黎藥牛耳楓研究進(jìn)展

彭政忠 張麗艷 唐靖雯 潘梅 盧禮平 楊桃

【摘 要】 從黎藥牛耳楓化學(xué)成分、藥理活性、質(zhì)量評價、制劑產(chǎn)品開發(fā)等方面進(jìn)行歸納總結(jié)，綜述了黎藥牛耳楓的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，抗炎、抗膽堿、抗腫瘤等藥理活性，總黃酮類成分、多指標(biāo)成分、指紋圖譜等質(zhì)量控制方法，以及已上市制劑產(chǎn)品情況，為進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。

【關(guān)鍵詞】 牛耳楓；化學(xué)成分；藥理活性；質(zhì)量評價

【中圖分類號】R285?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2023）01-0053-05

Research Progress of Li Medicine Daphniphyllum Calycinum Benth

PENG Zhengzhong1，2 ZHANG Liyan2 TANG Jingwen1* PAN Mei1 LU Liping1 YANG Tao1

1.Guizhou Warmen Pharmaceutical Co.， Ltd.， Guiyang 550018，China;

2.School of Pharmacy，Guizhou University of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550025， China

Abstract：The chemical composition， pharmacological activity， quality evaluation， as well as pharmaceutical product development of Daphniphyllum calycinum Benth. were summarized in this paper. The chemical basis， anti-inflammatory， anticholine， antitumor and other pharmacological activities， total flavonoids， multi-index components， fingerprint and other quality control methods， as well as the development of the preparation were reviewed， providing reference for further development and utilization.

Keywords：Daphniphyllum Calycinum Benth.; Chemical Composition; Pharmacologi-cal Activities

牛耳楓為虎皮楠科植物牛耳楓Daphniphyllum calycinum Benth.的干燥地上部分，收載于《貴州省中藥材民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（2019年版 第一冊）》，具有清熱解毒、活血散瘀、祛風(fēng)止痛的功效［1］。牛耳楓是黎族民間常用藥，在黎族地區(qū)用其治療外傷和炎癥［2］。在《中華本草》［3］《全國中草藥匯編》［4］及《福建藥物志》［5］《廣西民族藥簡編》［6］、《海南植物志》［7］等均有記載，具有很高的藥用價值和開發(fā)前景。由牛耳楓和辣蓼組成的復(fù)方牛耳楓片，具有理氣健胃、除濕化滯等功效，治療急慢性腸胃炎，臨床療效佳［3］。筆者綜述了牛耳楓化學(xué)成分、藥理活性、質(zhì)量評價、制劑產(chǎn)品開發(fā)等方面，為黎藥牛耳楓進(jìn)一步研究及綜合利用提供參考。黎藥牛耳楓研究進(jìn)展思維導(dǎo)圖如圖1所示。

1 化學(xué)成分

牛耳楓化學(xué)成分主要包括生物堿類化合物和黃酮類化合物，還含有少量的三萜類、甾醇類、胡蘿卜苷類和酚酸類等其它化合物，其中槲皮素、蘆丁、山奈酚、木犀草素、5，7-二羥基色原酮等均為常見的黃酮類化合物［8］。目前，在對牛耳楓化合物及其成分含量方面研究相對較多。

王永麗等［9］從牛耳楓乙酸乙酯部位和正丁醇部位分離、鑒定出7 個化合物，其中5-oxymaltol、2，6-dimethyl-3-hydroxychromone為首次從該植物中分離獲得。李晶晶等［10］采用柱層析和重結(jié)晶等分離技術(shù)，從牛耳楓果實(shí)甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物中分離、鑒定出10個化合物，其中5，7-二羥基色原酮、對羥基苯甲酸、5，7，4-三羥基-3-甲基黃酮等9個化合物首次從該植物的果實(shí)中分離得到。張小坡等［11］采用多種柱色譜方法從牛耳楓枝葉乙醇提取物中分離、鑒定出8個化合物，其中羽扇豆酮首次從交讓木屬植物中分離得到，以及胡蘿卜苷、槲皮素、蘆丁為首次從該植物中分離得到。朱文糧等［12］采用各種色譜方法從牛耳楓的莖葉乙醇浸提物中分離、鑒定出8個生物堿。李晶晶等［13］采用柱層析分離技術(shù)和重結(jié)晶等方法從牛耳楓葉的乙酸乙酯層分離、鑒定出3個化合物，其中反式對甲氧基肉桂酸、木樨草素為首次從該屬植物中分離得到。沈壽茂等［14］從牛耳楓的莖和葉中分離得到4個新的水飛薊生物堿，即水飛薊素A - D。近年來從牛耳楓中分離、鑒定的化合物見表1。

2 藥理活性

2.1 抗炎作用 宋青等［15］進(jìn)行了牛耳楓80%乙醇提取物的體內(nèi)外抗炎作用及其機(jī)制研究，通過建立 LPS 誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞ＲAW264.7 體外炎癥模型，結(jié)果顯示，牛耳楓提取物抑制了TNF-α、IL-10、IL-1β的分泌，并呈現(xiàn)劑量依賴性。通過 LPS 誘導(dǎo)建立了小鼠內(nèi)毒素血癥模型，結(jié)果顯示，牛耳楓提取物對小鼠血清細(xì)胞因子和炎性細(xì)胞因子有抑制作用；牛耳楓提取物呈劑量依賴性抑制了肝臟中iNOS 和 TNF-α蛋白的表達(dá)，對小鼠內(nèi)毒素血癥產(chǎn)生較好的預(yù)防和治療作用。任守忠等［16］以牛耳楓和辣蓼為原料制備楓蓼提取物，分析其抗炎機(jī)制，研究表明楓蓼提取物23.4、46.8g/kg均能明顯抑制小鼠耳腫脹，楓蓼提取物16.2 g/kg、32.4 g/kg均能顯著抑制角叉菜膠致大鼠足跖腫脹，且均能不同程度地降低炎足組織中TNF-α、IL-1β、PGE2和MDA的含量，但對NO無明顯影響。結(jié)果表明，楓蓼提取物可降低小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性、減少滲出，減輕小鼠耳腫脹和大鼠足腫脹，具有良好的抗炎作用。劉洪梅等［17］以牛耳楓和辣蓼為原料制備楓蓼發(fā)酵提取液，探究其鎮(zhèn)痛、抗炎、抗胃潰瘍作用，研究表明，楓蓼發(fā)酵提取液顯著抑制乙酸致小鼠扭體反應(yīng)，在一定程度上能抑制乙酸致小鼠毛細(xì)血管通透性的升高，還能顯著抑制二甲苯致耳腫脹和蛋清致足腫脹，減弱乙醇對胃黏膜的損傷以及減少血清中IL-1α、IL-1β的水平，同時抑制組織中HIS滲出，對 PED2滲出也有一定抑制作用。結(jié)果表明，楓蓼發(fā)酵提取液質(zhì)量穩(wěn)定可控，具有良好的抗炎、鎮(zhèn)痛、抗胃潰瘍作用。

2.2 抗膽堿酯酶活性 王永麗等［9］從牛耳楓中得到的deoxycalyciphylline B、deoxyisocalyciphylline B具有抗乙酰膽堿酯酶（AChE）活性，secodaphniphylline、deoxyisocalyciphylline B 具有較強(qiáng)的抗丁酰膽堿酯酶（BChE）活性。見表2。

吳裕紅等［18］以牛耳楓和辣蓼為原料分別制備楓蓼提取物，在乙酰膽堿引起的家兔小腸平滑肌痙攣模型中，對空腸而言，乙酰膽堿使小腸平滑肌收縮活動加強(qiáng)，給予楓蓼水提物、醇提物各劑量（0.125 g/mL、 0.25g/mL、0.5 g/mL）均可使平滑肌收縮張力下降，進(jìn)而抑制乙酰膽堿引起的小腸平滑肌痙攣；對于回腸平滑肌，楓蓼醇提物各劑量對乙酰膽堿引起的痙攣均有明顯的頡頏作用，最低有效濃度為 0. 125 g /mL，而水提物的最低有效濃度為 0. 5 g /mL。見表3。該抑制作用可能是通過阻斷乙酰膽堿與 M 受體的結(jié)合，降低細(xì)胞中鈣離子濃度，從而降低小腸平滑肌的興奮度。

2.3 抗腫瘤活性 王永麗［19］從牛耳楓中提取16種生物堿進(jìn)行體外抗腫瘤活性篩選，結(jié)果顯示，2-hydroxyyunnandaphnine D在體外具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性，其對人宮頸癌細(xì)胞（HeLa）、人肺腺癌細(xì)胞（A-549）、人乳腺癌細(xì)胞（MCF-7）、人肝癌細(xì)胞（HePG-2）和人神經(jīng)膠質(zhì)瘤（U-251）等5種腫瘤細(xì)胞株均有一定的抑制作用，其中對HePG-2細(xì)胞的抑制增殖作用最強(qiáng)，且具有量效和時效關(guān)系。曹志然等［20］從牛耳楓的莖葉乙醇浸提物中采用正相硅膠，反相材料（C18，MCI）以及凝膠（Sephadex LH-20，Toyopearl HW-40C）分離得到牛耳楓生物堿F21，并進(jìn)行了該成分對HePG-2細(xì)胞的抑制作用及機(jī)制研究，結(jié)果表明，牛耳楓生物堿F21在體外對HepG-2細(xì)胞具有顯著的抑制作用，其作用機(jī)制并非通過激活胱天蛋白酶途徑而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡。王蓓等［21］進(jìn)行了牛耳楓生物堿2-hydroxyyunnandaphnine D體外抗腫瘤活性及作用機(jī)制研究，結(jié)果顯示，該生物堿在體外對HepG-2細(xì)胞、MCFh7細(xì)胞及HeLa細(xì)胞3種腫瘤細(xì)胞株均有明顯的抑制作用，且具有明顯的時-效和量-效關(guān)系依賴性；FDA/PI雙染色熒光顯微鏡觀察顯示，該生物堿組中死亡細(xì)胞數(shù)較正常對照組細(xì)胞死亡數(shù)量增加，且隨著劑量的加大細(xì)胞死亡數(shù)量增加，表明該生物堿在體外具有明顯的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用。劉帥等［22］ 從牛耳楓的莖中分離出一種新的牛耳楓Daphnezomine L型生物堿，對HeLa細(xì)胞具有中等的細(xì)胞毒活性，IC50為16.0μg / mL。

3 質(zhì)量評價

唐靖雯等［23］對牛耳楓進(jìn)行了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，建立了以指標(biāo)成分蘆丁、牛耳楓對照藥材為對照的薄層鑒別（TLC）方法，以及以指標(biāo)成分蘆丁為含量的高效液相色譜（HPLC）法，結(jié)果顯示，TLC斑點(diǎn)清晰，重復(fù)性好；蘆丁在0.200～1.403μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為101.65%，RSD為 2.42%。何遠(yuǎn)景［24］建立了牛耳楓中山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量的HPLC法，結(jié)果顯示，山奈酚-3-O-蕓香糖苷濃度在6.92～69.2 μg/mL之間，且其峰面積呈良好的線性關(guān)系。梁穎等［25］建立了同時測定牛耳楓中沒食子酸、原兒茶酸、蘆丁、山柰酚-3-O-蕓香糖苷、槲皮素、木犀草素、芹菜素、山柰酚等8種成分含量的高效液相色譜串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）法，并結(jié)合 TOPSIS 分析法，對不同產(chǎn)地（廣西桂林、海南瓊中、海南海口）牛耳楓樣品的8種成分含量進(jìn)行對比分析及綜合評價，結(jié)果顯示，8種成分在相應(yīng)的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，且海南?？诘乃幉木C合質(zhì)量較好。杜迎翔等［26］建立了牛耳楓的HPLC指紋圖譜方法，標(biāo)定了11個共有峰，指認(rèn)了2個峰（蘆丁、槲皮素），各指紋圖譜的相似度均達(dá)到 0.85以上；利用系統(tǒng)聚類分析，確定同一地區(qū)牛耳楓藥材化學(xué)成分的穩(wěn)定性，說明藥材質(zhì)量與采集、干燥、運(yùn)輸及貯存過程有關(guān)；利用主成分分析提取了3個主要成分，確定牛耳楓中對第一主成分的影響較大的是蘆丁、槲皮素以及其他 3個未知成分。李海龍等［27］建立了測定牛耳楓藥材中總黃酮的含量方法，總黃酮在7.84～47.04 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

4 制劑產(chǎn)品開發(fā)

近年來，各制藥企業(yè)利用牛耳楓藥用資源，開發(fā)的中藥復(fù)方制劑產(chǎn)品楓蓼腸胃康分散片，是以牛耳楓、辣蓼兩味藥材經(jīng)加工制成的分散片，具有理氣健胃、除濕化滯功能，用于中運(yùn)不健、氣滯濕困而致的急性胃腸炎及其所引起的腹脹、腹痛和腹瀉等消化不良癥［28］；在急性胃腸炎治療中，有效改善臨床癥狀［29］。此外，以牛耳楓、辣蓼兩味藥材組合開發(fā)的中藥復(fù)方制劑產(chǎn)品有楓蓼腸胃康顆粒、楓蓼腸胃康口服液、楓蓼腸胃康膠囊、楓蓼腸胃康軟膠囊、楓蓼腸胃康滴丸等，在臨床上有一定的應(yīng)用。黃騰等［30］采用隨機(jī)、雙盲、陽性藥平行對照，多中心、非劣效試驗(yàn)設(shè)計，收集6個月至5歲患兒240例評價楓蓼腸胃康顆粒治療小兒急性腹瀉（濕熱瀉）的臨床有效性和安全性，結(jié)果表明，楓蓼腸胃康顆粒對6個月至5歲小兒急性腹瀉（濕熱瀉）止瀉率與兒瀉停顆粒療效相當(dāng)且起效較快，臨床應(yīng)用安全。吳珮毓等［31］觀察楓蓼腸胃康口服液聯(lián)合思密達(dá)治療老年慢性腹瀉的臨床療效，結(jié)果表明，觀察組總有效率為94.29%，高于對照組的74.29%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；觀察組治療有效時間為（5.27±2.25）d，短于對照組的（8.58±2.80）d，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；兩組不良反應(yīng)發(fā)生率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。李燕君［32］研究楓蓼腸胃康膠囊聯(lián)合常規(guī)三聯(lián)（克拉霉素片、奧美拉唑腸溶膠囊和阿莫西林膠囊）治療慢性萎縮性胃炎伴腸上皮化生的效果，結(jié)果表明，試驗(yàn)組幽門螺桿菌（Hp）根除率為82.00%，高于對照組的60.00%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；試驗(yàn)組不良反應(yīng)發(fā)生率為6.00%，低于對照組的20.00%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

5 展望

目前，對牛耳楓在化學(xué)成分和生物活性方面研究較多，但其藥用成分和藥用機(jī)理研究相對較少，嚴(yán)重制約著相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)［8］。采用現(xiàn)代的分離鑒定技術(shù)從牛耳楓中獲得的新生物堿2-hydroxyyunnandaphnine D在體外對HepG-2細(xì)胞具有較強(qiáng)的抑制作用，且抑制作用具有較好的時效和量效關(guān)系［21］，但其作用機(jī)制研究較少且尚不清楚。牛耳楓提物研究發(fā)現(xiàn)具有抗炎作用［15］，以及在體外具有顯著的抗AChE 及抗BChE活性［9］，但對于藥理藥效等方面的關(guān)注較少。牛耳楓的復(fù)方制劑產(chǎn)品楓蓼腸胃康顆?？烧{(diào)節(jié)幼齡大鼠的胃液分泌，對幼齡大/小鼠具有一定的抗炎、鎮(zhèn)痛、保護(hù)胃黏膜及解痙作用，表明其對幼齡動物的急性胃炎具有一定療效［33］，但對治療兒科急性胃炎的臨床應(yīng)用還需進(jìn)一步研究。牛耳楓的中藥復(fù)方制劑產(chǎn)品開發(fā)方面主要與辣蓼組合，與其他中藥組合開發(fā)的制劑產(chǎn)品較少。因此，下一步對牛耳楓的研究可將化學(xué)成分、藥理作用機(jī)制、臨床應(yīng)用三者緊密結(jié)合，開發(fā)更多以牛耳楓為原料的復(fù)方制劑產(chǎn)品。

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（收稿日期：2022-04-28 編輯：陶希睿）