miR-574-5p和miR-144-5p在腹主動脈瘤患者外周血中的表達及其與腔內(nèi)血栓厚度的關系

徐 鵬 單金濤 孫利坤

腹主動脈瘤(AAA)屬于動脈擴張性疾病,主要是由動脈壁退行性病變而引起,外傷、感染、動脈炎癥亦參與AAA的發(fā)生與發(fā)展[1-2]。大部分AAA患者早期無明顯癥狀,隨著病情進展,腫瘤生長,動脈瘤一旦發(fā)生破裂,將引起患者劇烈腹痛、大出血等情況,病情極其兇險,嚴重者甚至在短時間內(nèi)休克、死亡[3-4]。臨床相關研究認為,AAA的形成、生長與破裂與腔內(nèi)血栓(ILT)的厚度存在緊密聯(lián)系[5]。微小RNA(miR)是由18～22個核苷酸組合而成的非編碼小RNA,穩(wěn)定存在于血清中,并且不受環(huán)境溫度的影響,與機體的生理、病理過程存在密切聯(lián)系。同時,miR調(diào)控人類1/3以上的基因,超過一半的miR基因處于腫瘤有關的染色體或其脆性位點上,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關,發(fā)揮著癌基因或抑癌基因的作用。微小RNA-574-5p(miR-574-5p)、微小RNA-144-5p(miR-144-5p)屬于其中一種,前者在腫瘤細胞內(nèi)呈高表達,而后者在腫瘤細胞內(nèi)呈低表達。但臨床關于miR-574-5p、miR-144-5p在AAA患者外周血內(nèi)的表達及其與ILT厚度聯(lián)系之間的研究報道較為缺乏。基于此,本研究以2020年4月至2022年4月本院收治的84例AAA患者為研究對象,分析miR-574-5p、miR-144-5p在此類患者血清中的表達及與ILT厚度的關系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2020年4月至2022年4月本院收治的84例AAA患者納入觀察組,另選取同期于本院行體檢的75例健康人群納入對照組,研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準。納入標準:觀察組經(jīng)CT檢查示腎下腹主動脈≥3 cm;對照組均身體健康,無重大疾病;所有研究對象具有較高的依從性;所有研究對象對本試驗知悉,且自愿簽署知情同意書。排除標準:存在精神疾病者;合并免疫系統(tǒng)、凝血功能異常者;意識障礙,難以進行正常交流者;存在傳染性疾病者;合并全身性感染者;存有嚴重的腦器質(zhì)性疾病者;合并嚴重的臟器損傷者。對照組男性40例,女性35例;年齡39～76歲,平均年齡(58.94±3.21)歲;體重指數(shù)(BMI)18.4～27.3 kg/m2,平均BMI(25.39±0.48)kg/m2。觀察組男性46例,女性38例;年齡41～78歲,平均年齡(59.03±3.30)歲;BMI 18.5～27.1 kg/m2,平均BMI(25.30±0.41)kg/m2。比較兩組一般資料,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

1.2 方法

標本采集:采集兩組5 ml靜脈血置于抗凝管內(nèi),以3000 r/min的速率進行10 min的離心處理,取得上層血清后,于-80 ℃環(huán)境下留存待檢,采集標本時需嚴格注意無菌操作。檢測方法:首先以TRIzol法提取所有組織內(nèi)的總RNA,按檢測試劑盒操作步驟獲取cDNA,并以逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進行逆轉(zhuǎn)錄反應;之后對miR-574-5p、miR-144-5p予以擴增,反應體系共10 μl,反應條件為:95 ℃ 15 min,94 ℃ 15 s,55 ℃ 30 s,70 ℃ 30 s,共40個循環(huán);以U6為內(nèi)參,采取2-ΔΔCt法計算miR-574-5p、miR-144-5p相對表達量。同時,對觀察組患者施以彩色多普勒超聲檢測,連續(xù)檢測3次,取其平均值,依據(jù)其ILT厚度的不同將所有患者分為薄ILT組(n=48,ILT厚度≤平均值)與厚ILT組(n=36,ILT厚度>平均值)兩個亞組,統(tǒng)計對比兩個亞組的miR-574-5p、miR-144-5p相對表達量。

1.3 觀察指標

(1)觀察組與對照組miR-574-5p、miR-144-5p對比。(2)厚ILT組與薄ILT組miR-574-5p、miR-144-5p對比。(3)miR-574-5p、miR-144-5p預測ILT厚度的效能:繪制受試者工作曲線(ROC),分析miR-574-5p、miR-144-5p兩者單獨或聯(lián)合預測AAA患者ILT厚度的效能。

1.4 統(tǒng)計學分析

2 結果

2.1 觀察組與對照組miR-574-5p、miR-144-5p對比

觀察組的miR-574-5p高于對照組,miR-144-5p低于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表1。

表1 觀察組與對照組miR-574-5p、miR-144-5p對比

2.2 厚ILT組與薄ILT組miR-574-5p、miR-144-5p對比

厚ILT組的miR-574-5p高于薄ILT組,miR-144-5p低于薄ILT組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表2。

表2 厚ILT組與薄ILT組miR-574-5p、miR-144-5p對比

2.3 miR-574-5p、miR-144-5p預測ILT厚度的效能

ROC結果顯示:miR-574-5p、miR-144-5p兩者聯(lián)合預測AAA患者ILT厚度的AUC高于兩者單獨預測,見表3、圖1～3。

圖1 miR-574-5p預測ILT厚度的ROC圖

圖2 miR-144-5p預測ILT厚度的ROC圖

圖3 miR-574-5p、miR-144-5p聯(lián)合預測ILT厚度的ROC圖

表3 miR-574-5p、miR-144-5p預測ILT厚度的效能

3 討論

AAA指腹主動脈局限性擴張,直徑>3 cm,或較鄰近腹主動脈直徑擴張1.5倍以上,大多數(shù)AAA破裂前無任何癥狀,但在破裂后患者總病死率超過80%[6-7]。AAA與血小板活化和凝血功能紊亂密切相關,故AAA患者普遍存在一定程度的ILT形成[8-9]。ILT會降低血管壁承受的機械應力,還會導致黏蛋白降解、膠原合成與含量增加以及炎性細胞的過度浸潤[10]。血栓形成與炎性細胞浸潤會破壞血管壁結構的完整性與穩(wěn)定性,大大增加AAA破裂風險,故ILT在AAA生長與破裂中發(fā)揮著重要作用。臨床有研究認為,ILT厚度與動脈瘤直徑、血管平滑肌細胞凋亡等有著顯著聯(lián)系,而miRNA與ILT厚度密切相關[11]。因此,及時明晰miRNA與AAA患者ILT厚度之間的關系,指導臨床施以科學針對性的治療措施,對于改善患者預后至關重要。

miR是一種廣泛存在的調(diào)控基因的小分子RNA,在細胞的生長、發(fā)育與代謝中扮演著重要角色,可通過不同的miR完全或者不完全與靶基因互補結合,促使靶基因降解或者抑制翻譯,參與機體的病理生理過程[12]。miR-574-5p是miR-574的亞型之一,屬于miR家族的重要成員,在多種生物學功能中扮演著重要角色。miR-574-5p表達與神經(jīng)發(fā)育和形成有關,其可促進神經(jīng)的形成與癌細胞的增殖,而且其表達水平與肺癌和腸癌的抗藥性以及預后密切相關[13]。同時,miR-574-5p可作為人肺成纖維細胞生長因子1的RNA誘導因子誘導肺部腫瘤的發(fā)生。 miR-144-5p為前體miR-144的另一個成熟鏈,在多種疾病中表達異常,可通過調(diào)控靶基因的表達參與疾病的進程,包括AAA、心房顫動、慢性硬膜下血腫等[14-15]。本研究結果顯示,觀察組的miR-574-5p高于對照組,miR-144-5p低于對照組,提示在AAA患者機體內(nèi),miR-574-5p呈高表達,miR-144-5p呈低表達,二者可能參與疾病的發(fā)生與發(fā)展。本研究結果還顯示,厚ILT組的miR-574-5p高于薄ILT組,miR-144-5p低于薄ILT組,提示ILT越厚,miR-574-5p越高,miR-144-5p越低;且 ROC結果顯示:miR-574-5p、miR-144-5p兩者聯(lián)合預測AAA患者ILT厚度的AUC高于兩者單獨預測,由此可見,miR-574-5p、miR-144-5p聯(lián)合可有效預測AAA患者的ILT厚度,從而為臨床的早期治療提供可靠參考依據(jù),進而施行規(guī)范且個體化的治療,最終保障患者的身心安全,改善其預后。

綜上所述,miR-574-5p、miR-144-5p在AAA患者機體內(nèi)呈異常表達,且ILT厚度越厚,miR-574-5p越高,miR-144-5p越低,兩者聯(lián)合可有效預測AAA患者的ILT厚度,具有較高的臨床應用價值,可進行大力的推行。