癲癇共患注意缺陷多動障礙患兒外周血DRD2 DAT 基因表達(dá)與焦慮抑郁情緒的關(guān)系

馬 娜 顏曉磊 徐軍茹 王富明

開封市兒童醫(yī)院，河南 開封 475000

癲癇對于兒童影響率為0.5%～1.0%，是最常見的慢性神經(jīng)系統(tǒng)狀況疾病，其致殘性會嚴(yán)重影響兒童的正常生長發(fā)育［1-3］。注意缺陷多動障礙（attention deficit hyperactivity disorder，ADHD）是兒童癲癇的常見共患疾病，包括注意力渙散、發(fā)育遲緩、認(rèn)知功能缺陷及多種心理疾病等［4-7］。目前臨床常用藥物治療，抑制神經(jīng)細(xì)胞膜過度興奮，起到抗癲癇的作用［8-10］。兒童時期的癲癇，主要依靠對患兒臨床癥狀的判斷及焦慮、抑郁相關(guān)心理狀態(tài)量表的評定［11-13］，缺乏客觀的特征性生物學(xué)指標(biāo)，抑郁、焦慮的診斷主要依靠醫(yī)生臨床經(jīng)驗的積累，因此要密切注意其心理狀態(tài)，才能使患兒更好配合治療、疾病轉(zhuǎn)歸［14-15］。有研究報道癲癇共患ADHD的相關(guān)機(jī)制［16-18］，但并未具體分析患兒基因表達(dá)對心理狀態(tài)是否有影響。本研究通過檢測血液生化指標(biāo)基因表達(dá)，證實各項指標(biāo)與癲癇共患ADHD 患兒心理狀態(tài)的關(guān)系，為后續(xù)研究提供思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料納入2018-01—2021-01開封市兒童醫(yī)院收治的74例癲癇患兒為疾病組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合癲癇或ADHD診斷標(biāo)準(zhǔn)［19-20］；（2）近半年內(nèi)未使用抗癲癇藥物及激素類藥物；（3）患兒監(jiān)護(hù)家屬對本研究知情且同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）廣泛性發(fā)育障礙者；（2）內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病等患兒；（3）重要臟器相關(guān)疾病者；（4）無法配合本研究相關(guān)項目檢測的精神障礙患兒。其中37例癲癇患兒共患ADHD為A組，剩余癲癇患兒為B組（37 例）。另選同時段本院接受治療的抽動障礙（tic disorders，TD）患兒為對照組（35例）。見表1。3 組患兒基線資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 3組患兒一般資料比較Table 1 Comparison of general data among the three groups

1.2 方法

1.2.1心理狀態(tài)：采用抑郁自評量表（self-rating depression scale，SDS）和漢密爾頓焦慮量表（Hamilton depression scale，HAMA）評估患兒焦慮、抑郁狀態(tài)［21-22］。評分＜20 分為無焦慮或無抑郁癥狀，21～40 分為輕微抑郁或焦慮情緒，41～59 分為肯定有焦慮或抑郁，60～79分為較明顯焦慮或抑郁，＞81分為可能有嚴(yán)重焦慮；評分≥51 分為界，即SAS、SDS≥51分者界定為焦慮、抑郁，對應(yīng)評分越高表示患者抑郁、焦慮傾向越明顯。

1.2.2DAT和DRD2 基因表達(dá)檢測：晨起、空腹取患兒靜脈血5 mL 置于抗凝管中，并于—4 ℃冰箱儲存?zhèn)溆?。①提取總RNA及反轉(zhuǎn)錄：向樣本中加入Trizol裂解細(xì)胞，再進(jìn)行離心、加入氯仿進(jìn)行萃取、離心，加入異丙醇進(jìn)行沉淀，適量DEPC 水溶解，借助瓊脂糖凝膠電泳和核酸蛋白檢測儀檢測其完整性、純度，并按照試劑盒（中國賽默飛世爾科技有限公司）說明書操作步驟完成cDNA 合成；②目的基因擴(kuò)增：按照試劑盒（中國賽默飛世爾科技有限公司）要求及說明，加入cDNA、水及引物，擴(kuò)增操作選實時檢測擴(kuò)增儀（型號：SimpliAmp?）進(jìn)行，共循環(huán)42次。DAT、DRD2基因定量分析選用內(nèi)參基因△CT 法，其DRD2 引物L(fēng)eft：5’-GGAGGTGGTAGGTGAGTGG-3’，Right：5’-GGAGATGGTGAAGGACAGGA-3’，擴(kuò)增產(chǎn)物大小220 bp；DAT 引物L(fēng)eft：5’-TTCATCATCTACCCGGA AGC-3’，Right：5’-AACAGG-GACAGGAGGAAGGT-3’，擴(kuò)增產(chǎn)物大小215 bp；GAPDH引物L(fēng)eft：5’-GAGTCA ACGGATTTGGTCGT-3’，Right：5’-GACAAGCTTC-CC GTTGTGAG-3’，擴(kuò)增產(chǎn)物大小185 bp。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析用SPSS 17.0 和SigmaStat 3.5 軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料用例（%）表示，用χ2檢驗；計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，以t檢驗、F檢驗驗證組間差異；相關(guān)性選擇Pearson 法；借助多因素Logistic 回歸分析癲癇是否共患ADHD 患兒的影響因素。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3 組患兒心理狀態(tài)比較3 組患兒SDS 評分、HAMA評分有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。見表2。

表2 3組患兒心理狀態(tài)比較 （分，±s）Table 2 Comparison of psychological states among thethree groups （score，±s）

表2 3組患兒心理狀態(tài)比較 （分，±s）Table 2 Comparison of psychological states among thethree groups （score，±s）

注：與對照組相比，aP＜0.05；與疾病B組相比，bP＜0.05

組別疾病A組疾病B組對照組F值P值n 37 37 35 SDS評分54.21±5.05ab 45.62±6.78 42.37±5.07 45.142＜0.001 HAMA評分55.56±5.16ab 47.74±4.63 46.55±4.38 38.915＜0.001

2.2 3 組患兒DAT 和DRD2 基因表達(dá)比較3 組患兒DATmRNA、DRD2 mRNA表達(dá)有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。見表3。

表3 3組患兒DAT、DRD2基因表達(dá)比較 （±s）Table 3 Comparison of DAT and DRD2 gene expression in the three groups （±s）

表3 3組患兒DAT、DRD2基因表達(dá)比較 （±s）Table 3 Comparison of DAT and DRD2 gene expression in the three groups （±s）

注：與對照組相比，aP＜0.05；與疾病B組相比，bP＜0.05

組別疾病A組疾病B組對照組F值P值DRD2 mRNA 0.62±0.04ab 0.55±0.03a 0.25±0.03 679.832＜0.001 n 37 37 35 DAT mRNA 0.57±0.06ab 0.42±0.05a 0.30±0.05 235.594＜0.001

2.3 各項指標(biāo)與外周血DAT、DRD2 基因表達(dá)的相關(guān)性分析Pearson 相關(guān)性分析顯示，外周血DAT、DRD2基因表達(dá)聯(lián)合SDS評分、HAMA 評分均呈正相關(guān)（r=0.439、0.479、0.520、0.516，P＜0.05）。見表4。

表4 各指標(biāo)與外周血DAT、DRD2基因表達(dá)的相關(guān)性分析Table 4 Correlation analysis between each index and the expression of DAT and DRD2 genes in peripheral blood

2.4 癲癇共患ADHD 患兒出現(xiàn)焦慮、抑郁情緒的Logistic 分析將各因素作為自變量，癲癇共患ADHD 患兒出現(xiàn)焦慮、抑郁情緒作為因變量，進(jìn)行Logistic 回歸分析，結(jié)果顯示DAT、DRD2 基因表達(dá)是癲癇共患ADHD 患兒出現(xiàn)焦慮、抑郁情緒的影響因素（P＜0.05）。見表5。

表5 癲癇共患ADHD患兒出現(xiàn)焦慮、抑郁情緒的Logistic分析Table 5 Logistic analysis of anxiety and depression in children with epilepsy combined with ADHD

3 討論

癲癇是多種因素誘發(fā)兒童腦部功能障礙，導(dǎo)致不同程度發(fā)育、認(rèn)知、精神、心理等各方面障礙的一種神經(jīng)系統(tǒng)綜合征［23-25］，而ADHD作為其最易共患的精神類疾病之一，是全世界最常被診斷出的神經(jīng)發(fā)育障礙［26-27］。相關(guān)研究表明ADHD 患兒發(fā)病機(jī)制與神經(jīng)遞質(zhì)DA 功能異常有一定相關(guān)性［28-29］。由于患兒顱腦內(nèi)神經(jīng)元突發(fā)性異常放電，病情反復(fù)，其家屬及社會需要承擔(dān)一定的壓力，癲癇共患ADHD 患兒極易產(chǎn)生焦慮、抑郁、孤獨感等負(fù)面情緒［30-32］。

本研究顯示，疾病A 組患兒SDS 評分、HAMA 評分顯著高于疾病B組和對照組，而疾病B組患兒與對照組患兒的SDS 評分、HAMA 評分無統(tǒng)計學(xué)差異。SDS 和HAMA 評分是臨床上診斷患者是否抑郁、焦慮的重要指標(biāo)［33-34］。在癲癇發(fā)作時，患兒意識可能突然喪失，并伴肌肉強(qiáng)直性收縮、感覺異常等癥狀，導(dǎo)致其精神負(fù)擔(dān)加重，自尊水平下降，治療依從性降低，不利于疾病轉(zhuǎn)歸［35-36］。對照組選取的TD 患兒作為一種心理行為障礙，其不僅表現(xiàn)為抽動，還伴隨多種心理行為問題，導(dǎo)致患兒心理困擾，因而單純癲癇與對照組患兒的心理狀態(tài)無統(tǒng)計學(xué)差異，但共患ADHD 會加重患兒精神負(fù)擔(dān)狀態(tài)，因此心理狀態(tài)更為嚴(yán)重。及時觀察患兒心理狀態(tài)，并有針對性地制定治療方案，可使患兒積極配合各項臨床干預(yù)，規(guī)范進(jìn)行用藥，促進(jìn)臨床干預(yù)效果有效提升，使癲癇發(fā)作得到有效控制，減輕癲癇發(fā)作、不良情緒等。

突觸DA穩(wěn)態(tài)由DAT控制，其含量表達(dá)上調(diào)則會導(dǎo)致更多DA 被重攝取，進(jìn)而出現(xiàn)中樞DA 清除過度的情況，最終導(dǎo)致突觸間隙DA濃度相比之下有下降趨勢［37］。外周血DRD2 是DA 自身受體之一，若體內(nèi)DRD2 mRNA表達(dá)上調(diào)，說明患兒腦組織中均出現(xiàn)不同程度DA 系統(tǒng)功能異常［38］。DA 作為中腦神經(jīng)遞質(zhì)，主要作用是調(diào)節(jié)人體中樞神經(jīng)系統(tǒng)的各種生理功能［39］。當(dāng)腦內(nèi)DA含量不足，會使兒童腦部選擇性過濾無關(guān)刺激，進(jìn)一步使患兒任性沖動、無法集中注意力，最終導(dǎo)致癲癇患兒共患ADHD。本研究中疾病A組患兒DAT、DRD2基因表達(dá)顯著高于疾病B組，而疾病B 組DAT、DRD2 基因表達(dá)高于對照組，表明DAT、DRD2 基因可能是引起癲癇病理改變及患兒心理異常的主要原因，而對照組患兒發(fā)病機(jī)制更為復(fù)雜且偏向于遺傳因素，因而上述基因表達(dá)影響較小。

進(jìn)一步探究血清生化指標(biāo)及其基因表達(dá)的研究價值，結(jié)果顯示外周血DAT、DRD2 基因表達(dá)與SDS和HAMA評分均呈正相關(guān)。癲癇主要由腦神經(jīng)異常放電所致，腦部神經(jīng)細(xì)胞的損傷和凋亡加重癲癇癥狀。上述血清生化標(biāo)志物的其他受體表達(dá)紊亂，可通過特定的環(huán)路阻礙患者神經(jīng)保護(hù)作用，從而使患兒產(chǎn)生不良情緒及神經(jīng)遞質(zhì)相關(guān)代謝障礙。進(jìn)一步Logistic 回歸顯示，DAT、DRD2 基因表達(dá)均可在一定程度上影響癲癇共患ADHD 患兒的焦慮或抑郁狀態(tài)，可能是上述指標(biāo)參與神經(jīng)元再生以及神經(jīng)傳遞。抑郁、焦慮是癲癇病人常伴的心理障礙；神經(jīng)元異常放電是癲癇的病變基礎(chǔ)，而神經(jīng)元異常放電往往與基因的表達(dá)異常有關(guān)［40-42］。

兒童心理狀態(tài)和DAT、DRD2基因表達(dá)與疾病呈正相關(guān)，且聯(lián)合上述指標(biāo)可輔助臨床判定癲癇患兒是否共患ADHD，有一定的應(yīng)用價值。本研究一定程度上解釋了癲癇共患ADHD 患者血清DAT、DRD2基因表達(dá)與心理障礙的關(guān)系，但本研究樣本量較小，且未對癲癇的類型進(jìn)行分層研究，也未進(jìn)行長期隨訪進(jìn)一步觀察，后續(xù)還需要多中心大樣本研究進(jìn)一步驗證本研究結(jié)果。