異氟醚通過TLR4/JNK信號通路干預(yù)心肌梗死大鼠室性心律失常的作用機(jī)制研究

樊帥帥,宋磊軍,藺 聰

心肌梗死(myocardial infarction,MI)指因冠狀動脈狹窄或堵塞引起的心肌持續(xù)性缺血、缺氧性壞死[1]。心律失常及傳導(dǎo)障礙是心肌梗死的主要病理癥狀,也是導(dǎo)致心肌梗死發(fā)病率及死亡率增加的主要因素之一[2]。減少心肌梗死誘發(fā)的心律失常,對緩解心肌梗死病死率有重要意義。異氟醚是心臟搭橋手術(shù)過程中的常用麻醉劑,研究發(fā)現(xiàn)異氟醚對缺血心肌組織有保護(hù)作用且能降低惡性心律失常病人的病死率[3-5]。因此,異氟醚可能為緩解心肌梗死心律失常的潛在藥物,但其具體作用機(jī)制尚不明確。研究發(fā)現(xiàn),多種炎性因子不僅可造成心肌細(xì)胞炎性損傷,還可影響心肌細(xì)胞動作電位的改變及傳導(dǎo),與心肌梗死后心律失常的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[6]。Toll樣受體4(Toll-like receptor 4,TLR4)及c-Jun N末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)通路是調(diào)控炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵通路,且參與調(diào)控心肌梗死后心肌細(xì)胞L-型鈣電流、細(xì)胞過度攣縮等過程,與心律失常的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[7-8]。本研究建立大鼠心肌梗死模型,從TLR4/JNK信號通路探究異氟醚影響心肌梗死大鼠心律失常的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 動物及細(xì)胞來源 6～7周齡無特定病原體(SPF)級SD大鼠120只,體質(zhì)量180～200 g,購自甘肅中醫(yī)藥大學(xué)[許可證號為:SCXK(甘)2020-0001]。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)醫(yī)院動物護(hù)理和使用委員會(IACUC)批準(zhǔn)(編號:105062)。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器 異氟醚(貨號:JKLN010784a,上海經(jīng)科化學(xué)科技有限公司);蘇木精-伊紅(HE)及Masson染色試劑盒(貨號:AG1120、GMS80012,上海吉至生化科技有限公司、深圳子科生物科技有限公司);四氮唑紅染色法(TTC)染色試劑盒(貨號:YT8005,北京伊塔生物科技有限公司);Fluo-3/AM鈣熒光指示劑(貨號:70-F1243,杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司);磷酸肌酸激酶(CK)試劑盒(貨號:XG-E98764,上海西格生物科技有限公司);磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)試劑盒(貨號:GOY13667,上海谷研實(shí)業(yè)有限公司);乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒(貨號:YS-E8189,上海研生實(shí)業(yè)有限公司);兒茶酚抑素(CST)及超敏C-反應(yīng)蛋白(hs-CRP)等酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)試劑盒(貨號:BS-E11100R1,E02680,江蘇博深生物科技有限公司及上海瓦蘭生物科技有限公司);TLR4、JNK2、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-β(IL-β)、核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、鈣調(diào)蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)等抗體(均購自美國abcam公司,貨號:ab13556,ab76125、ab183218、ab254360、ab220803、ab239882、ab181052);PowerLab數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)購自澳大利亞ADInstruments公司;Langendorff心臟灌流裝置購自濟(jì)南千司生物技術(shù)有限公司;L-420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)購自成都泰盟科技有限公司。

1.2 研究方法

1.2.1 大鼠心肌梗死模型建立及分組給藥 參照文獻(xiàn)[9]中的方法于大鼠左側(cè)第3肋、第4肋間開胸,暴露心臟,結(jié)扎左冠狀動脈前降支建立心肌梗死模型,當(dāng)大鼠左心室心尖變白、心電圖ST段異常抬高或降低,表明造模成功。共造模成功100只大鼠,隨機(jī)分為模型組、異氟醚組、ad-TLR4組、ad-NC組、異氟醚+ad-TLR4組,每組20只。另選取大鼠20只,只暴露心臟,分離左冠狀動脈前降支但不結(jié)扎作為假手術(shù)組。所有大鼠術(shù)后連續(xù)3 d肌肉注射青霉素8×105U防止感染。參照文獻(xiàn)[4]中的方法,異氟醚組用麻醉呼吸機(jī)于術(shù)前30 min及術(shù)后每天給予異氟醚1.0個最低肺泡氣濃度(MAC)吸入(時間為30 min)進(jìn)行干預(yù)處理;ad-TLR4組及ad-NC組于術(shù)前30 min及術(shù)后第3天,經(jīng)尾靜脈注射攜帶TLR4過表達(dá)序列的腺病毒載體溶液(50 μmol/L)及TLR4陰性對照序列的腺病毒載體溶液(50 μmoL/L);異氟醚+ad-TLR4組在異氟醚組基礎(chǔ)上于術(shù)前30 min及術(shù)后第3天經(jīng)尾靜脈注射給予攜帶TLR4過表達(dá)序列的腺病毒載體溶液(50 μmoL/L);假手術(shù)組及模型組于術(shù)前30 min及術(shù)后每天,用麻醉呼吸機(jī)給予等量不含異氟醚的空氣給予輔助呼吸。各組均于術(shù)后第7天給藥結(jié)束進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

1.2.2 血清學(xué)指標(biāo)檢測 各組大鼠于術(shù)后第7天,麻醉取腹主動脈血3 mL,用自動生化分析儀聯(lián)合試劑盒法檢測血清CK、CK-MB、LDH水平,按ELISA試劑盒說明書方法檢測CST、hs-CRP水平。

1.2.3 心電圖參數(shù)及心律失常相關(guān)指標(biāo)檢測 體表心電圖及離體灌流監(jiān)測記錄心電圖參數(shù)及心律失常相關(guān)指標(biāo)。術(shù)后第7天,各組隨機(jī)選取大鼠6只,參照文獻(xiàn)[10]中的方法,通過Ⅱ?qū)?lián)體記錄2 h心電圖變化,并采用PowerLab數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)記錄和分析QT間期、QTC間期、QRS波時限變化。分離心臟、4 ℃改良臺式液中去除殘血,將主動脈套在Langendorff心臟灌流裝置上灌流15 min(8 mL/min灌注流速,37 ℃恒溫,5.86 kPa恒壓,新鮮K-H液+95%氧氣+二氧化碳混合氣體逆行灌流),采用2個鉑金電機(jī)分別連接肺動脈圓錐及心尖部,通過L-420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng),觀察記錄分析心律失常相關(guān)指標(biāo)如單相動作電位時程(APD)復(fù)極至50%(APD 50)時程、90%(APD 90)時程、APD電交替、心室有效不應(yīng)期(ERP)、室性心律失常誘發(fā)率等指標(biāo)變化。

1.2.4 TTC染色法檢測心肌梗死面積 術(shù)后第7天,隨機(jī)選取各組大鼠6只,麻醉處死,取完整心臟,按TTC染色試劑盒說明書方法進(jìn)行染色后,檢測心肌梗死面積(梗死部位為白色)。

1.2.5 HE及Masson染色檢測心肌組織病理變化 麻醉后處死剩余大鼠,取心臟,于冰上去除大血管及周圍組織,取左心室心肌組織分成3部分,一部分于液氮中冷凍后于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆?另一部分置于-80 ℃冰箱保存;剩余部分迅速置于4%多聚甲醛中固定24 h,透明、浸蠟、包埋后切成5 μm切片,取部分切片按HE及Masson試劑盒說明書方法染色后,置于顯微鏡下觀察組織病理變化。

1.2.6 免疫組化法檢測左心室組織TLR4、JNK2陽性表達(dá)水平 取1.2.5剩余切片,脫蠟及抗原修復(fù)后,加入一抗抗體(TLR4、JNK2,1∶200)37 ℃孵育3 h,加入二抗抗體IgG(1∶500)室溫孵育、蘇木精復(fù)染后,于顯微鏡下觀察拍照,并采用Image J軟件分析單位面積內(nèi)陽性表達(dá)的平均光密度值。

1.2.7 Ca2+熒光探針Fluo-3/AM法檢測心肌組織細(xì)胞Ca2+濃度 取液氮中冷凍后-80 ℃冰箱保存的心肌組織標(biāo)本,制成20 μm冷凍切片,按Fluo-3/AM鈣熒光指示劑說明書方法染色后,用激光共聚焦顯微鏡在488～500 nm激發(fā)波長下,觀察心肌組織Ca2+的熒光強(qiáng)度,采用Image-RroPlus 6.0圖像處理系統(tǒng),測定標(biāo)本單位面積內(nèi)熒光強(qiáng)度,以熒光強(qiáng)弱代表心肌組織細(xì)胞內(nèi)Ca2+的水平。

1.2.8 蛋白免疫印跡法(Western Blot)法檢測左心室心肌組織中TNF-α、IL-β、NF-κB、p-NF-κB、CaMKⅡ蛋白表達(dá) 取1.2.5中-80 ℃冰箱保存的左心室心肌組織,4 ℃解凍后取100 mg,加入裂解液勻漿提取蛋白,二喹啉甲酸(BCA)法檢測蛋白濃度,取50 μg蛋白上樣,行電泳、轉(zhuǎn)膜反應(yīng),加入一抗TNF-α、IL-β、NF-κB、p-NF-κB、CaMKⅡ抗體(1∶800)、內(nèi)參β-actin(1∶1 000)抗體,4 ℃孵育過夜,加入羊抗兔辣根過氧化物酶(HRP)二抗(1∶1 500),37 ℃孵育1.5 h,增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法顯色后,用化學(xué)發(fā)光儀顯影曝光,以Image J軟件分析蛋白相對表達(dá)水平。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠一般行為變化比較 假手術(shù)組大鼠無死亡、行為活動正常。模型組、ad-NC組、異氟醚+ad-TLR4組大鼠均有2只死亡,且活動量減少。異氟醚組大鼠無死亡,活動量有所增加。ad-TLR4組大鼠有4只死亡,活動量及飲食進(jìn)一步減少。

2.2 各組大鼠心肌梗死面積比較 與假手術(shù)組比較,模型組大鼠心肌梗死面積增加(P<0.05)。與模型組比較,異氟醚組大鼠心肌梗死面積較少(P<0.05),ad-TLR4組大鼠心肌梗死面積進(jìn)一步增加(P<0.05)。與異氟醚組比較,ad-TLR4組、ad-NC組、異氟醚+ad-TLR4組大鼠心肌梗死面積均增加(P<0.05)。與ad-TLR4組比較,異氟醚+ad-TLR4組、ad-NC組大鼠心肌梗死面積減少(P<0.05)。詳見圖1、表1。

表1 各組大鼠心肌梗死面積比較(±s) 單位:%

圖1 大鼠心肌梗死面積TTC染色圖

2.3 各組大鼠心肌損傷血清標(biāo)志物水平比較 與假手術(shù)組比較,模型組大鼠CK、CK-MB、LDH水平均升高(P<0.05)。與模型組比較,異氟醚組CK、CK-MB、LDH水平均降低(P<0.05);ad-TLR4組CK、CK-MB、LDH水平均進(jìn)一步升高(P<0.05)。與異氟醚組比較,ad-TLR4組、ad-NC組、異氟醚+ad-TLR4組CK、CK-MB、LDH水平均升高(P<0.05)。與ad-TLR4組比較,異氟醚+ad-TLR4組、ad-NC組CK、CK-MB、LDH水平均降低(P<0.05)。詳見表2。

表2 各組大鼠心肌損傷血清標(biāo)志物水平比較(±s) 單位:U/L

2.4 各組大鼠血清CST、hs-CRP水平比較 與假手術(shù)組比較,模型組大鼠血清CST、hs-CRP水平均升高(P<0.05)。與模型組比較,異氟醚組大鼠血清CST、hs-CRP水平均降低(P<0.05);ad-TLR4組大鼠血清CST、hs-CRP水平均進(jìn)一步升高(P<0.05)。與異氟醚組比較,ad-TLR4組、ad-NC組、異氟醚+ad-TLR4組CST、hs-CRP水平均升高(P<0.05)。與ad-TLR4組比較,異氟醚+ad-TLR4組、ad-NC組CST、hs-CRP水平均降低(P<0.05)。詳見表3。

表3 各組大鼠血清CST、hs-CRP水平比較(±s) 單位:pg/mL

2.5 各組大鼠心電圖參數(shù)比較 與假手術(shù)組比較,模型組大鼠心電圖參數(shù)QT間期、QTC間期、QRS波時限均延長(P<0.05)。與模型組比較,異氟醚組大鼠心電圖參數(shù)QT間期、QTC間期、QRS波時限均縮短(P<0.05);ad-TLR4組大鼠心電圖參數(shù)QT間期、QTC間期、QRS波時限均進(jìn)一步延長(P<0.05)。與異氟醚組比較,ad-TLR4組、ad-NC組、異氟醚+ad-TLR4組大鼠心電圖參數(shù)QT間期、QTC間期、QRS波時限均延長(P<0.05)。與ad-TLR4組比較,異氟醚+ad-TLR4組、ad-NC組大鼠心電圖參數(shù)QT間期、QTC間期、QRS波時限均縮短(P<0.05)。詳見表4。

表4 各組大鼠QT間期、QTC間期、QRS波時限變化比較(±s) 單位:ms

2.6 各組大鼠ERP、APD 50、APD 90、APD電交替及室性心律失常誘發(fā)率比較 與假手術(shù)組比較,模型組大鼠ERP、APD 50、APD 90、APD電交替均延長,室性心律失常誘發(fā)率升高(P<0.05)。與模型組比較,異氟醚組大鼠ERP、APD 50、APD 90、APD電交替均縮短,室性心律失常誘發(fā)率降低(P<0.05);ad-TLR4組大鼠ERP、APD 50、APD 90、APD電交替均進(jìn)一步延長,室性心律失常誘發(fā)率進(jìn)一步升高(P<0.05)。與異氟醚組比較,ad-TLR4組、ad-NC組、異氟醚+ad-TLR4組ERP、APD 50、APD 90、APD電交替均延長,室性心律失常誘發(fā)率升高(P<0.05)。與ad-TLR4組比較,異氟醚+ad-TLR4組、ad-NC組ERP、APD 50、APD 90、APD電交替均縮短,室性心律失常誘發(fā)率均降低(P<0.05)。詳見表5。

表5 各組大鼠ERP、APD 50、APD 90、APD電交替及室性心律失常誘發(fā)率比較(±s)

2.7 各組大鼠心肌組織病理變化比較 假手術(shù)組心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常。模型組HE染色可見心肌組織細(xì)胞間隙縮小、纖維組織增生、炎性浸潤明顯;Masson染色可見心肌組織膠原纖維沉積嚴(yán)重。異氟醚組大鼠心肌內(nèi)纖維組織增生、炎性浸潤及膠原沉積等病理損傷緩解明顯。ad-TLR4組大鼠心肌內(nèi)纖維組織增生、炎性浸潤及膠原沉積等病理損傷進(jìn)一步加重。ad-NC組、異氟醚+ad-TLR4組大鼠心肌組織病理變化與模型組相近。詳見圖2。

圖2 各組大鼠心肌HE及Masson染色圖(×200)

2.8 各組大鼠心肌組織Ca2+水平、TLR4及JNK2陽性表達(dá)比較 免疫熒光顯示,假手術(shù)組心肌組織細(xì)胞有少量顯綠色熒光。免疫組化染色顯示,TLR4及JNK2在心肌組織細(xì)胞胞漿中呈弱陽性表達(dá)。與假手術(shù)組比較,模型組大鼠心肌組織細(xì)胞Ca2+水平熒光染色強(qiáng)度、TLR4及JNK2陽性表達(dá)均升高(P<0.05)。與模型組比較,異氟醚組大鼠Ca2+水平熒光染色強(qiáng)度、TLR4及JNK2陽性表達(dá)均降低(P<0.05);ad-TLR4組大鼠Ca2+水平熒光染色強(qiáng)度、TLR4及JNK2陽性表達(dá)均進(jìn)一步升高(P<0.05)。與異氟醚組比較,ad-TLR4組、ad-NC組、異氟醚+ad-TLR4組大鼠心肌組織細(xì)胞Ca2+水平熒光染色強(qiáng)度、TLR4及JNK2陽性表達(dá)均升高(P<0.05)。與ad-TLR4組比較,異氟醚+ad-TLR4組、ad-NC組大鼠心肌組織細(xì)胞Ca2+水平熒光染色強(qiáng)度、TLR4及JNK2陽性表達(dá)均降低(P<0.05)。詳見圖3、表6。

表6 各組大鼠心肌組織Ca2+水平、TLR4及JNK2陽性表達(dá)比較(±s)

圖3 各組大鼠心肌組織Ca2+熒光染色、TLR4及JNK2免疫組化染色圖(×400)

2.9 各組大鼠心肌組織TNF-α、IL-β、NF-κB、p-NF-κB、CaMKⅡ蛋白表達(dá)比較 與假手術(shù)組比較,模型組大鼠TNF-α、IL-β、p-NF-κB/NF-κB、CaMKⅡ蛋白表達(dá)均升高(P<0.05)。與模型組比較,異氟醚組大鼠TNF-α、IL-β、p-NF-κB/NF-κB、CaMKⅡ蛋白表達(dá)降低(P<0.05);ad-TLR4組大鼠TNF-α、IL-β、p-NF-κB/NF-κB、CaMKⅡ蛋白表達(dá)均進(jìn)一步升高(P<0.05)。與異氟醚組比較,ad-TLR4組、ad-NC組、異氟醚+ad-TLR4組TNF-α、IL-β、p-NF-κB/NF-κB、CaMKⅡ蛋白表達(dá)均升高(P<0.05)。與ad-TLR4組比較,異氟醚+ad-TLR4組、ad-NC組TNF-α、IL-β、p-NF-κB/NF-κB、CaMKⅡ蛋白表達(dá)均降低(P<0.05)。詳見圖4、表7。

表7 各組大鼠心肌組織TNF-α、IL-β、p-NF-κB/NF-κB、CaMKⅡ蛋白表達(dá)比較(±s)

圖4 各組心肌組織TNF-α、IL-β、p-NF-κB、NF-κB、CaMKⅡ蛋白表達(dá)條帶圖(A為假手術(shù)組;B為模型組;C為異氟醚組;D為ad-TLR4組;E為異氟醚+ad-TLR4組;F為ad-NC組)

3 討 論

心肌梗死是心血管系統(tǒng)常見疾病,多以冠狀動脈狹窄及堵塞為誘因[11]。本研究結(jié)扎大鼠左心室冠狀動脈前降支,模擬人心肌梗死模型后發(fā)現(xiàn),大鼠出現(xiàn)死亡現(xiàn)象,且心肌損傷標(biāo)志物CK、CK-MB、LDH水平升高及心肌梗死面積增大,心肌組織炎性浸潤及心肌纖維化損傷加重,提示造模成功。心肌梗死一段時間后,可引起心肌細(xì)胞電生理紊亂、代謝紊亂及心律失常的發(fā)生[12]。Wu等[13]研究表明,心律失常是心肌梗死的常見并發(fā)癥,也是導(dǎo)致心肌梗死病人死亡率增加的關(guān)鍵誘因。心電圖及血清學(xué)指標(biāo)是臨床診斷心肌梗死后心律失常的主要方法。Zang等[14]研究顯示,QT間期延長可反映心室復(fù)極延緩,導(dǎo)致心室肌傳導(dǎo)性和自律性改變,引起心室易損期延長,誘發(fā)各種室性心律失常,導(dǎo)致心源性猝死的發(fā)生,且QT間期延長與心肌梗死室性心律失常的發(fā)生密切相關(guān)。魏澗琦等[15-16]研究表明,惡性心律失常的發(fā)生隨CST、hs-CRP水平的升高而升高,CST、hs-CRP可能作為心肌梗死病人心律失常的潛在生物學(xué)指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示,心肌梗死大鼠心電圖參數(shù)QT間期、QTC間期、QRS波時限均延長,血清CST、hs-CRP水平也異常升高,預(yù)示心肌梗死大鼠出現(xiàn)心律失常。異氟醚為手術(shù)中常用麻醉劑,研究證實(shí),其對心肌缺血損傷有一定的保護(hù)作用[17]。臨床研究顯示,異氟醚預(yù)處理可延緩心臟手術(shù)病人QT期延長,延緩心肌梗死病人QT離散性猝死[3,5]。本研究結(jié)果顯示,異氟醚預(yù)處理后,大鼠心肌梗死面積及心肌損傷程度在得到明顯改善的同時,大鼠心電圖參數(shù)QT間期、QTC間期、QRS波時限均縮短,血清CST、hs-CRP水平也明顯降低,提示異氟醚預(yù)處理可明顯緩解心肌梗死大鼠心律失常的發(fā)生。

APD電交替是惡性心律失常的決定性因素[18]。研究顯示,炎性因子與心肌梗死心律失常的發(fā)生密切相關(guān)[6]。TNF-α可使動作電位滯留在平臺期,使APD延長,造成傳導(dǎo)異常及心律失常的發(fā)生[9]。Wang等[19]研究發(fā)現(xiàn),心肌缺血犬左側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)內(nèi)注射IL-β可降低ERP,改變復(fù)極化離散度,誘導(dǎo)室性心律失常的發(fā)生。Liu等[20]研究發(fā)現(xiàn),降低炎性因子IL-β表達(dá),可降低心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度,降低跨膜電位,改善心臟傳導(dǎo)功能,降低室性心律失常的發(fā)生率。本研究發(fā)現(xiàn),大鼠心肌組織中IL-β、TNF-α水平升高的同時,APD延長、ERP升高、心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+升高,提示心肌梗死心律失常發(fā)生可能與炎性因子分泌水平升高有關(guān)。異氟醚預(yù)處理后,大鼠IL-β、TNF-α水平降低,APD縮短,ERP降低,心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+降低,提示異氟醚降低心肌梗死大鼠心律失常的作用,可能與抑制炎性因子水平的升高有關(guān)。

TLR4及JNK通路可調(diào)控炎性因子表達(dá),參與心肌梗死心肌損傷過程,且與心律失常的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。研究表明,TLR4可與髓樣分化蛋白88(MyD88)結(jié)合,激活胞內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,促進(jìn)NF-κB、JNK等多種轉(zhuǎn)導(dǎo)通路表達(dá)參與細(xì)胞凋亡、炎性反應(yīng)等生理過程[21]。蔡文科等[22]研究發(fā)現(xiàn),心肌缺血后,心臟應(yīng)激反應(yīng)可激活TLR4介導(dǎo)NF-κB下游炎性因子如IL-β、TNF-α的釋放,誘導(dǎo)心肌缺血的發(fā)生,且TLR4/NF-κB通路激活還可能與內(nèi)源性Ca2+釋放水平及心肌細(xì)胞收縮力增強(qiáng)、心律失常發(fā)生風(fēng)險增加有關(guān)。Yan等[8]研究發(fā)現(xiàn),JNK激活可硬性影響舒張期細(xì)胞內(nèi)Ca2+活性,調(diào)控CaMKⅡ表達(dá),促進(jìn)心室收縮及心房顫動的發(fā)生而加重心律失常發(fā)生的風(fēng)險。本研究結(jié)果顯示,IL-β、TNF-α水平及Ca2+升高的同時,TLR4、JNK在心肌細(xì)胞胞漿中表達(dá)顯著升高,其下游調(diào)控因子p-NF-κB、CaMKⅡ表達(dá)也顯著升高,進(jìn)一步上調(diào)TLR4表達(dá)后,心肌梗死大鼠死亡、心肌梗死面積及與心律失常有關(guān)的心電圖指標(biāo)及血清學(xué)指標(biāo)均進(jìn)一步升高,APD、ERP升高、心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+等均進(jìn)一步升高,提示上調(diào)TLR4可促進(jìn)心肌梗死大鼠心肌損傷及心律失常的發(fā)生。異氟醚組大鼠出現(xiàn)TLR4、JNK、p-NF-κ-B、CaMKⅡ通路蛋白表達(dá)降低,提示異氟醚降低心肌梗死大鼠心律失常作用,可能與抑制TLR4/JNK通路激活有關(guān)。另外,異氟醚組大鼠心肌梗死面積、死亡及心肌損傷程度,心肌組織中IL-β、TNF-α水平以及APD、ERP和心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+水平較ad-TLR4組和ad-NC組低,且上調(diào)TLR4可逆轉(zhuǎn)異氟醚的上述作用。

綜上所述,異氟醚可能通過抑制TLR4/JNK通路激活,降低炎癥水平及細(xì)胞內(nèi)Ca2+釋放水平,減少心律失常的發(fā)生并緩解心肌梗死大鼠心肌損傷。但心律失常相關(guān)機(jī)制復(fù)雜,涉及多條通路、多個細(xì)胞因子共同調(diào)節(jié),異氟醚降低心肌梗死大鼠心律失常作用的還需繼續(xù)深入研究。