狗頭赤芍質量標準的提升研究

蔡遠東 薛朝金 李天佑 何羽

【摘 要】 目的：高效液相色譜（HPLC）法同時測定狗頭赤芍中沒食子酸和芍藥苷的含量，為狗頭赤芍質量標準的提升提供依據。方法：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脫，流速為1 mL/min，檢測波長為230 nm，柱溫為30 ℃，進樣量為10 μL。結果：線性和范圍分別為，沒食子酸：Y=22472X+2118.9，r=0.9999（n=5），在4.237～33.884 μg范圍內線性關系良好；芍藥苷：Y=13583X-12485，r=0.9999（n=5）在5.197～41.578 μg范圍內線性關系良好。沒食子酸的平均回收率為99.58%，RSD為1.17%；芍藥苷的平均回收率為99.84%，RSD為0.45%。結論：建立的方法簡便快捷、重復性良好、準確度較高、分離度較好，可用于狗頭赤芍中沒食子酸和芍藥苷的含量測定。

【關鍵詞】 狗頭赤芍；HPLC法；沒食子酸；芍藥苷；質量標準

【中圖分類號】R927.2?? 【文獻標志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2023）02-0016-03

Research on the Improvement of Quality Standard of? Radix Paeoniae Mairei

CAI Yuandong XUE Chaojin* LI Tianyou HE Yu

Bi jie Inspection and Testing Center of Administration for Maeket Superrvision，Bijie 551700， China

Abstract：Objective Simultaneous determination of gallic acid and paeoniflorin in Radix Paeoniae Aairei by high performance liquid chromatography （HPLC），Provide a basis for the improvement of the quality standard of Radix Paeoniae Aairei.Methods? Columns using octadecylsilane-bonded silica as filler，The mobile phase is acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution，gradient elution，The flow rate is 1mL/min，Detection wavelength is 230nm，The column temperature is 30 ℃，The injection volume is 10 μL. Results? Linear and range are，Gallic acid： Y=22472X+2118.9， r=0.9999 （n=5），The linear relationship is good in the range of 4.237～33.884 μg；Paeoniflorin： Y=13583X-12485， r=0.9999 （n=5），The linear relationship is good in the range of 5.197～41.578 μg.The average recovery rate of gallic acid was 99.58%， and the RSD was 1.17%；The average recovery of paeoniflorin was 99.84%， and the RSD was 0.45%.Conclusion? The established method is fast， simple， with good repeatability， high accuracy and good separation.It can be used for the quality control of gallic acid and paeoniflorin in PRadix Paeoniae Aairei.

Keywords：Radix Paeoniae Aairei；HPLC method ；Gallic Acid；Paeoniflorin；Quality Standard

狗頭赤芍為毛茛科植物美麗芍藥Paeonia mairei Lévl.、草芍藥Paeonia obovata Maxim.的干燥根。春、秋二季采挖，除去根莖、須根及雜質，干燥。其功能為活血化瘀，涼血調經。用于瘀滯胸脅疼痛、腹痛、目赤、痛經、經閉、衄血、跌撲損傷［1］。美麗芍藥主要分布于貴州畢節(jié)、威寧等地，草芍藥主要分布在貴州麻江、錦屏、威寧、赫章、水城、遵義等地［2-3］。根據相關報道［4］，狗頭赤芍主要化學成分為芍藥苷、 羥基芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、芍藥內酯苷（白芍苷）、 芍藥新苷、 芍藥苷元酮等。芍藥苷具有保肝、保護神經細胞、保護缺血性的腦損傷及神經損傷的作用，還具有抗抑郁作用、抑制炎癥作用［5］。沒食子酸具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒等活性［6］。狗頭赤芍收載于《貴州省中藥材、民族藥材質量標準》（2003年版），標準只對其粉末進行了顯微鑒別，不能全面反映藥材整體質量。本文采用HPLC法同時測定狗頭赤芍中沒食子酸和芍藥苷的含量，為質量標準的提升提供依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters e2695 高效液相色譜儀，2998二極管陣列檢測器。電子天平：MSE3.6P-OCE-DM，由賽多利斯科學儀器（北京）有限公司生產；電子天平：AY120、BX420H由梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司生產。潔康超聲波清洗機（超聲功率：360 W，超聲頻率：40 KHz）由東莞市潔康超聲波設備有限公司生產。

1.2 試藥 沒食子酸對照品（批號：110831-201602，含量以90.8%計）、芍藥苷對照品（批號：110736-202044，含量以96.8%計）均由中國食品藥品檢定研究院提供。乙腈為色譜純（美國TEDIA天地試劑公司），實驗用水為娃哈哈純凈水，稀乙醇：取乙醇（95%，天津市富宇精細化工有限公司）529 mL，加娃哈哈純凈水稀釋至 1000 mL，即得稀乙醇。

1.3 樣品信息 采集的樣品經貴州省中藥研究所陳德媛老師鑒定，為毛茛科植物草芍藥 Paeonia obovata Maxim。樣品詳見表1。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：COSMOSIL- Packed- Column? 5C18-MS-II 4.6ID×250 mm；流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脫；流速為1 mL/min；檢測波長為230 nm；柱溫為30 ℃；進樣量：10 μL。梯度洗脫程序見表2，色譜圖如圖1，各成分分離度皆大于1.5。

2.2 混合對照品溶液的制備 精密稱取對照品沒食子酸、芍藥苷適量，加稀乙醇制成每1 mL含沒食子酸、芍藥苷分別為0.042 mg、0.052 mg的混合對照品溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取本品適量，粉碎，研細，取約0.5 g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，稱定重量，超聲處理（功率：360 W，頻率：40 KHz）30 min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得［7］。

2.4 線性關系考察 精密量取“2.2”項下的混合對照品溶液1 mL、2 mL、4 mL、6 mL、8 mL，分別置10 mL容量瓶中，加稀乙醇稀釋至刻度。分別精密吸取10 μL，按“2.1”項下的色譜條件測定，每個樣品進樣2次。以對照品濃度（X）為橫坐標，峰面積積分值（Y）為縱坐標進行線性回歸。得到沒食子酸和芍藥苷線性回歸方程、相關系數，結果見表3。

2.5 精密度試驗 取“2.2”項下的混合對照品溶液，按“2.1”項下的色譜條件重復測定5次，分別計算2種成分的峰面積積分值。結果沒食子酸、芍藥苷峰面積的RSD值分別為0.5%、0.6%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復性試驗 取畢節(jié)市赫章縣鐵匠鄉(xiāng)采集的狗頭赤芍藥材，粉碎，研細，取粉末5份，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，每份平行測定2次，按“2.1”項下的色譜條件測定并計算各成分的含量。結果顯示狗頭赤芍中沒食子酸、芍藥苷的平均值分別為0.31%，2.28%；RSD值分別為1.33%、1.84%。表明方法重復性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取畢節(jié)市赫章縣鐵匠鄉(xiāng)采集的狗頭赤芍藥材，粉碎，研細，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，分別在0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h、48 h進樣，按“2.1”項下的色譜條件測定并計算各組分峰面積的RSD值，結果沒食子酸、芍藥苷峰面積的RSD值分別為0.50%、1.60%。說明供試品溶液在48 h內穩(wěn)定性良好。

2.8 加樣回收試驗 取畢節(jié)市赫章縣鐵匠鄉(xiāng)采集的狗頭赤芍藥材，粉碎，研細，稱取粉末6份，每份約0.25 g，加入沒食子酸、芍藥苷濃度分別為0.7258 mg/mL、5.4015 mg/mL的混合對照品溶液1 mL，按“2.3”項下制備供試品溶液，按“2.1”項下測定并計算回收率?；厥章势骄捣謩e為99.58%、99.84%，RSD分別為1.17%、0.45%。結果見表4。

2.9 樣品含量的測定 取不同產地的狗頭赤芍樣品適量，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，每份平行測定2次，按“2.1”項下的色譜條件測定并計算各成分的含量。測定結果見表5。

結果按干燥品計算，樣品中沒食子酸的含量為0.30%～0.47%，平均值為0.4%；芍藥苷的含量為2.28%～3.24%，平均值為2.7%。從含量測定的結果看出，芍藥苷的含量均高于《中國藥典》（2020版）“赤芍”的含量限度1.8%，本品可以作為赤芍的替代品使用。沒食子酸含量較高的樣品，芍藥苷含量也相對較高，如產于畢節(jié)市赫章縣和威寧縣的樣品，含量的高低是否與地域和植物的生長周期有關，還待進一步的研究。

3 討論

本研究分別采用甲醇-0.05 moL／L磷酸二氫鉀溶液和乙腈-0.1％磷酸溶液為流動相，梯度洗脫，結果用甲醇-0.05 mol／L磷酸二氫鉀溶液時，芍藥苷色譜峰拖尾較嚴重，選用乙腈-0.1％磷酸溶液時，目標峰峰形較好，且與相鄰雜質峰達到完全分離，取得了滿意的效果。

采用稀乙醇為溶劑，分別考察了超聲處理15 min、30 min和45 min，結果超聲處理15 min時，樣品含量較低，超聲處理30 min和45 min時樣品含量相差不大，說明超聲處理15 min時，目標成分未提取完全，超聲處理30 min和45 min時目標物提取較完全，為保證充分提取完全和縮短實驗室操作時間，本次研究選擇超聲處理30 min。分別取稀乙醇、甲醇和50%甲醇作為溶劑，超聲處理30 min，結果發(fā)現稀乙醇提取時目標物含量較高，故本研究采用稀乙醇為提取溶劑。

本實驗采用HPLC法分別同時測定了5個不同產地的狗頭赤芍中的沒食子酸和芍藥苷的含量，取得了較為滿意的結果。該方法較為簡便，重復性較好，可用于狗頭赤芍的含量測定及質量評價，為狗頭赤芍質量標準的提升提供方法依據。

參考文獻

［1］貴州省藥品監(jiān)督管理局.貴州省中藥材、民族藥材質量標準2003年版［M］.貴陽：貴州科技出版社，2003：251.

［2］貴州省中藥資源普查辦公室，貴州省中藥研究所.貴州中藥資源［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，1992：670.

［3］何順志，徐文芬.貴州中草藥資源研究［M］.貴陽：貴州科技出版社，2007：275.

［4］徐國鈞，徐珞珊.《常用中藥材品種整理和質量研究》南方協作組第二冊［M］.福州：福建科技出版社，1997：110.

［5］張石凱，曹永兵.赤芍的藥理作用研究進展［J］.藥學實踐雜志，2021，39（2）：97-101.

［6］孫輯凱，張梅娟，張宏蓮，等. UPLC-Q-Trip-MS /MS 法測定赤芍中4 種成分的含量［J］.化學試劑，2021，43（2）：216-219.

（收稿日期：2022-05-16 編輯：劉 斌）