóng)藥的殘留量。

2 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)譜分析參數(shù)

35種禁用農(nóng)藥的質(zhì)譜分析參數(shù)見表1，總離子流圖見圖1。

2.2 基質(zhì)效應(yīng)

從表2可以看出，α-六六六、o，p′-三氯殺螨醇和p，p′-三氯殺螨醇的基質(zhì)效應(yīng)均小于1.0，說明存在基質(zhì)抑制效應(yīng)；δ-六六六和氟蟲腈的基質(zhì)效應(yīng)接近1.0，說明當歸基質(zhì)對這2個農(nóng)藥沒有明顯的抑制或增強效應(yīng)；其他30種農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)均大于1.0，說明存在基質(zhì)增強效應(yīng)。因此，為降低基質(zhì)效應(yīng)的影響，該試驗采用基質(zhì)匹配法配制標準溶液并繪制標準曲線［9］。

2.3 方法學考察

2.3.1 ???線性關(guān)系。按“ 1.2.7.1 ”方法操作，35種禁用農(nóng)藥的線性方程見表3，相關(guān)系數(shù)（r）均不低于0.985 2，表明35種禁用農(nóng)藥在各自的濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2 ???檢出限與定量限。按“ 1.2.7.2 ”方法操作，測得35種禁用農(nóng)藥的檢出限為0.155 5～7.173 9 μg/kg，定量限為0.513 2～23.673 9 μg/kg，具體結(jié)果見表3，表明該方法滿足痕量檢測的要求。

2.3.3 ???精密度。按“ 1.2.7.3 ”方法操作，測得35種禁用農(nóng)藥定量離子對峰面積的RSD為2.2%～13.4%，具體結(jié)果見表3，表明儀器精密度良好。

2.3.4 ???加樣回收率。按“ 1.2.7.4 ”方法操作，計算35種禁用農(nóng)藥的平均加樣回收率為83.86%～122.80%，RSD為3.8%～24.6%，具體結(jié)果見表4，表明該方法回收率良好，可用于當歸中35種禁用農(nóng)藥殘留量的測定。

2.4 樣品測定

按“ 1.2.8 ”方法對23批當歸藥材進行測定，結(jié)果顯示（表5），有10批藥材檢出O-內(nèi)吸磷、治螟磷、α-六六六、β-六六六、氟蟲腈亞砜、對硫磷和甲基異柳磷7種禁用農(nóng)藥。按照《中國藥典》2020版限量標準［10］進行判定，均未超出標準規(guī)定。

3 結(jié)論

該試驗建立了氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時測定當歸中35種禁用農(nóng)藥殘留量的檢測方法，具有前處理簡單、靈敏度高、準確快速的優(yōu)點，同時符合殘留分析的要求，可用于當歸中禁用農(nóng)藥殘留的定性和定量分析。

參考文獻

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［9］ 朱仁愿，劉興國，白雯靜，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定黨參中18種植物生長調(diào)節(jié)劑殘留量［J］.分析試驗室，2020，39（12）：1450-1455．

［10］ ?國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2020年版 四部［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2020：30-31.